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Vaccines against Leishmania/Vacunas contra Leishmania/As vacinas contra Leishmania.

GENERALIDADES

La leishmaniosis es una enfermedad causada por protozoos del genero Leishmania. Se trata de un parasito intracelular obligado que reside dentro del macrofago, donde prolifera, y que es transmitido por flebotomos. Se ha descrito la leishmaniosis en 98 paises de cinco continentes, afecta a mas de 12 millones de personas y cerca de 350 millones estan en riesgo de padecerla. Cada ano se producen entre 1,5 y 2 millones de casos nuevos de leishmaniosis tegumentaria y 500.000 de la forma visceral (1-3).

La leishmaniosis tegumentaria esta presente en America Central y Suramerica, con excepcion de Chile y Uruguay, y la forma visceral, en doce de sus paises, aunque con baja frecuencia en los considerados andinos (Bolivia, Colombia, Ecuador, Peru y Venezuela), excepto Brasil que tiene morbimortalidad importante por leishmaniosis en algunas de sus regiones. La compleja distribucion geografica de la leishmaniosis en America obedece a variaciones en los ciclos de transmision, los reservorios y los insectos transmisores, asi como a los deficientes programas de control. Todo ello explica la tendencia al aumento de las personas afectadas y del riesgo de transmision (4-6).

En la leishmaniosis, como en muchas de las enfermedades parasitarias, y a pesar de las variadas estrategias empleadas por el parasito para sobrevivir en el mamifero, el hospedero puede adquirir inmunidad a la infeccion por la misma especie que agrupa al patogeno, a pesar de la respuesta inmune celular ineficiente dependiente de las citocinas y la polarizacion de los macrofagos. Por tanto, la vacunacion podria ser exitosa para prevenir y tratar la enfermedad (1-3, 7). Tal estrategia seria importante por la toxicidad de la quimioterapia y la resistencia a la misma, que cada vez son mayores, al igual que por otras circunstancias: aumento de la incidencia de la enfermedad en sujetos inmunocomprometidos, dificultad para el control epidemiologico y definicion incompleta de los determinantes de susceptibilidad y progreso de la enfermedad (8).

PRIMERA GENERACION DE VACUNAS

Se han desarrollado varias generaciones de vacunas contra la leishmaniosis: la primera se centro en parasitos muertos o extractos crudos (9, 10). Las vacunas fabricadas con parasitos muertos con o sin adyuvante tienen las siguientes caracteristicas: composicion bioquimica estable, antigenicidad y tolerancia buenas, seguridad y bajo costo; fueron desarrolladas a partir de 1930 en Brasil y se han usado en Suramerica desde la decada de 1940 (11), por ejemplo, en Colombia y Ecuador (12).

Estas vacunas han sido preparadas con Leishmania amazonensis y/o Leishmania major, lisadas por autoclave y con adyuvante de Freund completo (13, 14), o mediante la mezcla de promastigotos de Leishmania mexicana sometidos al autoclave y BCG (Bacilo de Calmette-Guerin). Se han usado para inmunoterapia o inmunoquimioterapia, que resulto efectiva contra la enfermedad cutanea leve y en la prevencion de las lesiones cutaneas deformantes, pero no contra la leishmaniosis visceral (10, 12, 15, 16). En 1980 la vacunacion contra la leishmaniosis con parasitos muertos experimento un auge con base en la demostracion de la excelente proteccion que confiere en ratones, cuando se administra intravenosa o intraperitonealmente; infortunadamente, con el tiempo los parasitos sometidos al autoclave pierden su potencia inmunogenica (17).

En el caso de la leishmaniosis visceral canina, se han empleado con exito vacunas con fracciones del parasito, entre ellas la Leishmune[R], que consiste en una preparacion enriquecida de glicoproteina de promastigotos de Leishmania donovani, llamada ligando de fucosa-manosa (FML, por su sigla en ingles) que es formulada con saponina de Quillaja saponania, como adyuvante. La glicoproteina, el FML, es una molecula esencial (involucrada en la construccion del DNA del parasito) y constituye el mayor complejo antigenico de L. donovani (18). Tambien se ha usado ampliamente como candidato para vacuna el lipofosfoglicano (LPG) de Leishmania spp., un ligando para TLR2 en celulas NK que regula la produccion de IFN-[gamma] y TNF-[alpha], pero con resultados contradictorios (19).

Otro enfoque de la inmunoterapia consiste en usar una sola proteina antigenica del patogeno con el fin de provocar una respuesta inmunitaria especifica; en este sentido, se ha empleado el peptido gp63 de Leishmania (leishmanolisina) por ser una proteina inmunogena en todas las especies de Leishmania. Esto lo hace un buen candidato para vacunas de peptidos contra este grupo de parasitos (20, 21).

Tambien se han usado en perros vacunas contra Leishmania infantum atenuadas con gentamicina, aminoglucosido que afecta el metabolismo tiol-redox del parasito, que es crucial para su supervivencia cuando se expone al estres oxidativo generado durante su entrada al macrofago del mamifero; el parasito puede penetrar, pero no sobrevive y genera una fuerte respuesta inmunitaria del hospedero (22).

Asimismo, en perros se demostro proteccion contra L. infantum cuando se los inmunizaba con antigenos de secrecion/excrecion purificados de sobrenadantes de cultivos de promastigotos de esa especie del parasito sin adyuvante (LiESAp) o con el adyuvante dipeptido muramil (LiESAp-MDP), lo que induce la proliferacion de linfocitos especificos Th1, productores de IFN-[gamma], que potencian la actividad antileishmania mediada por el oxido nitrico secretado por monocitos derivados de macrofagos (23). Igual papel en la activacion de la respuesta Th1 tienen las enzimas enolasa (LdEno) y aldolasa (LdAld) de la via glicolitica extraidas de lisados solubles de aislamientos de L. donovani, y las serina-proteasas extracelulares de L. amazonensis, que incluso administrada por via nasal confiere proteccion en ratones BALB/c (24). El mismo efecto lo pueden tener las siguientes proteinas solubles: F14, elF2, P45, PDI, TPI y TPR (25). De igual forma se recurre a la cisteina-proteasa en liposomas cationicos con receptores agonistas contra L. donovanien el modelo del hamster (26, 27).

De la misma manera, pero en ratones, se ha empleado la vacunacion con proteina ribosomal purificada de extractos crudos de promastigotos (LRP por la sigla en ingles de Leishmania major ribosomal protein) combinada con el oligodeoxinucleotido CpG (CpG ODN), como adyuvante, pues induce respuesta Th1 (28). Igualmente, se han usado antigenos de Leishmania spp., tales como: tiol antioxidante especifico (TSA, por la sigla en ingles de thiol specific antioxidant), proteina 1 inductora de estres (LmSTI1, por la sigla en ingles), cisteina peptidasa (CPA), histona H1, factor iniciador eucariotico de Leishmania (LelF), proteina 11 de membrana de quinetoplasto (KMP11, por la sigla en ingles), proteinas de membranas Dp 7, gp 70-2 y FML, proteina B de superficie hidrofila acilada (HASPB, por la sigla en ingles), proteina especifica de amastigoto (A2) y cisteina-proteinasa B (CPB, por la sigla en ingles), todos con efecto protector individual para solo una especie de Leishmania (25, 29-39).

La inmunizacion con la enzima esterol metiltransferasa-c-24 (SMT, por la sigla en ingles) (formulada con una emulsion estable de monofosforil lipido A) es capaz de generar proteccion cruzada contra diferentes especies de Leishmania por ser una proteina altamente conservada entre ellas (36); esta proteina se requiere para la sintesis de ergosterol, el principal esterol de la membrana de Leishmania, que esta ausente en los mamiferos. Con poca efectividad profilactica se han empleado poliproteinas como Q, Leish-111f, Leish110f y KSAC (25).

Otra estrategia de vacunacion es el uso de las proteinas de choque termico (HSP por la sigla en ingles) llamadas chaperonas moleculares porque intervienen en el plegado, montaje, localizacion intracelular, secrecion y degradacion de proteinas como las inmunoglobulinas y el complejo mayor de histocompatibilidad), debido a que son altamente conservadas y tienen potencial para estimular las celulas T. Al respecto, se ha usado satisfactoriamente la proteina de choque termico 70 (HSP70) de L. donovani en el control de la infeccion en hamsteres (40, 41), incluso las observaciones indican que vacunas basadas en la combinacion de HSP70 con proteinas estimuladoras Th1 (triosa fosfato isomerasa, proteina disulfuro-isomerasa y el factor 2 de elongacion) de L. donovani potencian la efectividad en la destruccion del parasito intracelular (42).

SEGUNDA GENERACION DE VACUNAS

Se basa en una antigua observacion: que despues de curarse de una lesion el individuo se hace resistente a la reinfeccion. Esta practica, conocida como leishmanizacion, consiste en la inoculacion deliberada de formas vivas de Leishmania, procedentes del exudado de lesiones cutaneas de personas infectadas, en sitios anatomicos no expuestos de individuos sanos. Esta tecnica ha sido practicada por siglos (43, 44) y a gran escala en Israel, Iran y la extinta Union Sovietica (11, 17). Sin embargo, su empleo se ha limitado por razones eticas y por la aparicion de efectos adversos, como el desarrollo de lesiones persistentes, psoriasis, inmunosupresion, hipersensibilidad y persistencia del parasito; tambien por las dificultades en la cuantificacion del inoculo (9, 11, 17, 45).

La siguiente via en el desarrollo de vacunas contra Leishmania fue el uso de parasitos vivos atenuados por medios fisicos, quimicos o geneticos, a saber: cultivos in vitro por largos periodos, sensibilidad a la temperatura, atenuacion por rayos gamma, atenuacion quimica, mutagenesis quimica, cultivos bajo presion de drogas y modificaciones del parasito como la disrupcion genetica (46-50). Sin embargo, los principales problemas del uso de parasitos atenuados son la seguridad y la poca factibilidad de utilizarlos a gran escala en el campo (42, 51).

Al respecto, la atenuacion por modificacion genetica de los parasitos permite reducir la virulencia, mantener la inmunogenicidad y producir una respuesta inmunitaria similar a la obtenida con los parasitos vivos y virulentos, pero sin el dano asociado a estos (11).

Con la secuenciacion completa de L. major se puede atenuar su virulencia mediante el bloqueo o reemplazo (knock-out) de genes esenciales (7, 52). Lo que se pretende es disenar parasitos sin los genes que les garantizan larga supervivencia dentro del hospedero, haciendolos, por tanto, seguros para inmunizar (44). Por ejemplo, en L. major se modifico el gen de dihidrofolato reductasa-timidilato sintasa (DHFR-TS), y en L. mexicana la cisteina-proteasa CPA y CCPB (18, 53-55). Asimismo, por deleciones se han desarrollado leishmanias knock-out para los genes A2 rel, SIR2 y Hsp70-II y para genes de proteinas esenciales como: cisteina-proteinasa, transportador de bioterina, complejo citocromo C oxidasa, proteina parecida a ubiquitina, proteina que convierte el precursor Ufm1 a su forma conjugada y proteina p27 especifica de amastigotos (26, 54, 56-63).

En la atenuacion de la virulencia de Leishmania se ha recurrido a la adicion de casetes suicidas que ocasionan la muerte del parasito en respuesta a un determinado estimulo externo, como la introduccion de genes de sensibilidad a drogas (17), por ejemplo: la expresion en L. majorde los genes timidina-quinasa del virus herpes tipo 1 que la hacen sensible al ganciclovir (64) y el gen de la citosina-deaminasa de Sacharomyces cerevisiae, que hace al parasito sensible a drogas como 5-fluorocitosina (65).

Otro enfoque de las vacunas de segunda generacion es el uso de virus o bacterias vivos recombinantes que expresan antigenos de Leishmania. Ambos, virus y bacterias, expresan proteinas del parasito y actuan como sistema coadyuvante. Son ejemplos de proteinas del parasito expresadas por bacterias con este proposito: la proteasa de superficie gp63 de L. major,el antigeno de superficie clonado en Salmonella thypymurium mutante (patogeno intracelular capaz de penetrar en el macrofago humano), sola o en asociacion con IL-2, IFN-[gamma], TNF-[alpha] o antigeno LACK (66); o en BCG (67) o Lactococcus iactis (bacteria grampositiva no patogena, usada en la fermentacion de alimentos) que expresan A2 de L. donovani y L. iactis y coexpresan LACK e IL1249.

Los siguientes son ejemplos de virus que expresan proteinas vacunantes: a) virus de la vaccinia que expresa la proteina de superficie del promastigoto G46/M-2/ PSA-2, que protege contra L. amazonensis (68), analogo en el parasito del receptor para activar la quinasa C de los mamiferos que protege a ratones BALB/c contra L major (69); b) adenovirus que expresan el antigeno A2 de amastigotos (70).

Tambien se han empleado parasitos distintos a Leishmania en la tecnica de vacunacion con base en la atenuacion como el antigeno LCR1 de L. chagasi (similar a una proteina flagelar de Tripanosoma cruz!) en BCG (71); el antigeno proteico de la membrana del quinetoplasto KMP-11 en taquizoitos atenuados de Toxoplasma gondii (72) y Leishmania tarentolae (no patogena para humanos), bien sea solo, recombinante con expresion unica del gen A2 o fusionado con los genes CPA, CPB y CTE49. Este ultimo enfoque para las vacunas vivas atenuadas, es decir, el empleo de Leishmanias no patogenas para el ser humano, fue ideado por Breton (73), con base en el alto nivel de inmunorreactividad cruzada que se observa entre especies de parasitos patogenos y no patogenos para el ser humano, y podria llegar a ser la vacuna que mayor seguridad ofrezca al receptor en esta categoria.

Tambien es posible modificar los parasitos para que produzcan sustancias biologicas que activen el sistema inmunitario, como el factor estimulador de colonias de granulocitos y macrofagos (GM-CSF) (74). Sin embargo, hay varios argumentos en contra de las vacunas atenuadas, entre ellos, que la delecion de genes de virulencia esenciales pueda ocasionar la completa destruccion del parasito, o la aparicion de mutantes que favorezcan el desarrollo de lesion (73).

Por esta razon, actualmente se esta investigando con la radiacion ionizante en la atenuacion de Leishmania para el desarrollo de vacunas, empleando para ello el modelo del raton BALB/c y las vias de administracion intramuscular e intraperitoneal (49, 75).

TERCERA GENERACION DE VACUNAS

Incluye, como el procedimiento de vacunacion mas reciente, la codificacion de genes para un antigeno de proteccion, clonado en un vector; en pocas palabras, este metodo implica la inoculacion de DNA insertado en un plasmido bacteriano que actua como vector. El gen del antigeno vacunal queda bajo el control de un potente promotor mamifero. Cuando se inocula en un animal este plasmido, construido por ingenieria genetica, es capturado por las celulas del hospedero, en las cuales el DNA se transcribe a RNAm y se traduce en la proteina endogena de la vacuna (33, 76, 77).

De esta generacion la sustancia mas probada como candidato para vacuna recombinante es la proteina de superficie B1 acilada hidrofila (HASPB1), que confiere proteccion contra L. donovani (31). Tambien se ha empleado el candidato antigenico NH36, que confiere proteccion contra la infeccion por L. chagasi, L. mexicana (32) y L. amazonensis. Esto plantea su efectividad potencial como vacuna inmunoprofilactica bivalente, para el control de ambas endemias. A la par se han empleado las proteinas ribosomales recombinantes L3 y L5 de L. major para el desarrollo de vacunas contra Leishmania (78). Asimismo, la vacuna de DNA basada en la expresion de la proteina antioxidante tiol especifica de amastigoto y promastigoto induce respuesta inmune de la plataforma Th1, cuyo efecto puede amplificarse cuando se acompana con aluminio: este es un ejemplo de los intentos por impulsar las vacunas DNA con adyuvantes (79, 80). Otros antigenos de Leishmania candidatos para vacuna de DNA son el factor de elongacion e iniciacion, K26/ HASPB, la quinasa C activa, la nucleosido-hidrolasa, P36LACK, A2, gp63, KMP11, CPB, ORFF UBQ-ORFF TRYR H2A, H2B, H3, H4, GCS-[gamma], PSA-2 y la esterol-metiltransferasa 24-C (25, 42, 81).

Coler y colaboradores (82) han trabajado en leishmaniosis visceral con tres poliproteinas recombinantes de Leishmania (TSA, LmSTIl, LelF) en asociacion con el lipido monofosforil y el hidrocarburo escualeno como coadyuvante (MPL-SE). En Europa se estan haciendo pruebas clinicas de dos nuevas vacunas de DNA (una basada en un vector viral, y la otra, en la expresion genetica de antigenos seleccionados de Leishmania denominada LEISHDNAVAX2) (51).

Por las siguientes razones son notorias las ventajas de estas estrategias profilacticas sobre las anteriores: son vacunas simples, se pueden producir a gran escala, son estables a temperatura ambiente, lo que facilita su almacenamiento y transporte, y, finalmente, se pueden combinar varios antigenos y administrarlos en una sola dosis y por tanto brindar proteccion contra mas de una especie de Leishmania, con lo cual se reduce el numero de vacunas (83).

A las categorias de vacunas ya mencionadas se suman otros enfoques: la disrupcion, si se quiere quimica, de la senalizacion mediante el knock-out genetico del factor de transcripcion STAT6 para reducir la expresion de la enzima arginasa, molecula que contribuye a la replicacion intracelular de Leishmania por competencia con la oxido nitrico sintetasa (NOS2) por el sustrato arginina y por la generacion de poliaminas que promueven el crecimiento del parasito (84); las celulas T asesinas (unicas que reconocen glicolipidos) estimuladas con el antigeno alfa galactosil ceramida (aGalCer) para incrementar su efecto natural en la infeccion (85); el uso con fines de vacunacion de celulas dendriticas pulsadas ex vivo con antigenos de Leishmania, pues actuarian como vectores de antigenos y adyuvantes naturales, en la estimulacion de respuestas protectoras, como lo demostraron Moll y Berberich (86), porque las celulas dendriticas son muy especializadas en la presentacion de antigenos, mecanismo esencial para la generacion de celulas T en la respuesta inmunitaria protectora, directamente dependiente de la naturaleza del estimulo microbiano. La manipulacion de estas celulas para la generacion de una respuesta celular Th1 especifica de antigeno parece ser una estrategia promisoria de vacunacion contra Leishmania. (87-90).

Tambien se han empleado con exito en vacunacion e inmunoterapia en un modelo de raton (91) celulas dendriticas que sobreexpresan IL-12 (citocina que estimula la respuesta inmunitaria), y fragmentos o exosomas derivados de celulas dendriticas previamente expuestas a lisados de Leishmania (92). Ademas, se han pulsado celulas dendriticas con peptidos especificos del parasito como gp63 o con peptidos multiepitope (93,94). Asimismo, se han usado en las terapias con celulas dendriticas adyuvantes como el CpG-ODN, que es un ligando TLR9, que induce la activacion de dichas celulas y estimula la respuesta Th 1 (95). In vivo, se ha manipulado el receptor DEC205 de las celulas dendriticas con antigenos (LACK, Lelf, LmSTI1a) conjugados con anticuerpos como herramienta de inmunizacion contra Leishmania (96). Finalmente, se ha usado la transfectacion genetica Flt3L in vivo con el objeto de incrementar la poblacion de celulas dendriticas (97).

Por su efecto contra tripanosomas, se ha usado el extracto de Warburgia ugandensis subsp. ugandensis, planta de uso medicinal en Africa, con antigenos solubles de L. majorcomo vacuna en ratones BALB/c (98), y las vacunas con componentes de la saliva del flebotomo, en particular los antigenos MAX o MAXIDILAN (99), PpSP15, LJM19, LJL143 y LJM17, proteinas obtenidas de este insecto que inducen resistencia significativa contra la infeccion por L. majory L. infantum (100). Actualmente se prueba el efecto protector de una vacuna basada en la proteina PpSp15 de la saliva del vector con Leishmania tarentolae viva recombinante que expresa proteina-cisteinasa (101). Para finalizar, es prudente reconocer que ninguna de las estrategias de vacunacion desarrolladas hasta el momento es capaz de controlar eficientemente la enfermedad.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

(1.) Nylen S, Gautam S. Immunological perspectives of leishmaniasis. J Glob Infect Dis. 2010 May;2(2):13546. DOI 10.4103/0974-777X.62876.

(2.) Mougneau E, Bihl F, Glaichenhaus N. Cell biology and immunology of Leishmania. Immunol Rev. 2011 Mar;240(1):286-96. DOI 10.1111/j. 1600065X.2010.00983.x.

(3.) Alvar J, Velez ID, Bern C, Herrero M, Desjeux P, Cano J, et al. Leishmaniasis worldwide and global estimates of its incidence. PLoS One. 2012;7(5):e35671. DOI 10.1371/journal.pone.0035671.

(4.) Organizacion Mundial de la Salud. Lucha contra la Leishmaniasis. Informe de un comite de expertos de la OMS. Ginebra: OMS; 1990. Serie de Informes Tecnicos: 793.

(5.) Davies CR, Reithinger R, Campbell-Lendrum D, Feliciangeli D, Borges R, Rodriguez N. The epidemiology and control of leishmaniasis in Andean countries. Cad Saude Publica. 2000 Oct-Dec;16(4):925-50.

(6.) Organizacion Panamericana de la Salud. Segunda reunion de los programas nacionales de leishmaniasis en las Americas. Informe final. Ciudad de Panama; 2013.

(7.) Coler RN, Reed SG. Second-generation vaccines against leishmaniasis. Trends Parasitol. 2005 May;21(5):244-9.

(8.) Palatnik-de-Sousa CB. Vaccines for leishma niasis in the fore coming 25 years. Vaccine. 2008 Mar;26(14): 1709-24. DOI 10.1016/j.vacci ne.2008.01.023.

(9.) Modabber F Vaccines against leishmaniasis. Ann Trop Med Parasitol. 1995 Dec;89 Suppl 1:83-8.

(10.) Khamesipour A, Rafati S, Davoudi N, Maboudi F Modabber F Leishmaniasis vaccine candidates for development: a global overview. Indian J Med Res. 2006 Mar;123(3):423-38.

(11.) Handman E. Leishmaniasis: current status of vaccine development. Clin Microbiol Rev. 2001 Apr;14(2):229-43.

(12.) Noazin S, Modabber F Khamesipour A, Smith PG, Moulton LH, Nasseri K, et al. First generation leishmaniasis vaccines: a review of field efficacy trials. Vaccine. 2008 Dec;26(52):6759-67. DOI 10.1016/j.vaccine.2008.09.085.

(13.) Antunes CM, Mayrink W Magalhaes PA, Costa CA, Melo MN, Dias M, et al. Controlled field trials of a vaccine against New World cutaneous leishmaniasis. Int J Epidemiol. 1986 Dec;15(4):572-80.

(14.) Armijos RX, Weigel MM, Calvopina M, Hidalgo A, Cevallos W Correa J. Safety, immunogenecity, and efficacy of an autoclaved Leishmania amazonensis vaccine plus BCG adjuvant against New World cutaneous leishmaniasis. Vaccine. 2004 Mar;22(910):1320-6.

(15.) Cabrera M, Blackwell JM, Castes M, Trujillo D, Convit J, Shaw MA. Immunotherapy with live BCG plus heat killed Leishmania induces a T helper 1-like response in American cutaneous leishmaniasis patients. Parasite Immunol. 2000 Feb;22(2):73-9.

(16.) Convit J, Ulrich M, Polegre MA, Avila A, Rodriguez N, Mazzedo MI, et al. Therapy of Venezuelan patients with severe mucocutaneous or early lesions of diffuse cutaneous leishmaniasis with a vaccine containing pasteurized Leishmania promastigotes and bacillus Calmette-Guerin: preliminary report. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2004 Feb;99(1):57-62.

(17.) Khamesipour A, Dowlati Y, Asilian A, HashemiFesharki R, Javadi A, Noazin S, et al. Leishmanization: use of an old method for evaluation of candidate vaccines against leishmaniasis. Vaccine. 2005 May;23(28):3642-8.

(18.) Santos WR, Aguiar IA, Paraguai de Souza E, de Lima VM, Palatnik M, Palatnik-de-Sousa CB. Immunotherapy against murine experimental visceral leishmaniasis with the FML-vaccine. Vaccine. 2003 Dec;21(32):4668-76.

(19.) Pinheiro RO, Pinto EF, Lopes JR, Guedes HL, Fentanes RF Rossi-Bergmann B. TGF-beta-associated enhanced susceptibility to leishmaniasis following intramuscular vaccination of mice with Leishmania amazonensis antigens. Microbes Infect. 2005 Oct;7(13):1317-23.

(20.) Seay MB, Heard PL, Chaudhuri G. Surface Zn-proteinase as a molecule for defense of Leishmania mexicana amazonensis promastigotes against cytolysis inside macrophage phagolysosomes. Infect Immun. 1996 Dec;64(12):5129-37.

(21.) Rezvan H. Immunogenicity of HLA-DR1 Restricted Peptides Derived from Leishmania major gp63 Using FVB/N-DR1 Transgenic Mouse Model. Iran J Parasitol. 2013 Apr;8(2):273-9.

(22.) Daneshvar H, Namazi MJ, Kamiabi H, Burchmore R, Cleaveland S, Phillips S. Gentamicin-attenuated Leishmania infantum vaccine: protection of dogs against canine visceral leishmaniosis in endemic area of southeast of Iran. PLoS Negl Trop Dis. 2014 Apr;8(4):e2757. DOI 10.1371/journal. pntd.0002757. Erratum in: PLoS Negl Trop Dis. 2015 May;9(5):e0003787.

(23.) Lemesre JL, Holzmuller P Cavaleyra M, Gongalves RB, Hottin G, Papierok G. Protection against experimental visceral leishmaniasis infection in dogs immunized with purified excreted secreted antigens of Leishmania infantum promastigotes. Vaccine. 2005 Apr;23(22):2825-40.

(24.) Gupta R, Kumar V, Kushawaha PK, Tripathi CP, Joshi S, Sahasrabuddhe AA, et al. Characterization of glycolytic enzymes--rAIdolase and rEnolase of Leishmania donovani, identified as Th1 stimulatory proteins, for their immunogenicity and immunoprophyIactic efficacies against experimentaI visceral leishmaniasis. PLoS One. 2014 Jan;9(1):e86073. DOI 10.1371/journaI.pone.0086073.

(25.) Joshi S, Rawat K, Yadav NK, Kumar V Siddiqi MI, Dube A. Visceral Leishmaniasis: Advancements in Vaccine DeveIopment via CIassicaI and MoIecuIar Approaches. Front Immunol. 2014 Aug;5:380. DOI 10.3389/fimmu.2014.00380.

(26.) Das A, Ali N. Combining cationic liposomal delivery with MPL-TDM for cysteine protease cocktail vaccination against Leishmania donovani: evidence for antigen synergy and protection. PLoS Negl Trop Dis. 2014 Aug;8(8):e3091. DOI 10.1371/journaI.pntd.0003091.

(27.) de Matos Guedes HL, da Silva Costa BL, Chaves SP de Oliveira Gomes DC, Nosanchuk JD, De Simone SG, et al. Intranasal vaccination with extracellular serine proteases of Leishmania amazonensis confers protective immunity to BALB/c mice against infection. Parasit Vectors. 2014 Sep;7:448. DOI 10.1186/1756-3305-7-448.

(28.) Iborra S, Parody N, Abanades DR, Bonay P Prates D, Novais FO, et al. Vaccination with the Leishmania major ribosomal proteins plus CpG oligodeoxynucleotides induces protection against experimental cutaneous leishmaniasis in mice. Microbes Infect. 2008 Aug-Sep;10(10-11):1133-41. DOI 10.1016/j.micinf.2008.06.002.

(29.) Wilson ME, Young BM, Andersen KP Weinstock JV Metwali A, Ali KM, et al. A recombinant Leishmania chagasi antigen that stimulates cellular immune responses in infected mice. Infect Immun. 1995 May;63(5):2062-9.

(30.) Webb JR, Campos-Neto A, Ovendale PJ, Martin TI, Stromberg EJ, Badaro R, et al. Human and murine immune responses to a novel Leishmania major recombinant protein encoded by members of a multicopy gene family. Infect Immun. 1998 Jul;66(7):327989.

(31.) Stager S, Smith DF Kaye PM. Immunization with a recombinant stage-regulated surface protein from Leishmania donovani induces protection against visceral leishmaniasis. J Immunol. 2000 Dec;165(12):7064-71.

(32.) Ghosh A, Zhang WW, Matlashewski G. Immunization with A2 protein results in a mixed Th1/Th2 and a humoral response which protects mice against Leishmania donovani infections. Vaccine. 2001 Oct;20(1-2):59-66.

(33.) Campos-Neto A, Porrozzi R, Greeson K, Coler RN, Webb JR, Seiky YA, et al. Protection against cutaneous leishmaniasis induced by recombinant antigens in murine and nonhuman primate models of the human disease. Infect Immun. 2001 Jun;69(6):4103-8.

(34.) Aguilar-Be I, da Silva Zardo R, Paraguai de Souza E, Borja-Cabrera GP Rosado-Vallado M, Mut-Martin M, et al. Cross-protective efficacy of a prophylactic Leishmania donovani DNA vaccine against visceral and cutaneous murine leishmaniasis. Infect Immun. 2005 Feb;73(2):812-9.

(35.) Basu R, Bhaumik S, Basu JM, Naskar K, De T, Roy S. Kinetoplastid membrane protein-11 DNA vaccination induces complete protection against both pentavalent antimonial-sensitive and -resistant strains of Leishmania donovani that correlates with inducible nitric oxide synthase activity and IL-4 generation: evidence for mixed Th1- and Th2-Iike responses in Visceral Leishmaniasis. J Immunol. 2005 Jun; 174(11):7160-71. DOI 10.4049/jimmunol.174.11.7160.

(36.) Tewary P Jain M, Sahani MH, Saxena S, Madhubala R. A heterologous prime-boost vaccination regimen using ORFF DNA and recombinant ORFF protein confers protective immunity against experimental visceral leishmaniasis. J Infect Dis. 2005 Jun;191(12):2130-7.

(37.) Rafati S, Zahedifard F Nazgouee F Prime-boost vaccination using cysteine proteinases type I and II of Leishmania infantum confers protective immunity in murine visceral leishmaniasis. Vaccine. 2006 Mar;24(12):2169-75.

(38.) Agallou M, Athanasiou E, Koutsoni O, Dotsika E, Karagouni E. Experimental Validation of Multi-Epitope Peptides Including Promising MHC Class I- and IIRestricted Epitopes of Four Known Leishmania infantum Proteins. Front Immunol. 2014 Jun;5:268. DOI 10.3389/fimmu.2014.00268.

(39.) Goto Y, Bhatia A, Raman VS, Vidal SE, Bertholet S, Coler RN, et al. Leishmania infantum sterol 24-cmethyltransferase formulated with MPL-SE induces cross-protection against L. major infection. Vaccine. 2009 May;27(21):2884-90. DOI 10.1016/j.vaccine.2009.02.079.

(40.) Srivastava PK, Menoret A, Basu S, Binder RJ, McQuade KL. Heat shock proteins come of age: primitive functions acquire new roles in an adaptive world. Immunity. 1998 Jun;8(6):657-65.

(41.) Oladiran A, Belosevic M. Trypanosoma carassii hsp70 increases expression of inflammatory cytokines and chemokines in macrophages of the goldfish (Carassius auratus L.). Dev Comp Immunol. 2009 Oct;33(10):1128-36. DOI 10.1016/j.dci.2009.06.003.

(42.) Jaiswal AK, Khare P Joshi S, Kushawaha PK, Sundar S, Dube A. Th1 stimulatory proteins of Leishmania donovani: comparative cellular and protective responses of rTriose phosphate isomerase, rProtein disulfide isomerase and rEIongation factor-2 in combination with rHSP70 against visceral leishmaniasis. PLoS One. 2014 Sep;9(9):e108556. DOI 10.1371/journal.pone.0108556.

(43.) Handman E. Leishmania virulence: it's a knock out! Trends Parasitol. 2001 Feb;17(2):60.

(44.) Kedzierski L. Leishmaniasis Vaccine: Where are We Today? J Glob Infect Dis. 2010 May;2(2):177-85. DOI 10.4103/0974-777X.62881.

(45.) Reithinger R, Brooker S, Kolaczinski JH. Visceral leishmaniasis in eastern Africa-current status. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2007 Dec;101(12):1169-70.

(46.) Mitchell GF Handman E, Spithill TW Vaccination against cutaneous leishmaniasis in mice using nonpathogenic cloned promastigotes of Leishmania major and importance of route of injection. Aust J Exp Biol Med Sci. 1984 Apr;62 (Pt 2):145-53.

(47.) Gorczynski RM. Immunization of susceptible BALB/c mice against Leishmania braziliensis. II. Use of temperature-sensitive avirulent clones of parasite for vaccination purposes. Cell Immunol. 1985 Aug;94(1):11-20.

(48.) Kimsey PB, Theodos CM, Mitchen TK, Turco SJ, Titus RG. An avirulent lipophosphoglycan-deficient Leishmania major clone induces CD4+ T cells which protect susceptible BALB/c mice against infection with virulent L. major. Infect Immun. 1993 Dec;61(12):5205-13.

(49.) Rivier D, Shah R, Bovay I? Mauel J. Vaccine development against cutaneous leishmaniasis. Subcutaneous administration of radio attenuated parasites pro- tects CBA mice against virulentLeishmania major challenge. Parasite Immunol. 1993 Feb; 15(2):7584. DOI 10.1111/j.1365-3024.1993.tb00587.x.

(50.) Daneshvar H, Coombs GH, Hagan P Phillips RS. Leishmania mexicana and Leishmania major: attenuation of wild-type parasites and vaccination with the attenuated lines. J Infect Dis. 2003 May;187(10):1662-8.

(51.) Saljoughian N, Taheri T, Rafati S. Live vaccination tactics: possible approaches for controlling visceral leishmaniasis. Front Immunol. 2014 Mar;5:134. DOI 10.3389/fimmu.2014.00134.

(52.) Stober CB, Lange UG, Roberts MT, Gilmartin B, Francis R, Almeida R, et al. From genome to vaccines for leishmaniasis: screening 100 novel vaccine candidates against murine Leishmania major infection. Vaccine. 2006 Mar;24(14):2602-16.

(53.) Titus RG, Gueiros-Filho FJ, de Freitas LA, Beverley SM. Development of a safe live Leishmania vaccine line by gene replacement. Proc Natl Acad Sci U S A. 1995 Oct;92(22):10267-71.

(54.) Alexander J, Coombs GH, Mottram JC. Leishmania mexicana cysteine proteinase-deficient mutants have attenuated virulence for mice and potentiate a Th1 response. J Immunol. 1998 Dec;161(12): 6794-801.

(55.) Selvapandiyan A, Debrabant A, Duncan R, Muller J, Salotra P Sreenivas G, et al. Centrin gene disruption impairs stage-specific basal body duplication and cell cycle progression in Leishmania. J Biol Chem. 2004 Jun;279(24):25703-10.

(56.) Souza AE, Bates PA, Coombs GH, Mottram JC. Null mutants for the Imcpa cysteine proteinase gene in Leishmania mexicana. Mol Biochem Parasitol. 1994 Feb;63(2):213-20.

(57.) Zhang WW Matlashewski G. Characterization of the A2-A2rel gene cluster in Leishmania donovani: invoIvement of A2 in visceraIization during infection. Mol Microbiol. 2001 Feb;39(4):935-48.

(58.) Papadopoulou B, Roy G, Breton M, Kundig C, Dumas C, Fillion I, et al. Reduced infectivity of a Leishmania donovani biopterin transporter genetic mutant and its use as an attenuated strain for vaccination. Infect Immun. 2002 Jan;70(1):62-8.

(59.) Silvestre R, Cordeiro-Da-Silva A, Santarem N, Vergnes B, Sereno D, Ouaissi A. SIR2-deficient Leishmania infantum induces a defined IFN-gamma/IL-10 pattern that correlates with protection. J Immunol. 2007 Sep;179(5):3161-70.

(60.) SeIvapandiyan A, Dey R, Gannavaram S, LakhaINaouar I, Duncan R, Salotra P et al. Immunity to visceral leishmaniasis using genetically defined liveattenuated parasites. J Trop Med. 2012;2012:631460. DOI 10.1155/2012/631460.

(61.) Dey R, Meneses C, SaIotra P, Kamhawi S, Nakhasi HL, Duncan R. Characterization of a Leishmania stage-specific mitochondrial membrane protein that enhances the activity of cytochrome c oxidase and its role in virulence. Mol Microbiol. 2010 JuI;77(2):399-414. DOI 10.1111/j. 13652958.2010.07214.x.

(62.) Gannavaram S, Connelly PS, Daniels MI? Duncan R, Salotra P Nakhasi HL. Deletion of mitochondrial associated ubiquitin fold modifier protein Ufm1 in Leishmania donovani results in loss of P-oxidation of fatty acids and blocks cell division in the amastigote stage. Mol Microbiol. 2012 Oct;86(1): 187-98. DOI 10.1111/j.1365-2958.2012.08183.x.

(63.) Gannavaram S, Davey S, Lakhal-Naouar I, Duncan R, Nakhasi HL. Deletion of ubiquitin fold modifier protein Ufm1 processing peptidase Ufsp in L. donovani abolishes Ufm1 processing and alters pathogenesis. PLoS Negl Trop Dis. 2014 Feb;8(2):e2707. DOI 10.1371/journal.pntd.0002707.

(64.) Muyombwe A, Olivier M, Harvie P Bergeron MG, Ouellette M, Papadopoulou B. Protection against Leishmania major challenge infection in mice vaccinated with live recombinant parasites expressing a cytotoxic gene. J Infect Dis. 1998 Jan;177(1):188-95.

(65.) Davoudi N, Tate CA, Warburton C, Murray A, Mahboudi F McMaster WR. Development of a recombinant Leishmania major strain sensitive to ganciclovir and 5-fluorocytosine for use as a live vaccine challenge in clinical trials. Vaccine. 2005 Jan;23(9):1170-7.

(66.) Yang DM, Fairweather N, Button LL, McMaster WR, Kahl LP Liew FY. Oral Salmonella typhimurium (AroA-) vaccine expressing a major leishmanial surface protein (gp63) preferentially induces T helper 1 cells and protective immunity against leishmaniasis. J Immunol. 1990 Oct;145(7):2281-5.

(67.) Connell ND, Medina-Acosta E, McMaster WR, Bloom BR, Russell DG. Effective immunization against cutaneous leishmaniasis with recombinant bacilli Calmette-Guerin expressing the Leishmania surface proteinase gp63. Proc Natl Acad Sci U S A. 1993 Dec;90(24):11473-7.

(68.) McMahon-Pratt D, Rodriguez D, Rodriguez JR, Zhang Y, Manson K, Bergman C, et al. Recombinant vaccinia viruses expressing GP46/M-2 protect against Leishmania infection. Infect Immun. 1993 Aug;61(8):3351-9.

(69.) Gonzalo RM, del Real G, Rodriguez JR, Rodriguez D, Heljasvaara R, Lucas P et al. A heterologous primeboost regime using DNA and recombinant vaccinia virus expressing the Leishmania infantum P36/ LACK antigen protects BALB/c mice from cutaneous leishmaniasis. Vaccine. 2002 Jan;20(7-8):1226-31.

(70.) Grimaldi G Jr, Teva A, Porrozzi R, Pinto MA, Marchevsky RS, Rocha MG, et al. Clinical and parasitological protection in a Leishmania infantum-macaque model vaccinated with adenovirus and the recombinant A2 antigen. PLoS Negl Trop Dis. 2014 Jun;8(6):e2853. DOI 10.1371/journal.pntd.0002853.

(71.) Streit JA, Recker TJ, Donelson JE, Wilson ME. BCG expressing LCR1 of Leishmania chagasi induces protective immunity in susceptible mice. Exp Parasitol. 2000 Jan;94(1):33-41.

(72.) Ramirez JR, Gilchrist K, Robledo S, Sepulveda JC, Moll H, Soldati D, et al. Attenuated Toxoplasma gondii ts-4 mutants engineered to express the Leishmania antigen KMP-11 elicit a specific immune response in BALB/c mice. Vaccine. 2001 Nov;20(3-4):455-61.

(73.) Breton M, Tremblay MJ, Ouellette M, Papadopoulou B. Live nonpathogenic parasitic vector as a candidate vaccine against visceral leishmaniasis. Infect Immun. 2005 Oct;73(10):6372-82.

(74.) Dumas C, Muyombwe A, Roy G, Matte C, Ouellette M, Olivier M, et al. Recombinant Leishmania major secreting biologically active granulocytemacrophage colony-stimulating factor survives poorly in macrophages in vitro and delays disease development in mice. Infect Immun. 2003 Nov;71(11):6499-509.

(75.) Datta S, Roy S, Manna M. Therapy with radioattenuated vaccine in experimental murine visceral leishmaniasis showed enhanced T cell and inducible nitric oxide synthase levels, suppressed tumor growth factor-beta production with higher expression of some signaling molecules. Braz J Infect Dis. 2015 Jan-Feb; 19(1):36-42. DOI 10.1016/j. bjid.2014.10.009.

(76.) Xu D, Liew FY. Genetic vaccination against leishmaniasis. Vaccine. 1994 Dec;12(16):1534-6.

(77.) Modabber F. Leishmaniasis vaccines: past, present and future. Int J Antimicrob Agents. 2010 Nov;36 Suppl 1:S58-61. DOI 10.1016/j.ijantimicag.2010.06.024.

(78.) Ramirez L, Corvo L, Duarte MC, Chavez-Fumagalli MA, Valadares DG, Santos DM, et al. Cross-protective effect of a combined L5 plus L3 Leishmania major ribosomal protein based vaccine combined with a Th1 adjuvant in murine cutaneous and visceral leishmaniasis. Parasit Vectors. 2014 Jan;7:3. DOI 10.1186/1756-3305-7-3.

(79.) Monnerat S, Martinez-Calvillo S, Worthey E, Myler PJ, Stuart KD, Fasel N. Genomic organization and gene expression in a chromosomal region of Leishmania major. Mol Biochem Parasitol. 2004 Apr;134(2):233-43.

(80.) Tabatabaie F Mahdavi M, Faezi S, Dalimi A, Sharifi Z, Akhlaghi L, et al. Th1 Platform Immune Responses Against Leishmania major Induced by Thiol-Specific Antioxidant-Based DNA Vaccines. Jundishapur J Microbiol. 2014 Feb;7(2):e8974. DOI 10.5812/ jjm.8974.

(81.) Goto Y, Coler RN, Reed SG. Bioinformatic identification of tandem repeat antigens of the Leishmania donovani complex. Infect Immun. 2007 Feb;75(2):846-51.

(82.) Coler RN, Goto Y, Bogatzki L, Raman V Reed SG. Leish-111 f, a recombinant polyprotein vaccine that protects against visceral Leishmaniasis by elicitation of CD4+ T cells. Infect Immun. 2007 Sep;75(9):4648-54.

(83.) Encke J, zu Putlitz J, Wands JR. DNA vaccines. Intervirology. 1999;42(2-3):117-24.

(84.) Osorio EY, Travi BL, da Cruz AM, Saldarriaga OA, Medina AA, Melby PC. Growth factor and Th2 cytokine signaling pathways converge at STAT6 to promote arginase expression in progressive experimental visceral leishmaniasis. PLoS Pathog. 2014 Jun;10(6):e 1004165. DOI 10.1371/journal. ppat.1004165.

(85.) Griewank KG, Lorenz B, Fischer MR, Boon L, Lopez Kostka S, von Stebut E. Immune modulating effects of NKT cells in a physiologically low dose Leishmania major infection model after aGalCer analog PBS57 stimulation. PLoS Negl Trop Dis. 2014 Jun;8(6):e2917. DOI 10.1371/journal.pntd.0002917.

(86.) Moll H, Berberich C. Dendritic cell-based vaccination strategies: induction of protective immunity against leishmaniasis. Immunobiology. 2001 Dec;204(5):659-66.

(87.) Inaba K, Turley S, Iyoda T, Yamaide F Shimoyama S, Reis e Sousa C, et al. The formation of immunogenic major histocompatibility complex class II-peptide ligands in lysosomal compartments of dendritic cells is regulated by inflammatory stimuli. J Exp Med. 2000 Mar;191(6):927-36.

(88.) Pulendran B, Palucka K, Banchereau J. Sensing pathogens and tuning immune responses. Science. 2001 Jul;293(5528):253-6.

(89.) Steinman RM. Lasker Basic Medical Research Award. Dendritic cells: versatile controllers of the immune system. Nat Med. 2007 Oct;13(10):1155-9.

(90.) Steinman RM, Banchereau J. Taking dendritic cells into medicine. Nature. 2007 Sep;449(7161):419-26.

(91.) Ahuja SS, Reddick RL, Sato N, Montalbo E, Kostecki V Zhao W et al. Dendritic cell (DC)-based anti-infective strategies: DCs engineered to secrete IL-12 are a potent vaccine in a murine model of an intracellular infection. J Immunol. 1999 Oct;163(7):3890-7.

(92.) Schnitzer JK, Berzel S, Fajardo-Moser M, Remer KA, Moll H. Fragments of antigen-loaded dendritic cells (DC) and DC-derived exosomes induce protective immunity against Leishmania major. Vaccine. 2010 Aug;28(36):5785-93. DOI 10.1016/j.vaccine.2010.06.077.

(93.) Tsagozis P Karagouni E, Dotsika E. Dendritic cells pulsed with peptides of gp63 induce differential protection against experimental cutaneous leishmaniasis. Int J Immunopathol Pharmacol. 2004 Sep-Dec;17(3):343-52.

(94.) Patronov A, Doytchinova I. T-cell epitope vaccine design by immunoinformatics. Open Biol. 2013 Jan 8;3(1):120139. DOI 10.1098/rsob.120139.

(95.) Chu RS, Targoni OS, Krieg AM, Lehmann PV Harding CV CpG oligodeoxynucleotides act as adjuvants that switch on T helper 1 (Th1) immunity. J Exp Med. 1997 Nov;186(10):1623-31.

(96.) Matos I, Mizenina O, Lubkin A, Steinman RM, Idoyaga J. Targeting Leishmania major Antigens to Dendritic Cells In Vivo Induces Protective Immunity. PLoS One. 2013 Jun;8(6):e67453.

(97.) Tu H, Burke TM, Oderup C, Huang K, Wong K, Lewen S, et al. Robust expansion of dendritic cells in vivo by hydrodynamic FLT3L-FC gene transfer. J Immunol Methods. 2014 Nov;413:69-73. DOI 10.1016/j. jim.2014.07.008.

(98.) Kioy DW, Murilla G, Kofi-Tsekpo MW Mukhongo M, Okwara J. Anti-trypanosomal effects of some compounds isolated from the extracts of Warburgia ugandensis. Afr J Health Sci. 1998 Feb;5(1):35-7.

(99.) Brodie TM, Smith MC, Morris RV, Titus RG. Immunomodulatory effects of the Lutzomyia longipalpis salivary gland protein maxadilan on mouse macrophages. Infect Immun. 2007 May;75(5):2359-65.

(100.) Tavares NM, Silva RA, Costa DJ, Pitombo MA, Fukutani KF, Miranda JC, et al. Lutzomyia longipalpis saliva or salivary protein LJM19 protects against Leishmania braziliensis and the saliva of its vector, Lutzomyia intermedia. PLoS Negl Trop Dis. 2011;5(5):e1169. DOI 10.1371/journal.pntd.0001169.

(101.) Zahedifard F Gholami E, Taheri T, Taslimi Y, Doustdari F Seyed N, et al. Enhanced protective efficacy of nonpathogenic recombinant leishmania tarentolae expressing cysteine proteinases combined with a sand fly salivary antigen. PLoS Negl Trop Dis. 2014 Mar;8(3):e2751. DOI 10.1371/journal.pntd.0002751.

Elisa Martinez-Silva [1], Yuritmia Ruiz de Ramos [1], Gilberto Bastidas-Pacheco [2]

[1] Licenciada en Bioanalisis, Escuela de Bioanalisis, Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad de Carabobo, Venezuela.

[2] Medico Cirujano, MSc en Gerencia de la Educacion, MSc en Protozoologia, Doctor en Parasitologia, Departamento de Salud Publica, Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad de Carabobo, Venezuela.

Correspondencia: Gilberto Bastidas-Pacheco; bastidasprotozoo@hotmail.com

Recibido: julio 10 de 2015

Aceptado: agosto 5 de 2015

DOI 10.17533/udea.iatreia.v29n2a06
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Author:Martinez-Silva, Elisa; de Ramos, Yuritmia Ruiz; Bastidas-Pacheco, Gilberto
Publication:Iatreia
Date:Apr 1, 2016
Words:6704
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