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Relacion utero-embrionaria y su variacion morfologica durante el periodo implantacional en conejo.

RESUMEN: La implantacion embrionaria en uteros de mamiferos es iniciada por la formacion de un contacto directo celula a celula entre el trofoblasto del blastocisto y el epitelio uterino. El conejo ha demostrado ser un excelente modelo para los estudios de implantacion y se presenta como uno de los mamiferos con mayor eficiencia reproductiva. Nuestro objetivo fue reconstruir la secuencia de los eventos, tanto morfologicos como moffometricos que ocurren durante la implantacion en el conejo, entre los 7 a 10 dias post coito.

Se utilizaron 16 conejas neozelandesas blancas adultas (Oryctolagus cuniculus), mantenidas en cautiverio y obtenidas del Bioterio de la Facultad de Medicina de la Universidad de La Frontera, Temuco, Chile. Una vez sacfificadas, el utero de cada coneja gestante fue fijado en formalina al 10% y postfijado en Dubosq brasil. Se uulizaron las tecnicas histologicas: H. E. y Tricromico de Masson e histoquimicas: PAS, PAS diastasa, Azul de Alcian pH 2.5 y pH 1.0, y Picrosirius de Junqueira. Otras vesiculas se fijaron en methacarn para su estudio inmuuocitoquimico con el anticuerpo monoclonal (CK)AEI, con la finalidad de evidenciar cambios en los filamentos intermedios de las celulas epiteliales. Se consigno el diametro de la vesicula en mm y glandulas uterinas en [mu]m.

Desde el dia 7 al 10 post coito, el diametro de la vesicula embrionaria aumento 2 mm por dia. Las glandulas uterinas experimentaron un significativo y distinto crecimiento, dependiendo si estas se encontraban en la pared mesometrial o antimesometrial. En conejo, el sinciciotrofoblasto del hemisferio abembrionico del blastocisto, se adhiere y fusiona con el epitelio uterino, luego la camara implantacional, en coneja, se forma como resultado de la expansion del blastocisto que mantiene contacto con varios puntos de la pared uterina, ya sea en la region antimesometrial como mesometrial. La primera adhesion, ocurre entre el sinciciotrofoblasto y las celulas epiteliales de la pared antimesometrial antes de que ocurra una modificacion epitelial general y del tejido conjuntivo subyacente, con aumento de glicogeno y glicosaminoglicanos.

PALABRAS CLAVE: 1. Relacion utero-embrionaria; 2. Morfologia; 3. Conejo.

UTERUS-EMBRYONNIC RELATIONSHIP AND ITS MORPHOLOGIC VARIATIONS DURING IMPLANTATIONAL PERIOD IN THE RABBIT

SUMMARY: Embryo implantation in mammalian uterus starts by a cell-to-cell direct contact between the blastocyst's trophoblast and the uterine ephitelium. The rabbit is a good model to study implantation. This work aims at analyzing the sequence of morphological morphometric events during implantation (7 to 10 days post-coitum).

Sixteen white New Zealand adult female rabbits (Oryctolagus cuniculus), from the Faculty of Medicine, University of La Frontera, Chile, were used. After sacrifice, the uterus of each pregnant female was fixed in 10% formaline and postfixed in Duboscq Brasil. Stainings used were HE and Masson Trichromic and for histochemistry PAS, Diastase-PAS, Alcian Blue (pH 1 and 2.5) and Junqueira Picrosirius. Some samples were fixed in Methacarn for immunocitochemical study using the monoclonal AE1 antibody to reveal changes in the intermediate filaments in the ephitelial cells. Diameter of the embryonic vesicle in mm and uterine glands in [micro]m were recorded.

From day 7 to 10 post coitum, the diameter of the embryonic vesicle increased 2mm per day. The uterine glands underwent significative growth, differentially depending if they were located in the mesometrial or antimesometrial uterine wall. In the rabbit, the syncitiotrophoblast of the embryonic hemisphere of the blastocyst adhieres and fuses to the uterine ephitelium. The implantational chamber in the rabbit, is therefore formed as a result of the expansion of the blastocysts which contacts with many points of the uterine wall, either in the mesometrial or antimesometrial uterine wall. The first adhesion occurs between the syntitiotrophoblast and the ephitelial cells of the antimesometrial wall prior to a general ephitelial modification and the subjacent connective tissue, which shows increased glycogen and glycosamineglycanes.

KEY WORDS: 1. Uterus-Embryonic relationship; 2. Morphology; 3. Rabbit.

INTRODUCCION

La implantacion embrionaria en uteros de mamiferos es iniciada por la formacion de un contacto directo celula a celula entre el trofoblasto del blastocisto y el epitelio uterino. Para estudiar el mecanismo de adhesion e implantacion del blastocisto al epitelio uterino en mamiferos, se torna imperioso el estudio de la cubierta materna. En los animales domesticos, el primer resultado de la division es la formacion de un acumulo de celulas. En la mayor parte de los mamiferos domesticos, la zona de contacto es antimesometrial. En rumiantes, cerdos y roedores estas zonas del utero muestran una mayor vascularizacion antes que el blastocisto entre en contacto. En la mayoria de los grandes mamiferos domesticos, la union no es invasiva y los tejidos fetales pueden separarse del epitelio uterino. En carnivoros, roedores, primates y el Hombre, el trofoblasto invade y destruye parcialmente el endometrio (Noden & Lahunta, 1985).

Pitt & Carney (1999), realizaron un estudio morfologico postimplantacional en conejos New Zealand White, estableciendo asi el archeotipo normal de desarrollo de conejo entre los dias 9 al 13 post coito. Describieron que, en general, muchos de los patrones de desarrollo morfologicamente son similares a los de roedores. Una de las primeras notables diferencias es que en el dia 13, el embrion de conejo no esta completamente envuelto por el saco vitelino como en rata y raton. Segun estos autores, la placenta estana exhibiendo un crecimiento extensivo si se compara con los estadios tempranos de especies roedoras.

Enders & Schlafke (1978), en su estudio sobre interaccion del blastocisto y endometrio en la implantacion, indican que en rata el blastocisto se extiende antimesometrialmente, y comienza a ser progresivamente mas profundo y extenso al final del 5[grados] dia e inicio del 6[grados] dia. Para el 6[grados] dia, la camara se alarga, extendiendose hacia el lumen mesometrial.

En humanos, aproximadamente al 6[grados] dia de la fecundacion, el blastocisto se fija en el epitelio endometrial, por lo general, cerca de su masa celular interna, que representa el polo embrionario. Alrededor del 7[grados] dia, una capa de celulas, llamada endodermo primitivo, aparece en la superficie de la masa celular interna, la cual ve hacia la cavidad del blastocisto (Moore, 1995).

En el conejo, los primeros estadios embrionarios son similares que en el raton, Sin embargo, a diferencia de este, el embrioblasto se observa como una placa epitelial regular, sin que se forme la cavidad amniotica. La capa trofoblastica se observa como una fina pelicula de celulas completamente aplanadas que rapidamente desaparecen, ya sea por necrosis o porque se incorporan a los elementos del ectoblasto. En este punto queda en contacto directo con la mucosa uterina y el embrion ya se ha comenzado a implantar (Grasse, 1958). Varios estudios experimentales sobre el desarrollo de los blastocistos de raton, conejo y humanos sugieren que en el crecimiento embrionario in vitro resulta anormal (Channing, 1978; Morris, 1983; Hohn, 1989, 1992), por lo que la mucosa uterina pasa a ser primordial para el desarrollo embrionario.

Carson et al., (2000), en una revision sobre el estudio implantacional en diversas especies, como roedores, primates, cerdo y conejo, indican que en la mayoria existe un periodo restringido del ciclo uterino, durante el cual puede ocurrir la implantacion. Cualquier falla al inicio de este evento critico durante la ventana implantacional, resulta en la falla de la implantacion.

Segalen & Chambon (1983), estudiaron los aspectos ultraestrncturales de la implantacion antimesometrial en conejo. Ellos indicaron que ya al 6[grados] dia post coito se observaba una huella o marcaje que deja el blastocisto en la superficie endometrial de esta region, mostrando el establecimiento temprano de contacto entre el blastocisto y el utero. En el 7[grados] dia post coito, la region antimesometrial mostraba zonas de apertura glandular, las que parecerian ser los sitios electivos de atraccion del trofoblasto. Segun estos autores, la union o "attachment" del trofoblasto podria continuar en los dias 8 y 9.

Existe una variedad fascinante de relaciones morfologicas en los diferentes estados de implantacion en distintas especies. El conejo ha demostrado ser un excelente modelo de implantacion. Como ovulador obligado, el tiempo de prenez se puede establecer en forma precisa.

La invasividad del trofoblasto y la permisividad del endometrio deben permanecer en un equilibrio. Por este motivo, tambien estudiamos los cambios estructurales que implican la maduracion funcional del endometrio de conejo, durante la gestacion temprana. La observacion morfologica de cortes de uteros de 7, 8, y 9 dias post coito, permitira reconstruir una secuencia aparente de los eventos tanto morfologicos como morfometricos, que ocurren durante la implantacion, en el conejo.

MATERIAL Y METODO

Con el objetivo de analizar la interrelacion embrionaria pre y post implantacional en conejo, utilizamos l6 conejas neozelandesas blancas adultas (Oryctolagus cuniculus), nuliparas, no gestantes clinicamente sanas, (3,5-4,5 kg de peso), criadas y mantenidas en cautiverio, alimentadas con pellets y zanahorias ad libitum. Para la cruza se utilizaron 4 machos de probada fertilidad, clinicamente sanos, mantenidos en solitario. Los conejos fueron obtenidos del Bioterio de la Facultad de Medicina de la Universidad de La Frontera, Temuco, Chile. Determinamos como dia 0 el momento del coito, sacrificando las hembras los dias 7, 8, 9 y 10 de cada cruza, respectivamente. Para esto, las conejas fueron divididas en cuatro grupos, de cuatro ejemplares cada uno.

Obtencion de las vesiculas embrionarias: Una vez sacrificados los ejemplares, se diseco macro y mesoscopicamente la region pelvica, extrayendo los cuernos uterinos. El utero de cada coneja gestante fue removido y depositado en PBS. Se cuantifico el numero de implantes en cada cuerno uterino, y tambien su normalidad. Se seleccionaron vesiculas de cada cuerno. Se utilizaron las vesiculas del cuerno derecho para su estudio histologico e histoquimico y se depositaron en formalina al 10%, y del cuerno izquierdo para su estudio inmunocitoquimico depositandose en methacarn. La diseccion se realizo ocupando una lupa ransor (10X).

Analisis histologico, histoquimico e inmunohistoquimico: Mediante los analisis histologicos e histoquimicos de los cortes tenidos con Hematoxilina Eosina, Tricromico de Masson, PAS, PAS-Diastasa, Azul de Alcian a pH 2.5 y pH 1.0, se estudiaron las caracteristicas morfologicas de las celulas epiteliales uterinas a niveles luminal y glandular y su variacion entre los dias 7 y 9 post coito. Mediante el analisis histologico de los cortes tenidos con la tecnica Picrosirius de Junqueira (1979), se observaron los tipos de fibras colagenas. Para el analisis inmunohistoquimico las muestras fueron tratadas con el anticuerpo monoclonal (CK) AE1, en una dilucion de 1:200 (Sigma).

RESULTADOS

Morfologia utero embrionaria: En el 7[grados] dia pc, en la vesicula embrionaria se observaba el lumen de la region antimesometrial. Esta se encontraba constituida por el trofoblasto y revestida por la zona pelucida. La rodeaba una capa externa o capa mucoide que formaba un revestimiento laminar continuo. Esta capa era gruesa, mostrando ser positiva en su reaccion con PAS y Azul de Alcian, Fig. 1. El epitelio trofoblastico era simple cubico.

[FIGURA 1 OMITIR]

En la region antimesometrial se han formado pliegues de la mucosa. El tejido glandular tenia un grosor muy disminuido en comparacion con la region mesometrial. El epitelio luminal se destacaba por celulas epiteliales cubicas. En el tejido glandular se observo proliferacion celular a nivel del epitelio, dando el aspecto de un epitelio pseudoestratificado. El tejido corionico interglandular era poco abundante. Tambien se observo un minimo grosor de la pared muscular. El tejido conjuntivo tenia un aspecto hiperlaxo. Con Picrosirius se evidencio colageno I y colageno III, Fig. 2. En esta region se visualizaron muy pocas celulas deciduales.

[FIGURA 2 OMITIR]

En la region mesometrial se observaron abundantes pliegues de la mucosa uterina, los que no se presentaban en la region antimesometrial. El endometrio se observo con abundante tejido glandular. Las glandulas eran tubulares y rectas.

Tanto el epitelio de revestimiento como el glandular se observaron cilindricos con pseudoestratificacion de nucleos, tres o mas nucleos en cada celula, siendo ovalados, con nucleolo periferico. Algunas celulas presentaban cilios. Las celulas del epitelio glandular se presentaban aglomeradas, sin membrana citoplasmatica definida y algunas de ellas presentaban intensa basofilia.

El tejido conjuntivo que las sustentaba, era laxo, Azul de Alzian positivo lo que indicaba una importante cantidad de proteoglicanos y glucosaminoglicanos. El tejido conjuntivo de la lamina propia era rico en celulas y presentaba un abundante material intercelular amorfo, de tipo conjuntivo laxo. La mucosa se continuaba en una capa submucosa de tejido conjuntivo denso y luego en una capa muscular diferenciada en tres partes: circular interna, oblicua intermedia y longitudinal externa y por ultimo, una serosa. La pared muscular se presentaba mas gruesa en la region mesometrial.

Con Picrosirius se evidencio colageno I principalmente y colageno III. Las celulas deciduales comenzaban a aparecer, pero aun no eran abundantes. Los capilares estaban distribuidos en el corion superficial e interglandular. La pared endotelial alcanzaba la region mas apical de los pliegues uterinos y contactaban con el epitelio de revestimiento.

En el dia 8, la vesicula embrionaria habia aumentado de tamano. Se podia diferenciar la invasion del trofoblasto y la formacion de sincicio, la que era temprana en relacion con el estado de implantacion. Prolongaciones de sinciciotrofoblasto formaban acumulos celulares y tomaban una ubicacion antimesometrial, donde comenzaba a implantarse en varios sectores, mientras aun se observaban algunos segmentos separados del epitelio uterino. En esta region existian evidencias de fusion del sinciciotrofoblasto con las celulas endometriales uterinas (Fig. 3). La implantacion ocurre en la region antimesometrial, avanzando hacia la region mesometrial, existiendo contacto en varios puntos entre el trofoblasto y vellosidades endometriales de esta region.

[FIGURA 3 OMITIR]

En la region antimesometrial, los pliegues aumentaron de tamano en relacion al dia 7, pero siguieron siendo menores que la region mesometrial. Las glandulas endometriales se encuentraban disminuidas y se observaban muy pocos pliegues de la mucosa. El epitelio luminal era simple y cubico. El tejido circundante a las glandulas continuaba siendo Azul Alcian positivo, rico en proteoglicanos. Era notoria la disminucion de la pared muscular, la cual estaba constituida por dos capas: circular interna y longitudinal externa.

En la region mesometrial se presentaban los mayores cambios de la pared uterina. El lumen se encontraba muy dilatado. La tunica mucosa alcanzaba un mayor grosor. Los pliegues de la mucosa se observaban aun mas abundantes. Disminuyo el espesor de la pared muscular en relacion al dia anterior. El diametro glandular aumento tres veces en relacion al dia anteflor. Se observo hipertrofia en la base de las glandulas que estaban ubicadas mesometrialmente.

Hubo cambios evidentes a nivel del epitelio glandular, observandose, en general, una gran proliferacion celular, dando el aspecto de epitelio pseudoestratificado. Las celulas del epitelio glandular no estaban separadas por su membrana citoplasmatica en forma evidente, la que tomaba una forma aglobada, poco definida, con aparente material de secrecion. Se observo gran cantidad de nucleos de forma ovalada, con nucleolo periferico. Ocurrio un cambio tintorial del citoplasma, aumentando la basofilia.

El tejido conjuntivo era hiperlaxo. Continuaba siendo Azul Alcian positivo (tico en proteoglicanos). Con Picrosirius se evidencio colagenos I y III. En el estroma, se habian diferenciado las celulas deciduales y algunos leucocitos endometriales. A nivel del corion interglandular, se visualizo un mayor numero de celulas deciduales, las que se encontraban rodeadas por fibras colagenas (Fig. 4). Las celulas deciduales que se localizaban adyacentes a la lamina basal, se encuentraban con material citoplasmatico PAS positivo. Aparecieron los vasos sanguineos embrionarios. Aumento el numero de capilares uterinos. Las paredes del endotelio endometrial se comenzaban a engrosar.

[FIGURA 4 OMITIR]

Los analisis con inmunohistoquimica para detectar la presencia de la citoqueratina (CK) AE1 en coneja revelaron su presencia en todo el citoplasma celular, tanto del epitelio luminal como glandular, en las diferentes etapas estudiadas (Fig. 5).

[FIGURA 5 OMITIR]

En el dia 9, el trofoblasto se expandio perifericamente, mediante la adicion de areas, donde el sinciciotrofoblasto penetro entre las celulas epiteliales luminales hacia el estroma. Estas masas celulares se observaron invadiendo las regiones donde existia apertura glandular. La invasion trofoblastica era mayor en el lado mesometrial, el embrion somitico se ha ubicado entre los dos grandes pliegues endometriales. Los procesos trofoblasticos, aparentemente, no se detienen en la membrana basal del epitelio luminal, los que literalmente se dispersaban rapidamente bajo esta. En algunas instancias estos procesos se apilaban hacia la membrana basal. Incluso en este animal, en el que se establece una placenta hemocorial en forma rapida, algunos de los sitios de penetracion mostraban restriccion temporal por la membrana basal endometrial.

La region antimesometrial se observo muy delgada, con una fina pared muscular y delgada capa mucosa, a la que se adheria la vesicula embrionaria. Esta pared alcanzaba un diametro promedio de 0.4 mm.

La region mesometrial presentaba mayor espesor debido a los grandes pliegues de la mucosa con direccion luminal, mayor desarrollo glandular y pared muscular gruesa. Lumen aproximado de 7 mm y diametro de 12 mm aproximadamente. Esta region alcanzaba un grosor promedio de 5 mm. El tejido conjuntivo circundante era laxo en algunos sectores. Se visualizaron acumulos de celulas deciduales y una gran cantidad de glandulas endometriales, tanto a nivel de la mucosa superficial como profunda. Las glandulas uterinas mesometriales eran muy tortuosas.

El epitelio glandular presentaba celulas con reaccion fuertemente PAS (+), (Fig. 6). El lumen era irregular y presentaba secrecion y caracteristicas de apocrinidad. La superficie apical de las glandulas era Alcian (+). Esta reaccion era mas intensa a nivel de la zona apical de la celula. En el epitelio luminal de la superficie endometrial, las celulas se encontraban aglomeradas, su membrana citoplasmatica se encontraba poco definida y los nucleos se observaban uno al lado del otro. Los vasos eran abundantes y de mayor calibre. Los vasos sanguineos presentan cambios en su pared, el endotelio estaba reforzado por varias capas de origen trofoblastico. Se comienzan a visualizar vasos sanguineos embrionarios con globulos rojos nucleados.

[FIGURA 6 OMITIR]

En el dia 10, el embrion ha crecido, tiene varios somitos, se ha formado el amnios. Por otra parte, se ha formado una placenta del tipo hemoendoteliocorial, observandose celulas trofoblasticas llegando al lumen de los vasos sanguineos.

La region antimesometrial se visualizaba muy delgada, con una fina pared muscular y delgada capa mucosa, a la que se adheria la vesicula embrionaria.

Al observar la region mesometrial con Picrosirius, se evidenciaron fibras colagenas tipo I. El trofoblasto reemplazo al epitelio uterino. Los procesos del sinciciotrofoblasto invadian los vasos maternales. Las arteriolas estaban parcial o completamente ocluidas por el citotrofoblasto migrante. El acceso temprano para controlar la sangre materna, le permitia a las lagunas trofoblasticas expandirse superficialmente. En relacion a los vasos sanguineos, estarian ocurriendo procesos similares a los de la especie humana, donde el trofoblasto alcanzaba tambien a los vasos sanguineos y reemplazaba al endotelio y a la pared.

DISCUSION

La implantacion, que en la especie humana parece iniciarse cuando el embrion ha entrado en el utero, implica una serie de estimulos y respuestas integradas, es decir, un dialogo activo entre las celulas maternas y las del blastocisto. La naturaleza y la integracion de varios estimulos y respuestas, que exigen una sincronia precisa, son ahora objeto de estudio. En animales domesticos, el 80% de perdida de embriones ocurre durante el periodo preimplantacional. Por esto, entender las variadas senales que regulan la implantacion, tiene importancia tanto clinica como economica. Usar al conejo como modelo animal para conocer la implantacion, nos ha acercado a la comprension de este mecanismo.

El trofoblasto toma una posicion previa frente al epitelio endometrial. En el dia 7pc, mientras la camara de implantacion se forma, el trofoblasto se encuentra rodeado por una capa extracelular llamada blastolemas, (Denker, 2001). Esta es una capa externa, mucoide que forma un revestimiento laminar continuo en este dia. El PAS positivo nos indica la presencia de glucopolisacaridos neutros, el AA positivo a pH acido (0.4) y basico, indica la presencia de mucopolisacaridos acidos sulfatados y no sulfatados. Mientras la camara implantacional se forma, el trofoblasto se encuentra rodeado por una capa extracelular, la que es removida, (Enders & Schlafke, 1978). Concordamos con estos autores, ya que mientras el trofoblasto comienza a implantarse, se observa como la gruesa capa extracelular que rodea al resto del blastocisto se reduce, desapareciendo en los segmentos en los que el trofoblasto hace contacto con el epitelio, (dia 8 pc). En el dia 7pc, se presentan zonas de apertura celular en la region antimesometrial, hacia las que es atraido el trofoblasto, concordando con Segalen & Chambon. Este fenomeno se continua en el dia 8, en esta misma region, donde comienza la implantacion. Segun estudios de Carson, et al., y Denker & Thie en mamiferos, el sinciciotrofoblasto primero se adhiere a la terminacion apical de la celula epitelial, para luego fusionarse con ellas. Nuestras observaciones con microscopia optica indican que, luego del contacto entre el epitelio uterino y trofoblastico, las membranas celulares de ambos epitelios se borran, fenomeno que podria ser interpretado histologicamente como fusion. Esta fusion entre las terminaciones apicales celulares no es comun en otras especies. Ademas, demuestra que la adhesion apicalapical puede ser un importante iniciador de la implantacion. El conejo estaria constituyendo un ejemplo bien documentado de animal, que sufre de fusion antes del inicio del proceso de la penetracion epitelial durante la implantacion.

Los epitelios uterinos luminal y glandular tienen un extensivo dinamismo en el proceso implantacional. En el dia 7pc, aun no se evidencian productos secretorios en ninguno de los dos epitelios. La morfologia general de los epitelios luminal y glandular consiste en celulas cubicas, secretoras y ciliadas, presentes durante la etapa preimplantacional (dia 7 de gestacion), destacandose una diferencia entre los tipos de epitelio de las regiones meso y antimesometrial. Coincidimos con los estudios de Stroband et al., (1986) realizados en cerdo, al considerar los epitelios luminal y glandular como dos epitelios funcionalmente distintos en el periodo preimplantacional.

Muchas especies muestran alteraciones del epitelio uterino durante la implantacion. Los cambios que ocurren a nivel del epitelio uterino dependerian del epitelio trofoblastico, segun Dlaikan et al., (1999). En el dia 8pc, se inician los primeros contactos entre el trofoblasto y el epitelio luminal, y en la region antimesometrial ya comienzan a implantarse prolongaciones de sinciciotrofoblasto. Las modificaciones epiteliales comienzan en la region antimesometrial, en la zona donde se observa la implantacion, en sus primeras etapas. Sin embargo, es en la region mesometrial en donde se implanta definitivamente el embrion. Aqui se visualiza un incremento tanto a niveles glandular como de la vascularizacion local. Segun Png & Murphy (1997) y Demir et al., (2002), en sus estudios en ratones, la diferenciacion del epitelio endometrial es un evento dinamico. La estructura morfologica e histologica de los epitelios luminal y glandular muestran diferenciacion celular tanto luminal como glandular.

Los pinopodos endometriales han sido descritos en humanos como protrusiones hormona-dependientes que nacen en la region apical de la membrana plasmatica y se han sugerido como indicadores de receptividad endometrial. Las estructuras que se pueden relacionar con los pinopodos en coneja, segun varios estudios, son semejantes a proyecciones apicales. En nuestro trabajo no observamos estructuras semejantes ni el desarrollo de proyecciones apicales, debido a que en los dias estudiados la fase receptiva ha terminado y esta comenzando el periodo implantacional (dias 7 al 10 post coito). Los estudios realizados en conejo por Lescoat et al., (1982) y Parr & Parr, (1982), y en rata por Bansode et al., (1998), fueron realizados durante el periodo de maxima sensibilidad endometrial (dias 4 al 6pc).

El epitelio endometrial, por su morfologia y supuesta homogeneidad celular, han sido mas estudiadas que el estroma. Segun Duran & Hicks, (1995) en humano y raton, y por Orchard et al., (1999) en raton, en el dia 1 de prenez, la citoqueratina se encontraba en el citoplasma, pero para el dia 6 fue localizada solo en la region apical de la celulas del epitelio uterino. Olson et al., (2002), tambien observaron diferencias en la distribucion de la citoqueratina, especificamente la CK13, a nivel de los epitelios luminal y glandular. En nuestros estudios, la positividad de la inmunotincion con (CK)AE1 era leve en la region antimesometrial en el dia 7pc, en comparacion con la region mesometrial. En el dia 8pc, en cambio, se observo una fuerte positividad en la region mesometrial. Esta distribucion podria contribuir en la adhesion y posterior implantacion del blastocisto al epitelio mesometrial. La (CK) AE1 se ubica en todo el citoplasma y no solo en la region apical, lo que podria tener relacion con que el citoesqueleto, en el endometrio toma parte no solo en las funciones mecanicas de la celula, sino tambien en los movimientos y localizacion de organelos y proteinas, por lo tanto participa en el metabolismo.

El rol de las fibras colagenas podria tener una importancia relacionada con la adhesividad del blastocisto, Sherman et al. (1978), y Rincon, (1989). Los resultados obtenidos con la tecnica de Picrosirius nos proporciono informacion acerca de los tipos de fibras colagenas presentes durante los dias estudiados, 7 al 10 post coito. La presencia es principalmente de fibras colagenas de tipos I y III. Este tipo de fibras son mas maduras, lo que podria indicar que no hay nueva elaboracion de colageno. Clark et al., (1992), en su estudio en ratas, concluyeron que la concentracion de fibras colagenas dentro del tejido decidual embrionario disminuye entre los dias 6 al 8pc. Akcali et al., (2003), sugieren que la muerte de las celulas deciduales es el punto de termino de la diferenciacion de la colagena, por lo tanto, estas fibras tambien estarian involucradas con el proceso de decidualizacion. La remodelacion de la colagena en el area de implantacion parece ser un factor importante de la respuesta uterina a la implantacion embrionaria.

Las celulas trofoblasticas, en general, expresan un numero de receptores de matriz extracelular y actividades degenerativas, que permiten la interaccion e invasion a traves del endometrio. Con respecto al estado de implantacion, en conejo y cerdo de guinea la formacion de sincicio es temprana, en relacion con otros mamiferos como armadillo, rata y murcielago, (Enders & Schlafke, 1969). En nuestro trabajo encontramos la presencia de prolongaciones del cincisio citoplasmatico del trofoblasto o "knob trofoblastico" en el dia 8 post coito. Este serviria para anclar al trofoblasto en la posicion que toma en la camara de implantacion, mientras se establece la implantacion mesometrial del boton embrionario, en conejo.

Estamosde acuerdo con los autores Enders & Schlafke (1971), en que para formarse el knob trofoblastico, existe un proceso de fusion del trofoblasto con la terminacion apical de las celulas epiteliales donde el sinciciotrofoblasto se fusiona con dos o mas celulas epiteliales uterinas antes de la penetracion en el estroma.

Concordando con Carson, et al, el conejo es un ejemplo de adhesion y posterior fusion con los botones trofoblasticos encontrados en nuestro trabajo. El proceso de fusion ocurrido luego de la adhesion apical-apical puede ser un importante iniciador de la implantacion. Claramente, existen grandes diferencias en la forma de invasion de las celulas citotrofoblasticas entre mamiferos. Las celulas citotrofoblasticas en primates y humanos migran individualmente en el endometrio humano, formandose cordones de celulas que bypasean las celulas estromales, (Jones et al., 2001). En conejo, es unica la formacion de agregados de sinciciotrofoblasto en el hemisferio abembrionico del blastocisto, el que se adhiere evidenciando fusion del epitelio uterino con el trofoblasto. La base histologica para determinar fusion es la presencia de dos tipos de nucleos y la ausencia de membranas entre ellas. Esta forma tan poco invasiva destaca a esta especie y la diferencia de primates y roedores.

Pudimos observar que mientras la camara de implantacion se esta formando, el trofoblasto se encuentra rodeado por la capa extracelular, la que se remueve antes de la implantacion por, posiblemente, enzimas digestivas del propio trofoblasto, permitiendo el contacto del trofoblasto con el epitelio uterino en esos sectores. Luego, la formacion de sincisiotrofoblasto penetra el epitelio luminal. Observamos que la membrana basal en conejo es parcialmente restrictiva a la invasion trofoblastica. Pero la penetracion inicial en este animal, al compararlo con estudios realizados en raton por Larsen, (1961), no es pasiva. Estudios en rata, (Enders & Schlafke, 1969), y en murcielagos Carollia por Rasweiler et al., 2002, describen que despues de la invasion inicial del epitelio uterino luminal por las celulas trofoblasticas, este permanece por un tiempo adyacente a la lamina basal residual del epitelio, pero no lo penetra.

Murphy et al. (1982) observaron alteraciones estructurales en las celulas endometriales, por lo que deducimos que la implantacion es mas invasiva en roedores murinos que en conejo. En este animal los cambios estructurales se observan a nivel del apice de las celulas epiteliales luminales, especialmente las que se ven afectadas a la invasion trofobastica. El fenomeno observado el dia 10pc, en mono rhesus por Enders et al., (1983), se asimila a lo ocurrido en conejo el dia 8pc, con respecto a la formacion de complejos de union del sinciciotrofoblasto con el epitelio uterino. La implantacion en mono rhesus es mas invasiva, al mostrar aislamiento y destruccion de las celulas epiteliales y lamina basal, lo que no se observa en conejo.

La interaccion fetomaternal es esencial para una prenez exitosa en cualquier especie. Luego de la implantacion el trofoblasto penetra la decidua estromal superficial de la pared uterina, rompiendo la pared endotelial de las arterias para lograr el acceso hacia la circulacion maternal. Migran entre los vasos, incorporandose en la pared arterial, reemplazando el endotelio de los vasos.

La invasion endovascular y la remodelacion extensiva asociada con el desarrollo de la cama placentaria, requiere una regulacion precisa y una intima comunicacion y cooperacion entre el desarrollo de la unidad fetoplacental y la vasculatura endometrial.

Recibido: 11-06-2004

Aceptado: 22-09-2004

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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* Carolina Schencke; ** Mariano del Sol & *** Mariana Rojas.

* Alumna de Magister en Ciencias, Mencion Morfologia, Universidad de La Frontera, Chile.

** Facultad de Medicina, Universidad de La Frontera, Temuco, Chile.

*** Facultad de Medicina, Universidad de Chile, Santiago, Chile. Financiado por Proyecto DIDUFRO 130203

Direccion para correspondencia:

Prof Dr. Mariano del Sol

Facultad de Medicina

Universidad de La Frontera

Casilla 54-D

Temuco--CHILE
Tabla I. Descripcion morfologica de la vesicula embrionaria y del
trofoblasto de conejo Oryctolagus cuniculus, durante los dias 7,
8, 9 y 10 postcoito.

Vesicula      Dia 7 post coito    Yace en la region antimesometrial.
embrionaria                       Esta constituida por el trofoblasto
                                  y revestida por zona pelucida,
                                  rodeada de capa mucoide. Esta
                                  ultima, PAS y Azul de Alcian
                                  positivo.

              Dia 8 post coito    LA gruesa capa extracelular se
                                  reduce en algunos segmentos, en los
                                  que el trofoblasto hace contacto con
                                  el epitelio a nivel antimesometrial.

              Dia 9 post coito    Abarca todo el lumen endometrial.
                                  El embrion somitico se ha ubicado
                                  entre grandes pliegues endometriales
                                  de la region mesometrial.

              Dia 10 post coito   Abarca todo el lumen endometrial.

Trofoblasto   Dia 7 post coito    Epitelio trofoblastico: simple
                                  cubico.

              Dia 8 post coito    Se puede diferenciar invasion
                                  trofoblaastica en la region
                                  antimesometrial.
                                  Se evidencian procesos
                                  trofoblasticos por la formacion de
                                  sincicio, aun se observan algunos
                                  segmentos separados del epitelio
                                  uterino.

              Dia 9 post coito    La invasion trofoblastica es mayor
                                  mesometrialmente. Los procesos
                                  trofoblasticos no se detienen en la
                                  membrana basal del epitelio luminal.

              Dia 10 post coito   El embrion ha crecido, tiene varios
                                  somitos. Se ha formado el amnios y
                                  una placenta de tipo hemoendotelio
                                  corial.
                                  Se observan celulas trofoblasticas
                                  Ilegando al lumen de los vasos
                                  sanguineos.
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Author:Schencke, Carolina; del Sol, Mariano; Rojas, Mariana
Publication:International Journal of Morphology
Date:Dec 1, 2004
Words:6635
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