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Propagacion in vitro de Carica papaya var. PTM-331 a partir de meristemos apicales.

In vitro propagation of Carica papaya var. PTM-331 from apical meristem

Introduccion

En el Peru, la papaya (Carica papaya L.) es una especie importante en la economia del poblador amazonico debido a su fruta de alto rendimiento y valor nutritivo. Su cultivo presenta una serie de ventajas como calidad de su fruto, desarrollo vegetativo corto y la cosecha semanal luego de haber iniciado la produccion, permitiendo el rapido retorno del capital invertido. Segun Carbajal y Remuzgo (2007), en los ultimos diez anos la Amazonia Peruana se ha constituido en el principal productor y abastecedor de papaya al mercado de Lima e involucra a mas del 35% de los agricultores en las distintas etapas de la cadena productiva.

El Instituto de Investigacion de la Amazonia Peruana (IIAP) viene trabajando en el programa de mejoramiento genetico de la papaya, teniendo como objetivos principales mejorar la calidad del fruto, incrementar el rendimiento y desarrollar variedades tolerantes a enfermedades limitativas al cultivo (Carbajal & Remuzgo 2007); asi se ha logrado obtener la variedad PTM-331.

Existen diversas formas de propagar la papaya, sin embargo, desde el punto de vista comercial, el uso de semilla sexual es el mas generalizado (Franciosi 1992) a pesar de las dificultades que se presentan al obtenerse plantas de diferente sexo y que a veces las plantas resultantes no reproducen exactamente las caracteristicas de la planta originaria (Ibar 1979). La propagacion vegetativa por medio de estacas o injertos no brindan los efectos deseados, las primeras son de lento desarrollo y las segundas degeneran y no mantienen las caracteristicas (Posada 2005).

Una forma de obtener plantas libres de patogenos es a traves del cultivo in vitro de meristemos que se fundamenta en el hecho de que la distribucion de los microorganismos (virus, bacterias y micoplasmas) en los tejidos de la planta no es uniforme y su concentracion tiende a disminuir progresivamente hacia el apice del tallo (Jimenez 1998). Con el estudio de los procesos que ocurren en el cultivo de tejidos de la papaya se han desarrollado tecnicas de micropropagacion por organogenesis (Alvarado 1992, Baca 2002, Gallardo et al. 2002) y embriogenesis somatica (Jimenez 1999, Ascencio et al. 2008) pero en ninguno de estos casos se trabajo con la variedad PTM-331.

El desarrollo de una metodologia de micropropagacion a partir de meristemos apicales es importante para conocer el comportamiento in vitro de esta variedad y apoyar la multiplicacion de plantas elite de sexo femenino seleccionadas en campo por sus caracteristicas fenotipicas especiales; ademas se puede realizar una cuidadosa seleccion del material genetico, manejar grandes volumenes de plantulas en espacios reducidos y mantener un stock de plantas libres de enfermedades. Este trabajo tuvo como objetivo determinar los requerimientos nutricionales y hormonales de Carica papaya var. PTM-331 en los medios de cultivo durante las fases de establecimiento de meristemos apicales, multiplicacion y enraizamiento de las plantulas.

Materiales y metodos

El presente trabajo se desarrollo en el Laboratorio de Biotecnologia de la Estacion Experimental DONOSO del Instituto Nacional de Innovacion Agraria del Peru. Los meristemos fueron extraidos de yemas apicales obtenidas de plantas de 45 dias provenientes de invernadero. Para la desinfeccion, los explantes fueron lavados con abundante agua y jabon y luego fueron transportados a la camara de flujo laminar en donde fueron sumergidos en alcohol 70% durante 30 segundos y enjuagados tres veces con agua destilada esteril, luego fueron sumergidos en hipoclorito de sodio 1% durante 10 minutos y enjuagados tres veces con agua destilada esteril.

Fase de establecimiento de meristemos.-- Luego de desinfectar las yemas apicales, con la ayuda de un microscopio estereoscopio se realizo la diseccion de meristemos. Los explantes vegetales se colocaron sobre una placa Petri (148 x 120 mm.), se sujetaron con pinzas y con ayuda del bisturi se eliminaron los primordios foliares hasta dejar el meristemo descubierto. Despues se realizo un corte en la base del meristemo y se introdujo al tubo de ensayo que contenia el medio de cultivo.

Con la finalidad de obtener el medio de cultivo adecuado que nos permita la diferenciacion de los meristemos se formularon diversos tratamientos considerando los resultados obtenidos por Alvarado (1992) y Baca (2002), empleando el medio de cultivo basal Murashige y Skoog (MS-1962) con diferentes concentraciones de BAP, ANA, AIA, [AG.sub.3] y adenina (Tabla 1). El pH del medio de cultivo fue ajustado a 5,6. Se realizaron evaluaciones cada 7 dias y la evaluacion final se realizo 49 dias despues de la siembra.

Fase de multiplicacion.-- Para determinar el medio de cultivo mas adecuado para la multiplicacion de las plantulas, los tratamientos planteados consistieron en medio de cultivo base MS con diferentes concentraciones de BAP, KIN, ANA, AIA, [AG.sub.3] y adenina (Tabla 2). Se realizaron evaluaciones cada 7 dias y la evaluacion final se realizo 35 dias despues de la siembra.

Fase de enraizamiento.-- Para determinar el medio de cultivo adecuado para el enraizamiento de las plantulas se formularon diversos tratamientos empleando el medio base MS con diferentes concentraciones de IBA, BAP, ANA y adenina (Tabla 3). La evaluacion se realizo 21 dias despues de la siembra.

Resultados y discusion

Fase de establecimiento.-- En el 2002, Baca determino que el explante mas adecuado para el establecimiento in vitro de papaya eran los meristemos.

No se observo contaminacion en la introduccion in vitro de meristemos apicales de papaya. El uso de alcohol (70%) durante 30 segundos y NaOCl (1%) durante 10 minutos resulto ser muy efectivo en la desinfeccion de explantes, pero es muy importante considerar que la introduccion de meristemos se hizo a partir de plantulas provenientes de invernadero.

En la Tabla 4 se observa el porcentaje de meristemos diferenciados a los 49 dias, las variaciones encontradas entre los distintos tratamientos se debieron basicamente a la manipulacion de las yemas apicales durante la diseccion de los meristemos.

El analisis de los resultados a los 49 dias despues de la siembra nos indica que el tratamiento TR6 presenta mayor altura de plantula y mayor numero de brotes (Tabla 4), estos datos nos indican que la combinacion de los reguladores de crecimiento empleados en TR6 son optimos para el establecimiento in vitro de meristemos apicales de papaya var. PTM-331.

Un balance apropiado entre auxinas y citoquininas en el medio de cultivo es necesario para la formacion de plantas a partir de meristemos, apices o yemas. Usualmente en los meristemos y apices la citoquininas endogena es baja debido a que el principal sitio de sintesis son las raices, por lo que la adicion exogena de citoquininas en los medios de establecimiento es generalizada (Jimenez 1998). El tratamiento TR6, el cual resulto ser el mas optimo para el establecimiento in vitro de meristemos apicales de la variedad de papaya PTM-331, contiene en su formulacion 0,5 mg.[L.sup.-1] de BAP, resultados congruentes a los obtenidos por Baca (2002) quien reporta una mayor proliferacion de brotes de papaya empleando BAP como fuente de citoquininas.

Jimenez (1998) indica que los apices y meristemos que son empleados como material inicial para el cultivo in vitro, son areas de sintesis de auxinas por lo que la concentracion endogena es alta y que normalmente cuando se emplean apices no se adicionan auxinas al medio de cultivo aunque estos pueden estimular el crecimiento, pero cuando se emplean meristemos es frecuente que no exista suficiente auxina endogena siendo necesaria la adicion exogena. Se puede observar que para el establecimiento in vitro de meristemos apicales de la variedad de papaya PTM-331, nuestra mejor fuente de auxinas fue el AIA a diferencia de los resultados obtenidos por Baca (2002) donde el ANA como fuente de auxinas resulto ser mas efectivo para la diferenciacion de meristemos de papaya criolla. En la tabla 4 se observa que los tratamientos que contienen ANA como fuente de auxinas (TR1, TR2 y TR3), presentaron porcentajes altos de diferenciacion pero los explantes obtenidos presentaron menor altura de plantula y menor numero de brotes que los explantes obtenidos con el tratamiento TR6. Alvarado (1992) indica que la utilizacion del AIA como fuente de auxina resulta mas favorable que el ANA para el establecimiento in vitro de explantes de papaya.

[FIGURA 1 OMITIR]

Fase de multiplicacion.-- El analisis de los resultados obtenidos al comparar el efecto de diferentes combinaciones de reguladores de crecimiento demostro que TA2 nos permitio obtener plantulas de mayor tamano y con mayor numero de brotes, con diferencias significativas frente al resto de los tratamientos (Tabla 5). La Figura 1 muestra las plantulas obtenidas en TA2. TA1 y TA5 tambien mostraron buenos resultados, sin diferencias significativas entre ellas, pero son significativamente diferentes al resto de tratamientos.

Al analizar la composicion de los reguladores de crecimiento en TA1, TA2 y TA5 se observa que los tres tratamientos presentan AIA como fuente de auxina y estos son superiores a los tratamientos que presentan ANA como fuente de auxina.

En los tratamientos TA1 y TA2 la fuente de citoquininas es BAP y en el tratamiento TA5 la fuente de citoquininas es KIN, estos resultados nos indican que tanto BAP y KIN nos pueden proporcionar buenos resultados en la fase de multiplicacion. Todos los tratamientos contienen [AG.sub.3] en su composicion debido a que esta hormona induce el alargamiento de los brotes. Baca (2002) obtuvo un mayor alargamiento de tallos empleando un medio basal MS al que se le adiciono 0,5 mg.[L.sup.-1] de [AG.sub.3] y 10 mg.[L.sup.-1] de adenina.

El numero de brotes es una variable importante en la fase de multiplicacion ya que a mayor numero de brotes se tendra una mayor tasa de multiplicacion. Orellana (1998) indica que la proliferacion de brotes axilares se logra con la adicion de citoquininas en el medio de cultivo para romper la dominancia apical y estimular la brotacion de las yemas que se encuentran en las axilas de las hojas. El BAP resulto ser la citoquinina mas efectiva para la multiplicacion de brotes. Alvarado (1992) concluyo que la interaccion de 0,05 mg.[L.sup.-1] de AIA, 1,5 mg.[L.sup.-1] de KIN y 100 mg.[L.sup.-1] de acido nicotinico permite la mayor proliferacion de nudos y desarrollo de abundante de follaje, mientras que Baca (2002) obtuvo mayor proliferacion de brotes, mayor numero de nudos y menor presencia de callos en un medio MS suplementado con 0,5 mg.[L.sup.-1] de BAP, 0,1 mg.[L.sup.-1] de [AG.sub.3], 0,01 mg.[L.sup.-1] de AIA y 10 mg.[L.sup.-1] de adenina; en ambos casos el AIA fue la mejor fuente de auxinas.

Gallardo et al. (2002) reportaron que el medio de cultivo MS suplementado con 0,14 mg.[L.sup.-1] de ANA y 0,45 mg.[L.sup.-1] de BAP permite obtener mayores coeficientes de multiplicacion.

La diferencia en la fuente de auxina mas efectiva en la multiplicacion in vitro se debe principalmente a la variedad de papaya empleada en cada caso, en el presente trabajo se empleo la variedad PTM-331; Alvarado (1992) empleo la variedad Pauna, Baca (2002) empleo la variedad Criollo y Gallardo et al. (2002) emplearon el hibrido IBP-4299.

Fase de enraizamiento.-- El enraizamiento se caracteriza por ser la fase mas voluminosa de todo el proceso, pues en ella cada brote, esqueje o yema de forma individual que se ha formado durante la fase de multiplicacion, debe ser cultivada y manipulada in vitro para que, ademas de crecer y desarrollar un seudotallo o tallo con las primeras hojas, forme y desarrolle varias raices que le permitan comenzar la absorcion de nutrientes al transplantarse sobre un sustrato enriquecido y convertirse en vitroplanta aclimatizada lista para llevarse al campo (Orellana 1998).

Previamente al analisis estadistico de las variables numero y longitud de raices se determino el porcentaje de enraizamiento en cada tratamiento. Se observo que TM0, TM2 y TM6 no presentaron enraizamiento por lo que estos tratamientos no fueron tomados en cuenta para el analisis estadistico. Se alcanzaron mejores resultados en TM4 con 83,33% de plantas enraizadas (Tabla 6).

Al realizarse el analisis para las variables numero y longitud de raices, los tratamientos TM3 y TM4 presentan los mayores promedios, estos tratamientos no presentan diferencias significativas entre si de acuerdo a la prueba de Duncan realizada con un nivel de significancia de p<0,05 (Tabla 6). Estas variables son de mucha importancia en la fase de aclimatacion, debido a que es necesaria que una planta tenga el soporte de las raices para un mejor desarrollo en el sustrato esteril. Si bien las raices no son del todo funcionales debido a la escasez de pelos absorbentes que no se desarrollan in vitro, un mayor tamano y un mayor numero de raices inducen la formacion ex vitro de nuevas raices y pelos absorbentes, que extraeran del suelo los nutrientes necesarios para el desarrollo de la plantula.

Al comparar los diferentes tratamientos, se observa que TM4 presenta el mayor porcentaje de enraizamiento, mayor numero de raices y mayor longitud de raices; este tratamiento contiene el medio basal MS al que se le adiciono 3 mg.[L.sup.-1] de IBA y 5 mg.[L.sup.-1] de adenina. Estos resultados se asemejan a los obtenidos por Baca (2002) que obtuvo mayor proliferacion de raices en un medio que contenia 2 mg.[L.sup.-1] de IBA y 10 mg.[L.sup.-1] de adenina.

En el tratamiento TM3 que contiene 3 mg [l.sup.-1] IBA se observa un menor porcentaje de enraizamiento, pero las respuestas en el numero de raices y longitud de raices no presentan diferencias significativas con las respuestas obtenidas en el tratamiento TM4. Reuveni et al. (1990) lograron enraizar plantas in vitro en un medio MS que contenia 1 mg.[L.sup.-1] de IBA, mientras que Alvarado (1992) senala que el enraizamiento de plantulas de papaya se obtiene en un medio que contenga 5 mg.[L.sup.-1] de IBA.

Jimenez (1999), senala que el metodo de Drew (1993) induce el enraizamiento de los brotes en proliferacion, es decir una concentracion de 0,2 mg.[L.sup.-1] de IBA y 11,3 mg.[L.sup.-1] de Riboflavina. Posada (2005) indica que para el enraizamiento de plantulas de papaya, los explantes se subcultivan en un medio de cultivo compuesto por el 50% de las sales MS y concentraciones entre 3 y 5 mg.[L.sup.-1] de IBA durante 10 dias, luego se transfieren a un medio de cultivo compuesto por sales MS sin reguladores de crecimiento por espacio de 20 dias proporcionando un 80 % de plantas enraizadas.

A manera de sumario puede senalarse que:

En la fase de establecimiento, el tratamiento donde se obtuvo una mayor diferenciacion de meristemos a los 49 dias fue TR6 (MS + 0,5 mg.[L.sup.-1] de BAP + 0,5 mg.[L.sup.-1] de AIA + 10 mg.[L.sup.-1] de Adenina) y por lo tanto proporciono plantulas mas vigorosas para iniciar la fase de multiplicacion.

El medio TA2 que contiene MS + 0,5 mg.[L.sup.-1] de BAP + 0,5 mg.[L.sup.-1] de AIA + 0,3 mg.[L.sup.-1] de [AG.sub.3], permitio obtener a los 35 dias plantulas mas grandes y con mayor numero de brotes.

El uso de AIA como fuente de auxina nos permitio obtener mejores resultados que el uso del ANA en el establecimiento in vitro de meristemos y la multiplicacion de explantes.

El tratamiento TM4 que posee MS + 3 mg.[L.sup.-1] de IBA + 5 mg.[L.sup.-1] de adenina permitio obtener un mayor porcentaje de enraizamiento (83,33%).

Literatura citada

Alvarado M. 1992. Propagacion vegetativa in vitro del papayo (Carica papaya L.). Tesis Biologo. Universidad Nacional Agraria La Molina. Lima, Peru. 60 pp.

Ascencio A., H. Gutierrez, B. Rodriguez, et al. 2008. Plant regeneration of Carica papaya L. through somatic embryogenesis in response to light quality, gelling agent and phloridzin. Scientia Horticulturae. 118 (2): 155-160.

Baca A. 2002. Optimizacion de la micropropagacion in vitro de Carica papaya L. Tesis Ing. Agronomo. Universidad Nacional Agraria La Molina. Lima, Peru. 107 pp.

Carbajal T. & R. Remuzgo. 2007. Guia tecnica del cultivo del papayo. Instituto de Investigaciones de la Amazonia Peruana. Programa de Biodiversidad. Tingo Maria, Peru. 40 pp.

Franciosi R. 1992. El cultivo del papayo en el Peru. Ediciones Fundeagro. Lima, Peru. 87 pp.

Gallardo J., L. Posada, R. Gomez, et al. 2002. Micropropagacion del hibrido cubano de Papaya IBP 42-99. Biotecnologia Vegetal. 2 (4): 211-215.

Ibar L. 1979. Aguacate, Chirimoyo, Mango y Papaya. Editorial Aedos. Barcelona, Espana. 173 pp.

Jimenez E. 1998. Cultivo de apices y meristemos. En J. Perez (Ed.), Propagacion y mejora genetica de plantas por biotecnologia (pp. 45-56). Cuba. Ediciones GEO.

Jimenez C. 1999. Induccion de embriogenesis somatica en papayo (Carica papaya Linnaeus) cultivar PT-101-B. Tesis Biologo. Universidad Nacional Agraria La Molina. Lima, Peru. 82 pp.

Murashige T. & F. Skoog. 1962. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue culture. Physiology plantarum. 15: 473-497.

Orellana P. 1998. Propagacion via organogenesis. En J. Perez (Ed.), Propagacion y mejora genetica de plantas por biotecnologia (pp. 151-178). Cuba. Ediciones GEO.

Posada L. 2005. Aplicaciones de la biotecnologia a la propagacion de la papaya. Biotecnologia Vegetal. 5 (2): 67-79.

Reuveni D., D. Shlesinger & U. Lavi. 1990. In vitro clonal propagation of dioecious Carica papaya L. Plant cell, tissue and organ culture. 20 (1): 41-46.

Reynaldo Solis L. (1) *, Julio Olivera S. (2) y Rafael S. La Rosa L. (1)

(1) Universidad Nacional Federico Villarreal -- Facultad de Ciencias Naturales y Matematica. Jr. Rio Chepen No. 110, 114 y 290 -- El Agustino.

* Email Reynaldo Solis Leyva: rsolisleyva@yahoo.com.pe

(2) Estacion Experimental Agraria DONOSO --Instituto Nacional de Innovacion Agraria. Altura Km. 5,4 de la Carretera Chancay -- Huaral.

Presentado: 02/07/2011

Aceptado: 15/12/2011

Publicado online: 08/02/2012
Tabla 1. Medios de cultivo para la fase de
establecimiento de meristemos.

Tratamiento          Medio + Hormonas

TRO                         MS

TR1           MS + BAP 0,5 mg.[L.sup.-1] +
                  ANA 0,3 mg.[L.sup.-1]

TR2           MS + BAP 0,5 mg.[L.sup.-1] +
                 ANA 0,3 mg.[L.sup.-1] +
               [AG.sub.3] 0,3 mg.[L.sup.-1]

TR3           MS + BAP 0,5 mg.[L.sup.-1] +
                 ANA 0,3 mg.[L.sup.-1] +
                 Adenina 10 mg.[L.sup.-1]

TR4           MS + BAP 0,5 mg.[L.sup.-1] +
                  AIA 0,5 mg.[L.sup.-1]

TR5           MS + BAP 0,5 mg.[L.sup.-1] +
                 AIA 0,5 mg.[L.sup.-1] +
               [AG.sub.3] 0,3 mg.[L.sup.-1]

TR6           MS + BAP 0,5 mg.[L.sup.-1] +
                 AIA 0,5 mg.[L.sup.-1] +
                 Adenina 10 mg.[L.sup.-1]

Tabla 2. Medios de cultivo para la fase de
multiplicacion.

Tratamiento           Medio + Hormonas

TA 0                         MS

TA 1           MS + BAP 0,5 mg.[L.sup.-1] +
                  AIA 0,3 mg.[L.sup.-1] +
              [AG.sub.3] 0,3 mg.[L.sup.-1] +
                  Adenina 5 mg.[L.sup.-1]

TA 2           MS + BAP 0,5 mg.[L.sup.-1] +
                  AIA 0,5 mg.[L.sup.-1] +
                [AG.sub.3] 0,3 mg.[L.sup.-1]

TA 3           MS + BAP 0,5 mg.[L.sup.-1] +
                  ANA 0,3 mg.[L.sup.-1] +
               [AG.sub.3] 0,3 mg.[L.sup.-1]+
                  Adenina 5 mg.[L.sup.-1]

TA 4           MS + BAP 0,5 mg.[L.sup.-1] +
                  ANA 0,5 mg.[L.sup.-1] +
                [AG.sub.3] 0,3 mg.[L.sup.-1]

TA 5            MS + KIN 1 mg.[L.sup.-1] +
                  AIA 0,3 mg.[L.sup.-1] +
              [AG.sub.3] 0,3 mg.[L.sup.-1] +
                  Adenina 5 mg.[L.sup.-1]

TA 6            MS + KIN 1 mg.[L.sup.-1] +
                  AIA 0,5 mg.[L.sup.-1] +
                [AG.sub.3] 0,3 mg.[L.sup.-1]

TA 7            MS + KIN 1 mg.[L.sup.-1] +
                  ANA 0,3 mg.[L.sup.-1] +
              [AG.sub.3] 0,3 mg.[L.sup.-1] +
                  Adenina 5 mg.[L.sup.-1]

TA 8            MS + KIN 1 mg.[L.sup.-1] +
                  ANA 0,5 mg.[L.sup.-1] +
                [AG.sub.3] 0,3 mg.[L.sup.-1]

Tabla 3. Medios de cultivo para la fase
de enraizamiento.

Tratamiento        Medio + Hormonas

TMO                       MS

TM1           MS + IBA 3 mg.[L.sup.-1] +
                 ANA 0,5 mg.[L.sup.-1]

TM2            MS + ANA 1 mg.[L.sup.-1]

TM3            MS + IBA 3 mg.[L.sup.-1]

TM4           MS + IBA 3 mg.[L.sup.-1] +
                Adenina 5 mg.[L.sup.-1]

TM5           MS + IBA 2 mg.[L.sup.-1] +
               BAP 0,5 mg.[L.sup.-1] +
                 AIA 0,5 mg.[L.sup.-1]

TM6           MS + IBA 2 mg.[L.sup.-1] +
               BAP 0,5 mg.[L.sup.-1] +
                 ANA 0,5 mg.[L.sup.-1]

Tabla 4. Influencia de los diferentes medios de cultivo en la
diferenciacion de meristemos apicales.

Tratamientos                     49 dias

                  Meristemos         Altura de      Numero de
               diferenciados (*)   plantulas (mm)     brotes

TR 0                 87,5             2,3929 d       1,0000 d
TR 1                 87,5             7,6667 b      1,1667 bcd
TR 2                 93,75            5,3000 c      1,0667 cd
TR 3                 93,75            5,8000 c      1,1333 bcd
TR 4                  100            8,5313 ab       1,4375 b
TR 5                  100            7,8750 ab      1,3750 bc
TR 6                  100             9,1875 a       2,1875 a

* Medias con diferentes letras en la misma columna difieren para
p < 0,05 (Notacion Duncan)

Tabla 5. Altura de las plantulas (mm) y
numero de brotes en la fase de
multiplicacion.

Tratamientos          35 dias

               Altura de la    Numero de
               plantula (mm)     brotes

TA0              5,5833 g       1,0000 e
TA1              13,6667 b      2,1667 b
TA2              15,4167 a      3,4167 a
TA3             11,8333 cd      2,0833 b
TA4              11,3333 d     2,0000 bc
TA5              13,7500 b      2,0833 b
TA6              12,1667 c     1,8333 bc
TA7              8,8333 e      1,5833 cd
TA8              7,1667 f      1,1667 de

* Medias con diferentes letras en la misma
columna difieren para p < 0,05 (Notacion
Duncan)

Tabla 6. Numero y longitud de raices (21 dias despues de
siembra).

Tratamientos                  21 dias

               Porcentaje de    Numero de    Longitud de
               enraizamiento      raices     raices (mm)

TM1                 50 %         6,3333 b      5,1667 b
TM3               66,67 %        8,5000 a      6,9375 a
TM4               83,33 %        8,6000 a      7,4000 a
TM5               33,33 %        4,2500 c      4,1250 c

* Medias con diferentes letras en la misma columna difieren
para p < 0,05 (Notacion Duncan)
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Author:Solis, Reynaldo L.; Olivera, Julio S.; La Rosa L., Rafael S.
Publication:Revista peruana de biologia
Date:Dec 1, 2011
Words:4003
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