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Variabilidad genetica en generos de ciervos neotropicales (Mammalia: Cervidae) segun loci microsatelitales.

El presente estudio, complementario al de Ruiz-Garcia et al. (2007), se fundamenta en la determinacion y comparacion de los niveles de diversidad genica entre diversas especies de cervidos neotropicales respecto a algunas especies de cervidos europeos y asiaticos. Este es el primer estudio donde se reportan niveles de diversidad genetica en cervidos neotropicales mediante marcadores microsatelites hipervariables. Por eso, unicamente se pueden efectuar comparaciones con algunas especies de ciervos europeos y asiaticos ya que son los unicos cervidos que han sido estudiados desde la misma perspectiva molecular (ver Goodman et al. 200 1).

En el ambito de la genetica conservacionista se asume que cuanto menor sea el tamano efectivo de una poblacion, menor sera, tambien, la diversidad genetica de la misma y, por ende, tendra menores posibilidades de poder responder adaptativamente ante cualquier tipo de cambio ambiental (Ruiz-Garcia 2001). Para llevar a cabo esta tarea, se obtuvieron 71 muestras de ciervos neotropicales. Las muestras provienen de diferentes regiones geograficas de Latinoamerica y pertenecen a ocho especies diferentes de los tres grupos tradicionalmente establecidos. Estas especies son: Odocoileus virginianus, Ozotoceros bezoarticus y Blastocerus dichotomus (alto porte, cuernos ramificados), Hippocamelus antisensis (mediano porte, cuernos bifurcados), Mazama americana, Mazama gouazoubira, Mazama rufzna, y Pudu mephistopheles (pequeno porte, cuernos no ramificados). Adicionalmente, y como punto de comparacion, se reunieron muestras de Cervus elaphus (ciervo rojo europeo) de una poblacion escocesa (Gran Bretana) proveniente, de multiples reintroducciones de estos ciervos a partir de diversas areas de la Europa continental. Esta especie presenta multitud de poblaciones y subespecies, en Europa, que han sido reconocidas como diferentes a partir de estudios morfologicos, bioquimicos y moleculares. Whitehead (1972) reconocio 23 subespecies de Cervus elaphus. Hartl et al. (1995) estudiaron el ADN mitocondrial de Cervus elaphus procedentes de 15 localidades distribuidas por el centro, occidente y sur-este de Europa y descubrieron nueve haplotipos mitocondriales diferentes. La relacion entre esos haplotipos fue consistente con la distribucion geografica de las diversas poblaciones analizadas. La distribucion geografica de los haplotipos de los tres linajes principales se corresponden con diversas subespecies morfologicas propuestas por Groves & Grubb (1987). Lowe & Gardiner (1974), unicamente reconocieron C. e. elaphus como la unica subespecie del norte de Europa en virtud de sus analisis craneometricos. El linaje europeo oriental podria corresponder a la subespecie morfologica C. e. montanus, mientras que el linaje sur-oriental podria corresponder a C. e. maral. Eso nos induce a pensar que la variabilidad genetica de las muestras obtenidas en Escocia deberia ser muy elevada, ya que podrian representar individuos hibridos de esas diversas subespecies de ciervo rojo en Europa. Por lo tanto, los resultados de esa muestra pueden representar un limite superior en cuanto al nivel de heterocigosis (=diversidad genetica) que se encuentran en las poblaciones de cervidos. Tambien se analizaron muestras de Cervus nippon (sika) procedentes de Escocia. Esta es una especie de origen asiatico que se introdujo, por primera vez, en Gran Bretana en 1860 (Powerscourt 1884), con posteriores reintroducciones hasta, aproximadamente, 1930 (Goodman et al. 2000). Las muestras obtenidas provienen de una poblacion pequena que pudo sufrir un intenso efecto fundador con la consiguiente perdida de variabilidad genetica (Emmerson & Tate 1993). Igualmente, Goodman et al. (2001) determinaron la heterocigosis de diversas poblaciones de Cervus nippon en Japon y de poblaciones introducidas en Escocia. Las poblaciones japonesas en las zonas mas fragmentadas, como Nagasaki (H=0.19) y Tanegashima (H=0.21), presentaron niveles de variabilidad genetica inferiores al de las poblaciones con habitats amplios, tales como Iwate (H=0.49), Kinkazan (H=0.54), Shimane (H=0.45) y Hyogo (H=0.60). Las cuatro poblaciones de C. nippon introducidas en Escocia e Inglaterra presentaron niveles reducidos de heterocigosis (Argyll, H=0.13; Fife, H=0.27; Peebles, H=0.38 y Dorset, H=0.21) mostrando evidente depauperacion genetica por efecto fundador. La pregunta central que nos formulamos en el presente trabajo es la siguiente. ?Estan los niveles de variabilidad genetica en diversas especies de cervidos neotropicales mas cercanos a los altos valores esperados del Cervus elaphus en Escocia, probablemente resultado del cruzamiento entre individuos representativos de diversas subespecies?. O, por el contrario, ?estan mas cercanos a los niveles reducidos de diversidad genica del Cervus nippon introducido en Gran Bretana?. Esto es, el nivel reducido de variabilidad genetica de C. nippon en las poblaciones japonesas pequenas, y en las introducidas en Gran Bretana, puede mostrar un limite inferior, denotando un estado de variabilidad genetica pobre para las poblaciones de ciervos neotropicales que esten cercanas a esos valores. Por el contrario, las poblaciones de cervidos neotropicales que posean niveles de variabilidad genetica similares al C. elaphus escoces (H=0.71) pueden considerarse como poseedoras de una diversidad genetica elevada. Esos son los niveles de variabilidad genetica mas reducidos y mas elevados que se han encontrado en cervidos utilizando marcadores microsatelites identicos a los que se emplearon en el presente estudio. Adicionalmente para tener una perspectiva mas amplia de la citada cuestion, se consiguieron muestras de ADN de otros cervidos europeos: C. elaphus de origen italiano, Capreolus capreolus (corzo) procedentes de Espana y de Italia, y Dama dama (gamo) procedentes, tambien, de Espana y de Italia. De forma comparativa, se analizaron algunas muestras del rebeco catalan (Rupycapra pyrenaica), un bovido silvestre.

Para ello, se aplicaron 16 marcadores hipervariables microsatelites (STRP; Short Tandem Repeat Polimorphisms) disenados para diferentes especies. Diez de ellos fueron disenados para bovidos y estan altamente conservados en otros Artiodactyla, como los Cervidae y los Caprinae (Slate el al. 1998). Otros autores (Engel el al. 1996) han mostrado, tambien, que otro conjunto de 12 microsatelites elaborados para bovinos, siete para caprinos y un par especifico de ovinos, son utiles para su aplicacion en cervidos.

Tambien, a partir de los resultados moleculares obtenidos, se realizaron diferentes analisis poblacionales. Entre ellos la estimacion de la heterogeneidad genetica entre poblaciones de una misma especie y la determinacion de posibles cuellos de botella recientes en algunas de las especies analizadas.

MATERIALES Y METODOS

Analisis molecular: Las especies de cervidos neotropicales y el numero total de ejemplares analizados fueron: 22 muestras de Mazama americana, ocho muestras de Mazama gouazoubira, dos muestras de Mazama refina, 23 muestras de Odocoileus virginianus, cuatro muestras de Hippocamelus antisensis, dos muestras de Pudu mephistopheles, dos muestras de Ozotoceros bezoarticus, ocho muestras de Blastocerus dichotomes, sumando un numero total de 71 individuos. Para las especies europeas y de origen asiatico, se estudiaron nueve ejemplares de Cervus elaphus y cinco de Cervus nippon, 26 ejemplares de Capreolus capreolus, cinco ejemplares de Dama dama, mas cuatro ejemplares de Capreolus pygargus, sumando un total de 49 ejemplares. Comparativamente, se procesaron, tambien, muestras de cuatro Rupicapra pyrenaica (Rebeco, Bovidae) procedentes de los Pirineos Catalanes. La descripcion del origen de los ejemplares analizados y el tipo empleado de muestra de los cervidos neotropicales estudiados se encuentra en el Cuadro 1. Para la interpretacion de los analisis se considero dos especies Europeas como referencias: la especie Cervus elaphus (de Escocia), tomada como un grupo de alta variabilidad genetica por su origen en una mezcla de diversas subspecies de Cervus elaphus de Europa Occidental; y la poblacion de Cervus nippon en Escocia, como representante de una poblacion completamente empobrecida por constituirse a traves de un evento fundador.

Los marcadores microsatelites empleados fueron: (1) disenados para bovidos, RM012, BM757, INRA131, IDVGA055, FCB193, TGLA337, HUJ175, BOVIRBP, TGLA127 y FSHB (Slate el al. 1998), (2) disenados para el ciervo coli-blanco (Odocoileus), Cervid 1 y Cervid 3 (Dewoody el al. 1995) y (3) disenados para reno, Rangifer tarandus, NVHRT 16, NVHRT 30, NVHRT 71 y NVHRT 73 (Roed & Midthjell 1998). Esto significa que para el estudio de la estructura y la diversidad genetica de poblaciones y especies de cervidos, al igual que para otros grupos, existe un exito significativo en el uso de cebadores ("primers") heterologos para la PCR en la amplificacion de loci microsatelites, eliminando esto, la estricta necesidad de desarrollar nuevos conjuntos de cebadores para cada especie determinada.

En el Anexo 1 se muestran los alelos encontrados, previamente, en C. elaphus y C. nippon para los marcadores microsatelites de bovidos, al igual que el rango de tamanos alelicos presentados por los mismos y las temperaturas de anillamiento ("anealling") para cada marcador. Para obtener los correspondientes genotipos se procedio del siguiente modo. Una vez que el ADN fue obtenido a partir de dos procedimientos diferentes (Fenol-Cloroformo y resina Chelex), se llevaron a cabo reacciones de PCR en un volumen de 25 [micro]l, cuando el ADN fue extraido de tejido o sangre, con 2.5 [micro]l de MgCl2 2.5 qM, 2.5 [micro]l de Buffer 10x, 1 [micro]l dNTPs 1 mM, 1 [micro]l de ambos cebadores ("forward" y "reverse") (4 pmol), 14 [micro]l de [H.sub.2]O, 0.25 unidades de Taq polimerasa (1 u/[micro]l) y 2 [micro]l de ADN. Cuando el ADN fue extraido de raiz de pelo, el volumen de la reaccion de PCR fue de 50 [micro]l. En este caso se agregaron 20 [micro]l de ADN y el doble de las cantidades de reactivos anotadas en el caso anterior. La reaccion se llevo a cabo en un termociclador Geneamp PCR System 9600 de Perkin Elmer. Las temperaturas utilizadas para los marcadores de bovidos fueron 2 min a 94 [grados]C, seguidas de 7 ciclos de 30 s a 94[grados]C, 1 min a 50[grados]C y 30 s a 72 [grados]C y de 30 ciclos a 94 [grados]C, 1 min 50 [grados]C y 30 s a 72 [grados]C de extension. Para los de ciervo coli-blanco fueron 2 min a 94[grados]C, seguidas de 35 ciclos de 30 s a 92 [grados]C, 1 min a 60 [grados]C y 2 min a 74 [grados]C y 10 min a 74 [grados]C de extension. Para los marcadores de reno, las temperaturas fueron: 5 min a 94 [grados]C, seguidas de 30 ciclos de 1 min a 95 [grados]C, 30 s a 55 [grados]C y 1 min a 72 [grados]C, y 10 min a 72 [grados]C de extension. Los productos de amplificacion se almacenaron a 4 [grados]C, hasta el momento en que fueron utilizados. Se procedio a determinar si las muestras utilizadas realmente habian amplificado en un gel de agarosa al 3% tenido con bromuro de etidio en una camara de electroforesis horizontal GNA200 de Pharmacia Biotech. Una vez se comprobo que muestras habian amplificado, se corrieron estas en geles denaturantes de poliacrilamida al 6% en una camara vertical Hoefer SQ3 sequencer, con una fuente de poder EPS 3500 de Pharmacia biotech, a 35 W constantes durante 2-3 horas dependiendo del tamano del marcador. Posteriormente se paso a la fijacion (acido acetico), tincion (nitrato de plata, AgN[O.sub.3]) y revelado del gel con carbonato de sodio ([Na.sub.2]CH). El marcador de peso molecular utilizado fue [phi]174 cortado con Hind III situado cada 10 carriles.

Metodos genetico poblacionales aplicados: Una vez los geles fueron analizados, y se distinguieron perfectamente los genotipos de los especimenes estudiados, se procedio a determinar algunos estadisticos geneticopoblacionales basicos, tales como el numero de alelos por marcador, las frecuencias alelicas y la heterocigosis esperada insesgada con el metodo de Nei (1978). Una perdida significativa de esta heterocigosis puede indicar claramente la accion de diferentes procesos estocasticos, como la deriva genetica, o de procesos selectivos actuando en contra de un alelo particular y, por lo tanto, modificando las frecuencias alelicas (Ruiz-Garcia 1991).

Se procedio al analisis del equilibrio Hardy-Weinberg para algunos de los marcadores moleculares empleados para ciertos con juntos de muestras. Para ello se utilizaron dos procedimientos diferentes. El primero fue la aplicacion del estadistico F de Wright (1965), cuya expresion es:

F = 1 - ([H.sub.o]/[H.sub.e]), donde Ho es el numero observado de heterocigotos y He es el numero de heterocigotos esperados en equilibrio HardyWeinberg. La significacion estadistica del estadistico F puede medirse con la expresion:

[chi square] = [F.sup.2] N (m - 1), con m(m - 1)/2 grados de libertad, donde N es el numero de individuos analizados y m es el numero de alelos encontrados en cada locus (Li & Horvitz 1953). El segundo procedimiento analitico empleado fue la aplicacion de la f de Robertson & Hill (1984). Para cada alelo i, la estima insesgada de la desviacion de la frecuencia de homocigotos (ii), respecto a los valores esperados en equilibrio Hardy-Weinberg de estas frecuencias, tiene la siguiente expresion:

[T.sub.ii] [2(2n - 1) [n.sub.ii] - [n.sub.i]([n.sub.i] - 1)]/[4 (n - 1)], donde n es el tamano de la muestra, [n.sub.ii] es el numero de homocigotos observados y [n.sub.i] es el numero de alelos i en la muestra estudiada. Para cada alelo, la estima de f es:

[f.sub.i] 4n[T.sub.ii]/[[n.sub.i] (2n - [n.sub.i])]. El estadistico total, para el locus en cuestion, sera,

[f.sub.T] = 2 ([T.sub.ii]/[n.sub.i])/(m - 1), donde m es el numero de alelos detectados en un locus determinado. Ambos, [f.sub.ii] y [f.sub.T], tienen expresiones matematicas que permiten calcular la esperanza de sus varianzas.

El indice de fijacion (FST), mide los efectos de la subdivision de una poblacion, que se traduce en la reduccion de la heterocigosis en una subpoblacion debido a la deriva genetica. Este estadistico se define como: [F.sub.ST] =([H.sub.T] - [H.sub.s])/[H.sub.T], donde [H.sub.T] es la heterocigosis esperada en la poblacion total y HS es la heterocigosis promedio en el seno de las subpoblaciones. Utilizando [F.sub.ST], se calculo el grado de heterogeneidad genetica entre diferentes poblaciones de Odocoileus y Mazama, y entre diferentes especies de Mazama. Para ello, se utilizo el procedimiento de Weir & Cockerham (1984).

Se obtuvieron estimas de flujo genico entre poblaciones de Odocoileus y entre poblaciones de Mazama clasificadas por especies, por regiones biogeograficas respecto a la procedencia de las muestras y por paises. Para ello se utilizo el metodo de los alelos privados (Slatkin 1985) con el programa Genepop version 3.1 (Raymond & Rousset 1995).

Empleando el programa Bottleneck version 1.1.03 (Piry el al. 1999) se calculo la posible existencia de cuellos de botella recientes en las poblaciones de las diferentes especies de ciervos analizadas a partir de la teoria de Cornuet & Luikart (1996) y Luikart el al. (1998). Esta tecnica se basa en el principio por el cual las poblaciones, que han atravesado un cuello de botella reciente, pierden simultaneamente numero de alelos y niveles de heterocigosis esperada. Sin embargo, el numero de alelos ([k.sub.o]) se reduce mas rapidamente que los niveles de heterocigosis. De este modo, el valor de la heterocigosis esperada a partir del numero de atelos presente ([H.sub.eq]), obtenido por metodos de coalescencia, es menor que la heterocigosis esperada obtenida directamente de las frecuencias alelicas ([H.sub.e]). Este exceso de heterocigosis esperada respecto a la calculada mediante el numero de alelos ha sido fehacientemente demostrado en el modelo mutacional de los alelos infinitos, aunque no esta tan claradamente determinado para el modelo mutacional "step-wise" (Ohta & Kimura 1973). Los microsatelites empleados aqui, aunque su dinamica, posiblemente, puede estar mas cercana al segundo modelo mutacional, no lo siguen estrictamente y tan pronto como un marcador se aparta ligeramente del modelo "step-wise" hacia el modelo de los alelos infinitos, el exceso de heterocigosis esperada comenzara a incrementarse como consecuencia de un cuello de botella reciente. Para marcadores neutrales, en una poblacion en equilibrio deriva generica-mutacion, existe la misma probabilidad que, para un locus dado, haya un ligero exceso o deficit de heterocigosis respecto a este mismo concepto calculado a partir del numero de alelos. Por el contrario, una poblacion que ha sufrido un cuello de botella presentara una amplia fraccion de loci con un exceso significativo de heterocigosis esperada. Para medir esta probabilidad, se utilizaron cuatro procedimientos: el test del signo, el test de la diferencia estandarizada, el test del signo rango de Wilcoxon, y un descriptor grafico de la forma de la distribucion de las frecuencias alelicas. Una poblacion, que no haya pasado por un cuello de botella, mostrara una distribucion en forma L, tal como se espera en una poblacion estable en equilibrio derivamutacion. Por el contrario, una poblacion que ha sufrido un cuello de botella reciente mostrara una distribucion sesgada. El test de signorango de Wilcoxon es probablemente el mas poderoso cuando el numero de loci analizados es limitado como ocurre en el presente caso.

RESULTADOS

Analisis de diversidad genetica con loci microsatelites: En la Fig. 1 se pueden observar las frecuencias alelicas de las especies de cier vos neotropicales para los marcadores microsatelites empleados. Puede observarse (Cuadro 2) que la mayor cantidad de alelos fue obtenida para los marcadores Cervid 1, Cervid 3 e IDVGA 55, y que las especies neotropicales con mayor heterocigosis fueron Odocoileus virginianus (heterocigosis insesgada promedio H = 0.6148), Mazama americana (H = 0.6429) y Mazama gouazoubira (H = 0.7003). Los ejemplares del genero Cervus no amplificaron para ninguno de los marcadores especificos para Odocoileus y los del genero Capreolus no lo hicieron para Cervid 1 ni para RM012. Respecto a los marcadores disenados para renos, fueron probados unicamente en algunos especimenes y deben considerarse los resultados obtenidos como preliminares. Los ejemplares de Mazama rufina (H = 0.125), Pudu mephistopheles (H = 0.4062), Ozotoceros bezoarticus (H = 0.50), Hippocamelus antisensis (H = 0.5030) y Blastocerus dichotomus (H = 0.3599) presentaron niveles de heterocigosis menores a las especies referidas anteriormente, aunque el numero de muestras analizadas fue muy pequena para algunas de esas especies. Es importante comparar esos niveles de variabilidad genetica en los cervidos neotropicales con los niveles determinados en especies de cervidos europeos. Para los marcadores disenados para bovidos, encontramos que las muestras de los C. elaphus escoceses presentaron elevados niveles de variabilidad genetica. Para esos microsatelites, la heterocigosis individual de cada animal analizado oscilo entre el 0.7 y 1. La heterocigosis individual promedio incluyendo todos los C. elaphus escoceses fue de 0.8066, mientras que la heterocigosis insesgada promedio para el conjunto global de esas muestras fue de 0.8051. En el otro extremo de la escala, las muestras de C. nippon, introducidos en Gran Bretana, fueron monomorficas para los 10 microsatelites aplicados en esta especie. Esto es, no se obtuvo diversidad genetica alguna (H=0). El nivel estimado de diversidad genetica en las muestras de C. elaphus procedentes de Italia fue considerablemente menor que el nivel encontrado para la poblacion britanica. Los animales, individualmente, poseyeron niveles de heterocigosis entre 0.166 y 0.6. El valor de la heterocigosis individual promedio fue de 0.383, mientras que la heterocigosis insesgada global para toda la muestra fue de 0.556. Los tamanos alelicos encontrados en los C. elaphus italianos coinciden con los tamanos alelicos encontrados en los britanicos, aun cuando pueden pertenecer a subespecies diferentes. Capreolus capreolus presento alelos similares en tamano (95, 100 pares de bases, pb) a los reportados para Cervus en el marcador INRA131. Contrariamente, los alelos encontrados para esta especie, en TGLA337, son mucho mas pequenos (112, 114 pb) que los reportados para Cervus (128 pb en adelante). Los C. capreolus de origen italiano, para este ultimo marcador, estuvieron fijados para un alelo de 112 pb, mientras que los de origen espanol lo estuvieron para un alelo de 114 pb. Capreolus mostro un alelo de 143 pb, para HUJ175, de tamano mayor que los reportados para Cervus elaphus (115-133 pb). La heterocigosis individual promedio fue de 0.333 para C. capreolus. El marcador que presento mayor variabilidad en las muestras de Dama dama procedentes de Espana fue TGLA337, con tres alelos de 124, 134 y 138 pb (H=0.333). El tamano de esos alelos esta dentro del rango de los encontrados en C. elaphus. En cambio, los del bovido Rupicapra pyrenaica resultaron ostensiblemente menores (104, 108, 112, 118 pb) para ese marcador. D. dama italiano mostro un alelo de 123 pb para el marcador FCB 193, lo cual coincide con el tamano de los alelos reportados, anteriormente, para C. elaphus (97-121 pb) y para C. nippon (123-139 pb).

Los cervidos neotropicales analizados presentaron una variabilidad genetica intermedia respecto a los dos extremos representados por C. elaphus y C. nippon. Mientras que Mazama americana, M. gouzaouhira y Odocoileus virginianus presentaron valores de heterocigosis bastante elevados, cercanos al conspicuo valor de los C. elaphus escoceses (H=0.71 en el estudio de Goodman et al. 2001; H=0.8066 en el presente estudio), las otras especies de ciervos neotropicales estudiados presentan niveles de variabilidad genetica menores, pero nunca con un valor tan extremo en su pobreza como el estimado, y aqui mostrado, en C. nippon.

[FIGURA 1 OMITIR]

En el Cuadro 3 se presentan los grupos de muestras de cervidos neotropicales que mostraron no estar en equilibrio Hardy-Weinberg. En general estas asociaciones se caracterizaron por ser poblaciones "artificiales". Esto hace referencia al hecho de asociar muestras procedentes de diferentes regiones geograficas e, inclusive, de diferentes especies dentro del mismo genero (caso de Mazama), lo que pone en evidencia, la existencia de efecto Wahlund (=subdivision) por la existencia de acervos geneticos diferenciados en el seno de los generos Mazama y Odocoileus en Latinoamerica. Este hecho viene dado por la gran cantidad de dudas taxonomicas que se han reportado para Mazama intragenericamente y, por ello, se trabajo este genero como una poblacion total con diferentes subpoblaciones: una unica poblacion global (tomando todas las muestras de Mazama como una unica poblacion), por paises, sin importar las especies, y por especies (o subespecies) teniendo en consideracion las regiones biogeograficas de procedencia de las muestras. Como hasta el momento actual se desconoce cuantos y cuales pueden ser los acervos geneticos diferentes en el seno de Odocoileus virginianus en Latinoamerica y en el seno de cada especie de Mazama e, incluso, cuantas especies diferentes de Mazama pueden existir, una forma de detectar la posible existencia de diferentes acervos geneticos es mediante la deteccion de efecto Wahlund, el cual se caracteriza por mostrar un exceso significativo de homocigotos. Por ejemplo, el grupo total de Mazama mostro un deficit significativo de heterocigotos para los marcadores Cervid 1 (p=0.0041), Cervid 3 (p=0.0000), IDVGA 55 (1r - 0.0105) y NVHRT 71 (p=0.0104) y para el conjunto global de todos los marcadores analizados en este genero tomado como un todo (p=0.0000). Esto significa que no existe un unico acervo genetico para el genero Mazama en toda la extension geografica analizada en Latinoamerica. Los individuos de Mazama agrupados por paises tambien mostraron un fuerte exceso de homocigotos para el marcador Cervid 1 (p=0.0022) y Cervid 3 (p=0.0073) en el caso de Colombia (lo cual denota la existencia de diferentes acervos geneticos para esos marcadores en la poblacion de Mazama en ese pais sudamericano), o para Cervid 3 (p=0.0422) en el caso de las Mazama de Bolivia. Tambien, el taxon Mazama americana proveniente de la region amazonica peruana de Loreto mostro no estar en equilibrio Hardy-Weinherg para Cervid 3 (p=0.0157), ni para el conjunto global de todos los marcadores analizados (p=0.0000). Cuando se analizo el grupo total de Mazama americana, independientemente de los paises de procedencia de las muestras, se encontro un defecto significativo de heterocigotos para Cervid 3 (p=0.0017), para IDVGA55 (p=0.0218) y para el conjunto global de marcadores (p=0.0021). Igualmente, al analizar el conjunto global de Mazama gouzaoubira se encontro un deficit de heterocigotos para Cervid 1 (p=0.0421), Cervid 3 (p=0.0014) y para el conjunto global de todos los marcadores analizados (p=0.0052). Este descubrimiento revela la existencia de diferentes acervos geneticos en el seno de Mazama americana y de Mazama gouzaoubira, respectivamente. Por el contrario, no se encontraron desviaciones respecto al equilibrio Hardy-Weinberg para los conjuntos de muestras de Mazama gouzaoubira de Venezuela, Guyana Francesa, y Bolivia, ni para las agrupaciones de muestras de M. americana del departamento de Cordoba (Alto Sinu, Colombia), Bolivia y M. rufina, lo que puede significar que las muestras obtenidas en esas regiones geograficas forman acervos geneticos unicos bien definidos. Tampoco se registro ningun caso de desviacion respecto al equilibrio Hardy-Weinberg para los conjuntos muestrales de Blastoceros dichotomus, Ozotoceros bezoarticus, Pudu mephistopholes, o Hippocamelus antisensis. Contrariamente, en el caso del genero Odocoileus se registraron algunos casos de desviacion respecto al equilibrio HardyWeinberg por exceso de homocigotos. Para el conjunto global de todas las muestras estudiadas de O. virginianus se detecto este fenomeno para los marcadores Cervid 1 (p=0.0225), Cervid 3 (p=0.0022) y para el conjunto global de marcadores analizados (p=0.0007), al igual que para el grupo total de ejemplares procedentes de Colombia (p=0.0002; p=0.0465 y p=0.0001, respectivamente). Por lo tanto, en Odocoileus virginianus a nivel global de Latinoamerica y a nivel de Colombia, al igual que en el caso global de Mazama, encontramos evidencia de la existencia de acervos geneticos altamente diferenciados. En el Cuadro 4, se muestran los resultados, para los marcadores analizados mas polimorficos, de los estadisticos f de Robertson & Hill (1984) y F de Wright (1965) para las poblaciones de cervidos europeos. Contrariamente a lo encontrado para las poblaciones de ciervos latinoamericanos, todas las muestras de ciervos europeos mostraron estar en equilibrio Hardy-Weinberg, con la excepcion de Capreolus Capreolus en Italia.

Heterogeneidad genetica entre cervidos neotropicales: El Cuadro 5 muestra los valores de la heterogeneidad genetica, medida mediante el estadistico [F.sub.ST] y sus probabilidades exactas asociadas, entre diversas poblaciones de Mazama conformadas a partir de los paises de procedencia de las muestras, mientras que los Cuadros 6, 7 y 8 muestran las heterogeneidades medidas de identica forma para las diversas poblaciones analizadas de Mazama americana, para las diferentes poblaciones estudiadas de Odocoileus virginianus y para los diferentes pares analizados de especies del genero Mazama. Tambien se muestra en el Cuadro 9, las estimas teoricas de flujo genico entre diferentes agrupaciones geograficas de Mazama y de Odocoileus virginianus. Como se observa, existe heterogeneidad genetica significativa entre diversas poblaciones de Mazama y de Odocoileus, respectivamente, en la mayor parte de los casos. Algunos ejemplos notables son los siguientes. Las poblaciones totales de Mazama de Colombia y Peru difirieron significativamente para el marcador Cervid 1 (p=0.04192), al igual que la poblacion de Peru difirio significativamente de la de Venezuela (p=0.01386). El conjunto global de todas las poblaciones de Mazama por paises (Bolivia, Guyana, Colombia, Peru, Ecuador y Paraguay) para ese mismo marcador, tambien, mostro heterogeneidad significativa (p=0.01938). El marcador Cervid 3 mostro diferencias entre la poblacion total de Mazama de Bolivia y Venezuela (p=0.0058), de Colombia y Peru (p=0.0344), de Colombia y Venezuela (p=0.02036) y de Peru y Venezuela (p=0.04104). Tambien fue significativa la heterogeneidad genetica para todo el conjunto de poblaciones de Mazama para Cervid 3 (p=0.0041). Cuando se comparo entre especies de Mazama, las diferencias fueron significativas para el marcador Cervid 1 entre M. americana y M. rufzna (p=0.0316) y para la comparacion englobando las tres especies de este genero (p=0.02249). Lo mismo ocurre para el marcador Cervid 3 (p=0.0039), donde todos los pares de especies difieren con significacion estadistica. Identico hecho se constato al comparar simultaneamente todos los loci analizados para las tres especies de Mazama (p=0.0050). En el seno de M. americana, se detecto heterogeneidad genetica significativa para Cervid 1 entre la poblacion del departamento de Cordoba (Norte de Colombia) y la de Leticia (Amazonia Colombiana) y entre la primera y la poblacion de Loreto en la Amazonia peruana (p=0.01198 y p=0.0131, respectivamente), al igual que para la comparacion simultanea de todas las poblaciones estudiadas de M. americana (p=0.0057). Similar circunstancia se encontro para Cervid 3 entre la poblacion de Cordoba y la de Loreto (Peru) (p=0.01548) y para el conjunto analizado de todas las poblaciones de esta especie (p=0.0349). Por el contrario, no se detectaron diferencias significativas para los loci IDVGA 55, BOVIRBP o NVHRT73, por citar algunos ejemplos. En el caso de M. gouzaoubira, se determinaron diferencias entre las poblaciones de Bolivia y Venezuela (p=0.0251; Cervid 3) y para el conjunto global de poblaciones de esta especie para ese mismo marcador (p=0.0005). En el caso de Odocoileus virginianus, se observo una conspicua diferenciacion del conjunto de animales colombianos respecto a las muestras de las restantes poblaciones analizadas para los marcadores Cervid 3 (p=0.0055), IDVGA 55 (p= 0.0238) y NVHRT 16 (pA.04) y para el conjunto total de microsatelites estudiados (p=0.0005). De modo mas particularizado, la muestra colombiana y la venezolana fueron significativamente diferentes para IDVGA 55 (p-0.02378) y Cervid 3 (pA.0056). En el interior de Colombia, se analizaron dos poblaciones de O. virginianus, que representan las cordilleras andinas central y oriental, no encontrandose ningun caso de heterogeneidad genetica significativa para ninguno de los loci analizados. Resulta evidente que el marcador que mejor ayuda a discriminar poblaciones en el seno de esos dos generos de ciervos neotropicales fue Cervid 3, por lo que se recomienda su uso para el analisis poblacional de esos taxones.

Cuando se estimo el flujo genico entre las diferentes agrupaciones de Mazama sp., M. americana y de M. gouzaoubira, los valores obtenidos fueron muy bajos (Nm=0.38-0.85). Igualmente, la estima de flujo genico entre las poblaciones de Odocoileus virginianus por paises fue extremadamente baja (Nm=0.36). La unica estima ligeramente elevada fue la que se encontro entre las dos poblaciones colombianas de esta especie (Cordillera central vs. Cordillera oriental) (Nm=1.44). Todo ello implica que el manejo conservacionista de las poblaciones de Mazama y de Odocoileus tiene que tener muy presente la elevada heterogeneidad genetica, y el debil flujo genico, que parece ocurrir entre poblaciones de esos dos generos de cervidos neotropicales.

Deteccion de cuellos de botella en cervidos neotropicales: El analisis de la deteccion de posibles cuellos de botella recientes para las diferentes especies y poblaciones estudiadas de cervidos neotropicales, a partir de la teoria de Luikart et al. (1998), no detecto evidencias fehacientes de la existencia de cuellos de botella para los taxones analizados con los loci microsatelites empleados (Cuadro 10). Los unicos casos que se aproximaron a esa situacion fueron el de Odocoileus virginianus, para el conjunto global de muestras, mediante el test de Wilcoxon y para el modelo mutacional de los alelos infinitos (p=0.0156), el de O. virginianus a nivel de Colombia para el marcador IDVGA 55 para ambos modelos mutacionales, alelos infinitos y "step-wise" (p=0.0060 y p=0.0160, respectivamente) y para Hippocamelus antisensis, en el caso de Cervid 1 (p=0.0458). No obstante, no se puede enfatizar la deteccion clara y conspicua de cuellos de botella recientes en las especies de ciervos neotropicales estudiados. Es posible que el tamano de las muestras y el numero de marcadores se deban ampliar para aumentar el poder estadistico de las tecnicas usadas en la deteccion de cuellos de botella.

DISCUSION

Cabe resaltar que, con certeza, solo se observo la no amplificacion de Cervid 1 y RMO12 para los individuos de las especies del genero Capreolus y de Cervid 1 y Cervid 3 en C. elaphus y C. nippon. Esto demuestra que existe una considerable cantidad de loci microsatelites conservados en especies y tazones diferentes de Artiodactyla, al igual que ocurre en otros grupos de mamiferos (Gortari et al. 1997; Slate et al. 1998; Ruiz-Garcia 2005; Ruiz-Garcia & Alvarez 2003; Ruiz-Garcia et al. 2006). La mayor cantidad de resultados se obtuvieron para Odocoileus virginianus y Mazama americana. Esto no solo se debe a la mayor cantidad de muestras analizadas de esas especies, sino al alto polimorfismo encontrado en, y entre, las diferentes regiones geograficas de procedencia de esas muestras. Adicionalmente, los ejemplares de Mazama gouazoubira presentaron el mas alto grado de polimorfismo y diversidad genetica con los microsatelites empleados, aun cuando el tamano muestral obtenido y el numero estudiado de poblaciones fue considerablemente menor que en las dos especies precedentes.

Tal como se preveia, las muestras de C. elaphus de Escocia, una poblacion conformada por la introduccion de ejemplares de diversas subespecies, es la que presento una variabilidad genetica mas conspicua. Igualmente, y tal como era previsible, la especie que presento menor variabilidad genetica fue la poblacion de C. nippon escocesa, mostrando un fuerte efecto fundador durante su formacion a mediados del siglo XIX, o principio del siglo XX. Las restantes especies de cervidos europeos y neotropicales presentaron diversidades geneticas intermedias entre esos dos valores extremos. De este modo, no parece que las especies analizadas de cervidos neotropicales en este estudio esten afectadas por una especial depauperacion genetica, la cual es caracteristica de poblaciones con tamanos poblacionales efectivos muy reducidos. Igualmente, la mayor parte de las especies analizadas tuvieron valores promedios de heterocigosis mas elevados que una buena fraccion de las poblaciones de tamano considerable de C. nippon en Japon (Goodman et al. 2001). En consonancia con esta afirmacion, no se detecto ningun cuello de botella genetico evidente en los diversos taxones de cervidos neotropicales analizados, al utilizar los metodos de Cornuet & Luikart (1996) y Luikart et al. (1998). La unica excepcion fue la de Mazama rufina con una variabilidad genetica considerablemente reducida (H=0.125). Sin embargo, el tamano muestra] utilizado para esta especie fue extremadamente pequeno (n =2). En general, utilizando otros marcadores moleculares, en los pocos estudios realizados con ciervos neotropicales, se han encontrado niveles de variabilidad genetica muy diversos. Gonzalez et al. (1998), estudiando 453 pares de bases (pb) para la region de control del ADN mitocondrial de 54 ejemplares de Ozotoceros bezoarticus procedentes de seis localidades diferentes, encontraron niveles de diversidad genetica extremadamente elevados (45 haplotipos con ninguna localidad compartiendo haplotipos; diversidad haplotipica =0.99 y rc (diversidad nucleotidica) =0.011-0.025). Moscarella et al. (2003), analizando 730 pb de la region de control en 26 individuos representando las tres subespecies de Odocoileus virginianus en Venezuela (O. u gymnotis, O. v goudotti, O. v margaritae), mostraron niveles moderados de diversidad genetica. Los niveles de diversidad haplotipica fueron muy elevados para la muestra total (0.988) y para las tres subespecies (0.967, 1, l, respectivamente), siendo esos valores notablemente superiores a los encontrados en poblaciones norteamericanas de O. virginianus (Ellsworth et al. 1994; Purdue et al. 2000). Sin embargo, los niveles de ir fueron muy heterogeneos. El valor de O. v. gymnotis (0.029) es elevado, el de O. u margaritae (0.016) es medio y el de O. goudotti (0.005) es bajo. El resultado obtenido para esta ultima subespecie es muy similar al encontrado para Munfacus crinifrons, cervido del sudeste asiatico. Wu & Fang (2005), analizando tambien la region de control mitocondrial, encontraron nueve haplotipos en 44 ejemplares de esta especie con pequenos numeros efectivos historicos con un valor de [pi] = 0.00562 muy pequeno, pero con una diversidad haplotipica considerable (0.862). Marquez et al. (2006), estudiando 601 pb de la region de control mitocondrial y 486 pb del citocromo-b mitocondrial en 127 especimenes de Blastocerus dichotomus de cuatro areas de la cuenca del rio de La Plata, determinaron 17 haplotipos para ta region de control en Brasil, Argentina y Bolivia pero, esos haplotipos unicamente difirieron por 1-8 substituciones nucleotidicas, mientras que con citocromo-b encontraron solo tres sitios variables que determinaron cuatro haplotipos. Igualmente, la diversidad haplotipica estimada para la muestra global (0.64) y para todas las muestras brasilenas (0.57) fue modesta, siendo [pi], especialmente, bajo para esas dos muestras (0.0017 y 0.0012, respectivamente). En identica circunstancia, no se descubrio variacion cariotipica (Duarte & Giannoni 1995) en esta especie.

Por otra parte, la heterocigosis esperada (H) obtenida con los microsatelites resulto considerablemente mayor que los valores obte nidos con isoenzimas y proteinas plasmaticas, como era de esperarse. Algunos ejemplos con cervidos son los siguientes: Cervus elaphus atlanticus, H=0, C. e. scoticus, H=0.03, con 35 loci isoenzimaticos (Gyllensten et al. 1983); Mazama americana, H=0.070, M. gouazoubira, H=0.079, Odocoileus virginianus del suroeste de Estados Unidos y de Surinam, H=0.078 y 0.036, respectivamente (Smith et al. 1986); poblaciones norteamericanas de C. elaphus, H=0.012-0.034, utilizando 16 loci isoenzimaticos (Glenn & Smith 1993); poblaciones hibridas entre C. elaphus y C. nippon, para 15 marcadores, H=0.051 y 0.033 (Herzog et al. 1991); Dama dama, en Inglaterra y Gales para 30 loci, H=O (Pemberton & Smith 1985); Odocoileus virginianus, para ocho poblaciones y 35 loci, H=0.049-0.092 (Smith et al. 1985); Alces alces, 18 poblaciones estudiadas en Escandinavia para 23 loci, H=0.006-0.047 (Ryman et al. 1980). Oliveira et al. (2005) analizaron 147 individuos de Blastocerus dichotomus procedentes de tres areas del rio Parana con 17 loci isoenzimaticos. Once de esos loci resultaron monomorficos, siendo los seis restantes polimorficos (polimorfismo del 35.29 %) con H=0.0631 y el numero promedio de alelos por locus de 1.47 [+ or -] 0.45. Recordemos algunos de los valores de H obtenidos en el presente trabajo con loci microsatelites: C. elaphus en Escocia, H=0.81; C. elaphus en Italia, H=0.56; Odocoileus virginianus en Colombia, H=0.62, Dama dama en Espana, H=0.73, Mazama gouzaoubira, H=0.70 o Blastocerus dichotomus, tan solo con 8 individuos, H=0.36.

Con los resultados obtenidos para la estima del equilibrio Hardy-Weinberg deben hacerse dos anotaciones. La primera de ellas es que las poblaciones que no se encontraron en equilibrio (Mazama y Odocoileus, especialmente) recogian individuos de diferentes localidades geograficas en diferentes puntos de Latinoamerica. De este modo, la ausencia de equilibrio Hardy-Weinberg por exceso de homocigotos puede estar promovida por efecto Wahlund (= subdivision). Esto es, por efecto de subdivision geografica debido a la existencia de acervos geneticos bien diferenciados en el seno de esas especies y generos en diversos paises latinoamericanos. Un caso excepcional se dio para la muestra de Mazama americana procedentes de la region de Loreto, Amazonia peruana. Todos los individuos analizados pertenecieron a una misma region geografica relativamente pequena. La falta de equilibrio podria explicarse, en ese caso, por la existencia de consanguinidad en el seno de esa poblacion o por la existencia en simpatria de dos especies de Mazama, similares morfologicamente, pero todavia no determinadas taxonomicamente. Esto ya ha sido reportado por otros autores para otros grupos de Mazama (Duarte & Merino 1997). Estos autores mostraron que dos especies de Mazama, aparentemente identicas desde el punto de vista morfologico, poseian cariotipos diferentes.

El analisis de heterogeneidad genetica ([F.sub.ST]) mostro poblaciones del genero Mazama fuertemente diferenciadas para los loci Cervid 1 y Cervid 3. La importancia de este hecho reside en la utilidad de estos marcadores para diferenciar ejemplares de diversas procedencias, lo que es de mucha utilidad cuando no se posee la certeza del origen geografico de los ejemplares, como es el caso de individuos decomisados. Por otro lado, es apreciable que el flujo genetico entre las poblaciones de Mazama es muy reducido, siendo apenas moderado entre las poblaciones de Odocoileus virginianus que se encuentran en la cordillera central y oriental de los Andes colombianos. Por lo tanto, resulta evidente una fuerte heterogeneidad genetica entre las diversas especies de Mazama y en el interior de M. americana. Esto es equiparable a lo encontrado en otras especies de ciervos neotropicales con otros marcadores moleculares. Gonzalez et al. (1998) estimaron una fuerte heterogeneidad genetica entre 6 poblaciones de Ozotoceros bezoarticus distribuidas por Brasil, Uruguay y Argentina ([[phi].sub.ST] =0.268-0.523 con promedio 0.37, p <0.002). Unicamente, dos poblaciones argentinas de esta especie no alcanzaron a mostrar heterogeneidad significativa entre ellas ([[phi].sub.ST]. =0.064, p=0.17). La estima de flujo genico entre estas dos poblaciones fue elevada (Nm=7.1). Sin embargo, la estima promedio de flujo genico entre todas las poblaciones a partir del estadistico [[phi].sub.ST] y a partir del metodo de Slatkin & Maddison (1989) (0.87 y 0.5) muestran el fuerte aislamiento genetico entre esas poblaciones de este ciervo.

El aislamiento por distancia (clina norte-sur) parece contribuir a la heterogeneidad genetica encontrada (r = 0.6, p=0.014). La fuerte diferenciacion genetica que se encuentra en la poblacion de Mazama americana del area amazonica de Loreto en Peru es similar a lo encontrado en Ozotoceros bezoarticus. En el interior de las poblaciones brasilenas de esta especie los haplotipos divergieron entre el 0.4% al 5.5%, mientras que en el interior de la poblaciones uruguayas, esos valores oscilaron entre el 0.2% al 5.5%. Tambien, la heterogeneidad genetica entre poblaciones de Blastocerus dichotomus de la cuenca del rio de La Plata (Marquez et al. 2006) resulto altamente significativa tanto entre regiones ([[phi].sub.CT] =0.56, p=0.02) como entre poblaciones dentro de las regiones ([[phi].sub.SC] =0.25, p=0.00), aunque, tambien, lo fue dentro de las poblaciones ([[phi].sub.ST] =0.67, p=0.00). De nuevo, el aislamiento por distancia explico una proporcion importante de las diferencias geneticas entre las poblaciones estudiadas (r =0.792, p <0.05). No obstante, entre tres poblaciones de esta especie en la cuenca del rio Parana, la heterogeneidad fue mucho mas moderada (FST =0.049; Nm=4.9) y las distancias geneticas entre esas poblaciones fueron pequenas (0.0140.051) (Oliveira et al. 2005). Tambien es destacable la heterogeneidad genetica significativa entre todas las poblaciones de O. virginianus estudiadas aqui en diversos paises y entre las poblaciones de O. virginianus de Colombia y Venezuela. Este resultado es concordante con la heterogeneidad genetica que presenta esta especie, por ejemplo, en Venezuela (Moscarella et al. 2003). Entre todas las poblaciones venezolanas estudiadas, la heterogeneidad resulto altamente significativa ([[phi].sub.ST] = 0.27, p <0.0001), aunque, especialmente, entre O. v goudotti (poblacion andina) y O. v. margaritae (poblacion insular caribena) ([[phi].sub.ST] = .615). En este estudio se detectaron cuatro linajes geneticos diferentes. En el primero se detectaron los haplotipos de O. v goudotti junto con cinco haplotipos de O. v. gymnotis; en el segundo los haplotipos de O. v margaritae y un haplotipo de O. v gymnotis procedente de Sucre, area geografica cercana a la isla Margarita; en el tercero, se agruparon haplotipos de ejemplares procedentes del area de los Llanos y en el cuarto linaje, se encontraron haplotipos de animales procedentes de la costa de ese pais. Esto mostro la inexistencia de monofilia en el seno de O. v gymnotis. No es de extranar, pues, la heterogeneidad genetica encontrada en el presente estudio al utilizar rnicrosatelites entre diversas poblaciones de O. virginianus. De hecho, la heterogeneidad genetica encontrada entre secuencias mitocondriales de O. virginianus ha mostrado que existe mas diferenciacion genetica entre los haplotipos de poblaciones sudamericanas de esta especie respecto a poblaciones norteamericanas de la misma especie que entre la ultima y O. hemionus de Norteamerica (Moscarella et al. 2003), aunque, en ocasiones, se encuentran algunos animales en Sudamerica mas similares a los norteamericanos que a otros ejemplares sudamericanos (Ruiz-Garcia et al. 2007). A nivel morfologico, se han reconocido, al menos, 30 subespecies de O. virginianus en Norte y Centro America y ocho subespecies en Sudamerica (Baker 1984; Smith 1991) lo que ratifica la enorme diversidad de esta especie. Muchos de los procesos que han causado una fuerte heterogeneidad genetica entre las poblaciones de cervidos pueden estar relacionadas con cambios climaticos originados en el Pleistoceno superior. Por ejemplo, Vernesi et al. (2002) mostraron que la alta heterogeneidad genetica detenninada para Capreolus capreolus en Europa ([[phi].sub.ST] =0.60), reflejada entre tres grupos geneticamente bien diferenciados (Italia central, el grupo alpino relacionado con poblaciones de Francia, Espana y Noruega, y las poblaciones del este de Europa) se formaron en tres refugios diferentes del sur de Europa durante el Pleistoceno superior.

Mediante la teoria de Comuet & Luikart (1996) y Luikart et al. (1998) se estimo la posible existencia de cuellos de botella recientes en las poblaciones neotropicales de ciervos analizadas, obteniendose resultados no significativos en todos los casos. Debe aclararse que para algunas de estas especies, como Ozotoceros bezoarticus, Pudu mephistopheles y Mazama rufina, el pequeno numero de ejemplares analizados no pennite hacer una interpretacion en este aspecto suficientemente adecuada, por lo cual es recomendable realizar un muestreo mas intensivo para esos taxones. Sabemos que las poblaciones de Ozotoceros bezoarticus aunque, actualmente, no superan los 60.000-80.000 individuos, esas poblaciones constaron de millones de individuos debido a la elevada diversidad genetica que posee esa especie actualmente (Gonzalez et al. 1998). Eso significa que la reduccion demografica es un evento muy reciente que todavia no ha tenido repercusion en los niveles de variabilidad genetica de esa especie. Algo similar ha sido reportado para otras especies de cervidos. Por ejemplo, Balakrishnan et al. (2003) determinaron, en tres subespecies de Cervus eldi del sudeste asiatico (C. eldi eldi, C. e. thamin, C. e. siamensis) en estado critico, sus correspondientes diversidades geneticas a partir de 478 pb de la region de control mitocondrial. Dos de ellas todavia muestran una muy elevada diversidad (C. e. thamin: h = 0.82, [pi] = 0.024 y C. e. siamensis: h = 0.81, [pi] = 0.014), lo que refleja que, en el pasado, esas poblaciones contaban millones de individuos reproductores y que las poblaciones se han reducido muy recientemente. En el caso de la tercera subespecie, el cuello de botella ha sido tan brutal que no muestra variacion haplotipica. En el caso de Blastocerus dichotomes del Pantanal brasileno parece que experimento una expansion poblacional hace entre 25 000 y 28 000 anos.

La utilizacion de loci microsatelites para poder determinar la estructura genetica de cervidos neotropicales, al igual que la secuen ciacion de genes mitocondriales, y un muestreo mas intensivo de esas especies es decisivo para tener un conocimiento preciso y exacto de la historia natural de las mismas y, por lo tanto, la posibilidad de poder manejarlas correctamente desde la perspectiva de la biologia de la conservacion.

AGRADECIMIENTOS

Los autores agradecemos enfaticamente a todas aquellas personas que ayudaron en la tarea de obtener muestras biologicas de cervi dos neotropicales. Entre ellas cabe destacar a Hugo Galvez de Iquitos (Peru) y a Andres Eloy Bracho de Maracaibo (Venezuela). Tambien se agradece la obtencion de muestras por parte de Aunando Castellanos (Ecuador), Francois Catzeflis (Francia) y Jordi Jordana (Espana). Las comunidades indigenas Yaguas, Ticuras y Huitoto de la Amazonia Colombiana y a las comunidades indigenas Bora, Ocaina, ShipigoComibo, Capanahua, Angoteros, Orejon, Cocama, Kishuarana y Alama en la Amazonia Peruana tambien colaboraron en la obtencion de muestras. Igualmente, se reconoce la ayuda ofrecida por Hector Corredor (Argentina) al hacernos llegar muestras de Hippocamelus antisensis, recogidas en campo. Se agradece especialmente la ayuda prestada por K. Roed (Noruega) por el envio de cebadores de microsatelites disenados para Rangifer tarandus que fueron aplicados en ciervos neotropicales. A la Pontificia Universidad Javeriana agradecemos los apoyos prestados por la Decanatura de la Facultad de Ciencias y por la Vicerrectoria Academica por financiar parcialmente un viaje a Bolivia, en 1997, donde se obtuvieron algunas de las muestras.
ANEXO I

Numero de alelos y rango de tamanos alelicos detectados previamente
para diversos loci microsatelites (RM012, BM757, IDVGA055, FCB193,
TGLA337, HUJ175, BOVIRBP, TGLA127 y FSHB) en Cervus nippon y C.
elaphus. Adicionalmente se muestra la temperatura de anillamiento
para la PCR de cada marcador.

Previously detected allele numbers and size allele range for diverse
DNA microsatellite loci analyzed (RM012, BM757, IDVGA055, FCB193,
TGLA337, HUJ175, BOVIRBP, TGLA127 and FSHB) in Cervus nippon and
C. elaphus. In addition, the annelling temperature for the PCR of
each marker is shown.

             # alelos         Rango alelos         # alelos
Locus      Cervus nippon     Cervus nippon      Cervus elaphus

RM012            1                115                 12
BM757            2              175, 177              12+
INRA131          1                107                  6
IDVGA055         1                213                  5
FCB193           4         123, 127, 129, 139         12
TGLA337          1                128                  5
HUJI175          1                139                  7
BOVIRBP          3              142-146                8
TGLA127          1                157                  8+
FSHB             1                181                 12+


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Manuel Ruiz-Garcia (1)*, Maria Martinez-Aguero (1), Diana Alvarez (1) & Simon Goodman (2)

(1.) Unidad de Genetica (Genetica de Poblaciones-Biologia Evolutiva), Departamento de Biologia, Facultad de Ciencias, Pontificia Universidad Javeriana, Cra 7A No 43-82, Bogota DC. Colombia; mruiz cLjaveriana.edu.co; mruizgar@yahoo.es

(2.) Institute of Cell, Animal and Population Biology, University of Edinburgh, United Kingdom.

* Correspondence

Recibido 14-X-2007. Corregido 05-1V-2009. Aceptado 07-V-2009.
CUADRO 1

Muestras de cervidos neotropicales utilizadas para el analisis de
microsatelites de ADN

TABLE 1

Neotropical Cervidae samples employed for the DNA microsatellite
analysis

                           No de     Tipo de
Especie                   Muestras   Muestra         Region

Odocoileus virginianus       9        Pelo     Cordillera Oriental
                             7        Pelo     Cordillera Central
                             2       Sangre           WSPA
                             4        Pelo     Serrania de Merida
                             1        Pelo            Peten
Mazama americana             7        Pelo         Santa Cruz
                             4        Pelo          Alto Sinu
                             1       Tejido           Huila
                             2        Pelo           Leticia
                             6       Tejido          Iquitos
                             1       Tejido
                             1        Pelo          Asuncion
Mazama gouazoubira           2        Pelo           La Paz
                             3       Tejido
                             2        Pelo     Serrania de Merida
                             1        Pelo          Asuncion
Mazama rufina                1       Tejido           Choco
                             1        Pelo     Cordillera Oriental
Pudu mephistopheles          1       Tejido           Andes
                             1        Pelo     Cordillera Oriental
Ozotoceros bezoarticus       2        Pelo         Santa Cruz
Blastocerus dichotomus       2        Pelo         Santa Cruz
                             4        Pelo           La Paz
                             2        Pelo          Asuncion
Hippocamelus antisensis      4       Tejido           Salta

                           No de
Especie                   Muestras        Pais

Odocoileus virginianus       9          Colombia
                             7          Colombia
                             2          Colombia
                             4          venezuela
                             1          Guatemala
Mazama americana             7           Bolivia
                             4          Colombia
                             1          Colombia
                             2          Colombia
                             6            Peru
                             1       Guyana Francesa
                             1          Paraguay
Mazama gouazoubira           2           Bolivia
                             3       Guyana Francesa
                             2          venezuela
                             1          Paraguay
Mazama rufina                1           Ecuador
                             1          Colombia
Pudu mephistopheles          1            Peru
                             1          Colombia
Ozotoceros bezoarticus       2           Bolivia
Blastocerus dichotomus       2           Bolivia
                             4           Bolivia
                             2          Paraguay
Hippocamelus antisensis      4          Argentina

CUADRO 2

Heterocigosis insesgada esperada, heterocigosis promedio
por especie, desviacion y numero promedio de alelos por locus
en ocho especies de ciervos neotropicales y en dos especies
de ciervos europeos

TABLE 2

Expected unbiased heterozygosity, average heterozygosity
per species, deviation and average allele number per locus for
eight Neotropical deer species and in two European deer species

                                H
Especie          Locus      insesgada   H promedio

Mazama           Cv 1         0.886       0.6429
americana        Cv 3         0.846
                 FCB 193      0.500
                 TGLA 337     0.500
                 BOVIRBP      0.375
                 IDVGA 55     0.812
                 NVHRT 16     1.000
                 NVHRT 73     0.200
                 NVHRT 71     1.000
Mazama           Cv 1         0.820       0.7003
gouazoubira      Cv 3         0.833
                 BOVIRBP      0.625
                 IDVGA 55     0.812
                 NVHRT 16     1.000
                 NVHRT 71     0.500
                 NVHRT 30     1.000
Mazama           Cv 1         0.500       0.1250
rufina           Cv 3         0.000
                 NVHRT 16     0.000
                 NVHRT 73     1.000
Pudu             Cv 1         0.500       0.4062
mephistopheles   Cv 3         0.625
                 NVHRT 73     0.500
                 NVHRT 71     0.000
Odocoileus       Cv 1         0.711       0.6148
virginianus      Cv 3         0.857
                 FCB 193      0.500
                 BOVIRBP      0.320
                 IDVGA 55     0.784
                 NVHRT 16     0.611
                 NVHRT 73     0.625
                 NVHRT 71     0.500
                 NVHRT 30     0.625
Ozotoceros       Cv 1         0.625       0.5000
bezoarticus      Cv 3         0.750
                 BOVIRBP      0.000
                 IDVGA 55     0.625
Blastocerus      Cv 1         0.458       0.3599
dichotomus       Cv 3         0.781
                 FCB 193      0.000
                 TGLA 337     0.500
                 BOVIRBP      0.000
                 IDVGA 55     0.780
                 NVHRT 16     0.000
Hippocamelus     Cv 1         0.444       0.5030
antisensis       Cv 3         0.562
Capreolus        Cv 3         0.804       0.3173
capreolus        BOVIRBP      0.465
                 NVHRT 16     0.000
                 NVHRT 73     0.000
Capreolus        BOVIRBP      0.594       0.5940
pygargus

                            Desviacion   Alelos promedio
Especie          Locus       estandar       por locus

Mazama           Cv 1         0.2916         5.4444
americana        Cv 3
                 FCB 193
                 TGLA 337
                 BOVIRBP
                 IDVGA 55
                 NVHRT 16
                 NVHRT 73
                 NVHRT 71
Mazama           Cv 1         0.1835         5.1429
gouazoubira      Cv 3
                 BOVIRBP
                 IDVGA 55
                 NVHRT 16
                 NVHRT 71
                 NVHRT 30
Mazama           Cv 1         0.4748         1.5000
rufina           Cv 3
                 NVHRT 16
                 NVHRT 73
Pudu             Cv 1         0.2772         2.0000
mephistopheles   Cv 3
                 NVHRT 73
                 NVHRT 71
Odocoileus       Cv 1         0.1620         4.5556
virginianus      Cv 3
                 FCB 193
                 BOVIRBP
                 IDVGA 55
                 NVHRT 16
                 NVHRT 73
                 NVHRT 71
                 NVHRT 30
Ozotoceros       Cv 1         0.3385         2.7500
bezoarticus      Cv 3
                 BOVIRBP
                 IDVGA 55

Blastocerus      Cv 1         0.3586         2.8571
dichotomus       Cv 3
                 FCB 193
                 TGLA 337
                 BOVIRBP
                 IDVGA 55
                 NVHRT 16
Hippocamelus     Cv 1         0.0834         3.0000
antisensis       Cv 3
Capreolus        Cv 3         0.3916         3.5000
capreolus        BOVIRBP
                 NVHRT 16
                 NVHRT 73
Capreolus        BOVIRBP        --           3.0000
pygargus

CUADRO 3

Especies y generos de cervidos neotropicales y europeos
que no presentaron equilibrio Hardy-Weinberg

TABLE 3

Species and genera of Neotropical and European deers, which
were not in Hardy-Weinberg equilibrium

Especies      Region                   Loci               p

Mazama sp.    Todas las especies del   Cv1              0.0041
              genero                   Cv3              0.0000
                                       IDVGA55          0.0105
                                       NVHRT71          0.0104
                                       Todos los loci   0.0000
              Bolivia                  Cv3              0.0422
              Colombia                 Cv1              0.0022
                                       Cv3              0.0073
                                       Todos los loci   0.0002
              Peru                     Cv3              0.0259
                                       Todos los loci   0.0000
              Todos los paises         Todos los loci   0.0011
Mazama        Todas las regiones       Cv3              0.0017
americana                              IDVGA55          0.0218
                                       Todos los loci   0.0021
              Peru                     Cv3              0.0157
                                       Todos los loci   0.0000
Mazama        Todas las regiones       Cv1              0.0421
gouazoubira                            Cv3              0.0014
                                       Todos los loci   0.0052
Odocoileus    Todas las regiones       Cv1              0.0225
virginianus                            Cv3              0.0022
                                       Todos los loci   0.0007
              Guatemala y venezuela    Cv1              0.0000
                                       FCB 193          0.0000
              Colombia                 Cv1              0.0002
                                       Cv3              0.0465
                                       Todos los loci   0.0001
Capreolus     Italia                   Cv3              0.0427
capreolus                              Todos los loci   0.0085

* Unicamente se muestran aquellos marcadores que no mostraron el
citado equilibrio. p=probabilidad.

* Only those markers which were not in Hardy-Weinberg equilibrium
are herein shown. p=probability.

CUADRO 4

Analisis del equilibrio Hardy-Weinberg, para loci microsatelites,
aplicados a algunas especies de cervidos europeos y al bovido,
Rupricapra pyrenaica

TABLE 4

Hardy-Weinberg equilibrium analysis for microsatellite loci
applied to several European Cervidae species and to the
Bovidae, Rupricapra pyrenaica

                                  f      [ji al cuadrado]     p

RM012
Cervus elaphus (ESCOCIA)       -0.1563        0.4880        0.4847
Cervus elaphus (ITALIA)        -1.0000        2.0000        0.1573
BM757
Cervus elaphus (ESCOCIA)       -0.0625        0.0590        0.8087
FCB 193
Cervus elaphus (ESCOCIA)       -0.1000        0.2500        0.6171
HUJI 175
Cervus elaphus (ESCOCIA)        0.1719        0.5910        0.4420
TGLA 127
Cervus elaphus (ESCOCIA)        0.1719        0.9370        0.3330
INRA 131
Cervus elaphus (ESCOCIA)       -0.2500        0.9370        0.3329
IDVGA 55
Cervus elaphus (ESCOCIA)       -0.1000        0.1500        0.6985
TGLA 337
Cervus elaphus (ESCOCIA)        0.0125        0.0020        0.9685
Cervus elaphus (ITALIA)         0.0000        0.0000        1.0000
Dama dama (ESPANA)              0.6667        2.6670        0.1025
Rupicapra pyrenaica (ESPANA)   -0.2222        0.5930        0.4444
BOVIRBP
Cervus elaphus (ESCOCIA)        0.5000        1.0000        0.3170
FSHB
Cervus elaphus (ESCOCIA)        0.4000        3.2000        0.0736

                                 F      g. de l.

RM012
Cervus elaphus (ESCOCIA)       -0.282      10
Cervus elaphus (ITALIA)        -1.000       1
BM757
Cervus elaphus (ESCOCIA)       -0.212       6
FCB 193
Cervus elaphus (ESCOCIA)       -0.250      15
HUJI 175
Cervus elaphus (ESCOCIA)        0.167      10
TGLA 127
Cervus elaphus (ESCOCIA)       -0.389       6
INRA 131
Cervus elaphus (ESCOCIA)       -0.428       6
IDVGA 55
Cervus elaphus (ESCOCIA)       -0.212       6
TGLA 337
Cervus elaphus (ESCOCIA)        0.032       3
Cervus elaphus (ITALIA)        -0.333       1
Dama dama (ESPANA)              0.454       3
Rupicapra pyrenaica (ESPANA)   -0.391       6
BOVIRBP
Cervus elaphus (ESCOCIA)        0.200       3
FSHB
Cervus elaphus (ESCOCIA)        0.384      15

                               [ji al cuadrado]     H

RM012
Cervus elaphus (ESCOCIA)            1.591         0.867
Cervus elaphus (ITALIA)             2.000         0.667
BM757
Cervus elaphus (ESCOCIA)            1.563         0.733
FCB 193
Cervus elaphus (ESCOCIA)            1.563         0.889
HUJI 175
Cervus elaphus (ESCOCIA)            0.556         0.800
TGLA 127
Cervus elaphus (ESCOCIA)            2.269         0.800
INRA 131
Cervus elaphus (ESCOCIA)            2.755         0.778
IDVGA 55
Cervus elaphus (ESCOCIA)            0.675         0.773
TGLA 337
Cervus elaphus (ESCOCIA)            0.010         0.689
Cervus elaphus (ITALIA)             0.222         0.500
Dama dama (ESPANA)                  1.240         0.733
Rupicapra pyrenaica (ESPANA)        1.837         0.821
BOVIRBP
Cervus elaphus (ESCOCIA)            0.160         0.833
FSHB
Cervus elaphus (ESCOCIA)            2.959         0.929

* f =estadistico de Robertson & Hill (1984). F =estadistico de Wright
(1965). p= Probabilidad. g. de l. =grados de libertad.
H=heterocigosis insesgada de Nei (1978).

* f = Robertson & Hill's f statistic (1984). F =Wright's F statistic
(1965). p=Probability. g de l =degrees of freedom. H=Nei's
(1978) unbiased heterozygosity.

CUADRO 5

Diferenciacion genica entre pares de poblaciones de Mazama sp.

TABLE 5

Genic differentiation among population pairs of Mazama sp.

Cervid 1/Cervid 3               Bolivia     Guyana    Paraguay

Bolivia                                      0.5621      0.7847
Guyana                            0.3071                 0.4638
Paraguay                          0.1725     0.4783
Colombia                          0.0505     0.6910      0.0884
Peru                              0.3912     0.0986      0.4182
Ecuador                              N          N           N
Venezuela                       * 0.0058     0.2088      0.1413
Analisis global del marcador:
Cervid 1                        * 0.0193
Cervid 3                        * 0.0041

IDVGA 55/BOVIRBP                Bolivia    Paraguay   Venezuela
Bolivia                                      0.2946      0.4625
Paraguay                          1.0000                 0.2032
Venezuela                         1.0000        N
Analisis global del marcador:
IDVGA 55                          1.0000
BOVIRBP                           0.0925

NVHRT 73/NVHRT 16               Bolivia    Paraguay    Ecuador
Bolivia                                      1.0000      0.3327
Paraguay                             N                   0.3308
Ecuador                           1.0000        N
Venezuela                            N          N           N
Peru                              1.0000        N        0.3722
Analisis global del marcador:
NVHRT 73                          0.2468
NVHRT 16                          0.5726

NVHRT 71                         Guyana      Peru     Venezuela
Guyana                                       0.8989      1.0000
Peru                                                     0.4708
Venezuela
Analisis global del marcador:
NVHRT 71                          0.8890

TODOS LOS MARCADORES                       * 0.0142

Cervid 1/Cervid 3               Colombia      Peru

Bolivia                            0.2866     0.0653
Guyana                             0.1471     0.1505
Paraguay                           0.1838     0.0745
Colombia                                    * 0.0419
Peru                            * 0.0344
Ecuador                              N          N
Venezuela                       * 0.0203    * 0.0410
Analisis global del marcador:
Cervid 1
Cervid 3

IDVGA 55/BOVIRBP
Bolivia
Paraguay
Venezuela
Analisis global del marcador:
IDVGA 55
BOVIRBP

NVHRT 73/NVHRT 16               Venezuela     Peru
Bolivia                            1.0000       N
Paraguay                           1.0000       N
Ecuador                            0.3301       N
Venezuela                                       N
Peru                                  N
Analisis global del marcador:
NVHRT 73
NVHRT 16

NVHRT 71
Guyana
Peru
Venezuela
Analisis global del marcador:
NVHRT 71

TODOS LOS MARCADORES

Cervid 1/Cervid 3               Ecuador   Venezuela

Bolivia                          0.5118      0.8986
Guyana                           0.3348      0.2002
Paraguay                         0.2018      0.0853
Colombia                         0.3666      0.1628
Peru                             0.0680    * 0.0138
Ecuador                                      0.2069
Venezuela                           N
Analisis global del marcador:
Cervid 1
Cervid 3

IDVGA 55/BOVIRBP
Bolivia
Paraguay
Venezuela
Analisis global del marcador:
IDVGA 55
BOVIRBP

NVHRT 73/NVHRT 16
Bolivia
Paraguay
Ecuador
Venezuela
Peru
Analisis global del marcador:
NVHRT 73
NVHRT 16

NVHRT 71
Guyana
Peru
Venezuela
Analisis global del marcador:
NVHRT 71

TODOS LOS MARCADORES

* Los valores de las matrices corresponden a los valores de la
probabilidad (p) obtenidos a partir del estadistico [F.sub.st].
Por encima y por debajo de la diagonal principal se muestran los
valores de p para pares de microsatelites diferentes. * Diferencia
significativa (p= 0.05). N=no se obtuvo el correspondiente valor
por tamano muestral muy pequeno.

* The matrix values belong to the probability (p) obtained
throughtout the [F.sub.st] statistic.The values above and below
of the main matrix diagonal are p for two different microsatellites.
* Significant differences (p=0.05). N =the value was not
calculated since the sample sizes were very low.

CUADRO 6

Diferenciacion genica entre pares de poblaciones de
Mazama americana

TABLA 6

Genic differentiation among population pairs of
Mazama americana

Cervid 3/Cervid 1               Bolivia    Cordoba    Leticia    Peru

Bolivia                            --        0.2316    0.2000   0.5639
Cordoba                           0.3269      --       0.2121   0.0155
Leticia                           0.6397   * 0.0119     --      0.5997
Peru                              0.0986   * 0.0130    0.2126     --
Guyana                            0.2643     0.2403    0.2034   0.1645
Paraguay                          1.0000     0.1561    0.6063   0.3432
Huila                             0.7564     0.1530    1.0000   0.3239
Analisis global del marcador:
Cervid 3                        * 0.0349
Cervid 1                        * 0.0057

NVHRT 71/NVHRT 73               Bolivia      Peru     Guyana
Bolivia                            --         N          N
Peru                              1.0000      --       1.0000
Guyana                             N          N         --

BOVIRBP/IDVGA 55                Bolivia    Paraguay
Bolivia                            --        1.0000
Paraguay                          0.2851      --

TODOS LOS MARCADORES                         0.0671

Cervid 3/Cervid 1               Guyana   Paraguay   Huila

Bolivia                           N       0.1155      N
Cordoba                           N       0.2083      N
Leticia                           N       1.0000      N
Peru                              N       0.3027      N
Guyana                            --        N         N
Paraguay                        1.0000      --        N
Huila                           1.0000    1.0000     --
Analisis global del marcador:
Cervid 3
Cervid 1

NVHRT 71/NVHRT 73
Bolivia
Peru
Guyana

BOVIRBP/IDVGA 55
Bolivia
Paraguay

TODOS LOS MARCADORES

* Los valores de las matrices corresponden a los valores de la
probabilidad (p) obtenidos a partir del estadistico [F.sub.st].
Por encima y por debajo de la diagonal principal se muestran
los valores de p para pares de microsatelites diferentes.
* Diferencia significativa (p=0.05). N=no se obtuvo el
correspondiente valor por tamano muestral muy pequeno.

* The matrix values belong to the probability (p) obtained
throughtout the [F.sub.st] statistic. The values above and
below of the main matrix diagonal are p for two different
microsatellites. * Significant differences (p= 0.05).
N =the value was not calculated since the sample sizes
were very low.

CUADRO 7

Diferenciacion genica entre pares de poblaciones de
Odocoileus virginianus

TABLE 7

Genic differentiation among population pairs of Odocoileus
virginianus

Cervid 3/Cervid 1                Bolivia     Guyana

A

Bolivia                            --         0.1996
Guyana                              N          --
Venezuela                         0.4871        N
Paraguay                          1.0000        N
Analisis global del marcador:
Cervid 3                        * 0.0004
Cervid 1                          0.2703

IDVGA 55/BOVIRBP                 Bolivia    Venezuela
Bolivia                            --         0.4783
Venezuela                         0.3349        --
Paraguay                            N           N
Analisis global del marcador:
IDVGA 55                          0.0865
BOVIRBP                           0.3416

NVHRT 71/NVHRT 16               Venezuela   Paraguay
Venezuela                          --           N
Paraguay                          1.0000       --
Guyana                              N           N

TODOS LOS MARCADORES                        * 0.0005

B

Cervid 3/Cervid 1               Colombia    Venezuela
Colombia                           --         0.0731
Venezuela                         0.2993       --
Analisis global del marcador:

NVHRT 16/IDVGA 55               Colombia    Venezuela
Colombia                           --         0.0636
Venezuela                        * 0.0191      --
Analisis global del marcador:

TODOS LOS MARCADORES                        * 0.0071

C

Cervid 3/Cervid 1               Oriental     Central
Oriental                           --         0.6562
Central                           0.9336        --
Analisis global del marcador:

BOVIRBP/IDVGA 55                Oriental     Central
Oriental                           --         1.0000
Central                           0.2444        --
Analisis global del marcador:
TODOS LOS MARCADORES                          0.8571

Cervid 3/Cervid 1               Venezuela   Paraguay

A

Bolivia                         * 0.0250      0.1936
Guyana                            0.2005      0.3335
Venezuela                          --         0.0688
Paraguay                          0.2026        --
Analisis global del marcador:
Cervid 3
Cervid 1

IDVGA 55/BOVIRBP                Paraguay
Bolivia                           0.1983
Venezuela                         0.3323
Paraguay                           --
Analisis global del marcador:
IDVGA 55
BOVIRBP

NVHRT 71/NVHRT 16                Guyana
Venezuela                         1.0000
Paraguay                            N
Guyana                             --

TODOS LOS MARCADORES

B

Cervid 3/Cervid 1
Colombia
Venezuela
Analisis global del marcador:

NVHRT 16/IDVGA 55
Colombia
Venezuela
Analisis global del marcador:

TODOS LOS MARCADORES

C

Cervid 3/Cervid 1
Oriental
Central
Analisis global del marcador:

BOVIRBP/IDVGA 55
Oriental
Central
Analisis global del marcador:
TODOS LOS MARCADORES

* Los valores de las matrices corresponden a los valores de la
probabilidad (p) obtenidos a partir del estadistico [F.sub.st].
Por encima y por debajo de la diagonal principal se muestran
los valores de p para pares de microsatelites diferentes.
* Diferencia significativa (p= 0.05). N=no se obtuvo el
correspondiente valor por tamano muestral muy pequeno.
=Heterogeneidad genetica entre muestras de Bolivia, Guyana,
Venezuela y Paraguay. B =Heterogeneidad genetica entre las
muestras obtenidas en Colombia y Venezuela. C =Heterogeneidad
genetica entre muestras procedentes de la Cordillera Oriental
y Central de Colombia.

* The matrix values belong to the probability (p) obtained
throughtout the [F.sub.st] statistic. The values above and
below of the main matrix diagonal are p for two different
microsatellites. * Significant differences (p= 0.05). N =the
value was not calculated since the sample sizes were very
low. A =Genetic heterogeneity between samples from Bolivia,
Guyana, Venezuela and Paraguay. B =Genetic heterogeneity
between samples from Colombia and Venezuela. C =Genetic
heterogeneity between samples from the Eastern and Central
Andean cordilleras in Colombia.

CUADRO 8

Diferenciacion genica entre pares de especies de Mazama

TABLE 8

Genic differentiation among species pairs of Mazama

Cervid 3/Cervid 1        M. americana     M. rufina      M. gouazoubira

M. americana                  --           * 0.0112         * 0.0405
M. rufina                  * 0.0316           --            * 0.0849
M. gouazoubira             * 0.1235        * 0.5157            --
Analisis global
  del marcador:
Cervid 3                   * 0.0038
Cervid 1                   * 0.0249

BOVIRBP/IDvGA 55         M. americana   M. gouazoubira
M. americana                  --              1
M. gouazoubira             * 0.1813           --

NVHRT 73/NVHRT 16        M. americana     M. rufina      M. gouazoubira
M. americana                  --           * 0.3153            N
M. rufina                  * 0.3304           --               N
M. gouazoubira                1            * 0.4619            --

NVHRT 71                 M. americana   M. gouazoubira
M. americana                  --           * 0.0055
M. gouazoubira                                --

TODOS LOS MARCADORES                       * 0.0658

* Los valores de las matrices corresponden a los valores de la
probabilidad (p) obtenidos a partir del estadistico [F.sub.st].
Por encima y por debajo de la diagonal principal se muestran
los valores de p para pares de microsatelites diferentes.
* Diferencia (p=0.05). N=no se obtuvo el correspondiente valor
por tamano muestral muy pequeno.

* The matrix values belong to the probability (p) obtained
throughtout the Fst statistic. The values above and below
of the main matrix diagonal are p for two different
microsatellites. * Significant differences (p=0.05). N=the
value was not calculated since the sample sizes were very
low.

CUADRO 9

Flujo Genico (Nm) entre algunas poblaciones de cervidos neotropicales
respecto a diferentes escalas geograficas consideradas

TABLE 9

Gene flow (Nm) among several Neotropical deer populations taken
different geographic scales

Especie                  Poblaciones                Nm

Mazama sp.               Por paises                 0.6005
Mazama sp.               Por especies               0.6511
Mazama americana         Por Regiones               0.8578
Mazama gouazoubira       Por Regiones               0.3800
Odocoileus virginianus   Por paises                 0.3593
Odocoileus virginianus   Por Regiones Colombianas   1.4388

CUADRO 10

Determinacion de cuellos de botella recientes en diversos taxones y
poblaciones de cervidos neotropicales

TABLE 10

Recent Bottleneck event determination in Neotropical deer
populations

                                    Test estandarizado

Especie          Localidad            IAM      SMM

O. virginianus   Total              0.1240   0.2553
                 Colombia           0.1616   0.4290
                 Andes centrales    0.0547   0.1807
                 Andes orientales   0.1406   0.4412
Mazama sp.       Total              0.3267   0.0276 **
M. americana     Total              0.3577   0.2468
                 Bolivia            0.2304   0.2312
                 Colombia           0.2775   0.1005
                 Cordoba            0.1876   0.0922
                 Leticia            0.2742   0.2590
                 Peru               0.4498   0.2566
M. gouazoubira   Total              0.3061   0.4305
                 Guyana             0.2627
                 venezuela          0.2310   0.2927
                 Bolivia            0.4215
M. rufina        Total              0.0567   0.0838
B. dichotomus    Total              0.2220   0.4854
H. antisensis    Total              0.2559   0.3831

                                      Test Wilcoxon

Especie          Localidad            IAM         SMM

O. virginianus   Total              0.0156 **   0.6875
                 Colombia           0.0781      0.8906
                 Andes centrales    1.0000      1.0000
                 Andes orientales   1.0000      0.9062
Mazama sp.       Total              0.4688      0.0547
M. americana     Total              0.9062      0.0938
                 Bolivia            1.0000      1.0000
                 Colombia           0.2500      0.2500
                 Cordoba            0.1250      0.1250
                 Leticia            0.2500      0.2500
                 Peru               0.1875      0.1875
M. gouazoubira   Total              0.8750      0.8750
                 Guyana             0.2500
                 venezuela          0.8750      0.8750
                 Bolivia            0.8750
M. rufina        Total              1.0000      1.0000
B. dichotomus    Total              1.0000      0.6250
H. antisensis    Total              1.0000      0.8750

* IAM=Modelo mutacional de alelos infinitos. SMM=Modelo mutacional
"step-wise". En negrilla, las probabilidades significativas.

* IAM=Infinite allele mutation model. SMM=Mutation step-wise model.
** In bold, significant probabilities.
COPYRIGHT 2009 Universidad de Costa Rica
No portion of this article can be reproduced without the express written permission from the copyright holder.
Copyright 2009 Gale, Cengage Learning. All rights reserved.

Article Details
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Author:Ruiz-Garcia, Manuel; Martinez-Aguero, Maria; Alvarez, Diana; Goodman, Simon
Publication:Revista de Biologia Tropical
Article Type:Report
Date:Sep 1, 2009
Words:13387
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