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Primer analisis filogenetico de Ehrlichia canis en perros y garrapatas de Mexico. Estudio preliminar.

First phylogenetic analysis of Ehrlichia canis in dogs and ticks from Mexico. Preliminary study

INTRODUCCION

Ehrlichia canis es una bacteria intracelular obligada, patogeno causal de la Ehrlichiosis Monocitica Canina (CME), una enfermedad transmitida por garrapatas y potencial mente zoonotica (1,2). Sus vectores son las garrapatas Rhipicephalus sanguineus y Dermacentor variabilis. La distribucion de CME esta estrechamente relacionada con la distribucion del vector (3). En Mexico, la seroprevalencia nacional en perros es de 33%, y 74.5% en el noroeste del pais (4). Las manifestaciones clinicas en los perros infectados son: fiebre, vomito, artralgia, rash, y diarrea (5). El diagnostico se basa en la visualizacion de la morula dentro del monocito e inmunoensayo-enzimatico (4); sin embargo, las herramientas moleculares como la deteccion del gene 16SrRNA mediante PCR y secuenciacion han sido utilizadas exitosamente para el diagnostico (6,7). En Venezuela, se aislo E. canis en sangre de humano con presentacion clinica asintomatica; y posteriormente, otro estudio en perros y garrapatas infectadas de la misma region geografica sugiriendo que es un patogeno de comportamiento zoonotico (2,8).

Debido a la alta seroprevalencia de infeccion en perros de Mexico, es necesario determinar la frecuencia real mediante tecnicas moleculares, conocer la variabilidad genetica de E. canis en los perros infectados y de las garrapatas reportadas en America. Acorde a esto, el objetivo de este estudio fue determinar la frecuencia de Ehrlichia canis en perros naturalmente infectados; asi como, la frecuencia de las garrapatas que lo estan infestando, comparar las secuencias identificados en Mexico con aquellas publicadas en el GenBank de paises Americanos y realizar un analisis filogenetico buscando la relacion entre los aislados.

MATERIAL Y METODOS

Sitio de estudio y recoleccion de muestras. El estudio se llevo a cabo en el Noroeste de Mexico, en el estado de Sinaloa. El estudio fue aprobado por la Comision Nacional de Investigacion (R-2013-785-069; Mexico). Las muestras fueron colectadas de Julio del 2010 hasta Agosto del 2011. Se incluyeron en el estudio los perros capturados por las perreras municipales de tres ciudades al Norte, Centro y Sur del estado, asi como los perros llevados a revision a alguna de las clinicas veterinarias de participantes. Se invito a los duenos de los perros enfermos, trabajadores de las clinicas veterinarias y de las perreras a participar en el estudio, previo consentimiento informado; 88 personas aceptaron y se les tomo muestra sanguinea para la busqueda de infeccion (resultados no mostrados). Se les tomo muestra sanguinea a 139 perros con manifestaciones clinicas sugestivas, y que estuvieran infestados con garrapatas. Se colectaron dos garrapatas por cada perro. Las garrapatas fueron identificadas morfologicamente por entomologos, mediante claves dicotomicas.

El ADN de las muestras sanguineas de los 139 perros y las garrapatas fue extraido con el kit QIAamp[R] DNA Blood purificacion (Qiagen, CA), y se congelo el ADN a -80[grados]C, hasta su procesamiento. Para la deteccion de E. canis y Ehrlichia spp., se amplifico una parte del gene 16SrRNA, utilizando los iniciadores ECC-ECB y HE3-ECA descrito previamente (2,8) amplificando una banda esperada de 389pb; la secuenciacion se realizo con los iniciadores 15F-842R, previamente descritos amplificando el gene 16SrRNA, con una banda esperada de 400pb (9). En cada reaccion se incluyo un control positivo y negativo (agua destilada).

Secuenciacion. Las muestras positivas a Ehrlichia canis fueron purificadas mediante el kit comercial de QIAquick Gel Extration Minikit. Las secuencias fueron analizadas con el programa Chromas 233, y se realizo la busqueda en base de datos de GenBank, para determinar la especie y homologia.

Analisis filogenetico. Fue secuenciada una parte ubicada entre la region 15-856 del gene 16SrRNA, y alineada de manera individual con el programa MUSCLE. Los arboles filogenetico se realizaron mediante el programa MEGA v.5, utilizando el metodo de Maxima Verosimilitud Compuesta (MLC), y Maxima Parsimonia, mediante el ensamblaje de 1,000 datos en repeticiones aleatorizadas. El algoritmo del vecino mas cercano fue utilizado para obtener el arbol inicial, con 10 replicas de las secuencias (10,11).

RESULTADOS

De los 139 perros muestreados, se obtuvieron 41 perros con sintomas clinicos (Tabla 1). Para Ehrlichia spp., se encontro 41/139(27.52%) de los perros positivos, de los cuales E. canis fue detectada en 25/139 (18.0%). La garrapata R. sanguineus fue la prevalente (92.1%), ademas, se identificaron las garrapatas Ixodes scapularis, H. leporis-palustris y D. variabilis. Fueron positivas para Ehrlichia spp., 32/139(23.2%) garrapatas y 29/139(20.86) a E. canis (Tabla 2). El riesgo de los perros de contraer la infeccion con E. canis cuando las garrapatas son positivas es de 8.24 OR (CI 3.2-21.9, 95%).

De los productos positivos, se secuenciaron 6 muestras para E. canis; tres muestras de perros de tres diferentes regiones geograficas y tres muestras de diferentes especies de garrapatas. Las secuencias amplificadas del gene 16SrRNA de perros y garrapatas mostraron una homologia de 99.8% (GenBank No. KP844657-62) a la secuencia de Ehrlichia canis cepa Jake, E. canis VHE, E. canis VDE, y E. canis cepa Brazil-COI (Tabla 3).

Se realizaron dos arboles: el primero con el metodo de Maxima verosimilitud (Figura 1), en cual muestra el arbol con la probabilidad de registro mas alto (-1074.2304); se construyo de forma automatica, con la busqueda heuristica mediante la aplicacion del algoritmo de vecino mas cercano con una matriz de distancias estimadas por pares, utilizando el metodo de MCL; despues de seleccionar la topologia con un valor de probabilidad log superior. El arbol se muestra a escala, con longitudes de rama medidos en el numero de sustituciones por sitio.

El segundo arbol se construyo mediante el metodo de Maxima Parsimonia (Figura 2). Se muestra el mejor arbol de los 10 arboles mas parsimoniosos (longitud = 91). El indice de consistencia es 0.967033 (0.936170), el indice de retencion fue de 0.972973 (0.972973) y el indice compuesto es 0.940897 (0.910868), para todos los sitios y sitios de parsimonia. El arbol se obtuvo utilizando el algoritmo subarbol-poda-reinjerto (SPR) con nivel de busqueda 0 en el que los arboles iniciales se obtuvieron mediante la adicion aleatoria de secuencias (10 repeticiones).

DISCUSION

Estos resultados confirman la existencia del ciclo enzootico de transmision a E. canis en Sinaloa, Mexico. El 92.1% de las garrapatas identificadas fueron R. sanguineus, de las cuales 28 fueron positivas a Ehrlichia spp., y 27 positivas a E. canis. Dos garrapatas D. variabilis adultas fueron infectadas con Ehrlichia spp., siendo el primer reporte de esta asociacion en Mexico, aunque ya esta demostrado de manera experimental la competitividad de este vector para transmitir la bacteria (4). Los anticuerpos a E. canis pueden permanecer elevados durante un periodo de tiempo prologando, provocando falsos positivos en zonas endemicas.

Es la primera evidencia de E. canis en las garrapatas H. leporis-palustris en Mexico. Lo que pudiera representar la presencia de vectores potenciales, capaces de transmitir E. canis. Se necesita mas informacion al respecto, para conocer si estos vectores pueden adquirir el papel de vectores competentes; es decir, capaces de transmitir este patogeno y causar la enfermedad.

La presencia de tres grupos principales (I, II y III) para E. canis, demuestra que este patogeno presenta pocas variables en el continente Americano, similar a lo encontrado en otro trabajo (6). Aunque los aislados mexicanos muestran diferencias entre los grupo I y II, las secuencias encontradas presentaron una relacion ancestral con las secuencias de Venezuela, Brasil y Estados Unidos; hipotetizando que es posible encontrar la misma variante de E. canis entre los paises de America. Es necesario realizar el analisis filogenetico de E. canis entre las secuencias presentes a nivel mundial, asi como, la busqueda de otros genes con mayor variabilidad y observar el comportamiento.

Este estudio presenta las primeras evidencias moleculares de E. canis en perros y garrapatas de Sinaloa, Mexico. Los resultados muestran un alto riesgo de infeccion en perros infestados con garrapatas (12). La importancia de entender el ciclo enzootico de Ehrlichia en garrapatas, reservorios silvestres y domesticos, puede ayudar a realizar estrategias para prevenir la infeccion en los perros (12,13).

Esta investigacion sienta las primeras bases para profundizar en el estudio de la variabilidad genetica, en aislados no solo de E. canis, sino del resto de las enfermedades transmitidas por vector, ayudando a entender el comportamiento, y posibles blancos en su prevencion.

Agradecimientos

Los autores quieren agradecer a Abha Grover por las correcciones gramaticales y de lenguaje en este articulo. El proyecto fue financiado por: CONACYT-Salud 2008-1 87868 y una beca escolar otorgada por CONACYT: 252266.

INTRODUCTION

Ehrlichia canis is an obligate intracellular bacteria, the causative pathogen of Canine monocytic ehrlichiosis (CME), which is a potentially zoonotic vector-borne disease (1,2). The vector is Rhipicephalus sanguineus ticks. CME distribution is closely related to the distribution of the vector (3). The national seroprevalence of dogs in Mexico is 33% and 74.5% in the northwest of the country (4). The clinical symptoms commonly seen with this disease in infected dogs are fever, vomiting, arthralgia, rash, and diarrhea (5). Diagnosis is based on visualization of the morula in monocyte and enzymatic-immunoassay (4); however, as molecular tools 16SrRNA gene detection by PCR and sequencing have been successfully used for diagnosis (6,7). In Venezuela, E. canis was isolated from blood of an asymptomatic patient, and another study in infected dogs and ticks from the same region suggest that it is a zoonotic pathogen (2.8).

Because of the high seroprevalence of infection on dogs from Mexico, is necessary to determine the actual frequency using molecular methods, and knowing the genetic variability of E. canis in dogs and ticks reported from American countries. According to this, the aim of this study was to determine the frequency of Ehrlichia canis in dogs naturally infected, as well as infesting ticks it, comparing the sequences identified in Mexico with those published in GenBank from American countries, and perform phylogenetic analysis looking for the relation between isolates.

MATERIAL AND METHODS

Study areas and samples collection.The study was conducted in Northwestern of Mexico, state of Sinaloa. The study was approved by Comision Nacional de Investigacion (R-2013-069, Mexico). Samples were collected from July 2010 to August 2011. In this study, dogs captured by the pound in three cities of North, Central and South, as well as dogs carried to any veterinary of Sinaloa were included. As well as owners of sick dogs, workers of veterinary and kennels to participate in the study, prior informed consent; 88 owners and kennel workers accepted and we collected their blood samples for finding infection (data not shown). 139 dogs with suggestive clinical manifestations were taken blood samples, and two ticks were collected from each dog.

Ticks were identified morphologically by entomologists, using dichotomous keys. DNA from 139 blood samples dogs of and ticks was extracted with QIAamp[R] DNA Blood kit (Qiagen, CA), and stored at -80 until the processing. For E. canis and Ehrlichia spp. detection, part of 16SrRNA gene was amplified with ECC-ECB and HE3-ECA primers, previously described (2,8) amplified an expected band 389pb; and sequencing was performed using 15F-842R primers, previously described amplifying the 16SrRNA gene, with an expected band of 800bp (9). In each reaction was included a positive and negative (distilled water) control.

Sequencing. Positive samples to Ehrlichia canis were purified by the kit protocol of QIAquick Gel Extration Minikit (Qiagen, CA). Sequences were analyzed with Chromas 233 program, and the search was conducted in GenBank database to determine the species and homology.

Phylogenetic analysis. 15-856 region of the 16SrRNA gene was sequenced and aligned individually with MUSCLE program. The phylogenetic trees were performed with the program MEGA v.5, using the Maximum Likelihood Composite (MLC) method, and Maximum Parsimony method, by assembling data from bootstrap in 1,000 repetitions. The Neighbor-Join algorithm was used to obtain the initial tree, with 10 replicas of the sequences (10,11).

RESULTS

Of 139 dogs, were obtained 41 positive dogs with clinical manifestations (Table 1). Ehrlichia spp. was found in 41/139 (27.52%) from dogs with clinical suspect, where E. canis was detected in 25/139 (18.0%). The tick R. sanguineus was the most prevalent (92.1%), and were identified Ixodes scapularis, H. leporis-palustris and D. variabilis ticks. Were positive to Ehrlichia spp. 32/139 (23.2%) ticks and 29/139 (20.86) ticks to E. canis (Table 2). The dogs risk to be infected with E. canis when ticks were positive was 8.24 OR (IC 3.2-21.9, 95%).

We sequenced six positive products for E. canis; three dog samples and three tick samples. The 16SrRNA gene amplified from dogs and ticks (GenBank No. KP844657-62) showed a 99.8% homology with Ehrlichia canis strain Jake, E. canis HEV, E. canis VDE and E. canis strain Brazil- COI sequences (Table 3).

Two trees were performed: the first with Maximum likelihood method (Figure 1), in which shows the tree with the highest log likelihood (-1074.2304); was constructed automatically, with the heuristic search by applying Neighbor-Join algorithm with a matrix of pairwise distances estimated, using MCL method; after selecting the topology with a value greater likelihood log. The tree was drawn to scale with branch lengths calculated using the average pathway method and are in the units of the number of changes over the whole sequence.

The second tree was constructed by Maximum Parsimony method (Figure 2). Tree number 1 out of 10 most parsimonious trees (length = 91) is showed. The consistency index is 0.967033 (0.936170), the retention index is 0.972973 (0.972973), and the composite index is 0.940897 (0.910868) for all sites and parsimony-informative sites. The Maximum parsimony tree was obtained using the Subtree-Pruning-Regrafting (SPR) algorithm with search level 0 in which the initial trees were obtained by the random addition of sequences (10 replicates).

DISCUSSION

These results confirm the existence of enzootic cycle transmission to E. canis in Sinaloa, Mexico. 92.1% of the ticks identified were R. sanguineus, in which 28 were positive for Ehrlichia spp., and 27 positive to E. canis. Two adult D. variabilis ticks were infected with Ehrlichia spp. This is the first report of this association in Mexico. It was already experimentally demonstrated the competitiveness of this vector to transmit the bacteria (4). Antibodies an E. canis can remain elevated during a period of time prolonging, causing false positives in endemic areas.

It is the first evidence of E. canis in H. leporispalustris ticks in Mexico. It may represent the presence of potential vectors, capable of transmitting E. canis. More information is needed in order to prove if this vector can take on the role of competent vectors; ie, capable of transmitting the pathogen and causing the disease.

The presence of three main groups (I, II and III) for E. canis, shows that this pathogen has few variables in America, similar to that found in other studie (6). Although, Mexican isolates show differences between the groups I and II; the sequences found, presented an ancestral relationship with the sequences from Venezuela, Brazil and the United States; hypothesizing that it is possible to find the same variant of E. canis among American countries. It is required more phylogenetic analysis of E. canis between worldwide sequences, and search for other genes with greater variability and observe the behavior.

This study presents the first molecular evidence of E. canis in dogs and ticks from Sinaloa, Mexico. The results show a high risk of infection in tick-infested dogs. In Mexico, recent study in ticks proves a high frequency of infection of E. canis, and could play a hight risk in humans and dogs (12). The importance of understanding the enzootic cycle of Ehrlichia in ticks, wild and domestic reservoirs, can help implement strategies to prevent infection in dogs (12, 13).

This research provides the assessment for further study of genetic variability in isolated not only from E. canis, but the rest of vector, helping to understand the behavior and potential targets in preventing diseases.

Acknowledgments

The authors wish to thanks Abha Grover for grammar and language revision of this article. This work was supported by CONACYT-Health 2008-1 87,868 and a school scholarship from CONACYT: 252266.

REFERENCES

(1.) Sainz A, Rouna X, Miro G, Estrada-Pena A, Kohn B, Harrus S, Solano-Gallego L. Guideline for veterinary prectitioners on canine Ehrlichiosis and anaplasmosis in Europe. Parasit Vectors 2015; 8:75. doi: 10.1186/s13071-015-0649-0

(2.) Perez M, Bodor M, Zhang C, Xiong Q, Rikihisa, Y. Human infection with Ehrlichia canis accompanied by clinical signs in Venezuela. Ann NY Acad Sci 2006; 1078:110-117.

(3.) Villaescusa A, Tesourob MA, Garcia-Sanchoa M, Ayllona T, Rodriguez-Francoa F, Sainz A. Evaluation of peripheral blood lymphocyte subsets in family-owned dogs naturally infected by Ehrlichia canis. Comparative Immunology. Microbiol Infect Dis 2012; 35:391-396.

(4.) Sosa-Gutierrez CG, Quintero MT, Gaxiola CS, Cota GS, Esteve-Gassent MD, Gordillo-Perez MG. Frequency and clinical epidemiology of Canine Monocityc Ehrlichiosis in Dogs infested with ticks from Sinaloa, Mexico. J Vet Med 2013; 797019.

(5.) Parola P, Paddock CD, Raoult D. Tick-borne rickettsioses around the word: emerging diseases challenging old concepts. Clin Microbiol Rev 2005; 18:719-756.

(6.) Siarkou VI, Mylonakis ME, Bourtzi-Hatzopoulou E, Koutinas AF. Sequence and phylogenetic analysis of the 16S rRNA gene of Ehrlichia canis strains in dogs with clinical monocytic ehrlichiosis. Vet Microbiol 2007; 125(3-4):304-312.

(7.) Carvalho FS, Wenceslau AA, Carlos RSA, Albuquerque GR. Epidemiological and molecular study of Ehrlichia canis in dogs in Bahia, Brazil. Genet Mol Res 2008; 7(3):657-662.

(8.) Dumler JS. Ehrlichiosis y anaplasmosis en las Americas. Acta med costarric 2013; 55(1):1-5.

(9.) Vinasco J, Li O, Alvarado A, Diaz D, Hoyos L, Tabachi L, Sirigireddy K, Ferguson C, Moro MH. Molecular evidence of new strains of Ehrlichia canis from South America. J Cli Microbiol 2007; 45(8):2716-2719.

(10.) Tamura K, Nei M. Estimation of the number of nucleotide substitutions in the control region of mitochondrial DNA in humans and chimpanzees. Molec Biol Evol 1993; 10:512-526.

(11.) Tamura K, Peterson D, Peterson N, Stecher G, Nei M, Kumar S. MEGA5: Molecular Evolutionary Genetics Analysis using Maximum Likelihood, Evolutionary Distance, and Maximum Parsimony Methods. Moler Biol Evol 2011; 28:2731-2739.

(12.) Sosa-Gutierrez CG, Vargas-Sandoval M, Torres J, Gordillo-Perez MG. Tick-borne rickettsial pathogens in questing ticks, removing from humans and animals in Mexico. J Vet Sci 2015; 17(3):353-360.

(13.) Walker DH, Paddock CD, Dumler JS. Emerging and Re-emerging Tick-Transmitted Rickettsial and Ehrlichial Infections. Med Clin N Am 2008; 92:1345-1361.

DOI:10.21897/rmvz.831

Carolina G. Sosa-Gutierrez, [1] * Ph.D, Teresa Quintero-Martinez, [2] Ph.D, Margarita Vargas-Sandoval, [3] Ph.D, Guadalupe Gordillo-Perez, [4] Ph.D.

[1] Laboratorio Nacional de Genomica y Salud. Texcaltitla, Km 67.5. Singuilucan, Hidalgo. Mexico. [2] Universidad Nacional Autonoma de Mexico. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Ciudad Universitaria, S/N. Mexico D.F, Mexico. [3] Universidad Michoacana de San Nicolas de Hidalgo, Facultad de Agrobiologia, Departamento de Entomologia. Av. Lazaro Cardenas S/N, Col. Revolucion, C.P. 60150, Uruapan, Michoacan. Mexico. [4] Instituto Mexicano del Seguro Social. Centro Medico Nacional Siglo XXI. Hospital de Pediatria, Unidad de Investigacion de Enfermedades Infecciosas y Parasitarias. Cuauhtemoc, Nro. 330, Col. Doctores. Mexico D.F, Mexico. * Correspondence: mcarososagtz@yahoo.com.mx

Received: March 2015; Accepted: February 2016.

Leyenda: Figure 1. Phylogenetic analysis of 16SrRNA gene of Ehrlichia canis, constructed with sequences of America countries by Maximum Likelihood method.

Leyenda: Figure 2. Phylogenetic analysis of 16SrRNA gene of Ehrlichia canis, constructed with sequences of America countries by Maximum Parsimony method.
Table 1. Clinical manifestations presented in dogs
positive for Ehrlichia infection.

Clinical           Dogs with         P value          OR 95% CI
manifestation   Ehrlichiosis (%)

Fever              19 (61.0)          <0.01       8.04 (2.84-23.02)
Asthenia           23 (74.2)       [less than     12.27 (4.18-37.28)
                                   or equal to]
                                       0.01
Depression          6 (25.0)          <0.01       5.86 (1.95-16.86)
Vomiting           13 (42.0)          <0.01       4.46 (1.55-13.00)
Nausea             13 (42.0)          <0.01       3.82 (1.40-10.56)
Petechiae           9 (19.4)          <0.01       15 (2.05-140.00) *
Anorexia           12 (38.7)            NS                --
Epistaxis           1 (3.2)             NS               -- *
Mane                2 (6.4)             NS               -- *

* Fisher test. NS: Not significative.

Table 2. Identification, developmental stage and
results of ticks collected.

                      No. ticks.             Stadiums
Identification           (%)
                                   [male]   [female]   Nymphs

R. sanguineus         128 (92.1)     44        58        26
D. variabilis          6 (4.3)       0         6         0
H. leporispalustris    3 (2.1)       0         2         1
I. scapularis          1 (0.72)      0         1         0
Boophilus spp          1 (0.72)      1         0         0

Total                    139         45        67        27

                              Results
Identification
                      Ehrlichia   E. canis
                       spp (%)       (%)

R. sanguineus         28 (87.5)   27 (93.1)
D. variabilis         2 (6.20)    1 (3.45)
H. leporispalustris   1 (3.15)        0
I. scapularis             0           0
Boophilus spp             0           0

Total                    32          29

[male]: Male adult tick. [female]: Female adult tick.

Table 3. Frequency of substitution (%) among isolates of Ehrlichia
canis in dogs and ticks isolates found in the Americas.

Sequences                    1        2        3        4

E. canis str. Jake                    --       --       --
E. canis str. Brazil-CO2   0.0000              --       --
E. canis str. Brazil-CO1   0.0000   0.0000              --
E. canis M7322680          0.0025   0.0025   0.0025
E. canis str. Oklahoma     0.0025   0.0025   0.0025   0.0000
E. canis iso. VDE          0.0000   0.0000   0.0000   0.0025
E. canis iso. VHE          0.0000   0.0000   0.0000   0.0025
E. canis DQ91597080        0.0000   0.0000   0.0000   0.0025
E. canis iso. Belem_Ec01   0.0025   0.0025   0.0025   0.0050
E. canis U2674080          0.0000   0.0000   0.0000   0.0025
E. canis AY39446580        0.0025   0.0025   0.0025   0.0050
Sinaloa Tick6g             0.0476   0.0476   0.0476   0.0503
Sinaloa Tick32g            0.0476   0.0476   0.0476   0.0503
Sinaloa Tick18g            0.0476   0.0476   0.0476   0.0503
Sinaloa Dog31p             0.0447   0.0447   0.0447   0.0474
Sinaloa Dog56p             0.0476   0.0476   0.0476   0.0503
Sinaloa Dog75p             0.1089   0.1089   0.1089   0.1118

Sequences                    5        6        7        8

E. canis str. Jake           --       --       --       --
E. canis str. Brazil-CO2     --       --       --       --
E. canis str. Brazil-CO1     --       --       --       --
E. canis M7322680            --       --       --       --
E. canis str. Oklahoma                --       --       --
E. canis iso. VDE          0.0025              --       --
E. canis iso. VHE          0.0025   0.0000              --
E. canis DQ91597080        0.0025   0.0000   0.0000
E. canis iso. Belem_Ec01   0.0050   0.0025   0.0025   0.0025
E. canis U2674080          0.0025   0.0000   0.0000   0.0000
E. canis AY39446580        0.0050   0.0025   0.0025   0.0025
Sinaloa Tick6g             0.0503   0.0476   0.0476   0.0476
Sinaloa Tick32g            0.0503   0.0476   0.0476   0.0476
Sinaloa Tick18g            0.0503   0.0476   0.0476   0.0476
Sinaloa Dog31p             0.0474   0.0447   0.0447   0.0447
Sinaloa Dog56p             0.0503   0.0476   0.0476   0.0476
Sinaloa Dog75p             0.1118   0.1089   0.1089   0.1089

Sequences                    9        10       11       12

E. canis str. Jake           --       --       --       --
E. canis str. Brazil-CO2     --       --       --       --
E. canis str. Brazil-CO1     --       --       --       --
E. canis M7322680            --       --       --       --
E. canis str. Oklahoma       --       --       --       --
E. canis iso. VDE            --       --       --       --
E. canis iso. VHE            --       --       --       --
E. canis DQ91597080          --       --       --       --
E. canis iso. Belem_Ec01              --       --       --
E. canis U2674080          0.0025              --       --
E. canis AY39446580        0.0050   0.0025              --
Sinaloa Tick6g             0.0503   0.0476   0.0504
Sinaloa Tick32g            0.0503   0.0476   0.0504   0.0050
Sinaloa Tick18g            0.0503   0.0476   0.0504   0.0050
Sinaloa Dog31p             0.0474   0.0447   0.0475   0.0616
Sinaloa Dog56p             0.0503   0.0476   0.0504   0.0706
Sinaloa Dog75p             0.1118   0.1089   0.1121   0.1382

Sequences                    13       14       15       16

E. canis str. Jake           --       --       --       --
E. canis str. Brazil-CO2     --       --       --       --
E. canis str. Brazil-CO1     --       --       --       --
E. canis M7322680            --       --       --       --
E. canis str. Oklahoma       --       --       --       --
E. canis iso. VDE            --       --       --       --
E. canis iso. VHE            --       --       --       --
E. canis DQ91597080          --       --       --       --
E. canis iso. Belem_Ec01     --       --       --       --
E. canis U2674080            --       --       --       --
E. canis AY39446580          --       --       --       --
Sinaloa Tick6g               --       --       --       --
Sinaloa Tick32g                       --       --       --
Sinaloa Tick18g            0.0050              --       --
Sinaloa Dog31p             0.0616   0.0616              --
Sinaloa Dog56p             0.0706   0.0706   0.0364
Sinaloa Dog75p             0.1350   0.1382   0.0985   0.0961

* Analyses were performed using Maximum Likelihood Composite method.
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Title Annotation:SHORT COMMUNICATION
Author:Sosa-Gutierrez, Carolina G.; Quintero-Martinez, Teresa; Vargas-Sandoval, Margarita; Gordillo-Perez,
Publication:Revista MVZ (Medicina Veterinaria y Zootecnia)
Date:Sep 1, 2016
Words:4142
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