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Polimorfismo G1385A del gen RNASEL y su asociacion con el desarrollo de cancer de prostata. Estudio preliminar.

G138A polymorphism of the RNASEL gene and its association with the development of prostate cancer. Preliminary study.

INTRODUCCION

El cancer de prostata (CAP), es la causa mas comun de muerte por cancer en hombres de paises desarrollados (1-3). La Sociedad Americana del Cancer ha notificado para el ano 2008 un incremento de 186.320 nuevos casos, y se estima que 28.600 seran defunciones a consecuencia del mismo (4). La prevalencia varia al comparar grupos etnicos, con el mayor numero de casos en los afroamericanos y el menor en los asiaticos. El riesgo de desarrollar CAP se incrementa hasta 3 veces al tener un familiar de primer grado afectado (2, 3, 5), con lo que se reconoce que el componente genetico juega un papel importante en el desarrollo de CAP. El analisis de ligamiento y los estudios de segregacion han sugerido un gran numero de regiones cromosomicas portadoras de loci de susceptibilidad para el CAP (1-3, 6), sin embargo, la perdida de consistencia entre los estudios denota que el CAP es un desorden geneticamente heterogeneo con multiples loci y factores medioambientales involucrados en su etiologia.

En el ano 1996, se reporto el primer locus de susceptibilidad al CAP en la region 1q24-25, que se llamo HPC1 (Heredable Prostate Cancer Locus Chromosome 1). Estudios posteriores de ligamiento han aportado resultados mixtos sobre la relevancia o no de esta region en el CAP (5, 7-9). En un estudio multicentrico internacional donde se analizaron 772 familias se encontro evidencia de ligamiento a esta zona en el 6% de las familias consideradas (10).

El RNASEL (NM_021133; OMIM: 180435), es un gen que se encuentra ubicado en la region HPC1, contiene 8 exones y codifica una endoribonucleasa (Ribonucleasa L) de 741 aminoacidos que se expresa constitutivamente en tejido prostatico, timo, bazo, testiculos, intestinos y colon. Actua como un mediador de la actividad pro-apoptotica y de respuesta antiviral del sistema inducible por interferon 2-5A (11-13). Debido a su participacion en la regulacion del ciclo celular, se ha sugerido como un posible gen candidato Supresor de Tumores (8, 10).

Varias mutaciones y polimorfismos se han reportado en este gen, entre las cuales, la variante G1385A que conlleva a la sustitucion Arg462Gln (R462Q), ha sido frecuentemente asociada con el incremento del riesgo a desarrollar CAP (8-10). Xiang y col., demostraron que la presencia de esta variante polimorfica se asocia con reduccion de la actividad de la proteina RNase L para inducir apoptosis en respuesta de la activacion de la via 2-5A (14). De alli, surge la hipotesis que este polimorfismo u otras variantes alelicas en el gen RNASEL puedan provocar una actividad funcional disminuida y brindar una adaptacion positiva a las celulas tumorales que les permita escapar de la via apoptotica y por ende facilitar el desarrollo del proceso tumoral.

En este trabajo se presentan los datos preliminares de la evaluacion del comportamiento del polimorfismo G1385A en una muestra de poblacion de Maracaibo, Venezuela y su valoracion al asociarlo con el desarrollo de cancer de prostata.

PACIENTES Y METODOS

Se trata de un estudio descriptivo, de tipo caso-control donde se analizaron 103 individuos masculinos que acudieron al servicio de Urologia del Hospital Universitario de Maracaibo, Estado Zulia, Venezuela. Se estudiaron 51 pacientes con diagnostico de cancer de prostata, con una edad promedio de 66 anos (rango 46-84 anos) y 52 individuos masculinos con una edad promedio de 63 anos (rango de 45-79 anos). Se consideraron en el grupo de casos aquellos varones con diagnostico de CAP confirmados mediante mediciones de APE (Antigeno Prostatico Especifico) con valores inferiores a 4ng/mL, biopsia positiva, y edad mayor de 35 anos. Un total de 51 individuos cumplieron con estos criterios. De igual forma se estudiaron 52 sujetos mayores de 45 anos, quienes conformaron el grupo control, cuyos resultados fueron negativos para el diagnostico de CAP. Todos los participantes en el estudio firmaron su consentimiento a participar, luego de explicarles la naturaleza del mismo. El protocolo de esta investigacion fue aprobado por el comite de etica de la Unidad de Genetica Medica de la Universidad del Zulia, Venezuela.

El ADN se extrajo a partir de una muestra de 3 mL de sangre periferica, por metodo estandarizado en la Unidad de Genetica Medica de la Universidad del Zulia (15). La identificacion del polimorfismo G1385A, se realizo mediante la tecnica descrita por Casey y col. (3), y consistio en la aplicacion de una variante de la Tecnica de Reaccion en Cadena de la Polimerasa (RCP), llamada Sistema de Amplificacion de Mutacion Refractaria (SAMR) y que consiste en una Amplificacion Alelo Especifica donde se utiliza tres iniciadores, dos de los cuales disenados para unirse solo con la secuencia especifica del alelo a ser identificado, lograndose la amplificacion efectiva solo cuando el alelo en cuestion esta presente en la muestra. La RCP se realizo en un volumen final de 15 [micron] L conteniendo 100 ngs de ADN, 3,5 [micron]L de buffer 5x Taq ADN polimerasa, 1 [micron]L MgCl2, 0,3 [micron]L dNTPs, 0,5 U Taq polimerasa, 0,25 [micron]L de cada iniciador. Las condiciones de amplificacion consistieron en una desnaturalizacion prolongada a 94[grados]C por 5 minutos, seguida de una desnaturalizacion corta a 95[grados]C por 50 segundos, un anillado a 55[grados]C por 50 segundos y una extension a 72[grados]C por 30 segundos; este ciclo se repitio durante 38 veces y culmino con una extension final a 72[grados]C por 5 minutos. La caracterizacion de los genotipos se hizo mediante electroforesis en gel de agarosa al

2%, tenido con bromuro de etidio y su posterior visualizacion en pantalla de luz ultravioleta (UV).

Analisis estadistico

La estimacion de las frecuencias alelicas, genotipicas observadas y esperadas se realizo de forma manual. Se utilizo la prueba del Chi cuadrado ([ji al cuadrado]), con un nivel de significacion de p [menor que o igual a] 0,05 para evaluar equilibrio de Hardy-Weimberg (EqHW), y para establecer la significancia estadistica de las diferencias entre las frecuencias alelicas de los casos y controles se estimo la Razon de Posibilidades (RP), con intervalo de confianza de 95% para el cual se utilizo el paquete estadistico SAS/STAT (Sistema de Analisis Estadistico).

RESULTADOS

Los valores de APE tuvieron una media de 138,6 {+ o -] 47 ng/mL para los individuos con CAP y de 1,34 [+ o -] 0,9 ng/mL en los controles.

En el grupo con CAP se detectaron 4 individuos homocigotos AA (7,8%), 10 individuos heterocigotos AG (19,6%) y 37 individuos homocigotos GG (72,5%), mientras que en el grupo control se observaron: 2 individuos homocigotos AA (3,8%), 16 AG (30,8%), y 34 (65,4%) homocigotos GG. Con frecuencia de 0,1782 para el alelo A y 0,8317 para el alelo G en los casos y de 0,1923 para el alelo A y 0,8077 para el alelo G en los controles. El polimorfismo se encontro en EqHW en ambos grupos. El calculo del RP revelo que no existen diferencias significativas que corroboren la asociacion entre el polimorfismo G1385A (Arg462Gln) del gen RNASEL y el riesgo de desarrollar cancer de prostata. Con relacion a la presencia del alelo mutado y el alelo normal se obtuvo un valor de RP de 0,76 (IC 95% de 0,33-1,76/p=0,5193), mientras que los individuos homocigotos GA presentaron un RP de 0,61 (IC 95% de 0,24-1,52) y los homocigotos mutantes (AA) un RP de 2,06 (IC 95% de 0,35-12,02) con una p=0,3379, igualmente no significativos estadisticamente (Tabla I).

DISCUSION

El cancer de prostata (CAP) es un tumor maligno que afecta a la glandula prostatica y cuyos sintomas suelen aparecer tardiamente, cuando el paciente ya se encuentra en una etapa avanzada del mismo. La etiologia permanece desconocida pero se reconoce su naturaleza compleja donde intervienen agentes geneticos y medioambientales (1, 2, 8, 10, 16).

Estudios moleculares han aportado evidencia sobre la posible presencia de un gen de susceptibilidad en la region cromosomica denominada HPC1 (17), donde se encuentra ubicado el gen RNASEL. Se han descrito diversas mutaciones y polimorfismos en este gen, y su asociacion con el CAP ha sido ampliamente evaluada (1-3, 5, 8, 10), encontrandose que la variante G1385A, ha mostrado un impacto importante al asociarla con el desarrollo y evolucion del CAP. Casey y col., sugirieron que aproximadamente el 13% de los CAP estudiados en su poblacion podrian ser atribuibles a la presencia de este polimorfismo (3).

[FIGURA 1 OMITIR]

Rokman y col. (1), evaluaron variaciones del gen RNASEL en 66 pacientes finlandeses con CAP hereditario y encontraron una asociacion con la presencia del polimorfismo G1385A, con un RP=1,96 el cual no fue estadisticamente significativo. Asi mismo, Casey y col., estudiaron casos de CAP esporadico y hereditario y detectaron que el polimorfismo G1385A mostro una asociacion significativa con el desarrollo del CAP, con un RP=2,12 (IC 1,19-3,78/ p=0,011) (3). En un estudio similar realizado por Wang y col. (8), se encontro una asociacion significativa con esta variante pero en tendencia opuesta al estudiar 473 individuos afectados por CAP de 181 familias con un RP de 0,83 (IC 0,61-1,13) para heterocigotos y de 0,54 (IC 0,32-0,91), para homocigotos, p= 0,02.

Los presentes resultados son similares a los publicados por Wiklund y col. (10) quienes estudiaron 1624 pacientes con CAP y 801 controles y no encontraron asociacion significativa entre este polimorfismo y el CAP al ver que la distribucion del mismo fue similar. De igual manera, Daugherty y col. (18) estudiaron 1317 casos de cancer de prostata y 1842 controles, y no encontraron asociacion, al comparar los homocigotos para el alelo mutado, los heterocigotos y los homocigotos para el alelo normal.

En este estudio preliminar la falta de asociacion puede ser atribuida principalmente al tamano de la muestra analizada, por lo que se necesita incrementar la misma para llegar a consideraciones mas concretas sobre el papel del polimorfismo G1385A en el desarrollo de esta neoplasia en futuros trabajos. Por otro lado, es de considerar que la etiologia del CAP no pueda ser explicada por variabilidad alelica en un solo gen, debido a su naturaleza poligenica y multifactorial, la cual resulta probablemente de interacciones complejas entre diferentes variantes geneticas y factores ambientales. Los estudios de asociacion en enfermedades humanas complejas suelen presentar resultados contradictorios, estas diferencias pueden deberse a variaciones metodologicas, limitaciones del tamano de las muestras, clasificacion erronea del fenotipo, o a diferencias en las frecuencias subyacentes de alelos en los grupos poblacionales estudiados, entre otros (19).

En virtud de los hallazgos encontrados en esta investigacion los autores se proponen ampliar el tamano de la muestra, asi como tomar en cuenta otras variantes alelicas que puedan estar involucradas en el amplio espectro del CAP. Ademas es recomendable realizar estudios epidemiologicos mas amplios que permitan conocer la prevalencia real de estas enfermedades cronico-degenerativas, entre las cuales se encuentra incluido el cancer y sus diferentes variantes, de manera que se puedan seleccionar muestras importantes en estudios multicentricos a nivel nacional.

AGRADECIMIENTOS

Este proyecto de investigacion fue subvencionado por el CONDES, bajo el numero VAC-CONDES- CC-0729-06

Recibido: 23-06-2008. Aceptado: 20-11-2008.

REFERENCIAS

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(2.) Carpten J, Nupponen N, Issacs S, Sood R, Robbins C, Xu J, Faruque M, Moses T. Germiline mutations in ribonuclease L gene in families showing linkage with HPC1. Nat Genet 2002; 30:181-184.

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William Zabala, Criserly Delgado, Tatiana Pardo, Lisbeth Borjas, Alicias Rojas-Atencio, Francia Reyes y Jose Miguel Quintero.

Unidad de Genetica Medica, Facultad de Medicina, Universidad del Zulia. Maracaibo, Venezuela.

Autor de correspondencia: William Zabala. Urbanizacion La Victoria, 3era. etapa, Calle 68C, No. 81-45. Maracaibo, estado Zulia, Venezuela. Telefonos: Hab: 0261-7554266. Cel: 0414-6139664 Correo electronico: williamzabala@ cantv.net
TABLA I
GENOTIPOS OBSERVADOS, FRECUENCIAS ALELICAS, EqHW Y RAZON DE
POSIBILIDADES (RP), ENTRE LA PRESENCIA DEL ALELO MUTADO DEL GEN RNASEL
Y EL DESARROLLO DEL CANCER DE PROSTATA

            Genotipos    Frecuencias    EqHW *
            observados    alelicas

              GG 34
Controles                 A 0,1923
  n=52        AG 16                    0,000861
                          G 0,8077
               AA 2

              GG 37

  Casos                   A 0,1782
  n=51                                 0,104271
              AG 10       G 0,8317
               AA 4

            Genotipos                     RP
            observados                 (95% IC)

                           Alelo A     GG vs GA     GG vs AA

              GG 34          ...          ...          ...
Controles
  n=52        AG 16          ...          ...          ...

               AA 2          ...          ...          ...

                            0,76         0,61         2,06
              GG 37
                         (0,33-1,76)   (0,24-1,52) (0,35-12,02)
  Casos
  n=51
              AG 10       p=0,5193     p=0,3379
               AA 4

* Equilibrio de Hardy-Weimberg nivel de significacion de p B 0,05. No
significativo.
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Author:Zabala, William; Delgado, Criserly; Pardo, Tatiana; Borjas, Lisbeth; Rojas-Atencio, Alicias; Reyes,
Publication:Investigacion Clinica
Date:Sep 1, 2009
Words:2918
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