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Seroprevalencia de borreliosis, o enfermedad de Lyme, en una poblacion rural expuesta de Cordoba, Colombia.

Seroprevalence of Lyme borreliosis in workers from Cordoba, Colombia

Borrelia burgdorferi, es una espiroqueta reconocida como el agente etiologico de la enfermedad de Lyme (1), se transmite al hombre a traves de la picadura de garrapatas del genero Ixodes y se caracteriza desde el punto de vista clinico por la aparicion de un cuadro multisistemico con afectacion de varios organos como piel, articulaciones, sistema nervioso central y corazon (2). El diagnostico clinico es dificil, ya que un elevado numero de enfermos no recuerdan el antecedente de la picadura de garrapata, y hasta en un 50 % de los afectados tampoco aparece la lesion cutanea caracteristica denominada eritema migratorio. Las fases posteriores de la enfermedad se caracterizan por la inespecificidad de los signos y sintomas. La mayoria de las infecciones por Borrelia son subclinicas por lo que su incidencia es desconocida, por ello la informacion sero-epidemiologica es importante para conocer la tasa de infeccion en una poblacion. La seroprevalencia en Colombia de esta entidad es poco conocida y existen solo dos estudios en sujetos con sintomas clinicos sugestivos de enfermedad de Lyme (3,4). Estudios ecologicos tendientes a la busqueda de B. burgdorferi en garrapatas se han llevado a cabo sin exito (5).

La Enfermedad de Lyme esta ampliamente distribuida en el hemisferio norte especialmente en EEUU y Europa; en el primero es la enfermedad infecciosa mas prevalente transmitida por artropodos (6). Tambien se han notificado algunos reportes de casos en paises sudamericanos y centroamericanos como Peru (6), Brasil (7), Chile (8), Argentina (9), Bolivia (10), Venezuela (11) y Mexico (12).

En Colombia, existen pocos estudios sobre esta enfermedad y de otras enfermedades transmitidas por picaduras de garrapatas y se desconoce su verdadero impacto en salud publica. Una de las estrategias para detectar la circulacion de agentes infecciosos desconocidos, es buscar la respuesta humoral en los individuos expuestos, de alto riesgo o susceptibles como los trabajadores rurales.

El objetivo de este estudio fue establecer la seroprevalencia de la enfermedad de Lyme en un sector de trabajadores del agro.

MATERIALES Y METODOS

Tipo de estudio y muestreo. Se llevo a cabo un estudio descriptivo transversal, no probabilistico con un muestreo por conveniencia que pretendio determinar la seroprevalencia de anticuerpos para Borrelia burgdorferi en el departamento de Cordoba. La poblacion la constituyeron 152 sujetos procedentes de los municipios de Monteria, Lorica, Cerete y Cotorra, seleccionados de forma secuencial no probabilistica, de un total de cerca de 100 000 personas que conforman la poblacion de trabajadores rurales estratificados en el Departamento (13).

Aspectos demograficos, climaticos y ecologicos del sitio de estudio. El departamento de Cordoba posee una poblacion total de 1 472 699 habitantes (13), se encuentra localizado en la costa caribe colombiana, posee una temperatura anual promedio de 35[grados]C y una humedad relativa del 95 %. Su extension agro-ecologica hace parte de las sabanas o praderas tropicales y sus tierras son utilizadas principalmente en la produccion extensiva de ganado bovino y cultivos tropicales.

Poblacion de riesgo ocupacional y aspectos epidemiologicos. A todas las personas del area de estudio se les aplico una encuesta epidemiologica que indago sobre algunos aspectos como edad, sexo, antecedentes clinicos, sintomatologia y los factores de riesgo asociados a la transmision de estos microorganismos como convivencia permanente con animales domesticos, picaduras por garrapatas, ocupacion y viajes al exterior durante los ultimos anos. Se invito a participar a trabajadores del area agropecuaria, zonas rurales y personal de mantenimientos de redes de aguas servidas y personal de aseo del departamento quienes laboraban en el sector desde hace mas de 10 anos y que habian estado en contacto con animales domesticos. Ciento cincuenta y dos sujetos aceptaron participar (100 % de los contactados). Se les entrevisto mediante un cuestionario y se les extrajo 10 mL de sangre venosa para la deteccion de anticuerpos.

Entrevista ocupacional. Se aplico un cuestionario a la poblacion de riesgo que laboraba en el campo, se les solicito informacion demografica, actividad ocupacional y antecedentes epidemiologicos de exposicion a garrapatas como posibles factores asociados a infeccion. Se incluyeron las siguientes variables: tipo de trabajo en el campo (vaqueria, ordenadores, oficios varios en las malezas) y antecedentes por picaduras de garrapatas.

Metodos serologicos. Todas las muestras fueron procesadas en el Laboratorio del Instituto de Investigaciones Biologicas del Tropico, Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad de Cordoba. Se establecio la presencia de anticuerpos sericos IgG especificos anti-Borrelia burgdorferi por la tecnica de ELISA (Ridascreen[R] Borrelia IgG. R-Biopharm AG, Landwehrst, Germany). Las muestras de suero fueron diluidas 1:100 y el resto de procedimiento se realizo de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Un suero se considero positivo cuando la densidad optica fue mayor a 14 u/ml. La sensibilidad esperada del ensayo es del 100 % y la especificidad del 97,4 %, en cada prueba se uso un control negativo y uno positivo. Para la confirmacion de los sueros positivos se utilizo western blot anti-Borrelia Blot IgG (DRG Diagnostics, Marburg, Germany). El criterio usado para considerar una muestra positiva a Borrelia burgdorferi fue el recomendado por el fabricante asi: western blot IgG positivo si existian anticuerpos que reaccionaron al menos con dos de las proteinas: p83/ 100, p58, p43, p39, p30, OspC, p21, p17 y VlsE. Con el fin de descartar reacciones cruzadas, a todos los sueros positivos por ELISA se les realizo la tecnica de RPR (rapid plasma reagin) para Treponema pallidum (sifilis) y ELISA para leptospirosis IgM (Panbio limited, Australia ref. E-LEP01M).

Analisis de los resultados. Los datos fueron recolectados mediante un formulario estandarizado y tabulados en una hoja electronica de MS Excel[R]. Adicionalmente, se utilizaron las herramientas de analisis de datos de este programa para elaborar la estadistica descriptiva.

Aspectos eticos. Este proyecto se rigio de acuerdo a las normas tecnicas, cientificas y administrativas para la investigacion en salud, del Ministerio de Salud de Colombia, Resolucion 8430 de 1993 y la declaracion de Helsinki, refrendada del ano 2004. A todos los pacientes incluidos en el estudio se les explico el tipo de estudio y se obtuvo su consentimiento oral y escrito.

RESULTADOS

Se estudiaron un total de 152 sueros de trabajadores de las zonas rurales expuestas del departamento de Cordoba. La edad media de la poblacion estudiada fue de 40,6 anos, (16 a 70 anos). En el Tabla 1, se describen las caracteristicas sociodemograficas, la ocupacion y la referencia de sintomas de todas las personas analizadas.

Por ELISA se detectaron 30 (20 %) sueros con anticuerpos IgG para Borrelia. De las cuales 17 (56,6 %) fueron procedentes de Monteria, 7 (23,3 %) de Lorica, 5 (16,6 %) de Cerete y 1 (3,3 %) de Cotorra. La mediana de la edad de los sujetos seropositivos por ELISA fue de 45 anos. La mayor prevalencia se dio en personas de 41-50 anos (33,3 %), seguido por un 30 % de personas entre 31-40 anos. Solo una mujer presento anticuerpos IgG para Borrelia.

En cuanto a la ocupacion de los sujetos seropositivos, 16 (53,3 %) fueron carniceros, 7 (23,3 %) personal de mantenimiento de redes de aguas servidas y personal de aseo y 7 (23,3 %) eran trabajadores del agro.

Los sujetos seropositivos fueron clasificados segun la sintomatologia clinica que presentaron, el (45,9 %) de ellos presento fiebre, (36,6 %) cefalea, (33,6 %) dolores musculares y (23,3 %) artralgia, ninguno reporto eritema migratorio.

Los 30 sueros positivos a ELISA para Borrelia burgdorferi fueron RPR negativos, lo que descarto una posible reaccion cruzada o coinfeccion con Treponema pallidum. En uno de ellos se detecto reaccion positiva frente a ELISA para leptospirosis y 3 se encontraron cerca del punto de corte para esta prueba.

Para la confirmacion por western blot se escogieron al azar 25 sueros positivos por ELISA, el 100 % de estos reaccionaron contra la proteina 41 Kda; mientras que la reaccion contra las proteinas 58 y 75 Kda se observo en 68 % y 36 % respectivamente. Se detecto reaccion contra OspA (proteina de membrana altamente especifica) en 7 (28 %) de los sueros; mientras que un 8 % reaccionaron contra otras proteinas tales como, p3 0, Osp C, p17 y VLsE. La proteina p83/100 se presento en un 4 %. De estos 25, siete se confirmaron como positivos para Borrelia burgdorferi (seroprevalencia de 4,6 %) de acuerdo con las especificaciones del fabricante para considerar un western blot positivo.

En cuanto a relacion con el vector de los 30 sujetos seropositivos por ELISA, la Tabla 2, muestra la tasa de poblacion que tuvo contacto con animales que pudieron actuar como reservorios de la garrapata. Entre los sujetos que resultaron positivos por Western blot, 6 reportaron la presencia de roedores ya sea en su casa o el trabajo, 5 en contacto permanente con perros y bovinos y 3 contacto con cerdos.

DISCUSION

La borreliosis de Lyme es una zoonosis de distribucion mundial, y es la enfermedad mas comun transmitida por vectores en los estados Unidos con mas de 20 000 casos reportados anualmente, el 93% de estos casos se diagnosticaron en 10 estados. B. burgdorferi sensu stricto es la unica genoespecie que causa la enfermedad de Lyme en Norte America y Europa (14,15). En Europa, aunque la borreliosis de Lyme no se encuentra entre las enfermedades de declaracion obligatoria, se estima que las mayores tasas de incidencia se alcanzan en Alemania, Austria, Eslovenia, Suecia y Escandinavia, pudiendo llegar a los 155 casos por 100 000 habitantes por ano. Tambien se han descrito casos en Rusia, China y Japon. La enfermedad de Lyme no se considera endemica para Australia, Africa, America del Sur, asi como el sur de Estados Unidos (16).

Los estudios de seroprevalencia en humanos son importantes ya que demuestran hasta que punto una infeccion esta presente en una poblacion. En este estudio, la seroprevalencia hallada fue de 4,6 % (7/152) lo que indica la presencia de borrelia en esta region. Aunque otros estudios realizados en Colombia no demostraron la seroprevalencia y se enfocaron al estudio de pacientes con sintomas dermatologicos asociados con la enfermedad de Lyme, estos trabajos evidenciaron la circulacion de B. burgdorferi. Palacios (4), en Cali, utilizando western blot encontro que el 12 % (4/30) de los sujetos con manifestaciones clinicas asociadas a la enfermedad presentaron evidencia serologica de infeccion por borrelia. En otro estudio Munoz (3), utilizo inmunofluorescencia indirecta y encontro un paciente con morfea localizada con reactividad serologica para B. burgdorferi, otros siete pacientes con morfea localizada y tres con cuadros reumaticos presentaron reactividad serologica debil.

Por otra parte, los criterios para considerar un western blot positivo han sufrido modificaciones en EEUU y Europa; (17-20) lo anterior esta relacionado con la heterogeneidad genetica de la bacteria y su area geografica. En este estudio se incluyeron los criterios del fabricante de la tecnica pero tambien fueron tomados en cuenta las proteinas establecidas por el CDC, en EEUU, y la Union Europea de Accion y Concertacion de la Borreliosis de Lyme (European Union Concerted Action on Lyme Borreliosis) (EUCALB).

Segun la tecnica utilizada en este estudio para considerar positivo un western blot IgG al menos dos de las proteinas p83/100, p58, p43, p39, p30, OspC, p21, p17 y VlsE, son necesarias para confirmar el diagnostico, lo que fue encontrado en las muestras positivas. Esta tecnica reconoce las proteinas de Borrelia usadas en el diagnostico para cepas aisladas en Europa donde las borrelias son diferentes a las aisladas en EEUU. Una de estas es la proteina flagelar de 41 kDa que Dressler, (16) utilizo en los criterios de CDC para diagnostico en casos con enfermedad de Lyme temprana. En este trabajo 100 % de los sujetos presentaron la banda p41kDa. Sin embargo, el fabricante de la tecnica utilizada no tienen en cuenta la p41kDa para diagnostico por western blot. Cabe anotar que otras proteinas recomendadas por el CDC no son tomadas como proteinas de diagnostico por la tecnica utilizada en el estudio y es probable que los sujetos de este estudio presentaran reactividad contra estas proteinas.

Otras proteinas de criterio diagnostico utilizadas por el CDC y el fabricante de la tecnica son; la proteina OspC (p23kDa proteina de membrana externa), reportada por Dressler, (16) como indicadora de enfermedad temprana, en este estudio dos personas (28,5 %) presentaron anticuerpos para esta proteina. Magnarelli (21), reportaron las proteinas p93 (p83/100) y p39 conocidas por ser antigenos especificos de Borrelia burgdorferi. Dos sujetos analizados presentaron anticuerpos frente a estas proteinas, lo que indica infeccion por B. burgdorferi. Aunque el western blot es el metodo recomendado como prueba confirmatoria para la Enfermedad de Lyme, la interpretacion del diagnostico por laboratorio de esta entidad no es facil, debido a la heterogeneidad genetica de la bacteria en cada area geografica, por tal razon seria necesario establecer la diversidad de cepas en cada area.

En lo que refiere a la exposicion ocupacional, un 42,8 % (3/7) de los sujetos con western blot positivos a Borrelia realizaban labores del campo, actividad en la que se tiene mayor riesgo de ser picado por el vector de la enfermedad (22). En actividades en las que se requiere manejo de tejidos animales 42,8 % (3/7) de los sujetos presentaron western blot positivo, se desconoce la relacion entre esta ocupacion con la infeccion por borrelia que es transmitida por picaduras de garrapatas y no por contacto directo con tejidos de animales infectados. Sin embargo, la mayoria de estos sujetos viven cerca de zonas rurales y en contacto permanente con animales domesticos.

Ninguno de los sujetos analizados en el estudio, presentaron sintomatologia compatible de enfermedad de Lyme. La aparente discrepancia entre la serologia positiva y la ausencia de sintomas clinicos ha sido bien documentada (22). Los individuos con anticuerpos a Borrelia burgdorferi por ELISA y western blot, sin evidencia clinica de la enfermedad, podrian ser el resultado de una exposicion repetida a borrelia y consecuentemente a una revacunacion natural.

Los estudios epidemiologicos de enfermedades infecciosas presentan grandes dificultades. Esto es notable en las zoonosis transmitidas por vectores debido al gran numero de factores implicados en su transmision. La ocurrencia de borreliosis en humanos en Cordoba posee importantes implicaciones epidemiologicas. Debido a que los vectores conocidos de las borreliosis, como Ixodes scapularis o Ixodes ricinus, aun no se ha documentado su existencia en esta region del pais. Un diagnostico de borreliosis en humanos en esta region significaria que se ha desarrollado un nuevo tipo de asociacion huesped-parasito no descrito. La definicion de este aspecto requerira de una apropiada investigacion epidemiologica y entomologica. Caso similar al nuestro es el descrito en Papua New Guinea en donde el 57 % de las muestras fueron positivas por western blot pero el vector de la enfermedad de Lyme se desconoce (23).

En conclusion, este estudio solo permite presumir la existencia de infeccion por Borrelia burgdorferi en Cordoba, poco se conoce a cerca de los vectores, los reservorios, prevalencia, incidencia, distribucion geografica y la existencia de casos y seguimiento de aquellos sujetos que presenten manifestaciones clinicas de la enfermedad y de antecedentes de picaduras por garrapatas. Los datos aqui presentados muestran evidencia de la circulacion antigenica de Borrelia en la poblacion rural estudiada. Se deben realizar futuros estudios clinicos, serologicos y sobre todo ecologicos que determinen la presencia de ADN de Borrelia burgdorferi en las garrapatas de nuestra region

REFERENCIAS

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Jorge Miranda, Salim Mattar, Katya Perdomo y Luis Palencia

Instituto de Investigaciones Biologicas del Tropico, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad de Cordoba. Monteria, Colombia. jorgemire@hotmail.com, mattarsalim@hotmail.com, kapeca63@hotmail.com, Luispa849@hotmail.com

Recibido 15 Agosto 2008/Enviado para Modificacion 22 Marzo 2009/Aceptado 5 Mayo 2009
Tabla 1. Caracteristicas sociodemograficas de la poblacion estudiada

Procedencia               Mujer       Hombre          Total
                          n (%)       n (%)      n (% del total)

Monteria                  5 (6)      77 (94)         82 (54)
Cerete                   2 (6,6)    28 (93,4)       30 (19,7)
Lorica                   3 (11,5)   23 (88,5)       26 (17,1)
Cotorra                  2 (14,2)   12 (85,8)       14 (9,2)

OCUPACION
Carnicero                9 (12,6)   62 (87,3)       45 (29,6)
Alcantarillado y aseo    1 (2,7)    36 (97,3)       37 (24,3)
Agricultor               2 (5,4)    35 (94,6)       37 (24,3)
Expendedor                  0       3 (100,0)        3 (1,9)
Oficios varios              0       3 (100,0)        3 (1,9)
Gerente                     0       1 (100,0)       1 (0,65)

SINTOMAS
Cefalea                  3 (4,6)    61 (95,3)       64 (42,1)
Dolor muscular           4 (6,5)    57 (93,3)       61 (40,1)
Artralgias               1 (2,1)    45 (97,8)       46 (30,2)
Fiebre                    3 (10)     27 (90)         30 (20)
Ictericia                1 (16,6)    5 (83,3)       6 (3,94)

Total general            12 (7,9)   140 (92,1)     152 (100,0)

Tabla 2. Lugar de procedencia y porcentaje de pacientes seropositivos
con contacto con animales domesticos y silvestres

                       Contacto con animales

             Perros      cerdos      bovinos    roedores

Municipio   n     %     n     %     n     %     n     %

Monteria    8    26,6   10   33,3   8    26,6   14   46,6
Lorica      2    6,6    1    3,3    5    16,6   5    16,6
Cerete      5    16,6   4    13,3   4    13,3   6     20
Cotorra     1    3,3    1    3,3    1    3,3    1    3,3

Total       16   53,3   16   53,3   18    60    26   86,6
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Author:Miranda, Jorge; Mattar, Salim; Perdomo, Katya; Palencia, Luis
Publication:Revista de Salud Publica
Article Type:Report
Date:Jun 1, 2009
Words:3781
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