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Patogenicidad de aislamientos de hongos entomopatogenos contra: Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae) y Epilachna varivestis (Coleoptera: Coccinellidae).

Resumen: Con la finalidad de contar en Durango, Mexico, con aislamientos nativos de hongos entomopatogenos con patogenicidad contra Spodoptera frugiperda y Epilachna varivestis, principales plagas de maiz y frijol, respectivamente, se evaluaron 97 aislamientos de los cuales se seleccionaron a Bb42 y Bb18 de Beauveria bassiana y Ma91 de Metarhizium anisopliae, la actividad insecticida de estos se midio mediante bioensayos con un diseno completamente al azar aplicando diferentes concentraciones de esporas sobre larvas jovenes de ambos insectos, los datos de mortalidad de larvas se analizaron con un ANOVA y una prueba de Tukey, la [DL.sub.50] y [TL.sub.50] se determino con el programa Polo PC. El aislamiento Bb42 obtenido de larvas de S. frugiperda fue evaluado contra larvas del segundo estadio ocasionando una mortalidad de 96,6 % a una concentracion de 1,0x[10.sup.9] esporas m[L.sup.-1] y tuvo una [CL.sub.50] de 5,92x[10.sup.3] esporas m[L.sup.-1] con un tiempo letal de 3,6 dias, siendo la mas virulenta de las seleccionadas. De igual forma el aislamiento Bb18 obtenido de frijol fue el mas virulento contra E. varivestis, ya que causo una mortalidad de larvas neonatas del 93,3%, a 1,0x[10.sup.9] esporas m[L.sup.-1] a los 3 dias, con una [CL.sub.50] de 1,20x[10.sup.6] esporas m[L.sup.-1] y tiempo letal de 5,1 dias (Tukey; p [menor que o igual a] 0,05). Con base en estos resultados se concluyo que la patogenicidad de los aislamientos fue mayor cuando se obtuvieron directamente del insecto que de suelos cultivados con maiz y frijol, asi como cuando provienen del respectivo cultivo en el que se encuentra la plaga.

Palabras clave: Conchuela del frijol. Gusano cogollero. Beauveria bassiana. Metarhizium anisopliae.

Abstract: In order to obtain native isolates of entomopathogenic fungi in Durango, Mexico, with pathogenicity against Spodoptera frugiperda Fall Armyworm and Epilachna varivestis Mexican Bean Beetle, main pests of maize and beans, respectively, 97 isolates were evaluated, Bb42 and Bbl8 of Beauveria bassiana and Ma91 of Metarhizium anisopliae. A bioassay using neonate larvae under completely randomized design of treatments per dose (ANOVA) and Tukey's test were use to measure the insecticidal activity in both insects, mortality data were used to calculate [LC.sub.50] and [LT.sub.50]. The isolation Bb42 obtained from larvae of S. frugiperda and evaluated against second instar larvae of the same insect showed the highest virulence 96.6% of mortality to rate of 1 x [10.sup.9] spores m[L.sup.-1], with [LC.sub.50] of 5.92x [10.sup.3] spores m[L.sup.-1], and lethal time of 3.6 days; isolation Bbl8 from beans was highly virulent against neonate larvae of E. varivestis, 93.3% of mortality to 1 x [10.sup.9] spores m[L.sup.-1] with an [LC.sub.50] of 1.20x[10.sup.6] and lethal time of 5.1 days (Tukey, p [less than or equal to] 0.05). In conclusion, the pathogenicity of the isolates was greater when were obtained directly from the insect hosts than from maize and beans soil samples, as well as when it's are obtain from their respective host culture where was find the pest insect.

Key words: Mexican Bean Beetle. Fall Armyworm. Beauveria bassiana. Metarhizium anisopliae.

Pathogenicity of isolates of entomopathogenic fungi against Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae) and Epilachna varivestis (Coleoptera: Coccinellidae)

Introduccion

En el Estado de Durango, Mexico, se cultivan anualmente 231.497,61 ha de frijol (Phaseolus vulgaris L.) y 146.587,00 ha de maiz (Zea mays L.) siendo los cultivos de mayor importancia economica, ya que cubren el 71,43% del total de la produccion agricola (SAGARPA 2009). Los insectos plaga que causan los mayores danos a estos cultivos son el gusano cogollero Spodoptera frugiperda (J. E Smith 1797) (Lepidoptera: Noctuidae) y la conchuela del frijol Epilachna varivestis (Mulsant, 1850) (Coleoptera: Coccinellidae). Una alternativa viable para el control biologico de estos insectos son los hongos entomopatogenos (HE): Beauveria bassiana (Balsamo-Vuilleimin, 1912), Metarhizium anisopliae (Metsch-Sorokin, 1883) y Nomuraea rileyi (Farlow-Samson) (Lezama et al. 2005; Molina et al. 2003; Garcia et al. 1999; Morales y Rochling 1998).

Debido a la importancia de contar con aislamientos nativos con patogenicidad para el control de estos insectos, adaptados a las condiciones climaticas de una region, Lezama et al. (2000) colectaron larvas de S. frugiperda logrando aislar cepas de B. bassiana, N. rileyi e Hirsutella sp., de cultivos de maiz y sorgo en Michoacan, Colima y Jalisco, mientras que en suelo encontraron a B. bassiana, M. anisopliae e Isaria fumosorosea (Wize 1904). Con este mismo fin, Molina et al. (2003) tomaron muestras de suelo y colectaron larvas de S. frugiperda en campos cultivados con maiz, sorgo Sorghum vulgare (Pers.) y pasto Sudan Sorghum sudanense Piper (Stapf, 1917) en seis Estados de la Republica, donde tambien encontraron larvas infectadas con N. rileyi e Hirsutella sp., mientras que del suelo aislaron solo B. bassiana y M. anisopliae.

Respecto a E. varivestis, Garcia et al. (1999) evaluaron la susceptibilidad de 10 cepas de coleccion sobre larvas de tres dias de desarrollo, las cepas fueron aisladas de insectos de diferentes ordenes y las mas patogenicas fueron obtenidas de coleopteros." Diabrotica sp., Geraeus senilis (Casey, 1920) (Coleoptera: Curculionidae), Diabrotica balteata LeConte (Coleoptera: Chrysomelidae), Hippodamia convergens (Guerin-Meneville, 1842) (Coleoptera:Coccinellidae) e Hypothenemus

hampei (Ferrari, 1867) (Coleoptera:Scolytidae). De estas la que genero mayor mortalidad fue la que se aislo de Diabrotica sp., con 96.6 % de mortalidad a una dosis de 1,27x[10.sup.7] esporas/mL en comparacion con las que no fueron aisladas de coleopteros, lo que sugiere que existe cierto grado de especificidad de cepas dependiendo de la ubicacion taxonomica del insecto (Srisukchayakul et al. 2005); la que mostro menor toxicidad (66 %) fue la cepa aislada de Cydia pomonella (Linnaeus, 1758) (Lepidoptera: Tortricidae).

Por otro lado, Behle et al. (2006) evaluaron la efectividad toxica de blastosporas y esporas de I. fumosorosea utilizando dos tipos de bioensayos; uno por aplicacion topica y otro por contaminacion de dieta natural (hojas de frijol) a una concentracion de lx[l0.sup.8] esporas m[L.sup.-1] sobre larvas del tercer estadio de E. varivestis, se demostro que las blastosporas fueron mas efectivas que las esporas, ademas el bioensayo por aplicacion topica tuvo una mejor [CL.sub.50] (2,34x[10.sup.8] esporas m[L.sup.-1] y 9,88x[10.sup.6] blastosporas m[L.sup.-1]) que el bioensayo por contaminacion de dieta (9,39x[10.sup.8] esporas m[L.sup.-1] y 3,47x[10.sup.7] blastosporas m[L.sup.-1]), tanto para blastosporas como para esporas.

En relacion con la patogenicidad de HE sobre S. frugiperda, Lezama et al. (1996) evaluaron seis cepas sobre huevecillos y larvas a una concentracion de l x[10.sup.8] esporas m[L.sup.-1]; y observaron que resultaron mas efectivas las cepas de M. anisopliae y la combinacion de I. fumosorosea y P. javanicus (Friedrichs & Bally) (94 y 100 %), los valores de [CL.sub.50] fueron de 9,8 x [10.sup.5] y 5,6 x [10.sup.6] conidias m[L.sup.-1] para huevecillos y de 3,9 x [10.sup.6] y 1,5 x [10.sup.4] conidias m[L.sup.1] para larvas, con un tiempo letal medio ([TL.sub.50]) de 1,3 y 3,3 dias, respectivamente. Por la importancia de obtener aislamientos nativos de HE para el control biologico de estas plagas, se realizo el presente trabajo cuyo objetivo fue: Evaluar la patogenicidad de aislamientos provenientes de suelo e insectos colectados en cultivos de maiz y frijol, contra larvas del gusano cogollero y conchuela del frijol.

Materiales y Metodos

Se obtuvieron 39 muestras de suelos cultivados con maiz y frijol en los municipios de Guadalupe Victoria (GV) (24[grados]27'31,6"N 104[grados]05'37,3"W) con altitud de 1997 m.s.n.m., y Francisco I. Madero (FIM) (24[grados]24' 16,5" N 104[grados]20'45,2"W), con altitud de 1958 m.s.n.m, en el Estado de Durango, Mexico (Tabla 1).

Se colectaron larvas de E. varivestis y S. frugiperda con manifestacion de micosis, aspecto momificado o esporulacion del hongo. Los insectos se colectaron directamente de las plantas y se pusieron en vasitos de plastico con capacidad de 10mL, etiquetados por localidad y mantenidos refrigerados en laboratorio. Los muestreos de larvas y suelos se realizaron semanalmente del 4 de julio al 26 de septiembre del 2008.

Para el aislamiento de HE de suelo se utilizo como insecto trampa a larvas de Galleria mellonella (Linnaeus, 1758) (Lepidoptera: Pyralidae) que son altamente susceptibles a hongos (Vanninen 1997). Cada una de las muestras de suelo se tamizaron y se tomaron 300g, el cual se humedecio y se coloco dentro de un recipiente de plastico junto con siete larvas de G. mellonella del ultimo estadio de desarrollo, el recipiente con el suelo y las larvas se tapo y se invirtio. Las muestras se incubaron por siete dias a 25[+ or -]1[grados]C (Bedding y Akurst 1975). Pasado este tiempo, las larvas se recuperaron del suelo y se desinfectaron superficialmente con hipoclorito de sodio al 1%, se enjuagaron tres veces en agua destilada esteril; se removio el exceso de agua y se colocaron en cajas de Petri con papel filtro con el fin de mantener la humedad relativa elevada, para favorecer el desarrollo de los hongos las larvas se incubaron a 25[grados]C durante siete dias (Hatting et al. 1999), luego se aislo el HE por diferentes tecnicas como transferencia directa de hifas, impronta y maceracion del insecto, dependiendo del desarrollo del HE en el cuerpo del insecto, hasta obtener cultivos puros.

La identificacion de los hongos se hizo considerando la forma y el color de las hifas, esporas, celulas conidiogenas y fialides, mientras que las caracteristicas macroscopicas se basaron en la forma y color de la colonia, el crecimiento del sinema y la apariencia del hongo sobre su hospedero (Humber 1998; Samson 1988).

La seleccion de los aislamientos se hizo con base en su rapida esporulacion y alta viabilidad durante los primeros 15 dias. Las colonias de B. bassiana, M. anisopliae e I. fumosorosea se sembraron por estrias en cajas petri con el medio de cultivo de referencia para cada hongo, para que el porcentaje de germinacion no se viera disminuido. La viabilidad se determino mediante microcultivos segun Jimenez (1992), con un microscopio de contraste de fases (objetivo 40 X); las esporas se consideraron viables si el tubo germinativo era dos veces el diametro de la espora, contando 400 esporas/ repeticion, la viabilidad debio ser superior al 90% para que los aislamientos fueran considerados como efectivos (Milner et al. 1991).

Los aislamientos seleccionados se propagaron en medio de cultivo liquido como se describe a continuacion, para obtener un inoculo que se utilizo para la produccion de esporas aereas en sustrato solido, estas fueron usadas para su evaluacion contra las larvas de E. varivestis y de S. frugiperda.

Una vez conservados los aislamientos en medio de cultivo papa dextrosa agar (PDA), se preparo una suspension de los hongos adicionando 20mL de agua destilada esteril en el tubo de ensayo, se raspo la superficie del medio de cultivo con ayuda de una asa bacteriologica y dicha suspension se coloco en 200mL de medio de cultivo liquido a base de melaza de cana de azucar como fuente de carbono y sulfato de amonio como fuente de nitrogeno, posteriormente se coloco en una incubadora-agitadora por 48h, a 27[grados]C y agitacion de 200rpm, hasta que el hongo alcanzo el 80% de la fase logaritmica de crecimiento, luego se inocularon en bolsas con 250g de arroz previamente tratadas (lavado, estilado, esterilizado), las bolsas se almacenaron en un cuarto a 27[grados]C, 70% de HR, durante 15-18 dias (Garcia et al. 2006). Una vez que las esporas germinaron se separaron del arroz con ayuda de un tamizador automatico, posteriormente se redujo el contenido de humedad (<10%) con ayuda de un deshumidificador, luego las esporas se formularon en Celite[R] en proporcion 1:1, l g de esporas/lg de Celite[R], las esporas se contaron en una camara de Neubauer y se determino la viabilidad de esporas formuladas mediante la tecnica descrita anteriormente.

Cria de insectos. Se recolectaron larvas y adultos de E. varivestis en cultivos de frijol para establecer la cria masiva del insecto en laboratorio (25[+ or -]2[grados]C, 60% de HR y 14:10 HL). Los insectos se colocaron sobre plantas de frijol "Flor de Mayo" sembradas en macetas hasta obtener larvas neonatas de la tercera generacion de la colonia, las cuales se utilizaron en la ventana de respuesta biologica y en los bioensayos para la determinacion de la [CL.sub.50] y [TL.sub.50].

Se colectaron larvas de gusano cogollero en un cultivo de maiz, las cuales se criaron individualmente en laboratorio con dieta artificial (Ashby 1972), se usaron recipientes de plastico con capacidad de 10mL con tapa y en su interior se colocaron 8g de dieta. Las pupas se pasaron a una camara de emergencia con arena humeda, y una vez que alcanzaron el estado adulto se colocaron en una bolsa de papel y dentro de esta se coloco un recipiente de 5cm de diametro con arena, miel y agua, para alimentar a los adultos y obtener los huevecillos, mismos que se pasaron a una caja Petri dentro de la camara de cria (27[+ or -]2[grados]C, 80[+ or -]10% de HR y fotoperiodo 14:10 HL) hasta la emergencia de larvas, las cuales se usaron en las pruebas de patogenicidad.

Bioensayos de actividad insecticida. Con base en los mejores resultados de patogenicidad en las pruebas descritas se obtuvieron ocho aislamientos de B. bassiana y cuatro de M. anisopliae; se preparo una solucion base de cada uno a una concentracion de 1x[10.sup.9] esporas m[L.sup.-1]. A partir de esta se preparo una serie de diluciones para obtener las dosis requeridas para causar el 0 y 100% de mortalidad de larvas. Para lograrlo, se adicionaron 10 mL de agua destilada esteril sobre el crecimiento del tubo de ensaye y 0,1% de Tween[R] 80% como dispersante raspando la superficie con un asa, despues las esporas se contaron en una camara de Neubauer. Se emplearon veinticinco larvas por tratamiento de cada insecto, por triplicado y agua destilada como testigo. La aplicacion de los tratamientos se realizo sumergiendo las larvas por 30 segundos en cada suspension, posteriormente las larvas de S. frugiperda se mantuvieron con dieta artificial y las de E. varivestis con dieta natural, se incubaron bajo las condiciones de cria previamente descritas. A las 72h se determino el numero de larvas muertas en cada aislamiento.

Analisis estadistico. Los resultados de mortalidad de larvas en los insectos se analizaron mediante un diseno completamente al azar de tratamientos por dosis (ANOVA) donde los tratamientos fueron los aislamientos Bbl8, Bb42 y Ma91 y las seis diluciones las dosis; se uso el programa SAS, ver 9.0., ademas de una prueba de Tukey para la comparacion de medias entre los diferentes aislamientos y concentraciones (Pr < F = 0,05).

Seleccion de aislamientos. De esta manera se seleccionaron los aislamientos Bb18, Bb42 de B. bassiana y Ma91 de M. anisopliae, debido al mayor porcentaje de mortalidad de larvas (>90%) y menor tiempo letal ([menor que o igual a]72h).

Para determinar la [CL.sub.50] y [TL.sub.50], se utilizaron los aislamientos Bbl8, Bb42 y Ma91 contra larvas neonatas de E. varivestis. Para lograrlo, se preparo una suspension adicionando 10mL de agua destilada esteril a un tubo de ensayo con el hongo mas 0,1 mL de Tween[R] 80, de esta se tomo 1 mL y se adiciono en 9 mL de agua destilada esteril, hasta obtener seis diluciones seriadas ([10.sup.-9] a [10.sup.-4]); en el bioensayo se utilizaron 25 larvas neonatas de E. varivestis, las cuales se sumergieron 30 s por separado en cada concentracion, se dejaron secar y luego se colocaron en macetas con frijol para que se alimentaran, cada 24h se observo el numero de larvas muertas/ tratamiento.

Para los bioensayos con S. frugiperda se utilizaron los mismos aislamientos, se obtuvo una suspension de esporas raspando el contenido del HE con ayuda de una asa adicionando 10mL de agua esteril mas 0,1mL de Tween[R] 80 (dispersante), se hicieron seis diluciones seriadas ([10.sup.-9] a [10.sup.-4]). De cada concentracion se adiciono l mL/8g de dieta artificial antes de que solidificara, tambien se utilizaron 25 larvas con tres repeticiones, las cuales se incubaron de la misma forma que para la cria y cada 24h se reviso de mortalidad de larvas. A estos datos se les aplico un analisis Probit (POLO PC 1996) para conocer la relacion de las concentraciones con el numero de insectos muertos ([DL.sub.50] y [TL.sub.50]) a lo largo de las horas, respecto al control.

[FIGURA 1 OMITIR]

Resultados y Discusion

Aislamientos nativos de HE. De las muestras de suelo y larvas en cultivos de maiz y frijol se obtuvieron 97 aislamientos, de los cuales 57 fueron de M. anisopliae (58,7%), 36 de B. bassiana (37,11%) y cuatro de I. fumosorosea (4,12%); de 63 larvas de S. frugiperda colectadas en campo, se encontro M. anisopliae en 37 y B. bassiana en 23, pero no se encontraron aislamientos de HE en larvas o adultos de E. varivestis provenientes de campo. Respecto a esto ultimo, Ceryngier (2000) y Beyene et al. (2007) senalan que la infeccion natural de HE en coccinelidos es menor a 20%. En el gusano cogollero nuestros resultados concuerdan con los reportados por Lezama et al. (2000) quienes encontraron que M. anisopliae fue dominante (10,9 %), seguido por B. bassiana (4,7 %) e I. fumosorosea, aislados del suelo y asociados a poblaciones de S. frugiperda en diferentes localidades de Mexico.

Seleccion de aislamientos nativos de HE. Del total de aislamientos encontrados se seleccionaron ocho cepas de B. bassiana y cuatro de M. anisopliae ya que fueron patogenicos, tuvieron un adecuado desarrollo en medio de cultivo, un alto porcentaje de esporulacion a los 15 dias, y una viabilidad superior al 90%. Con los aislamientos Bb18 y Bb42 de B. bassiana y Ma91 de M. anisopliae se presento un rango alto de mortalidad de larvas de E. varivestis y S. frugiperda del 93,2 al 100% (1x[10.sup.9] esporas [mL.sup.-1]) a las 72h. Con base en la actividad insecticida observada se seleccionaron solo los aislamientos Bb18 de suelo cultivado con frijol y Bb42 y Ma91, aisladas de larvas infectadas en maiz, como las mas efectivas para el control de E. varivestis y S. frugiperda (Fig. 1).

De acuerdo con la Prueba de Tukey ([alpha]=0,05), los aislamientos mas patogenicos para el control de S. frugiperda fueron Bb42 a las seis concentraciones y Ma91 moderadamente (1x[10.sup.7]-1x[10.sup.9]), tambien para E. varivestis (Bb18) a las tres concentraciones mas altas; al comparar los valores medios y bajos de mortalidad de larvas a las distintas concentraciones se comprobo que los otros aislamientos fueron menos patogenicos a las concentraciones probadas (Tabla 2).

Actividad insecticida El aislamiento que tuvo la mas alta patogenicidad sobre larvas de E. varivestis fue Bb18 de B. bassiana, aislada de cultivos con frijol, con una mortalidad de 93,3 % a dosis de 1,0x[10.sup.9]; la [CL.sub.50] fue de 1,20x[10.sup.6] esporas [mL.sup.-1] y el [TL.sub.50] fue de 5,1 dias (Tabla 3). En los insectos tratados se observo que el inicio de la infeccion fue a los 3 dias, quedando cubiertos totalmente por el micelio a los 13 dias despues de haber aplicado las diferentes concentraciones.

El aislamiento que causo mayor mortalidad fue el obtenido de larvas infectadas de S. frugiperda en campo (Bb42), con una mortalidad maxima de 96,6 % a 1x[10.sup.9] esporas [mL.sup.-1], [CL.sup.50] de 5,92x[10.sup.3] y [TL.sub.50] de 3,6 dias (valor mas bajo). Este resultado coincide con el [TL.sub.50] reportado por Lezama et al. (1996) de 3,3 dias para el control de larvas de S. frugiperda.

El aislamiento Bb18, el cual fue aislado de suelos cultivados con frijol causo una mortalidad de 69,3 % en larvas de S. frugiperda. No obstante, al evaluarlo contra larvas de E. varivestis causo una mayor mortalidad (93,3 %) a la misma concentracion, mientras que el aislamiento Ma91 proveniente de larvas de S. frugiperda infectadas con M. anisopliae en campo causo una menor mortalidad (78,6 %) en larvas de S. frugiperda que B. bassiana. Sin embargo, para el control de E. varivestis la mortalidad fue menor (20%).

Polanczyk y Alves (2005) aplicaron 100[micro]L de una suspension de B. bassiana de 1x[10.sup.8] esporas/mL en la superficie de placas con dieta artificial para evaluar su toxicidad sobre larvas de S. frugiperda, obteniendo una mortalidad del 30 al 45 %, la que fue mayor cuando se aplico en combinacion con Bacillus thuringiensis Berlinier (58 %), esto indica la patogenicidad del hongo probada en nuestro ensayo con este insecto.

En relacion con la seleccion de cepas, Kaur y Padmaja (2008) evaluaron 32 cepas de N. rileyi de diferente origen geografico y huesped para el control de Spodoptera litura (Fabricius, 1775) (Lepidoptera: Noctuidae) encontrando tres cepas altamente toxicas, donde el grado de variacion entre aislamientos se relaciono con la muda del insecto. De forma similar, en nuestro estudio tambien observamos que el mayor numero de larvas muertas de E. varivestis se dio durante la muda del insecto.

Al evaluar las diferencias entre el grado y la rapidez de la infeccion de aislamientos de I. fumosorosea en lepidopteros, Altre y Vandenberg (2001) encontraron que las blastosporas del aislamiento 4461 fueron capaces de penetrar a la cuticula y proliferar en la hemolinfa de S. frugiperda a las 22h despues de la inoculacion, mientras que el aislamiento 1576 no fue efectivo, es decir que no hubo penetracion de las hifas del HE en el insecto. Asi mismo, Srisukchayakul et al. (2005) sugieren que la germinacion de esporas en aislamientos nativos depende del insecto hospedero, debido quizas a la variacion del integumento, la penetracion de los HE a traves de la cuticula es a veces precedida por la formacion de un apresorio que se fija a la epicuticula y proporciona el punto de apoyo para los procesos mecanicos y enzimaticos. Lo anterior sugiere que el origen de los aislamientos determina el grado de patogenicidad, esto apoya el porque los aislamientos de frijol fueron mas efectivos contra E. varivestis y los de maiz contra S. frugiperda, pues las quitinasas poseen el dominio de union a la quitina, componentes geneticos del insecto huesped, lo que aumenta la capacidad de penetracion de aislamientos nativos de HE (Fan et al. 2007). Tambien podrian ser hongos endofitos localizados en diversos cultivos propiciando la infeccion en diversas plagas (Vera 2008).

En sintesis se encontraron abundantes aislamientos nativos de M. anisopliae y B. bassiana en campos cultivados con frijol y maiz en la region de estudio, siendo posible aislar a los dos hongos solo de gusano cogollero con potencial para biocontrol. Fue evidente una mayor patogenicidad y virulencia de los dos hongos dependiendo de su origen; el aislamiento Bb42 aislado de larvas de S. frugiperda en maiz fue el mas virulento, mientras que para E. varivestis lo fue el Bb18 aislado del frijol.

Agradecimientos

Los autores agradecen al Instituto Politecnico Nacional (SIP 20070543), el apoyo economico otorgado al Proyecto de Investigacion: Busqueda e identificacion de hongos y nematodos entomopatogenos en suelos cultivados con frijol y maiz en Durango.

Recibido: 3-mar-2010 * Aceptado: 20-oct-2011

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CIPRIANO GARCIA G. (1), MARIA BERENICE GONZALEZ M. (2) y NESTOR BAUTISTA M. (3)

(1) Ph.D. CIIDIR-IPN COFAA. Blvd. Juan de Dios Batiz Paredes No. 250. C.P. 8110 I. Guasave, Sinaloa, Mexico. cgarciag@ipn.mx Autor para correspondencia. (2) M. Sc. CIIDIR-IPN COFAA Unidad Durango. Sigma No. 119. Fracc. 20 de Nov. II. C. P. 34220. Durango. mbgonzalez@ipn.mr. (3) Ph.D. Colegio de Posgraduados. Instituto de Fitosanidad. Carr. Mexico-Texcoco Km. 36.5 Montecillo Texcoco. Edo. de Mexico C.P. 56230. nestor@colpos.mx.
Tabla 1. Origen de los aislamientos de B. bassiana y M. anisopliae
(2008).

                                Origen

Clave           Suelo              Insecto      Localidad

Bb17    G. [mellonella.sup.*]                   FIM
Bb18    G. mellonella                           FIM
Ma85    G. mellonella                           GV
Ma63                            S. frugiperda   FIM
Bb09                            S. frugiperda   FIM
Bb34    G. mellonella                           GV
Bb56                            S. frugiperda   FIM
Ma62                            S. frugiperda   GV
B612    G. mellonella                           GV
Bb42                            S. frugiperda   FIM
Bb52                            S. frugiperda   FIM
Ma91                            S. frugiperda   GV

Bb = B. bassiana, Ma = M. anisopliae, FIM = Francisco I. Madero,
GV = Guadalupe, Victoria. G. [mellonella.sup.*] = insecto trampa.

Tabla 2. Mortalidad de larvas de S. frugiperda y E. varivestis en
seis aislamientos a diferente concentracion de esporas de
B. bassiana y M. anisopliae.

                                 S. frugiperda

       Conc.
Esporas [mL.sup.-1]     Bb18       Bb42      Ma91     Bbl8

1x[10.sup.9]          69,3a *    96,66a     78,66a   93,33a
1x[10.sup.8]          61,3a      81,33ab    62,66b   74,66b
1X[10.sup.7]          48,0b      72,00abc   52,00c   65,33b
1x[10.sup.6]          41,3b      68,00bc    36,00d   52,00e
1x[10.sup.5]          33,3c      54,66bc    25,33e   36,00d
1x[10.sup.4]          12,0d      50,66c     20,00e   20,00e
Testigo               2,66e      4,00d      4,00f    2.6617

                       E. varivestis

       Conc.
Esporas [mL.sup.-1]    Bb42     Ma91

1x[10.sup.9]          57,33a   20,00a
1x[10.sup.8]          36.0%    12,006
1X[10.sup.7]          29,33c   9,33bc
1x[10.sup.6]          21,33c   4,00cd
1x[10.sup.5]          18,66c   4,00cd
1x[10.sup.4]          12,00d   4,00cd
Testigo               2,66e    0,00d

* Medias con distinta letra en una columna son estadisticamente
diferentes (Tukey, p 5 0,05).

Tabla 3. Valores de [CL.sub.50] y [TL.sub.50] de aislamientos de
B. bassiana y M. anisopliae contra S. frugiperda.v E. varivestis.

Clave             [CL.sub.50]           Limites fiduciales
                                              al 95%

Bbl8            8,93x[10.sup.6]   1,77x[10.sup.6]-5,01x[10.sup.7]
S. frugiperda

E. varivestis   1,20x[10.sup.6]   3,24x[10.sup.5]-4,19x[10.sup.6]

Bb42            5,92x[10.sup.3]   3,05x[10.sup.2]-4,07x[10.sup.6]
S. frugiperda

E. varivestis   3,96x[10.sup.8]   5,56x[10.sup.7]-7,06x[10.sup.9]

Ma91            8,18x[10.sup.6]   1,84x[10.sup.6]-3,85x[10.sup.7]

S. frugiperda

E. varivestis          0                        --

Clave                Pendiente           [TL.sub.50]

Bbl8            0,304 [+ o -] 0,039   6,1 [+ o -] 0,288
S. frugiperda

E. varivestis   0,428 [+ o -] 0,043   5,1 [+ o -] 0,288

Bb42            0,295 [+ o -] 0,042   3,6 [+ o -] 0,288
S. frugiperda

E. varivestis   0,274 [+ o -] 0,044   5,8 [+ o -] 0,288

Ma91            0,355 [+ o -] 0,042   4,5 [+ o -] 0

S. frugiperda

E. varivestis   0,220 [+ o -] 0,060   8,1 [+ o -] 0,577
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Title Annotation:Seccion Agricola
Author:Garcia G., Cipriano; Gonzalez M., Maria Berenice; Bautista M., Nestor
Publication:Revista Colombiana de Entomologia
Date:Jul 1, 2011
Words:5577
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