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Patogenicidad dermica de un aislamiento autoctono del hongo entomopatogeno Beauveria bassiana en ratones.

Dermal Pathogenicity of an Autochthonous Isolate of Entomopathogenic Fungus Beauveria bassiana in Mice

INTRODUCCION

Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin es un hongo filamentoso (Ascomycota: Hipocreales), que en la actualidad se encuentra bajo un intenso estudio y utilizacion como agente para el control biorracional de una amplia variedad de artropodos-plagas, tanto de importancia agricola como aquellos que poseen relevancia en la salud publica humana y animal [30, 31].

Las especies de Beauveria, y en particular B. bassiana, generalmente son implementadas como agentes de control microbiano de una manera segura para los animales vertebrados y los humanos, siendo demostrada su seguridad en varios modelos animales [30, 31]. Sin embargo, como cualquier otro microorganismo, B. bassiana, asi como tambien otras especies de hongos entomopatogenos y de otras 400 especies fungicas, posee la potencialidad de actuar como un patogeno oportunista, aunque debe mencionarse que estos reportes son extremadamente raros [11, 30, 31]. En el caso particular de las infecciones humanas, el analisis de los reportes indica que las mismas se han dado en condiciones o circunstancias extraordinarias o muy sui generis, tales como individuos extremadamente inmunosuprimidos (e.g., leucemia aguda) o con un historial de cirugias o injurias, como en el caso de queratitis en el ojo despues de eventos traumaticos y tratados con corticosteroides [11, 19, 29, 30, 31]. Existen reportes de infecciones por este hifomiceto en reptiles en cautiverio, incluyendo tortugas [9], y caimanes [6], lo cual se puede atribuir a las inadecuadas condiciones de cautividad [30].

Estudios a nivel experimental y de campo han demostrado que, B. bassiana posee un potencial muy promisorio para ser implementado en el manejo biorracional de poblaciones de especies de triatominos, las cuales poseen importancia epidemiologica en la trasmision de la enfermedad de Chagas [14]. Esto es relevante mencionarlo, toda vez que varias especies de triatominos han desarrollado resistencia hacia los insecticidas de origen quimico, los cuales similarmente han sido poco efectivos hacia aquellos triatominos-vectores de habitos peridometicos y selvaticos [13,14]. Ademas, debe destacarse los efectos toxicos potenciales de los insecticidas quimicos sobre la salud humana y de los animales, tanto los de habitos silvestres como aquellos domesticados por el hombre y los organismos beneficos (e.g., polinizadores y enemigos naturales de otros artropodos daninos), asi como tambien a toda la biosfera en general, lo que evidentemente alteraria el equilibrio natural de los ecosistemas con la subsecuente contaminacion de las aguas y los suelos [4].

Como parte de un proyecto global para seleccionar patotipos autoctonos de hongos entomopatogenos que sean altamente virulentos contra vectores de enfermedades metaxenicas y adaptados a las condiciones del medio venezolano, el equipo de investigacion del presente estudio ha demostrado bajo condiciones de laboratorio, la elevada patogenicidad y virulencia que posee el aislamiento nativo LF14 de B. bassiana sobre Rhodnius prolixus y Triatoma maculata [2], vectores de la enfermedad de Chagas en Venezuela, siendo por lo tanto un potencial patotipo para ser empleado en futuros programas de manejo integrado de plagas (MIP) de la tripanosomiasis americana en zonas endemicas del pais, y particularmente en la region falconiana. Este hecho ha aumentado la necesidad de evaluar su bioseguridad y su impacto ambiental como posible agente de control biologico, antes de ser evaluado a nivel de campo. Con el objetivo de determinar la patogenicidad de LF14, B. bassiana en modelos vertebrados, se les aplico el aislamiento por via dermica a ratones (Mus musculus) albinos.

MATERIALES Y METODOS

Los ensayos de tipo descriptivo-analitico, se realizaron en el laboratorio de Entomologia Parasitologia y Medicina Tropical (LEPAMET), de la Universidad Nacional Experimental "Francisco de Miranda" (UNEFM), Coro, estado Falcon, Venezuela. Basicamente se utilizo parte del diseno experimental previsto en el nivel I de evaluacion toxicologica de los agentes microbianos para el control de plagas de la Agencia de Proteccion Ambiental (Environmental Protection Agency: EPA) de los Estados Unidos de America (EUA) [30]. Asimismo, fueron conducidos cumpliendo las normas internacionales y nacionales de bioetica y bioseguridad de las buenas practicas de laboratorio, y en el cuidado y uso de animales de laboratorio, lo que permitio que recibieran cuidados humanisticos [5] El presente protocolo de investigacion fue aprobado por el Comite de Bioetica de la UNEFM el 31 de Enero de 2008.

Animales de experimentacion

Se usaron 12 ratones/sexo albinos heterocigotos NMRI, entre 6 y 7 semanas de edad por cada grupo de ensayo, incluyendo los respectivos controles, cuyos pesos no excedieron aproximadamente 20% del peso promedio para cada sexo, con calidad higienico sanitarias de acuerdo a las normas de cuidado y uso de animales de laboratorio [5]. Se colocaron 3 animales por jaulas de uso habitual en el Bioterio. El alimento (Ratarina: Protinal[R], Valencia, Venezuela) y el agua se esterilizaron por vapor humedo en autoclave (All American 25X-1, Wisconsin Aluminum Foundry, EUA) y suministrados ad libitum. Los animales se mantuvieron en ciclo de luz-oscuridad 12-12 horas.

Cultivos fungicos y preparacion de la suspension de conidios

Los ensayos se hicieron con el aislamiento LF14, de B. bassiana, de la micoteca del laboratorio de Fitopatologia (LF), Nucleo Universitario "Rafael Rangel" (NURR), Universidad de Los Andes (ULA), Trujillo, estado Trujillo, Venezuela. El mismo fue aislado en 1992, a partir del cadaver esporulado de un insecto coleoptero no identificado recolectado en la poblacion de Monay, estado Trujillo, en la region andino-venezolana. Las conidias se obtuvieron removiendo, mediante asa de platino, la superficie de cultivos esporulados de 15 dias crecidos sobre medio solido Sabouraud-agar (25 gr de glucosa; 10 gr de peptona; 20 gr de agar y 1000 cc de agua destilada), y mantenidos a temperatura 26[grados]C y humedad relativa (HR) >90% en camara de ambientacion o climatizada (Biotronette[R] Mark II, modelo 845, Lab Line Instruments, Inc, Illinois, EUA). El material fungico cosechado se suspendio en agua destilada esteril con 0,1% Tween 20 y se filtro a traves de gasa para separar el micelio de las conidias. La suspension de conidias se ajusto, mediante hemocitometro (Nebauer improved, Marienfeld, Alemania), a 1 x [10.sup.9] conidias/mL, y se utilizo inmediatamente [3, 7].

Procedimiento de infeccion

Aproximadamente 24 horas antes del ensayo, se rasuro con hojillas esteriles, un area (aproximadamente 10% de la superficie corporal) ventral y dorsal del tronco de los animales. Sobre estas areas se sujetaron mediante cinta adhesiva no irritante, una gasa esteril previamente impregnada con una suspension de 1 x [10.sup.9] conidias/mL del hifomiceto, en una sola dosis durante 24 horas. Al grupo de animales control se les aplico la gasa impregnada en agua destilada esteril. Al cabo de este tiempo, los residuos de las sustancias del area dermica expuesta se removieron con agua esteril. Posteriormente, durante 14 dias se realizaron examenes clinicos y de comportamiento, determinacion diaria de peso, mortalidad y estudio micologico (aclaramiento) de la piel. En los examenes clinicos se evaluo la presencia de signos de irritacion en piel y pelo, ojos y mucosas, frecuencia respiratoria, frecuencia cardiaca, sistema nervioso central y autonomico, actividad somato-motora, patrones de conducta o comportamiento calificado como normal-activo, sensible, pasivo, agresivo [26], haciendose enfasis, entre otros, en convulsiones, diarrea, letargo, salivacion, somnolencia y coma. A cada animal se le hizo determinacion diaria de peso.

Para el estudio micologico (aclaramiento) se tomo la muestra con hisopo esteril de las areas rasuradas, y se coloco sobre lamina portaobjeto, se colorearon con azul de algodon, cubriendose con laminilla cubreobjeto para observarse bajo microscopio fotonico (Axiostar Plus, Carl Zeiss, Alemania). El cultivo de la muestra se hizo en medio solido (agar-Sabouraud) por agotamiento en estria (zig-zag), las placas se incubaron por 7-14 dias a 26[grados]C y HR>90% en camara de ambientacion (Biotronette[R] Mark II, modelo 845, Lab Line Instruments, Inc, Illinois, EUA), como ya se indico anteriormente [3, 7]. A las 24; 48 y 72 horas se estimo el numero de conidias germinadas (%). Una vez concluida la incubacion, se cuantifico la esporulacion (conidias/mL) mediante hemocitometro [7].

Se llevaron anotaciones diarias del numero de animales que sobrevivieron o fallecieron durante la investigacion.

Estudio histopatologico

A todos los animales se les realizaron necropsia completa (anatomopatologia), detallandose las caracteristicas externas e internas (organos y sistemas). Los sacrificios se realizaron (2-3 animales/sexo) en los dias 3; 7 y 14 despues de la inoculacion fungica, mediante anestesia con eter dietilico, seguida de dislocacion cervical. Mediante pinzas y tijeras de diseccion, se tomaron muestras de tejidos, incluyendo piel, rinones, higado, bazo, pulmones, traquea, estomago, intestinos y corazon. A las muestras obtenidas se les hizo estudio micologico (infectividad) directo y cultivo en medio solido, como ya se describio anteriormente. Para el estudio histopatologico, una seccion de las muestras se fijo en formaldehido al 10% y se incluyeron en parafina para hacer cortes histologicos de 5-7[micron]m con microtomo de rotacion (Reichert Jung HN-40, Mannheim, Alemania) accionado manualmente. Los cortes se colorearon con hematoxilina - eosina (H & E) y/o azul de toluidina, y se evaluaron y fotografiaron (Olympus, Fe-120, Olympus Imaging Corp., Japon) bajo un microscopio fotonico (Axiostar Plus, Carl Zeiss, Alemania).

Analisis estadisticos

A los porcentajes de germinacion antes de realizar los analisis, se les aplico una transformacion angular o arcoseno ([Sen.sup.-1][raiz cuadrada de (x)]) de manera tal de homogenizar las varianzas [25]. La significancia estadistica de las diferencias entre las medias de los pesos, % de germinacion y cantidad de esporulacion (conidias/mL) entre los diferentes ensayos, se calculo mediante las pruebas de analisis de Varianza (ANOVA) de una via y de comparacion multiple Student-Newman-Keusl (SNK) [25]. Los datos se analizaron mediante paquetes estadisticos MINITAB version 13,20 (Minitab Inc. 2000) [18].

RESULTADOS Y DISCUSION

Todos los ratones, incluyendo machos y hembras, sobrevivieron durante la realizacion de los experimentos. La evaluacion clinica no revelo cambios o alteraciones en la piel, tales como modificacion en la coloracion, humedad y turgencia, presencia de edema, eritema, inflamacion, necrosis, dermatitis de contacto y/o alergica, entre otros, siendo por lo tanto el indice de irritacion dermica de 0 con 100% de normalidad. Al cabo de los 14 dias de observaciones, en la region dermica depilada expuesta, el pelo crecio normalmente. En el 100% de los casos, no se observaron cambios o alteraciones patologicas de sintomas clinicos discernibles en ojos y/o mucosas, en los sistemas respiratorio, circulatorio, nervioso central y autonomico, en la actividad somato-motora de los animales, tanto en los expuestos a la accion fungica como los controles no expuestos, asi como tampoco en su comportamiento, el cual se observo normal para la especie al conservar sus habitos y caracteristicas [26], siendo en todos los casos de tipo activo-normal.

El peso promedio corporal en ambos sexos, tanto en los animales expuestos a LF14 B. bassiana como los controles, se incremento significativamente durante los 14 dias de observacion (TABLA I), las diferencias entre sexos tomando en cuenta el total de peso promedio ganado fueron estadisticamente significativas (F=42,84 ; g.l.=1; P<0,00001). Sin embargo, cuando se observa el analisis comparativo para cada sexo en particular, entre los ratones inoculados y los no expuestos al hongo, no se detectaron diferencias estadisticamente significativas (P>0,05) para esta variable, desde el inicio y al final del periodo de observacion (TABLA I).

El estudio micologico (aclaramiento) mediante el examen directo revelo la presencia de conidias sin germinar de LF14 B. bassiana a las 24 horas despues de la inoculacion en todos los machos y hembras expuestos a la accion fungica. En relacion con el cultivo en medio solido de la muestra de la region rasurada, la misma resulto positiva a la presencia de LF14 B. bassiana, similarmente solo a las 24 horas despues de la inoculacion, obteniendose tasas promedio de germinacion para ambos sexos [mayor que o igual a] 98% ([barra.X] [+ o -] D.S.= 98,8 [+ o -] 0,8 en machos; 99,1 [+ o -] 0,5, en hembras) a las 24 horas de su incubacion, y de esporulacion: [barra.X] [+ o -] D.S.= 17,5 x [10.sup.5] [+ o -] 1,8 x [10.sup.4] conidias/mL en machos, y 17,3 x [10.sup.5] [+ o -] 1,2 x [10.sup.4] conidias/mL en hembras, siendo las diferencias entre sexos para ambos parametros estadisticamente no significativas (P>0,05).

Recuperacion de conidias de animales (Infectividad)

Cuando se observa el analisis del estudio de infectividad se aprecia que, el hongo solo se logro aislar en piel al dia 3 de la necropsia, en todos los animales (3/sexo) muestreados, obteniendose tasas promedio de esporulacion de 2,6 x [10.sup.5] [+ o -] 2,1 x [10.sup.4] y 2,5 x [10.sup.5] [+ o -] 1,7 x [10.sup.4] para machos y hembras, respectivamente, no siendo estas diferencias estadisticamente significativas (P>0,05).

Anatomopatologia

El examen externo de los cadaveres a traves de la inspeccion y la palpacion desde la cabeza hasta la cola, no mostro hallazgos patologicos, tales como alteracion en la coloracion de piel, palma y planta de las patas, distribucion anomala o dano en el pelo, alteracion en conjuntivas oculares, abultamientos, depresiones, lesiones, entre otras, en la superficie corporal, no detectandose diferencias entre los tratamientos y los grupos controles no expuestos al hongo. Tras la extirpacion de la parrilla costal, se realizo el examen de la cavidad toracica, no evidenciandose alteraciones macroscopicas como adherencias entre las pleuras, derrame pleural o pericardico, presencia de liquidos, hemorragias o lesiones. El examen de la cavidad abdominal no mostro hallazgos patologicos como adherencias del epiplon, aumento o disminucion en el liquido peritoneal, asi como cambios en la coloracion o presencia de tumoraciones o lesiones, y el diafragma se visualizo en posicion, configuracion y altura normal. Se estudiaron todos los organos toraco-abdominales, los cuales se evidenciaron de caracteristicas macroscopicas normales.

Al realizar el estudio histopatologico de los organos extraidos durante las necropsias, se constato que en general ninguno de los grupos de tratamiento en estudio presentaron alteraciones estructurales de consideracion en los tejidos, cuando se compararon con los grupos controles. De una manera global, no se observaron infiltrados de macrofagos, neutrofilos y eosinofilos como parte de un proceso inflamatorio agudo, asi como tampoco conidias germinadas ni evidencias fungicas o histopatologicas de la multiplicacion del aislamiento LF14 (FIG. 1).

Como bien lo senala Toriello [27], antes de ser probados a nivel de campo, los bioplaguicidas deben cumplir con ciertas normas basicas de bioseguridad, que permitan garantizar que los mismos sean seguros para la salud publica y el ambiente.

Las conidias de LF14 B. bassiana pudieron recuperarse viables en la piel de los murinos 24h despues de su inoculacion, revelandose ademas con los estudios anatomo e histopatologicos que no se presentaron cambios o alteraciones dermicas discernibles, ni en ningun otro organo, tales como: edema, eritema, inflamacion, necrosis y/o alopecia, en el cuerpo ni en las extremidades, tampoco se observaron reacciones cutaneas de tipo inmunologico, lo cual sugiere la seguridad a nivel dermico de este aislamiento fungico, aun con la aplicacion de altas dosis conidiales de 1 x [10.sup.9] conidias/mL. Similares observaciones se han obtenido con otras cepas de Beauveria en modelos vertebrados (e.g., ratones: M. musculus, conejos: Oryctolagus cuniculus), donde se ha demostrado su bioseguridad sin producirse irritaciones dermicas [26, 30]. Sin embargo, se debe tener siempre presente que el genero Beauveria se encuentra entre los hongos oportunistas de capacidad queratinolitica/queratinofilica que pueden destruir la queratina por medios enzimaticos [1], por lo que, aunque muy rara vez, ocasionalmente puede ser verificado como agente causal, entre otras infecciones humanas, de lesiones necroticas en piel y keratitis, propia esta ultima de la cornea la cual posee al igual que la piel humana, queratina [19, 24, 29]. Dentro de otros factores a determinar para la evaluacion de la capacidad infectiva dermica del aislamiento fungico LF14, cabe mencionar su capacidad para producir sustancias antibioticas (e.g., penicilinas) que permiten la destruccion de la flora cutanea bacteriana, las cuales actuan como barrera cutanea al producir enzimas contra los antibioticos, facilitandose asi la infeccion micotica. Ademas, el pH, temperatura, humedad, la presion osmotica, presencia de globulinas, ferritina, quelantes de metales en el suero de los vertebrados, pudieran dificultar o limitar el crecimiento fungico [16, 20].

[FIGURA 1 OMITIR]

Tal como ocurre normalmente con M. musculus durante su desarrollo hasta la adultez [22], en todos los animales del presente trabajo, incluyendo los inoculados con LF14 B. bassiana, se registro un incremento del peso promedio ganado. Este hecho sugiere que no se presento una alteracion fisiologica debida directamente por las conidias intactas, el micelio o por sus toxinas (metabolitos secundarios), que pudiera incidir en la reduccion del peso corporal de los ratones expuestos, como ocurre con otros hongos tacitamente patogenos, tales como Cryptococcus neoformans var. neoformans (Basidiomycota), que afecta algunos organos de los ratones lo que a su vez altera el sistema fisiologico de los mismos [26]. Resultados similares a estos han obtenido otros investigadores al exponer otras cepas de B. bassiana y de otras especies de hongos entomopatogenos, tanto en mamiferos [26] como en aves [10], asi como tambien con Metarhizium anisopliae y Paecilomyces fumosoroseus en ratones [17, 28], y P. lilacinus en ratas (Rattus rattus) [15], donde los pesos promedio ganados se han incrementado tambien al final del periodo de observacion. Como bien lo indican Tapias y Dussan [26], las diferencias significativas detectadas en los pesos promedio entre ambos sexos es un evento normal y comun, debido a que por caracteristicas fisiologicas y morfologicas los machos murinos (M. musculus) tienen un mayor peso corporal que sus congeneres hembras [22].

Cuando se analiza la mayoria de los estudios experimentales, llama la atencion que las pruebas dermicas, asi como tambien las de tipo ocular, se implementan en pocas ocasiones o se les consideran opcionales. Al menos en el presente trabajo se implemento la de tipo dermico, debido a que el metodo de aplicacion de las suspensiones de hongos entomopatogenos es por medio de aspersiones, lo que genera aerosoles que incrementan las posibilidades de contacto con las conidias y su potencial infeccion [26]. Ademas de que se deben seguir las recomendaciones de las Agencias Internacionales ad hoc para las evaluaciones de toxicidad/patogenicidad [26, 30].

Cuando se evaluan los riesgos bio-toxicologicos de los micoinsecticidas, el Nivel I corresponde a la serie de baterias iniciales de pruebas toxicologicas que consisten en varios bioensayos experimentales donde se evalua un riesgo maximo del microorganismo a utilizar (e.g., 10-100 veces la cantidad recomendada a nivel de campo). Si el resultado de dichas pruebas es negativo (i.e., ausencia de infectividad o patogenicidad), entonces esto indicaria la escasa probabilidad de que estos microorganismos ocasionen problemas patologicos; reportandose como "escasa probabilidad" debido a que, como se ha venido documentando a lo largo de este trabajo, siempre existira, aunque muy remotamente, la posibilidad de producir infecciones a cualquier integrante de la Biosfera que sea susceptible o durante su manipulacion o uso en labores practicas de estos bioproductos [12, 23]. En virtud de que no se presentaron efectos adversos de consideracion implementando las pruebas dermicas del nivel I de la US-EPA, no se considero necesario por lo tanto proceder con otras pruebas de los niveles II, III y IV mas elaboradas, como lo son la cuantificacion de la toxicidad a traves de la dosis letal media ([DL.sub.50]), e infectividad a traves de la dosis de efectividad media ([DE.sub.50]) e irritabilidad, ademas de la realizacion de otras pruebas agudas adicionales para evaluar el rango de especies no-diana y la ruta optima de exposicion, o hasta llegar a las del nivel IV donde se han pruebas directamente en el campo ya sean reales o simuladas [12, 27].

Se puede considerar que al no detectarse conidias germinadas, ni su persistencia, adherencia o multiplicacion ni dano de los tejidos, el aislamiento LF14 B. bassiana inoculado por la via dermica aun a elevadas dosis, no es patogenico ni toxico para el modelo murino NMRI, siendo por lo tanto segura para el mismo, y esperandose que sea similarmente seguro para todos los integrantes de la Biosfera, incluyendo los seres humanos, especialmente para los trabajadores que realicen la aplicacion del producto a nivel de campo en los futuros Programas de MIP de los vectores de la enfermedad de Chagas. Esto se indica a pesar de que en B. bassiana se han detectado toxinas (e.g., beauvericina) y otros metabolitos secundarios [21].

Sin embargo, se debe tener cuenta que la manipulacion de los hongos entomopatogenos durante su manufacturacion, almacenamiento y aplicacion en el campo podria exponer a los trabajadores a dosis fungicas muy elevadas, por lo que se requiere seguir las recomendaciones de seguridad durante los procesos de manufacturacion para reducir la exposicion y contacto de los humanos con estos agentes fungicos [8,17]. Por otra parte, a pesar de que se espera que otros aislamientos autoctonos de B. bassiana, que se aplican a nivel de control de plagas de interes agropecuario y de la Salud Publica, sean similarmente inocuos para los vertebrados, no obstante, como bien lo senalan Goettel y col. [8], cada cepa/aislamiento debe ser tratado, registrado y probada su patogenicidad/toxicidad basados en un optica "caso por caso", toda vez que los hongos pueden presentar una amplia variabilidad intraespecifica.

CONCLUSIONES

La administracion por via dermica del aislamiento LF14 de B. bassiana a dosis de 1 x [10.sup.9] conidias/mL no causo alteraciones anatomo o histopatologicas ni de tipo conductuales discernibles en ratones albinos NMRI.

AGRADECIMIENTO

Decanato de Investigaciones de la UNEFM, Coro, estado Falcon, Venezuela.

Recibido: 26 / 01 / 2011. Aceptado: 09 / 09 / 2011.

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[28] TORIELLO, C.; PEREZ-TORRES, A.; BURCIAGA-DIAZ, A.; NAVARRO-BARRANCO, H.; PEREZ-MEJIA, A.; LORENZANA-JIMENEZ, M.; MIER, T. Lack of acute pathogenicity and toxicity in mice of an isolate of Metarhizium anisopliae var. anisopliae from spittlebugs. Ecotoxicol. Environ. Saf. 65: 278-287. 2006.

[29] TUCKER, D.; BERESFORD, C.; SIGLER, L.; ROGER, K. Disseminated Beauveria bassiana infection in a patient with acute lymphoblastic leukemia. J. Clin. Microbiol. 42: 5412-5114. 2004.

[30] UNITED STATE ENVIROMENTAL PROTECTION AGENCY (US-EPA). Microbial Pesticide test guidelines. 1996. OPPTS 885.5000. Background for Microbial Pesticides Testing. On Line: http://www.nepis.epa.gov/Exe/ ZyPURL.cgi? 22-09-2009.

[31] ZIMMERMANN, G. Review on safety of the entomopathogenic fungi Beauveria bassiana and Beauveria brongniartii. Biocontr Sci. Technol. 17: 553-596. 2007.

Maria Eugenia Acosta-Quintero (1), Dalmiro Jose Cazorla-Perfetti (1) *, Giovanny Eduarte-Pereira (2) y Pedro Morales-Moreno (1)

(1) Laboratorio de Entomologia, Parasitologia y Medicina Tropical (L.E.P.A.M.E.T.). Centro de Investigaciones Biomedicas (C.I.B.), Universidad Nacional Experimental "Francisco de Miranda" (UNEFM), Apdo. 7403, Coro 4101, Coro. Estado Falcon. Venezuela. E-mail: lutzomyia@hotmail.com. (2) Catedra de Farmacologia, Area Ciencias de la Salud, UNEFM. Coro. Estado Falcon. Venezuela.
TABLA I

DESARROLLO DEL PESO PROMEDIO CORPORAL (GR.; [bar.X] [+ o -] D.S.) *
DURANTE 14 DIAS DE RATONES ALBINOS NMRI EXPUESTOS POR VIA DERMICA
A 1X[10.sup.9] CONIDIAS/ML DEL AISLAMIENTO LF14 Beauveria bassiana

Tiempo                                               Grupo -
(dias)         Machos inoculados +                  Control+

0         34,0 [+ o -] 2,8 (A,a)         33,7 [+ o -] 2,9 (A,a)
1         34,0 [+ o -] 2,8 (A,a)         33,7 [+ o -] 2,9 (A,a)
2         34,4 [+ o -] 2,8 (A,a)         33,9 [+ o -] 3,0 (A,a)
3         34,7 [+ o -] 2,7 (A,a)         34,5 [+ o -] 2,9 (A,a)
4         35,1 [+ o -] 2,8 (A,a)         34,9 [+ o -] 2,9 (A,a)
5         35,5 [+ o -] 2,7 (A,a,c)       35,3 [+ o -] 2,9 (A,a,c)
6         35,9 [+ o -] 2,7 (A,a,c)       35,7 [+ o -] 3,0 (A,a,c)
7         36,3 [+ o -] 2,9 (A,a,d)       36,0 [+ o -] 2,9 (A,a,d)
8         36,6 [+ o -] 2,8 (A,a,d)       36,3 [+ o -] 3,0 (A,a,d)
9         36,9 [+ o -] 2,8 (A,a,e)       36,7 [+ o -] 3,0 (A,a,e)
10        37,3 [+ o -] 2,7 (A,C,a)       37,1 [+ o -] 2,8 (A,a,e)
11        37,5 [+ o -] 2,1 (A,b,c,d,e)   37,4 [+ o -] 2,3 (A,b,c,d,e)
12        37,8 [+ o -] 1,9 (A,C,b,d,e)   37,7 [+ o -] 2,2 (A,C,b,d,e)
13        38,1 [+ o -] 1,8 (A,b,e)       37,9 [+ o -] 1,9 (A,b,e)
14        38,5 [+ o -] 1,6 (A,C,b)       38,1 [+ o -] 1,7 (A,b)
Total     36,3 [+ o -] 1,4 (a)           36,1 [+ o -] 1,5 (a)

Tiempo            Tratamiento
(dias)        Hembras inoculadas+                 Control+

0         30,3 [+ o -] 4,2 (B,a)       31,0 [+ o  -] 4,4 (B,a)
1         30,2 [+ o -] 4,3 (B,a)       31,1 [+ o -] 4,5 (B,a)
2         30,4 [+ o -] 4,3 (B,a)       31,3 [+ o -] 4,5 (B,a)
3         31,8 [+ o -] 4,3 (B,a)       31,6 [+ o -] 4,4 (B,a)
4         32,2 [+ o -] 4,0 (B,a,c)     31,9 [+ o -] 4,3 (B,a,c)
5         32,4 [+ o -] 3,8 (B,a,c)     32,2 [+ o -] 4,1 (B,a,c)
6         32,6 [+ o -] 3,6 (B,a,d)     32,5 [+ o -] 3,9 (B,a,d)
7         32,8 [+ o -] 3,5 (B,a,d)     32,8 [+ o -] 3,6 (B,a,d)
8         33,0 [+ o -] 3,4 (B,a,d)     33,1 [+ o -] 3,4 (B,a,d)
9         33,3 [+ o -] 3,1 (B,a,d)     33,5 [+ o -] 3,1 (B,a,d)
10        33,6 [+ o -] 3,0 (B,C,a,d)   33,8 [+ o -] 2,9 (B,C,a,d)
11        33,9 [+ o -] 2,8 (B,C,a,d)   34,1 [+ o -] 2,5 (B,C,a,d)
12        34,2 [+ o -] 2,6 (B,a,d)     34,3 [+ o -] 2,1 (B,C,s,d)
13        34,5 [+ o -] 2,5 (B,b,c,d)   34,7 [+ o -] 1,7 (B,C,b,c,d)
14        34,8 [+ o -] 2,1 (B,b,d)     36,0 [+ o -] 1,4 (B,C,b,d)
Total     32,8 [+ o -] 1,4 (B)         33,1 [+ o -] 1,4 (B)

* En el analisis de comparacion multiple (SNK), cuando dos medias
posean letras mayusculas iguales en las filas o minusculas en las
columnas, sus diferencias resultaron estadisticamente no
significativas (P>0,05). [bar.X] = media aritmetica;
D.S.= Desviacion Standard. + N = 12.
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Author:Acosta-Quintero, Maria Eugenia; Cazorla-Perfetti, Dalmiro Jose; Eduarte-Pereira, Giovanny; Morales-M
Publication:Revista Cientifica de la Facultad de Ciencias Veterinarias
Date:Nov 1, 2011
Words:5223
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