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Patogenicidad de una cepa de Yersinia ruckeri de un brote de yersiniosis en truchas arcoiris (Oncorhynchus mykiss) de Huaraz, Peru.

Pathogenicity of a Yersinia ruckeri strain from an outbreak of yersiniosis in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) from Huaraz, Peru

INTRODUCCION

La enfermedad de la boca roja o yersiniosis es causada por Yersinia ruckeri, una bacteria que afecta a principalmente a salmonidos, ocasionando una infeccion sistemica de curso agudo a cronico con altas mortalidades y grandes perdidas economicas (Austin B y Austin D, 2016). La enfermedad se caracteriza por la presencia de hemorragias alrededor de la boca y el ano, base de las aletas y en la superficie de los organos internos (Barnes, 2011; Kumar et al., 2015). La enfermedad de la boca roja se reconocio por primera vez como una enfermedad bacteriana grave en una piscigranja de truchas arcoiris en los EEUU a comienzos de la decada de 1950 (Rucker, 1966). Actualmente, la yersiniosis tiene una distribucion mundial (Tobback et al., 2007; Barnes, 2011). En Peru, la primera vez que se aislo Y. ruckeri fue en Junin por Bravo y Kojagura (2004), y posteriormente en otros departamentos de la sierra central, norte y sur del pais (Sirvas et al., 2011; Flores; 2013; Sandoval et al., 2016; Cerro et al., 2017; Castro et al., 2017).

Y. ruckeri es una bacteria bacilar gramnegativa y mayormente movil (Tobback et al., 2007). La trucha arcoiris (Oncorhynchus mykiss) es la especie mas susceptible a este agente bacteriano (Tobback et al., 2007; Barnes, 2011); sin embargo, se ha informado de infecciones por Y. ruckeri en otros salmonidos y otras especies de peces (Willumsen, 1989; Kumar et al., 2015; Austin y Austin, 2016). La yersiniosis es mas contagiosa a temperaturas del agua de 15-20[grados]C, siendo de 5 a 10 dias el periodo de incubacion de la infeccion (Busch y Lingg, 1975; Roberts, 1983). La transmision de la enfermedad es principalmente de forma horizontal a traves del agua por las deyecciones de peces enfermos o portadores (Busch, 1978; Kumar et al., 2015). Generalmente, la infeccion se observa en forma hiperaguda o aguda, especialmente en alevines, cuando hay un aumento repentino en la temperatura del agua en primavera, mientras que las infecciones cronicas generalmente ocurren en los peces adultos a principios del invierno (Busch, 1978; Barnes, 2011).

La mayoria de las investigaciones previas sobre las infecciones por Y. ruckeri se basaron en los hallazgos bacteriologicos, habiendose clasificado actualmente dos biotipos. El 1 que es movil y secreta fosfolipasa, y el biotipo 2 que ha perdido la motilidad y secrecion de la fosfolipasa (Welch et al., 2011); ademas de diversos serotipos en base del antigeno O del lipopolisacarido de la bacteria (Davies, 1990). Sin embargo, la investigacion sobre la patogenicidad de las diferentes cepas de Y. ruckeri en truchas arcoiris es muy limitada (Avci y Birincioglu, 2005). En el Peru, se ha determinado la variabilidad fenotipica y bioquimica en aislados de Y. ruckeri de las principales regiones productoras de truchas arcoiris (Flores, 2013), pero no se han hecho estudios sobre su patogenicidad. Esto es importante con el fin de desarrollar las vacunas mas adecuadas. Debido a esto, el objetivo de este estudio fue determinar la patogenicidad de una cepa de Y. ruckeri procedente de un brote en una piscigranja de truchas arcoiris de Huaraz.

MATERIALES Y METODOS

Tipo y Lugar de Estudio

El estudio fue de tipo experimental, descriptivo, longitudinal y prospectivo. La preparacion de los inoculos bacterianos, los analisis bacteriologicos y moleculares, y los analisis de laminas histopatologicas se realizaron en la Seccion de Ictiopatologia de la Facultad de Medicina Veterinaria (FMV) de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos (UNMSM), en Lima, Peru. La crianza de los alevines de truchas arcoiris, la inoculacion con Y. ruckeri y la evaluacion de su efecto se llevaron a cabo en la Unidad de Cultivo Experimental del Laboratorio de Biologia Acuatica y Acuicultura de la Facultad de Ciencias Biologicas, UNMSM, Lima.

Peces

Se adquirio un lote de 120 alevines de trucha arcoiris (Oncorhynchus mykiss) en 2015, con un peso de 7.25 g y talla promedio de 6.8 cm, de una piscigranja ubicada en Canta, Lima, sin reporte alguno de enfermedad. Los peces fueron aclimatados por 10 dias en un estanque de 500 L con aireacion, filtracion y enfriamiento constante del agua. Se les alimento diariamente con una dieta comercial. Para asegurar que los peces estuvieran libres de Y. ruckeri, 20 truchas fueron anestesiadas con benzocaina 1 g/20 l (Ross L y Ross B, 2008) y eutanasiadas mediante corte medular con hoja de bisturi entre el cerebro y la medula espinal (Rosenthal, 2013), tomandose luego muestras de bazo y rinon para el aislamiento bacteriologico en tripticasa de soya (TSA). El aislamiento de Y. ruckeri fue negativo.

Cepa Desafio y Preparacion del Inoculo

Para la inoculacion se utilizo una cepa de Y. ruckeri aislada de truchas arcoiris de cultivo con signos clinicos de yersiniosis de la region de Huaraz, Peru. La cepa estaba almacenada a -20[grados]C, fue descongelada y reactivada en caldo de tripticasa de soya (TSB) a 25[grados]C por 24 h, sembrada en TSA e incubada en las mismas condiciones. Las colonias caracteristicas de Y. ruckeri se utilizaron para preparar diluciones bacterianas en buffer fosfato salino (PBS) esteril, hasta obtener las concentraciones requeridas para el presente estudio (Cuadro 1), medido segun escala de McFarland a diluciones sucesivas.

Diseno Experimental

Los peces fueron distribuidos al azar en cinco grupos de 20 peces cada uno, siendo un grupo control y cuatro desafiados. Cada grupo fue mantenido en dos acuarios de 10 individuos cada uno. Los peces fueron anestesiados, siguiendo el procedimiento descrito previamente, e inoculados con la cepa de Y. ruckeri debajo de la aleta dorsal, usando jeringas de tuberculina esteril para cada aplicacion (Cuadro 1). El grupo control fue inoculado con PBS esteril.

Lesiones Macroscopicas, Aislamiento e Identificacion de Y. ruckeri

Los peces fueron monitoreados tres veces al dia (08:00, 12:00, 17:00) durante 12 dias, registrandose los signos clinicos presentes. Los peces moribundos con signos compatibles con yersiniosis fueron anestesiados y eutanasiados para identificar lesiones externas, lo cual tambien se hizo a los peces que morian. Luego, se desinfectaba la superficie del pez con etanol al 70% y se realizaba la necropsia segun la metodologia descrita por Meyers (2009) para reconocer lesiones internas. Al finalizar el experimento (dia 13), los peces sobrevivientes fueron eutanasiados para su evaluacion y analisis bacteriologico e histopatologico. Adicionalmente, las instalaciones y el equipo utilizado se desinfectaron con 10 000 ppm de cloro.

Las muestras para la caracterizacion histologica, colectadas en formol al 10%, fueron tejidos de intestino, rinon, bazo, musculo, higado y branquias, procedentes de cinco peces por grupo. Las laminas histologicas fueron tenidas con hematoxilina y eosina (HE) mediante el metodo histologico convencional. Las laminas fueron observadas con un microscopio optico de luz con aumentos de 10X, 40X y 100X para determinar lesiones patologicas. Los hallazgos fueron categorizados segun el grado de afeccion por su extension (normal, escaso, leve, moderado y severo) propuesto por Reimschuessel et al. (1992).

Se tomaron muestras asepticas de bazo y rinon para aislamiento bacteriano mediante siembras por agotamiento en placas con TSA e incubadas por 24 h a 25[grados]C. Se registro las caracteristicas fenotipicas de las colonias resultantes, tales como forma, tamano, bordes y color. A las colonias presuntivas de ser Y. ruckeri se les realizo tincion de Gram, prueba de oxidasa, catalasa y motilidad. Las bacterias con caracteristicas bioquimicas de Y. ruckeri fueron confirmadas por PCR. Para ello, se hizo extraccion de ADN utilizando el kit comercial PureLink Genomic DNA Mini Kit (Thermo Fisher Scientific), siguiendo las indicaciones del fabricante. Posteriormente, el PCR se realizo segun el protocolo desarrollado por Gibello et al. (1999), que identifica un segmento de 575 pares de bases (pb) correspondientes al gen del ribosoma 16S de Y. ruckeri. Los productos de PCR fueron visualizados por electroforesis en geles de agarosa al 1.5% y tenidos con 0.5 [micron]g/ml de bromuro de etidio sometidos a campo electrico de 90 V/m durante 60 minutos. Finalmente, se compararon las bandas de ADN en el transiluminador (DNR Bio-Imaging Systems, EEUU).

RESULTADOS

Analisis de Datos

Se realizaron estimaciones de frecuencias de los signos clinicos, lesiones externas e internas, asi como de los hallazgos histopatologicos, segun Bland y Altman (1986).

Consideraciones Eticas

En el estudio se contemplaron las normas eticas para la investigacion senaladas por el Comite de Etica y Bienestar Animal de la FMV-UNMSM.

RESULTADOS

Analisis Bacteriologico y Molecular

En los cultivos en TSA de bazo y rinon se aislaron colonias pequenas, redondas y de color crema de 1 cm de diametro en promedio. Los analisis morfologicos y bioquimicos mostraron que los aislados eran bacilos gramnegativos, moviles y positivos para catalasa, pero negativo para oxidasa.

En los productos de amplificacion de PCR se observaron bandas especificas con un tamano molecular de aproximadamente 575 pb, indicativo confirmatorio de Y ruckeri como agente causal de signos y lesiones en peces infectados con esta bacteria. No se aislo Y. ruckeri de bazo y rinon en los peces del grupo control.

Evaluacion de Patogenicidad

Entre los signos clinicos registrados con mayor frecuencia se encuentra la anorexia (90%) y la melanosis (76%) (Cuadro 2), que aparecieron a las 12 horas de la inoculacion en G3 y G4, y al 3er dia pos-inoculacion (dpi) en G1 y G2 (Cuadro 3). Posteriormente, aparecieron letargia y nado erratico a las 24 h de la inoculacion en G3 y G4, y al 4to dpi en G1 y G2, junto con otros signos en menor frecuencia con el transcurrir de los dias. A la necropsia, las lesiones externas e internas mas frecuentes fueron esplenomegalia (86%), contenido mucoso en intestino (80%), congestion intestinal (60%) y hemorragias en boca (50%) (Cuadro 4). Las mortalidades se iniciaron al 2o dpi en G3 y G4, y a los 7o dpi en G1 y G2. La mortalidad total fue nula para el grupo control, y 65, 60, 100 y 100% para G1, G2, G3 y G4 (Cuadro 5).

Analisis Histopatologico

A nivel del tejido hepatico, se identifico degeneracion grasa (20/20) y necrosis (20/20) (Figura 1A), en ambos de escaso a severo grado de presentacion; asimismo, escasa a moderada congestion (19/20) (Figura 1B), escasa a leve presencia de melanomacrofagos (5/20) (Figura 1A), leve presencia de bacterias extravasculares (1/20) y moderada separacion de hepatocitos (1/20) (Figura 1B) en los peces inoculados con Y. ruckeri. En el caso del grupo control, solo se observo leve degeneracion grasa (5/5) (Cuadro 6).

A nivel del bazo, en los peces inoculados, se identifico de leve a escaso grado de congestion (20/20) y escasa a moderada presencia de melanomacrofagos (20/20) (Figura 2A). Adicionalmente, en menor frecuencia se observo leve presencia de bacterias (4/20), dilatacion de vasos sanguineos (3/20) (Figura 2B) y disminucion linfoide (2/20) (Figura 2C), ambas de grado moderado a severo. Ademas, de leve a moderada necrosis (3/20) (Figura 2B) y moderada presencia de linfocitos lisados (2/20) (Figura 2C) (Cuadro 7). No se observaron lesiones en bazo en los peces del grupo control.

En el rinon anterior, se observo en los peces inoculados de leve a severa presencia de melanomacrofagos (13/20), tubulos regenerados (5/20) y disminucion linfoide (6/20) (Figura 3A), ambas de leve a moderado grado. Adicionalmente, moderada a severa necrosis (6/20), escasa a moderada presencia de gotas hialinas en epitelio tubular (3/20) (Figura 3B), moderado aumento de tejido linfoide (2/20), congestion (2/20) (Figura 3C) y presencia de bacterias (2/20), en ambos casos de leve a moderado grado y una moderada linfocitolisis (1/20) (Figura 3C). Se debe resaltar que en el grupo control tambien se observo diversos tipos de lesiones (Cuadro 8).

A nivel intestinal se determino en los peces inoculados severa necrosis (20/20) (Figura 4A) en todas las muestras de peces infectados con Y. ruckeri; asimismo, se observo presencia de bacterias (2/20) e hiperplasia de enterocitos (2/20) (Figura 4B), en ambo casos de leve a severo grado de presentacion. Ademas, disgregacion del epitelio (1/20) y presencia de celulas granulares eosinofilicas (1/20) (Figura 4A), ambas de grado severo, y leve hiperplasia de celulas caliciformes (1/20) (Figura 4B). No se observaron lesiones en intestino en los peces del grupo control (Cuadro 9).

En el analisis de musculo se identifico en los peces inoculados de leve a severo grado de necrosis (11/20) (Figura 5A), escasa a moderada presencia de macrofagos y otras celulas inflamatorias (8/20) (Figura 5B). Ademas, se observo escasa a moderada presencia de bacterias (3/20), disgregacion de fibras musculares (2/20) y dilatacion de vasos (1/20) (Figura 5A), en ambos casos en grado leve. No se observaron lesiones en musculo en los peces del grupo control (Cuadro 10).

A nivel del tejido branquial se observo en los peces inoculados de escasa a moderada hiperplasia y fusion de lamelas (13/20) y leve teleangiectasia (1/20) (Figura 6A), congestion (3/20), presencia de melanomacrofagos (1/20) (Figura 6B), estas dos ultimas en grado leve, y escasa hiperplasia del apice de lamelas (1/20) (Figura 6C). No se observaron lesiones en tejido branquial en los peces del grupo control (Cuadro 11).

DISCUSION

La cepa de Y. ruckeri mostro una alta patogenicidad en alevines, causando septicemias agudas con mortalidades del 50% al segundo dia de inoculado en dosis de 1x[10.sup.8], demostrando ser la causante de la epizootia de yersiniosis que causo mortalidades de 6070% en pozas de diversas piscigranjas de Huaraz, tanto en alevines como en otros grupos etarios, indicando una patogenicidad inusual en el campo.

Los principales signos clinicos observados (anorexia, melanosis, letargo y exoftalmia) son signos generales de un pez enfermo y no patognomonico de yersiniosis. Estos tambien fueron reportados en retos experimentales con Y. ruckeri, sin que se hayan mencionado los momentos pos-inoculacion en que hayan aparecido (Tobback et al., 2009; Mahjoor y Akhlaghi, 2012; Cueva, 2015). Asi mismo, se ha reportado que Y. ruckeri puede provocar severa afeccion cerebral (Ohtani et al., 2014), produciendo signos nerviosos, como nado erratico y en tirabuzon, los cuales fueron encontrados en este y otros estudios (Avci y Birincioolu, 2005). Ademas, Y. ruckeri provoca lesiones edematosas en las glandulas coroidales con acumulacion de liquido intraocular (Busch, 1978), lo que explicaria la exoftalmia encontrada en este estudio.

La rapida presentacion de signos clinicos en peces de G3 y G4 fue mas rapida a lo reportado por Seeker et al. (2011), quienes describen signos similares, pero a partir del tercer dia para dosis altas de Y. ruckeri (1x[10.sup.8] y 4x[10.sup.8]). En el caso de G1 y G2, estos signos se presentaron al tercer dia, de forma y orden similar a los grupos G3 y G4, y a lo reportado por Austin B y Austin D (2016). Los signos clinicos de yersiniosis y su temprana aparicion en los grupos G3 y G4, no solo estarian relacionados a las altas concentraciones inoculadas, sino tambien a la alta patogenicidad de la cepa en estudio, lo cual se evidencia en las lesiones ocasionadas.

Todas las truchas inoculadas con Y. ruckeri presentaron lesiones tipicas de la enfermedad de la boca roja. Las lesiones que se observaron en los cuatro grupos fueron esplenomegalia, contenido mucoso en intestino y congestion intestinal, que tambien han sido descritas por Tobback et al. (2009), Seeker et al. (2011) y Cueva (2015); lo que confirma la patogenicidad de esta cepa a bajas concentraciones. Por otra parte, el 50% de los peces infectados presentaron hemorragias alrededor o dentro de la cavidad oral, lo que le da el nombre caracteristico de <<boca roja>> a esta enfermedad. Avci y Birincioglu (2005) y Cueva (2015) tampoco encontraron estas lesiones en todos los peces inoculados. Las lesiones menos frecuentes halladas en este estudio coinciden con las observaciones de otros autores (Barnes, 2011; Sakai et al., 2012; Mahjoor y Akhlaghi, 2012; Mateo et al., 2016). Estas lesiones estarian asociadas a los factores de virulencia que tiene Y. ruckeri, como toxinas extracelulares, adhesinas e invasinas y ruckerbactina, entre otros (Fernandez et al., 2007; Ryckaert et al., 2010; Barnes, 2011).

Si bien se obtuvo el 100% de mortalidad en G3 y G4, las mortalidades tambien fueron altas en los grupos G1 y G2, a pesar de las bajas concentraciones de Y. ruckeri (1x[10.sup.4] y 4x[10.sup.4]/ml, respectivamente). Berc et al. (1999) utilizaron una dosis menor (5x[10.sup.5]/ml) en carpas inoculadas intraperitoneal produciendo una enfermedad septicemica. Las mortalidades comenzaron a los 3 dpi para los grupos G3 y G4, y a los 6 dpi para los grupos G1 y G2. El indice de mortalidad y la rapidez de presentacion no solo pueden atribuirse a la alta concentracion utilizada en este estudio, dado que con concentraciones bajas en G1 y G2 tambien se produjo mortalidad con signos clinicos y lesiones, dada la alta patogenicidad de la cepa en estudio.

El retraso en la manifestaciones clinicas de enfermedad a dosis menores (G1 y G2) y la sobrevivencia de 35-40% de alevines infectados se deberia a la respuesta inmune de los peces, ya que se ha demostrado que los dos biotipos de Y. ruckeri inducen la produccion de TNF-[alfa]1 e IL1-[beta]1 desde el primer dia del desafio y tienen una maxima expresion de los genes a los 3, 5 y 7 dias en el bazo, induciendo a una respuesta inmune innata en los peces infectados con bajas dosis. Por otro lado, a altas dosis, la expresion de los genes de las proteinas de la superfamilia de TNF son regulados negativamente (downregulated) a los 3, 5 y 7 dias pos-infeccion (Wiens y Vallejo, 2010), siendo esta una de las causas de las altas mortalidades por las dosis altas utilizadas en este trabajo.

En este estudio se logro visualizar lesiones en bazo con presencia de bacterias, tanto en el parenquima como en los vasos sanguineos, lo cual prueba la septicemia bacteriana de manera similar a las descritas por Tinsley et al. (2011), Mahj oor y Akhlaghi (2012) y Sierralta et al. (2013). Ademas, se pudo observar una moderada congestion, necrosis y degeneracion grasa, asi como la presencia de melanomacrofagos en higado, mayormente en los alevines de G3 y G4. La degeneracion grasa hepatica ha sido descrita para animales con infeccion cronica por Y. ruckeri (Avci y Birincioolu, 2005; Tinsley et al, 2011).

Se observo regeneracion tubular en el rinon e incremento de celularidad leucocitaria, similar a los hallazgos reportados por Tinsley et al. (2011) y Avci y Birincioolu (2005), respectivamente. Ademas, se reporta la proliferacion de celulas mononucleares en infecciones cronicas experimentales y en brotes de campo (Tobback, 2007; Mahjoor y Akhlaghi, 2012), necrosis intestinal con desprendimiento de la mucosa (Mahjoor y Akhlaghi, 2012; Sierralta et al., 2013).

La presencia de melanomacrofagos en bajo numero en rinon, bazo e higado se considera normal en algunas especies de peces, pero su incremento esta asociado a infecciones cronicas (Agius y Roberts, 2003). En el presente estudio estuvieron presentes en estos tejidos; sin embargo, de manera leve a severa, y de acuerdo con las dosis inoculantes, ya que estas celulas poseen capacidad de fagocitar antigenos; asi mismo, esto conlleva a estimular la respuesta inmune adaptativa (Press y Evensen, 1999): Por otro lado, su incremento ha sido descrito en truchas sobrevivientes a infecciones con Y. ruckeri (Tobback et al., 2009; Cueva, 2015).

La via intramuscular como sitio de inoculacion en este y otros estudios experimentales, evidenciaron leve a severa necrosis de las fibras musculares, con presencia de celulas inflamatorias y bacterias. Esta lesion se debe a que Y. ruckeri produce una proteasa Yrp1, la cual es capaz de degradar fibronectina, actina y miosina, danando asi las fibras musculares y produciendo, ademas, su disgregacion (Fernandez et al., 2007; Austin B y Austin D, 2016).

Las lesiones en branquias como congestion, teleangiectasia, hiperplasia y fusion de lamelas asi como del apice lamelar, son similares a las reportadas en la literatura (Berc et al., 1999; Tinsley et al., 2011). Tobback et al. (2009) y Ohtani et al. (2014) demostraron que por la via branquial ocurre una rapida e importante captacion de antigenos de Y. ruckeri, lo que lleva a suponer que las lesiones observadas son producto de la inoculacion de esta bacteria. No obstante, Avci y Birincioglu (2005) indicaron que la hiperplasia interlamelar en truchas desafiadas contra Y. ruckeri fueron atipicas para la enfermedad y fueron asociadas, en cambio, a mala calidad del agua. Para este trabajo, los parametros fisicoquimicos del agua fueron optimos para el desarrollo de truchas arcoiris, con la excepcion de los niveles de amonio-nitrogeno, los cuales se encontraban elevados, pero en un rango subletal. Niveles subletales de amonio en agua (2-5 mg/l) provocan hiperemia y fusion de lamelas secundarias en tilapias niloticas (Benli et al., 2008).

CONCLUSIONES

* La cepa movil de Yersinia ruckeri procedente de Huaraz, Peru, es altamente patogena, produciendo mortalidad y diversas lesiones en tejidos de truchas arcoiris (Oncorhynchus mykiss) en condiciones experimentales.

* La cepa de Y. ruckeri inoculada experimentalmente a bajas concentraciones produce mortalidad y lesiones anatomopatologicas en alevines de truchas arcoiris como las descritas en yersiniosis septicemicas naturales, como lesiones hemorragicas bucales (boca roja) en el 50% de peces infectados y mortalidad en un periodo de hasta 12 dias.

* Altas concentraciones de Y. ruckeri (1x[10.sup.8]/ml y 4x[10.sup.8]/ml) producen infecciones septicemicas agudas con altas mortalidades y lesiones en diversos tejidos de truchas arcoiris en un corto periodo (2 a 6 dias).

http://dx.doi.org/10.15381/rivep.v30i1.15695

Agradecimientos

Los autores manifiestan su agradecimiento al Vicerrectorado de Investigacion de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos por el financiamiento de este estudio.

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Fernando Mesias V. [1], Mario Vargas L. [1], Alexander Cueva Q. [1], Alberto Manchego S. [2], Nieves Sandoval C. [1, 3]

[1] Laboratorio de Histologia, Embriologia y Patologia Veterinaria, Facultad de Medicina Veterinaria, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Peru

[2] Laboratorio de Microbiologia y Parasitologia Veterinaria, Facultad de Medicina Veterinaria, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Peru

[3] E-mail: nsandovalc@unmsm.edu.pe

Recibido: 3 de julio de 2018

Aceptado para publicacion: 22 de noviembre de 2018

Leyenda: Figura 1. Cortes histologicos de higado de trucha arcoiris (Oncorhynchus mykiss). A: Necrosis (flechas naranjas) con degeneracion grasa (flechas negras) y presencia de melanomacrofagos (flechas rojas). B: Congestion con separacion de hepatocitos (flechas negras). H-E. 400X

Leyenda: Figura 2. Cortes histologicos de bazo de trucha arcoiris (Oncorhynchus mykiss). A: Congestion con presencia de melanomacrofagos (flechas negras). B: Dilatacion de vasos sanguineos (flechas negras) con zonas de necrosis (flechas naranjas). C: Disminucion linfoide con linfocitos lisados (flechas negras). H-E. 400X

Leyenda: Figura 3. Cortes histologicos de rinon de trucha arcoiris (Oncorhynchus mykiss). A: Disminucion de tejido linfoide con regeneracion tubular (flechas naranjas) y presencia de melanomacrofagos (flechas negras). B: Necrosis tubular (flechas naranjas) con presencia de gotas hialinas (flechas negras). C: Congestion y aumento de tejido linfoide con presencia de linfocitos lisados (flechas negras). H-E. 400X

Leyenda: Figura 4. Cortes histologicos de intestino de trucha arcoiris (Oncorhynchus mykiss). A: Necrosis con epitelio disgregado (flechas negras) y celulas granulares eosinofilicas (flechas naranjas). H-E. 400X. B: Hiperplasia de enterocitos (flechas naranjas) con hiperplasia de celulas caliciformes (flechas negras). H-E. 100X

Leyenda: Figura 5. Cortes histologicos de musculo de trucha arcoiris (Oncorhynchus mykiss). A: Disgregacion de fibras musculares con areas de necrosis con (flechas negras) y dilatacion de vaso sanguineo (flecha naranja). B: Infiltracion de macrofagos (flechas naranjas) y otras celulas inflamatorias (flechas negras). H-E. 400X

Leyenda: Figura 6. Cortes histologicos de branquias de trucha arcoiris (Oncorhynchus mykiss). A: Hiperplasia y fusion de lamelas (flechas naranjas) con teleangiectasia (flechas negras). B: Congestion con presencia de melanomacrofagos (flechas negras). H-E. 400X. C: Hiperplasia del apice de las lamelas (flechas naranjas). H-E. 100X
Cuadro 1. Grupos experimentales
inoculados por via intramuscular con
cepas de Yersinia ruckeri (n=20 truchas
por grupo)

Grupo                                   Dosis

Control (1)                             0.1 ml
G1                           0.1 ml de 1 x [10.sup.4]/ml
G2                           0.1 ml de 4 x [10.sup.4]/ml
G3                           0.1 ml de 1 x [10.sup.8]/ml
G4                           0.1 ml de 4 x [10.sup.8]/ml

(1) Se inoculo PBS

Cuadro 2. Frecuencia de signos clinicos en truchas arcoiris inoculadas
con Yersinia ruckeri (n=20 peces por grupo)

Signos clinicos          G1           G2           G3           G4
                        (n)          (n)          (n)          (n)

Anorexia                 18           17           18           19
Melanosis                14           15           15           17
Letargia                 10           11           13           13
Exoftalmia               9            10           12           13
Abdomen                  7            8            10           10
dilatado
Nado erratico            5            5            8            9
Orillamiento             5            4            6            6

Signos clinicos       Total de     Frecuencia (%)
                     casos (n)

Anorexia                 67              90
Melanosis                61              76
Letargia                 47              59
Exoftalmia               44              55
Abdomen                  35              44
dilatado
Nado erratico            27              34
Orillamiento             21              26

G1: 1 x [10.sup.4]; G2: 4 x [10.sup.4]; G3: 1 x [10.sup.8]; G4: 4 x
[10.sup.8]/ml

Cuadro 3. Indice de morbilidad de los
grupos experimentales inoculados con Y.
ruckeri (n=20 por grupo)

Dia           C          G1         G2         G3         G4

1             -          -          -          7          9
2             -          -          -          8          9
3             -          3          3          5          2
4             -          5          2          -          -
5             -          4          5          -          -
6             -          3          6          -          -
7             -          4          2          -          -
8             -          1          3          -          -
9             -          -          -          -          -
10            -          -          -          -          -
11            -          -          -          -          -
12            -          -                     -          -
Total         0          20         20         20         20

C; control; G1: 1 x [10.sup.4]; G2: 4 x [10.sup.4]; G3:
1 x [10.sup.8]; G4: 4 x [10.sup.8]/ml

Cuadro 4. Frecuencia de lesiones externas e internas en truchas
arcoiris inoculadas con Yersinia ruckeri (n=20 peces por grupo)

Lesiones internas y                       G1      G2      G3      G4
externas                                  (n)     (n)     (n)     (n)

Esplenomegalia                            16      15      18      18
Contenido mucoso en intestino             15      13      18      18
Congestion intestinal                     11      13      12      12
Hemorragias en boca                        8       9      11      12
Petequias en musculo y tejido graso        8       7      10      13
Palidez hepatica                           6       9      11      12
Hemorragia ocular                         10      10       6       8
Palidez branquial                          7       7       8       8
Vejiga natatoria hemorragica               7       7       6       5
Congestion hepatica                        8       6       5       4
Petequias en higado                        4       6       4       3

Lesiones internas y                        Total de      Frecuencia
externas                                  casos (n)         (%)

Esplenomegalia                                67             84
Contenido mucoso en intestino                 64             80
Congestion intestinal                         48             60
Hemorragias en boca                           40             50
Petequias en musculo y tejido graso           38             48
Palidez hepatica                              38             48
Hemorragia ocular                             34             43
Palidez branquial                             30             38
Vejiga natatoria hemorragica                  25             31
Congestion hepatica                           23             29
Petequias en higado                           17             21

C; control; G1: 1 x [10.sup.4]; G2: 4 x [10.sup.4]; G3: 1 x
[10.sup.8]; G4: 4 x [10.sup.8]/ml

Cuadro 5. Indice de mortalidad de los
grupos experimentales inoculados con Y.
ruckeri (n=20 por grupo)

Dia             C          G1         G2         G3         G4

1               -          -          -          -          -
2               -          -          -          11         10
3               -          -          -          5          8
4               -          -          -          1          2
5               -          -          -          2          -
6               -          -          -          1          -
7               -          1          1          -          -
8               -          1          4          -          -
9               -          3          3          -          -
10              -          7          2          -          -
11              -          1          1          -          -
12              -          -          1          -          -
Total           0          13         12         20         20

C; control; G1: 1 x [10.sup.4]; G2: 4 x [10.sup.4]; G3:
1 x [10.sup.8]; G4: 4 x [10.sup.8]/ml

Cuadro 6. Hallazgos histopatologicos y su frecuencia relativa en
higado de truchas arcoiris (Oncorhynchus mykiss) inoculadas con
Yersinia ruckeri

Lesiones                          C          G1         G2
                                 n=5        n=5        n=5

Degeneracion grasa                5          5          5
Necrosis                          0          5          5
Congestion                        0          5          4
Melanomacrofagos                  0          2          1
Presencia de bacterias            0          0          0
Separacion de hepatocitos         0          1          0

Lesiones                          G3         G4       Frecuencia
                                 n=5        n=5          (%)

Degeneracion grasa                5          5           100
Necrosis                          5          5            80
Congestion                        5          5            76
Melanomacrofagos                  1          1            20
Presencia de bacterias            0          1            4
Separacion de hepatocitos         0          0            4

C; control; G1: 1 x [10.sup.8]; G2: 4 x [10.sup.8]; G3: 1 x
[10.sup.8]; G4: 4 x [10.sup.8]/ml

Cuadro 7. Hallazgos histopatologicos y su frecuencia en bazo de
truchas arcoiris (Oncorhynchus mykiss) inoculadas con Yersinia
ruckeri

Lesiones                            C n=5      G1 n=5     G2 n=5

Congestion                            0          5          5
Melanomacrofagos                      0          5          5
Bacterias                             0          1          1
Dilatacion de vasos sanguineos        0          0          0
Necrosis                              0          1          2
Disminucion Linfoide                  0          1          1
Linfocitos lisados                    0          1          0

Lesiones                            G3 n=5     G4 n=5    Frecuencia
                                                             (%)

Congestion                            5          5             80
Melanomacrofagos                      5          5             80
Bacterias                             1          1             16
Dilatacion de vasos sanguineos        1          2             12
Necrosis                              0          0             12
Disminucion Linfoide                  0          0             8
Linfocitos lisados                    0          1             8

C; control; G1: 1 x [10.sup.4]; G2: 4 x [10.sup.4]; G3: 1 x
[10.sup.8]; G4: 4 x [10.sup.8]/ml

Cuadro 8. Hallazgos histopatologicos y su frecuencia en rinon anterior
de truchas arcoiris (Oncorhynchus mykiss) inoculadas con Yersinia
ruckeri

Lesiones                         C        G1       G2       G3
                                n=5      n=5      n=5      n=5
Melanomacrofagos                 2        4        2        4
Tubulos regenerados              2        2        0        2
Necrosis                         0        2        0        2
Disminucion linfoide             0        0        0        3
Gotas hialinas en epitelio       1        3        0        0
   tubular
Aumento de tejido linfoide       0        0        2        0
Bacterias                        0        1        0        0
Congestion                       0        0        0        0
Linfocitolisis                   0        1        0        0

Lesiones                         G4      Frecuencia
                                n=5         (%)
Melanomacrofagos                 3           60
Tubulos regenerados              1           28
Necrosis                         2           24
Disminucion linfoide             3           24
Gotas hialinas en epitelio       0           16
   tubular
Aumento de tejido linfoide       0           8
Bacterias                        1           8
Congestion                       2           8
Linfocitolisis                   0           4

C; control; G1: 1 x [10.sup.4]; G2: 4 x [10.sup.4]; G3: 1 x
[10.sup.8]; G4: 4 x [10.sup.8]/ml

Cuadro 9. Hallazgos histopatologicos y su frecuencia en intestino de
truchas arcoiris (Oncorhynchus mykiss) inoculadas con Yersinia ruckeri

Lesiones                          C n=5      G1 n=5     G2 n=5

Necrosis                            0          5          5
Bacterias                           0          2          0
Hiperplasia de enterocitos          0          1          1
Epitelio disgregado                 0          1          0
Celula granular eosinofilica        0          1          0
Hiperplasia de celulas              0          0          1
   caliciformes

Lesiones                          G3 n=5     G4 n=5    Frecuencia (%)

Necrosis                            5          5             80
Bacterias                           0          0             8
Hiperplasia de enterocitos          0          0             8
Epitelio disgregado                 0          0             4
Celula granular eosinofilica        0          0             4
Hiperplasia de celulas              0          0             4
   caliciformes

C; control; G1: 1 x [10.sup.4]; G2: 4 x [10.sup.4]; G3: 1 x
[10.sup.8]; G4: 4 x [10.sup.8]/ml

Cuadro 10. Hallazgos histopatologicos y su frecuencia en musculo de
truchas arcoiris (Oncorhynchus mykiss) inoculadas con Yersinia ruckeri

Lesiones                          C          G1         G2
                                 n=5        n=5        n=5

Necrosis                          0          4          4
Infiltracion de                   0          1          1
   melanomacrofagos y
   otras cel. inflamatorias
Bacterias                         0          0          0
Disgregacion de fibras            0          2          0
musculares
Dilatacion de vasos               0          1          0

Lesiones                          G3         G4       Frecuencia
                                 n=5        n=5          (%)

Necrosis                          5          5            44
Infiltracion de                   4          2            32
   melanomacrofagos y
   otras cel. inflamatorias
Bacterias                         1          2            12
Disgregacion de fibras            0          0            8
musculares
Dilatacion de vasos               0          0            4

C; control; G1: 1 x [10.sup.4]; G2: 4 x [10.sup.4]; G3: 1 x
[10.sup.8]; G4: 4 x [10.sup.8]/ml

Cuadro 11. Hallazgos histopatologicos y su frecuencia en branquias de
truchas arcoiris (Oncorhynchus mykiss) inoculadas con Yersinia ruckeri

Lesiones                        C          G1         G2         G3
                               n=5        n=5        n=5        n=5

Hiperplasia y fusion de         0          2          3          3
   lamelas
Congestion                      0          0          1          1
Presencia de                    0          1          0          0
   melanomacrofagos
Hiperplasia apice de            0          0          0          1
   lamelas
Teleangiectasia                 0          0          0          0

Lesiones                        G4       Frecuencia
                               n=5          (%)

Hiperplasia y fusion de         5            52
   lamelas
Congestion                      1            12
Presencia de                    0            4
   melanomacrofagos
Hiperplasia apice de            0            4
   lamelas
Teleangiectasia                 1            4

C; control; G1: 1 x [10.sup.4]; G2: 4 x [10.sup.4]; G3: 1 x
[10.sup.8]; G4: 4 x [10.sup.8]/ml
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Author:Mesias V., Fernando; Vargas L., Mario; Cueva Q., Alexander; Manchego S., Alberto; Sandoval C., Nieve
Publication:Revista de Investigaciones Veterinarias del Peru (RIVEP)
Date:Jan 1, 2019
Words:7038
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