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Prevalencia y factores de riesgo asociados con el virus del Sindrome Reproductivo y Respiratorio Porcino en sementales de granjas porcinas en el sureste de Mexico.

Prevalence and Risk Factors Associated With the Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus in Boars of Pig Farms at the Southeastern Mexico

INTRODUCCION

El Sindrome Reproductivo y Respiratorio Porcino (PRRS) es una enfermedad viral que se caracteriza por signos respiratorios en animales de todas las edades, aumento en las repeticiones de celo en hembras, aborto tardio y disminucion de la fertilidad; incremento de cerdos (Sus scrofa) momificados, nacidos muertos y debiles, y alta mortalidad de lechones durante la lactancia [4].

La enfermedad es causada por un virus ARN de cadena sencilla, perteneciente al orden Nidovirales, familia Arteriviridae, genero Arterivirus, grupo Nidovirus [15]. En los EUA se ha descrito al PRRS como la enfermedad mas devastadora en las explotaciones porcinas [20]. En las piaras, ocurre un desbalance en las infecciones por microorganismos primarios y secundarios, por lo que se manifiesta un incremento de enfermedades de diversa indole.

El uso extensivo de la inseminacion artificial en las granjas porcinas ha facilitado el intercambio de caracteristicas geneticas deseables; sin embargo, la diseminacion de patogenos via semen es un aspecto importante que se debe considerar al implementar un programa de salud animal [6].

El virus del PRRS afecta a cerdos de todas las edades, produciendo diversos signos clinicos de acuerdo a la edad y estado reproductivo. En el caso de los sementales puede presentarse disminucion del apetito, fiebre, disminucion de la libido y alteraciones en la calidad del semen, principalmente disminucion de la motilidad, aumento en anormalidades, dano en acrosomas y un aumento en el porcentaje de eyaculados rechazados [6].

La transmision del virus del PRRS mediante el semen de animales infectados implica un riesgo para las explotaciones porcinas, ya que los animales infectados eliminan el virus via semen durante algunos periodos, principalmente durante la fase aguda de la enfermedad. Se ha notificado que la fase de eliminacion del virus via semen es muy variable entre los individuos, desde un minimo de cuatro hasta 92 dias postinfeccion [6]. Tambien se ha notificado que la eliminacion del virus en semen puede ser de forma intermitente y no necesariamente estar correlacionada con la viremia o el estatus serologico [6,15]. El grado de eliminacion depende de la cepa viral, de las condiciones del medio ambiente, y de la cantidad de virus infectante [3].

En granjas porcinas de Yucatan, Mexico, se encontro una seroprevalencia individual del 55% al virus del PRRS en la poblacion de cerdos y 58% en los sementales [8]. En este mismo estudio se menciona que, el uso de reemplazos externos, el vaciado parcial de la granja y mantener animales de diferentes edades dentro de una nave, favorecen la presencia del virus en una granja. El PRRS es una de las enfermedades que causa mayores perdidas a la industria porcina [5].

Se ha demostrado que el empleo de sementales portadores del virus de PRRS es un factor importante en la transmision y diseminacion de la enfermedad entre granjas y dentro de granja, debido a que el virus puede encontrarse en el semen [15]. Para llevar a cabo un programa de control del virus de PRRS en granjas porcinas es necesario conocer la prevalencia de sementales positivos al virus de PRRS y cuales son los factores de riesgo asociados a su presencia.

Los objetivos de este estudio fueron: Estimar la prevalencia del virus de PRRS en suero de sementales y determinar algunos factores de riesgo asociados a la presencia del virus en granjas porcinas de Yucatan, Mexico.

MATERIALES Y METODOS

Localizacion y clima

El estudio se llevo a cabo en 30 granjas porcinas de Yucatan, localizado en el sureste de Mexico. El clima de la region es tropical subhumedo con lluvias en verano y rango de temperatura de 7 a 42[grados]C, siendo la media de 26,6[grados]C. La humedad relativa varia de 65 a 100% con un promedio de 78% y la precipitacion anual varia de 415 a 1290 mm dependiendo del area. Los vientos predominantes son de norte a sureste [7].

Seleccion y descripcion de las granjas

Las 30 granjas encuestadas fueron seleccionadas por conveniencia e interes de los productores por participar en la encuesta de las 105 granjas pertenecientes a la asociacion de productores de cerdos del estado de Yucatan. Las granjas se localizaban en un area de alta densidad porcina y se consideraron representativas de la region centro del Estado. El numero de vientres en las granjas encuestadas vario de 28 a 2.000 y el numero de sementales por granja de 1 hasta 32. El nivel de tecnificacion tambien vario entre granjas, el cual se encuentra en relacion con el numero de vientres. Se muestrearon todos los sementales que tuvieran al menos un mes de estancia en las granjas.

Manejo general de los sementales en las granjas

Los verracos al llegar a las granjas se sometieron a un periodo de adaptacion al manejo y al estatus sanitario. En las granjas porcinas se manejan dos tipos de servicio reproductivo: la monta natural y la inseminacion artificial. Algunas explotaciones manejan ambas opciones. La alimentacion de los verracos consistia en el uso de dietas comerciales basadas en soya (Glycine max L) y sorgo (sorghum vulgare).

Diseno del estudio

Se realizo un muestreo por conglomerados en un diseno transversal desde septiembre 2005 hasta febrero 2006. El total de animales a muestrear (n=170 verracos) se calculo de acuerdo a la formula proporcionada por Segura y Honhold [13].

[n.sub.c] = D(n/1+n/N)

donde:

n = [Z.sup.2]pq/[d.sup.2] = tamano de muestra para el muestreo simple para una pdoblacion infinita; N = 735 (numero estimado de verracos en las 105 granjas porcinas pertenecientes a la asociacion de porcicultores de Yucatan); Z = 1,96 valor de tablas de la distribucion de Z con un 95% de confianza; d = 0,10 precision o error deseado; D = 2, efecto de diseno; P = 0,50, prevalencia individual esperada; q = 1-p; [n.sub.c] = 170, numero de verracos a muestrear. Dado que el efecto de diseno se desconocia a principios del estudio, por conveniencia se tomo el valor de 2. El numero de granjas a visitar (n=30) se obtuvo dividiendo [n.sub.c] entre el numero promedio de cerdos por granja (k=5,5).

Obtencion y procesamiento de muestras

Las muestras sanguineas se obtuvieron de la vena cava anterior utilizando tubos esteriles al vacio de 10 mL y agujas 21 x 1 1/2 mm. Las muestras de sangre se conservaron a temperatura ambiente aproximadamente por una hora, y posteriormente se transportaron con temperatura de refrigeracion al laboratorio de Inmunologia de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Autonoma de Yucatan, donde se centrifugaron a 600 g x 10 minutos en centrifugadora Damon (Modelo DPR 6000, Damon/IEC Division, EUA). Posteriormente, los sueros se transfirieron a tubos de microcentrifugadora de 1,5 mL por duplicado, previamente identificados, y se conservaron en un congelador (marca VWR, modelo 5700; VWR Sales group, EUA) a -70[grados]C hasta su analisis.

Prueba serologica

La prueba de ELISA indirecta se realizo empleando el kit HerdChek*PRRS 2XR (IDEXX Laboratorios Inc. Westbrook, Maine, EUA), siguiendo las instrucciones especificadas por el fabricante para detectar la presencia de anticuerpos contra el virus del PRRS en el suero porcino. La presencia o ausencia de anticuerpos contra el virus de PRRS se determino con el valor diagnostico conocido como S/P, el cual es la razon del valor de densidad optica de la muestra entre la densidad optica del testigo positivo. Cuando la razon S/P fue menor a 0,4 la muestra se considero como negativa; si la razon S/P fue igual o mayor a 0,4 se considero como positiva (segun indicaciones del fabricante).

Extraccion del ARN y Prueba de RT-PCR.

Para la extraccion del ARN viral de las muestras de suero, se utilizo el Kit QIAamp Viral RNA Mini Kit de los laboratorios QIAGEN Inc., EUA. El ARN viral fue recuperado segun las indicaciones del fabricante con bufer de elucion y almacenado a -70[grados]C. Para las pruebas de PCR se utilizo el kit comercial OneStep RT-PCR QIAGEN, siguiendo las instrucciones del fabricante y utilizando 8 [micron]L del ARN extraido en un volumen total de 50 [micron]L de la mezcla (master mix). Los iniciadores que se utilizaron fueron del marco de lectura abierta 7 (ORF7) derivados de la secuencia del VR-2332 PRRSV y sintetizados por la compania Accesorios para Laboratorios, S.A. de C.V. Mexico DF. Para la amplificacion en RT-PCR se utilizo el iniciador de sentido (forward) 5'-TCGTGTTGGGTGGCAGAAAAGC-3' (nucleotidos 2763 a 2785) y el iniciador antisentido (reverse) 5'GCCATTCACCACACATTCTTCC-3'. Los productos amplifica dos de 482 pb fueron visualizados en geles de agarosa al 2% y tenidos con bromuro de etidio.

Prevalencia y factores de riesgo

Un caso se definio como aquel cerdo positivo a la prueba de ELISA o RT-PCR. La prevalencia se estimo como el numero de verracos positivos entre el total de verracos muestreados. Se aplico un cuestionario para determinar posibles factores de riesgo asociados al virus de PRRS en sementales porcinos. El cuestionario incluyo los datos generales de cada granja asi como preguntas asociadas a la poblacion animal y a la bioseguridad.

La informacion sobre la positividad de los verracos se utilizo para el estudio de los factores de riesgo, el cual se realizo en dos etapas: 1) Se corrieron pruebas de Ji-cuadrado para la positividad a PRRS con cada uno de los factores de riesgo. 2) Los factores de riesgo que resultaron significativos (P<0,20) a la prueba de Ji-cuadrado se incluyeron en un analisis de regresion logistica marginal (ajustado por hato) multivariado. Este modelo considero el efecto de la correlacion entre verracos dentro de granja y para ello se utilizo el procedimiento GENMOD [12]. El modelo de regresion logistica marginal se especifico por la distribucion binomial y la funcion de ligue logit. Las razones de momios (OR) ajustados y errores estandares se obtuvieron mediante el metodo de ecuaciones generalizadas estimadas usando una matriz de correlaciones de simetria compuesta entre observaciones dentro de una misma granja.

RESULTADOS Y DISCUSION

Prevalencia

Cincuenta y seis animales de los 170 sementales fueron positivos a la prueba de ELISA, 21 fueron positivos a la prueba de RT-PCR y 67 sementales resultaron positivos a una o ambas pruebas. La prevalencia encontrada al virus de PRRS en sementales de las granjas porcinas fue 40,6% (67/170). Veinticinco de las treinta granjas muestreadas (83,33%) tuvieron al menos un semental positivo al virus de PRRS. La prevalencia encontrada en este estudio (40,6%) es menor que la notificada en la misma region por otros autores [8], quienes mencionan prevalencias en sementales del 58 y 55% de animales positivos en todas las edades y etapas del ciclo productivo. En Guanajuato, Puebla, Mexico, Sonora y Veracruz, se obtuvo una seroprevalencia global del 62,2% en cerdos de todas las edades [14]. La seroprevalencia en el presente trabajo es menor, debido posiblemente, a un control en las granjas donde se realizan pruebas diagnosticas y se eliminan los sementales que resulten positivos.

Estudios realizados en Mexico mencionan, del 78 al 100% de hatos positivos al virus del PRRS [8,14]. En el presente estudio solo se muestrearon a los sementales y se encontro que el 83% de las granjas tienen al menos un semental positivo; sin embargo, no se puede inferir que las otras granjas se encuentre libres de la enfermedad, ya que no se colectaron muestras de otros segmentos de la poblacion como las hembras reproductoras, lechones, engorda, etc., donde podria estar presente el virus.

Los sementales en granjas porcinas se encuentran expuestos a la enfermedad debido a que estan en constante contacto con las hembras, principalmente cuando se les utiliza para detectar celos y/o en monta natural. Por otra parte, un semental infectado pone en riesgo a todas las hembras con las que tiene contacto, ademas el PRRS puede transmitirse por semen y por lo tanto, pone en riesgo tambien a las hembras inseminadas artificialmente.

Factores de riesgo

Los nueve factores de riesgo estudiados se presentan en la TABLA I. Las pruebas de Ji cuadrado indicaron que de los nueve factores, solo cinco fueron significativos (P<0,20): Conocer si la granja es positiva a PRRS, no realizar pruebas diagnosticas antes de ingresar los sementales a la granja, no realizar pruebas diagnosticas periodicamente, no cuarentenar a los sementales y utilizar los sementales para deteccion de celo. Pero en el modelo de regresion logistica marginal solo tres factores resultaron significativos (P<0,05): granja positiva a PRRS, no realizar pruebas diagnosticas antes de ingresar los sementales a la granja y utilizar a los sementales para la deteccion de celo (TABLA II). Los sementales en granjas positivas presentaron 3,6 veces mas riesgo de infeccion que aquellos que se encontraban en granjas identificadas como negativas al PRRS. Esto se debe a que los sementales se encuentran a poca distancia (dentro de la misma granja) del resto del hato y entran en contacto con las hembras para la monta o para deteccion de celo lo cual aumenta el riesgo de infeccion. Por otro lado, los sementales en granjas negativas estan en menor riesgo ya que no entran en contacto directo con animales infectados. Algunos autores [9,16,18] mencionan que el uso de sementales positivos o de semen proveniente de sementales positivos es un factor de riesgo para la infeccion de hembras reproductoras, esto debido a que cualquier animal positivo dentro de una granja representa un riesgo para el resto del hato, tanto los sementales para las hembras como las hembras, hacia los sementales. Aunque se debe tomar en cuenta que el riesgo que presentan los sementales puede ser mucho mas importante debido a la inseminacion artificial, poniendo en riesgo a gran cantidad de hembras. En las 30 granjas muestreadas se tiene una poblacion de 7.816 vientres, de las cuales 7.051 se encuentran en las 25 granjas con sementales positivos, ademas si el semen de animales infectados se utiliza para inseminar hembras de otras granjas se aumenta el numero de hembras en riesgo.

Otro factor de riesgo identificado fue: no realizar pruebas diagnosticas antes de introducir los sementales a la granja, ya que el realizar pruebas diagnosticas disminuye las probabilidades de infeccion (OR=0,39). Es importante realizar muestreos para prevenir la introduccion de animales en periodo de incubacion, en fase latente o con enfermedad subclinica a la granja. Weigel y col. [16] y Mousing y col. [10] mencionan que el introducir animales de reemplazo es un factor de riesgo para la presencia de la enfermedad, lo cual demuestra la importancia de realizar pruebas diagnosticas para asegurase que los animales se encuentren sanos.

Utilizar a los sementales para la deteccion del celo es el factor de riesgo detectado mas importante, representando 7,0 veces mas probabilidades de infeccion comparada con aquellas granjas donde no se emplea a los sementales para identificar a las hembras en celo. Esta practica pone en riesgo a los sementales, ya que entran en contacto directo con las hembras que pueden ser positivas al virus de PRRS. El virus del PRRS se transmite principalmente por medio del contacto directo entre un animal enfermo y uno susceptible, probablemente por contacto nariz-nariz o por contacto con orina y/o heces infectadas [1, 2, 11]. Los animales infectados pueden eliminar el virus del PRRS en saliva hasta 42 dias postinfeccion [17], en secreciones nasales hasta 38 dias postinfeccion, en orina 28 dias postinfeccion [11] y en heces hasta 35 dias postinfeccion [19], por lo que el riesgo de infeccion al juntar animales susceptibles con animales enfermos es alto.

Los factores: no realizar pruebas diagnosticas periodicamente y no cuarentenar a los sementales, fueron estadisticamente significativos (P<0,05) en el estudio de regresion logistica estandar pero no en el de regresion logistica marginal. Sin embargo, las pruebas diagnosticas periodicas son importantes para conocer el estado sanitario de la granja y de esta manera poder detectar un brote a tiempo y tomar las medidas de control necesarias. Por otro lado, el cuarentenar a los animales antes de introducirlos a la granja es una medida de bioseguridad importante para una explotacion porcina, ya que los animales pueden llegar en fase de incubacion y salir negativos en las pruebas diagnosticas pero presentar la enfermedad mas adelante. El no aislar a los animales despues de la compra incrementa 3,3 veces mas las posibilidades de infeccion en la granja si no se toma esta medida [16].

El empleo de inseminacion artificial ha sido notificado como un factor de riesgo para la infeccion de los vientres en una granja porcina [16], encontrandose que la compra de dosis de semen para inseminacion representa un riesgo (OR=2,2) para la infeccion en el hato reproductor. Sin embargo, esto no representa un riesgo para los sementales, ya que por medio de la colecta de semen para la inseminacion artificial no tienen contacto directo con animales infectados. Otra variable estudiada fue la frecuencia de reemplazo de los sementales, la cual no resulto significativa. Aunque la entrada de animales nuevos a la granja este relacionada con la presentacion de enfermedades, si se tienen las medidas de bioseguridad adecuadas, esto puede prevenirse. La frecuencia con que se reemplacen los sementales no es tan importante como el realizar pruebas diagnosticas y cuarentenar antes de introducirlos a la granja. Contar con personal exclusivo para el area de sementales y el origen de los sementales (local, nacional o internacional) no son variables significativas para la presentacion del PRRS en sementales de granjas porcinas de acuerdo a lo encontrado en este estudio.

CONCLUSIONES

El virus del PRRS se encuentra presente en los sementales de las granjas porcinas del estado de Yucatan con una prevalencia de 40,6%. El 83,3% de las granjas muestreadas presenta al menos un semental positivo a esta enfermedad. El riesgo de que un semental sea positivo se incrementa al utilizarlo para la deteccion de celo (OR=7,0), en granjas positivas a la enfermedad (OR=3,6) y en las granjas donde no se realizan pruebas diagnosticas a los cerdos que ingresan (OR=0,39).

Recibido: 10 / 12 / 2008. Aceptado: 20 / 02 / 2009.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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Ada Rovelo Celorio, Alejandro Alzina Lopez, Jorge Carlos Rodriguez Buenfil, Jose Candelario Segura Correa y Sandra Villegas Perez

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Autonoma de Yucatan. Km 15.5 Carretera Merida-X'matkuil, Apdo. Postal 4-116 Itzimna, CP 97100, Merida, Yucatan. Tel. (999) 9 42-32-00 ext. 32. Fax: 942-32-05. E-mail: alzina@uady.mx.
TABLA I
FACTORES DE RIESGO PARA ANTICUERPOS DE VERRACOS CONTRA
PRRS EN 30 GRANJAS PORCINAS EN EL SURESTE DE MEXICO,
MEXICO/risk factors for antibodies of boars against
prrs in 30 pig farms in southeastern Mexico.

                                       Verracos

Factor de riesgo             Granjas   Total   Positivos

?Es la granja
  positiva a PRRS? * (a)
No                             12       75        22
Si                             18       95        47
?Realiza pruebas
  diagnosticas antes
  de introducir
  los sementales
  a la granja? * (a)
No                             18       80        39
Si                             12       90        30
?Realiza pruebas
  diagnosticas para
  PRRS periodicamente? *
No                              8       51        26
Cada 6 meses                   10       42        21
Cada ano                       12       77        22

?Cuarentena a los
  sementales? *
No                              9       28        18
Si                             21       142       51
?Utiliza los sementales
  para detectar
  celos? * (a)
No                              7       26         5
Si                             23       144       64
?Servicio reproductivo
  que utiliza?
Monta natural                   5       49        20
Inseminacion artificial        16       88        34
Ambas                           9       33        15

?Cada cuando reemplaza
  a los sementales?
Cada 1 o 2 anos                16       75        34
Cada 3 anos                    14       95        35

?El personal es exclusivo
  del area de sementales?
No                             17       78        32
Si                             13       92        37

?Cual es el origen
  de sus sementales?
Local                           7       29        10
Estados Unidos                  9       93        35
Nacional                       13       43        22

                                  Verracos

Factor de riesgo               %     [P.sub.b]

?Es la granja
  positiva a PRRS? * (a)
No                           29,33   0,0079
Si                           49,47
?Realiza pruebas
  diagnosticas antes
  de introducir
  los sementales
  a la granja? * (a)
No                           48,75   0,0410
Si                           33,33
?Realiza pruebas
  diagnosticas para
  PRRS periodicamente? *
No                           50,98   0,0147
Cada 6 meses                 50,00
Cada ano                     28,57

?Cuarentena a los
  sementales? *
No                           64,29   0,0052
Si                           35,92
?Utiliza los sementales
  para detectar
  celos? * (a)
No                           19,23   0,0160
Si                           44,44
?Servicio reproductivo
  que utiliza?
Monta natural                40,82   0,7929
Inseminacion artificial      38,64
Ambas                        45,45

?Cada cuando reemplaza
  a los sementales?
Cada 1 o 2 anos              45,33   0,2630
Cada 3 anos                  36,84

?El personal es exclusivo
  del area de sementales?
No                           41,03   0,9148
Si                           40,22

?Cual es el origen
  de sus sementales?
Local                        34,48   0,2493
Estados Unidos               37,63
Nacional                     51,16

* Factores incluidos en el modelo de regresion logistica estandar.
(a) Factores incluidos en el modelo de regresion logistica
marginal. Valores de P de la prueba de Ji-cuadrado.

TABLA II
PARAMETROS ESTIMADOS DE LA REGRESION LOGISTICA MARGINAL
PARA ALGUNOS FACTORES DE RIESGO ASOCIADOS A PRRS/ estimated
parameters of the marginal logistic regression for some
risk factors associated to PRRS.

                                          Error
                          Coeficientes   estandar    OR

Granja positiva a PRRS
No                             0            0        1
Si                           1,268        0,464     3,55
Realiza pruebas
  diagnosticas cua do
  introduce sementales
No                             0            0        1
Si                           -0,944       0,438     0,39
Utiliza los sementales
  para la deteccion
  de celos
No                             0            0        1
Si                           1,948        0,453     7,01

                             IC95%          P

Granja positiva a PRRS
No                                        0,0063
Si                         1,43;8,82
Realiza pruebas
  diagnosticas cua do
  introduce sementales
No                                        0,0310
Si                         0,16;0,92
Utiliza los sementales
  para la deteccion
  de celos
No                                        0,0001
Si                         2,88;17,04

Intercepto = -2,20 [+ o -] 0,60; Deviance = 203,7;
grados de libertad = 166.
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Article Details
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Author:Rovelo Celorio, Ada; Alzina Lopez, Alejandro; Rodriguez Buenfil, Jorge Carlos; Segura Correa, Jose C
Publication:Revista Cientifica de la Facultad de Ciencias Veterinarias
Article Type:Report
Date:Jan 1, 2010
Words:4599
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