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Organogenesis in vitro en pina 'Espanola Roja' y morfoanatomia foliar de las plantas obtenidas en el proceso.

Organogenesis in vitro in pineapple 'Red Spanish' and foliar morpho-anatomy of plants obtained in the process

INTRODUCCION

En Venezuela, la pina se cultiva en los estados Tachira, Merida, Trujillo, Lara, Monagas, Anzoategui, Sucre y los margenes del rio Orinoco en el estado Amazonas, siendo la Espanola Roja la variedad de pina que ha sido mas cultivada (Leal y Antoni 1981a, b). Constituye uno de los frutos autoctonos que ha mantenido su aceptacion y conservado su cultivo, compitiendo con otras frutas exoticas. En el pais, la pina para 2010 era el cuarto rubro vegetal en importancia despues de la cana de azucar, el maiz y el banano. A nivel mundial, actualmente Venezuela ocupa el puesto numero 13 entre los principales paises productores, con una produccion anual de 371.410 toneladas metricas (FAO, 2010).

La pina es un cultivo de gran importancia comercial y consumo en nuestro pais por la demanda de su fruto, lo que ha conducido la busqueda de nuevos metodos de propagacion, que permitan acelerar la produccion de propagulos para la siembra en el campo, entre los cuales cabe senalar el cultivo in vitro de yemas que permite mejorar sustancialmente el proceso de multiplicacion.

Desde finales de la decada de los anos 80 se han realizado interesantes trabajos de propagacion in vitro de la pina basados en la ruptura de la latencia de yemas apicales y laterales preexistentes, y el efecto del balance auxinacitocinina sobre la brotacion de esas yemas. En este aspecto se pueden mencionar los trabajos de: Casale y Garcia (1987) quienes estudiaron las variedades Espanola Roja, Brecheche y Nacional, y Saucedo et al. (2008) quienes trabajaron con las variedades Hawaiana y Champaka, ambos grupos lograron la supresion de latencia de yemas axilares de plantas adultas, utilizando los mismos reguladores de crecimiento en una proporcion de 4:1 auxina: citocinina. Otros investigadores encontraron que algunas variedades como la 'Queen Australia' requerian para la brotacion concentraciones de citocininas 100 veces mayor que la de auxinas (Mogollon et al., 2004). Tambien se han obtenido altas tasas de multiplicacion de brotes de pina 'Espanola Roja', utilizando concentraciones iguales de auxinas y citocininas (Garcia et al., 2008) pero usando un sistema de inmersion temporal. Recientemente Blanco et al. (2011), trabajando con variedades autoctonas del Amazonas venezolano resaltaron la importancia de la concentracion de tiamina y el pH del medio de cultivo para el proceso de la ruptura de la latencia de las yemas.

En el presente trabajo se presentan los resultados de una investigacion que tuvo como objetivos: a) Induccion del proceso de organogenesis in vitro para la clonacion de plantas de la variedad Espanola Roja mediante el cultivo in vitro de secciones de hojas de vitroplantas. b) Analisis morfologico e histologico de los eventos morfogenicos. c) Caracterizacion morfoanatomica de hojas de las plantas madres y de las plantas regeneradas, para determinar la existencia de posibles variaciones estructurales presentes en las hojas de la poblacion clonal, obtenida mediante el proceso organogenico.

MATERIALES Y METODOS

Para el establecimiento de los cultivos e induccion a la organogenesis los explantes empleados fueron segmentos de bases de hojas de aproximadamente 5 [mm.sup.2] provenientes de vitroplantas de pina 'Espanola Roja' mantenidas durante 8 meses en condiciones in vitro.

Los medios de cultivo utilizados estuvieron constituidos por las sales de Murashige y Skoog, 1962 (MS), suplementados con 0,4 mg x [L.sup.-1] de tiamina, 100 mg x [L.sup.-1] de mioinositol y 30 g x [L.sup.-1] de sacarosa. El pH de los medios fue ajustado a 5,8 con NaOH, se anadieron 8 g x [L.sup.-1]de agar como agente gelificante. Se probaron diferentes concentraciones de reguladores de crecimiento detallados en el Cuadro 1. Se emplearon 50 explantes por tratamiento.

Para la aclimatacion de las plantas regeneradas, el material fue incubado en una camara de crecimiento a una temperatura de 25 [+ or -] 1 [grados]C, en total oscuridad durante un mes para lograr la induccion del callo. Posteriormente, durante las etapas siguientes del proceso de formacion de brotes, los cultivos fueron transferidos a condiciones de luz fluorescente continua (50 [my]mol x [m.sup.-2] x [s.sup.-1]) y temperatura de 27 [+ or -] 1 [grados]C, un periodo mayor a siete meses.

Se colocaron 30 plantas obtenidas por organogenesis, con una altura aproximada de 6 cm en un sustrato conformado por tierra negra y arena lavada en una proporcion 1:1 y se colocaron durante 15 dias en propagadores con alta humedad (80-93 % de humedad relativa) y baja luminosidad (10 [my]mol x [m.sup.-2] x [s.sup.-1], densidad de flujo fotonico fotosintetico. Luego las plantas fueron transferidas a condiciones de vivero.

El analisis estadistico de los datos se realizo a traves del analisis de varianza y prueba de Duncan utilizando el programa Statistica version 5.5.

Tambien se realizo el calculo del Indice de Formacion de Brotes (IFB) para ambas variedades mediante la siguiente formula:

IFB = No de brotes formados x No explantescon brotes/ [(No explantes cultivados).sup.2]

Analisis morfologico e histologico de los eventos morfogenicos: La naturaleza del proceso de regeneracion in vitro, se estudio mediante el analisis de cortes histologicos del material vegetal, para asi comprobar la naturaleza organogenica del proceso y determinar si dicho proceso ocurrio de forma directa o indirecta. Para ello se realizaron cortes a mano alzada del material vegetal de muestras tomadas cada 15 dias desde que se inicia el cultivo hasta los 2 meses y medio, tiempo en el cual generalmente comienza la aparicion de los meristemoides, y luego cada 7 dias hasta la formacion y desarrollo de los brotes. Los cortes fueron coloreados con Azul de toluidina en solucion acuosa al 1 % y fijado en glicerina al 50 %, siguiendo el protocolo de Roth (1964).

Caracterizacion morfoanatomica de hojas de las plantas madres y de las plantas regeneradas

Para evaluar posibles cambios en la morfoanatomia de las hojas de las plantas hijas obtenidas por organogenesis in vitro se realizo un estudio morfologico y un estudio anatomico comparativo en las hojas de plantas madres mantenidas en vivero (a los 12 meses de cultivo), las plantas madres obtenidas por induccion de yemas pre-existentes in vitro, y mantenidas in vitro (8 meses de cultivo), las plantas hijas obtenidas por organogenesis y mantenidas in vitro (8 meses de cultivo) y las plantas hijas obtenidas por organogenesis y mantenidas ex vitro (8 meses de cultivo), donde algunas diferencias se definieron por presencia o ausencia de las diversas estructuras. Para ello se tomo aleatoriamente una hoja de tres plantas, creciendo en cada una de las condiciones de cultivo. Se desprendieron hojas ubicadas en la parte media de las plantas por presentar tejidos maduros (no juveniles ni senescentes), el material se lavo con agua corriente y de el se tomaron porciones correspondientes al tercio medio de la lamina, las cuales se fijaron en etanol al 70 %. Posteriormente se efectuaron secciones transversales a mano alzada, de aproximadamente 10 cortes por hoja por planta y se verifico en la totalidad de estos la homogeneidad de las caracteristicas observadas. La morfologia externa fue observada en un microscopio estereoscopico, mientras que los cortes anatomicos lo fueron a traves de un microscopio optico estandar y un microscopio optico con luz polarizada; se tomaron fotografias, en cada caso, con una camara digital acoplada a los mismos. El calculo del aumento total de las fotografias fue realizado mediante la multiplicacion del aumento del objetivo, por el aumento del ocular y el zoom de la camara.

RESULTADOS Y DISCUSION

Induccion del callo y de la organogenesis in

vitro. Se observo respuesta hacia la formacion de callo en los medios donde se adicionaron reguladores de crecimiento (MS2 y MS3). Al mes de cultivo, se aprecio un callo granular de consistencia friable y coloracion de amarillenta a marron hacia los extremos del explante. A los tres meses de cultivo, se obtuvo un 74 % de explantes con callo en el medio MS2 y un 38 % en el medio MS3 (Cuadro 2). Al septimo mes de cultivo, el porcentaje de explantes con callo era de 84 % en el medio MS2 y 76 % en el MS3. Amin et al. (2005), tambien reportan induccion de callogenesis en A. comosus cv. Giant Kew a partir de bases de hojas a la cuarta semana de cultivo, pero en un medio MS con 2,0 mg x [L.sup.-1] de 2,4-D (no usan ANA) y 2,0 mg x [L.sup.-1] de BA, logrando un maximo de 95 % de callo formado. Un mejor tiempo de respuesta fue el reportado por Sripaoraya et al. (2003) quienes indican la formacion de callos a los 14 dias de cultivo a partir de bases de hojas de pina cv. Phuket, en medio MS suplementado con 2,4-D y BA pero en concentraciones diferentes (0,5 y 2,0 mg x [L.sup.-1], respectivamente).

Analisis morfologico e histologico de los eventos morfogenicos. A los tres meses de cultivo los callos formados comenzaron a mostrar meristemoides o regiones localizadas de celulas en division activa, los cuales se asemejan a meristemas verdaderos. Estas zonas se encontraban en el interior del callo y estaban compuestas por celulas pequenas, isodiametricas, con citoplasma denso, vacuolas pequenas y nucleos prominentes. Los meristemoides son los centros de origen de brotes en algunos casos, o de raices en otros, dependiendo del balance hormonal inducido en el tejido.

En la Figura 1 se observa el corte transversal de un brote formado en el medio MS3 a partir de callo organogenico y en otras secciones del tejido (no publicadas), pudimos observar la conexion vascular entre el brote neoformado y el tejido del callo que le dio origen. Un proceso similar se observo en los brotes formados en medio MS2.

Es interesante destacar que en la etapa de regeneracion, pudo apreciarse la formacion de raices y brotes en un mismo explante (Figura 2A) y en otros explantes ocurrio la formacion solamente de raices (Figura 2B) o brotes (Figura 2C)

[FIGURA 1 OMITIR]

[FIGURA 2 OMITIR]

Aproximadamente a los 4 meses se obtuvieron los primeros brotes en ambos medios, siendo de mayor tamano los brotes obtenidos en el medio de cultivo MS2 (con BA) en un mismo lapso de tiempo. En este medio se obtuvieron 2,92 brotes por explante, valor mayor que el 0,67 brotes por explante obtenido en el medio MS3 (sin BA). Con respecto a las raices, en MS2 se obtuvo un promedio por explante de 0,32 raices mientras que en MS3 el promedio fue de solo 0,08 raices. El promedio de brotes por explante en ambos medios de cultivo (MS2 y MS3) fue mayor al promedio de raices por explante (Cuadro 2).

Los brotes en general eran de color verde y a los 15 dias de cultivo, tenian una tamano promedio de 2 mm en ambos medios (Figura 3A), a los 7 meses los brotes en el medio MS2, alcanzaron una altura maxima de aproximadamente 8 cm (Figura 3B), mientras que los brotes en el medio MS3, alcanzaron una altura maxima de 6,7 cm.

En relacion a la formacion de raices, la Figura 4A muestra la formacion de raices a partir de callos, provenientes de explantes de hojas de la pina 'Espanola Roja' cultivados en el medio MS2, mientras que la Figura 4B, corresponde a la formacion de una raiz en la superficie del explante foliar, sin la formacion de callo, en el medio de cultivo MS3.

A los 7 meses de cultivo, en el medio MS2 se obtuvo un promedio de 1,34 raices por explante y un promedio de 4,7 brotes por explante. En el analisis estadistico se encontraron diferencias significativas entre los dos tratamientos aplicados (MS2 y MS3) con respecto a la formacion de brotes, mientras que no hubo diferencias significativas entre ambos medios de cultivo para la formacion de raices (Cuadro 2).

[FIGURA 3 OMITIR]

[FIGURA 4 OMITIR]

Estos resultados son comparables a los citados por Almeida et al. (1997) quienes trabajaron con el hibrido PExSC-52 y el cv. Cayena Lisa, y reportaron que con 2 mg x [L.sup.-1] de BA se obtiene la proliferacion de brotes en el hibrido y que la combinacion de la misma concentracion de BA con 2 mg x [L.sup.-1] era necesaria en 'Cayena Lisa'. Firoozabady y Gutterson en el 2003 tambien obtuvieron brotes de pina in vitro via organogenesis, utilizando la misma combinacion hormonal pero en diferente concentracion (1,5 mg x [L.sup.-1] de BA y 0,5 mg x [L.sup.-1] de ANA) en medio MS. Igualmente, Sripaoraya et al. (2003) obtuvieron brotes a partir de bases de hojas cultivadas en medio MS suplementado con la combinacion de 0,5 mg x [L.sup.-1] de 2,4-D y 2,0 mg x [L.sup.-1] de BA.

Amin et al. (2005) usando un medio MS suplementado con una combinacion de auxinas y citocininas (0,1 mg x [L.sup.-1] de ANA y 1,0 mg x [L.sup.-1] de BA), regeneraron brotes de pina obtenidos a partir de callo organogenico logrando un promedio de 18,55 brotes por explante a las seis semanas de cultivo.

El 2,4-D es una auxina empleada usualmente en la induccion de la embriogenesis somatica, sin embargo la presente investigacion arrojo resultados hacia la induccion de la genesis de organos, produciendo la formacion de brotes mediante organogenesis indirecta y de raices mediante organogenesis directa. Sin embargo, a pesar de que se logro la induccion de la organogenesis en este medio (MS3), los resultados obtenidos en relacion a produccion de brotes son inferiores (0,67 brotes por explante). En relacion a los valores alcanzados en el medio MS2 (4,7 brotes por explante), el medio de cultivo MS2 resulto ser mas eficiente en la produccion de brotes y raices.

Roostika y Mariska (2003) establecieron un sistema de organogenesis en pina empleando yemas apicales cultivadas en un medio MS suplementado con 5 mg x [L.sup.-1] de ANA y 0,25 mg x [L.sup.-1] de BA (igual al medio MS2 empleado en esta investigacion), obteniendo un 99 % de brotes via organogenesis directa y un 86 % de brotes via organogenesis indirecta. A diferencia de ellos en la presente investigacion no se observo diferenciacion directa de brotes mediante organogenesis, y esto puede deberse a la diferencia de los explantes utilizados, ellos utilizaron yemas apicales, tejidos menos diferenciados que las bases de hojas, usadas como explantes en esta investigacion.

Aclimatacion de las plantas regeneradas. Al final de los 3 meses que duro el periodo de aclimatacion, del total de 30 plantas que fueron transferidas a un sustrato compuesto con tierra negra y arena lavada en proporcion 1:1, y mantenidas en los propagadores, se obtuvo un 100 % de supervivencia, alcanzando medidas entre 9 y 15 cm de altura (Figura 5). Este resultado es similar al obtenido por Garcia et al. (2008) quienes observaron un 100 % de supervivencia de plantas micropropagadas de pina 'Espanola Roja', empleando un sustrato con igual composicion que el usado en la presente investigacion.

[FIGURA 5 OMITIR]

Por otra parte, Dal Vesco et al. (2001), realizaron trabajos en plantas micropropagadas in vitro de pina cv. Perola, evaluando diferentes factores tales como el tamano de las plantas a aclimatar y la composicion del sustrato (compost organico y arena en proporcion 5:1), encontrando que independientemente del sustrato empleado, la tasa mas alta de supervivencia (93,8 %) se obtuvo cuando los brotes aclimatados eran de mas de 7 cm de altura, lo cual es una medida similar a los 6 cm de altura promedio con los cuales se realizo la transferencia a tierra de las plantas aclimatadas en la presente investigacion.

En estudios realizados por Moreira et al. (2006) en plantas micropropagadas de pina 'Perola', se indica la obtencion de mejores resultados empleando tres tipos de sustratos: compost organico, una combinacion de 50 % de tierra negra y 50 % de estiercol bovino y una combinacion de 40 % de tierra negra, 30 % de estiercol bovino y 30 % de Plantmax (turba negra comercial cribada y tratada), obteniendo un 95 % de supervivencia en los tres casos reportados. Sin embargo, en la aclimatacion realizada en esta investigacion, se obtuvieron resultados superiores para la pina 'Espanola Roja' (100 % de supervivencia), sin emplear compuestos adicionales, lo cual encareceria el costo de produccion de las plantas.

Caracterizacion morfoanatomica de hojas de las plantas madres y de las plantas regeneradas

En el estudio morfoanatomico comparativo de las hojas de las plantas madres y de las plantas regeneradas se lograron observar algunas diferencias importantes, sobre todo con la planta madre ex vitro (Cuadro 3 y Figura 6 A,B,C,D). Por ejemplo, la hoja de la planta madre ex vitro mantenida en vivero fue la unica que presento antocianinas (Figura 6A) y hubo ausencia de espinas en la planta hija in vitro obtenida por organogenesis (Figura 6D).

[FIGURA 6 OMITIR]

La Figura 7 muestra detalles de la cuticula, epidermis, hipodermis mecanica, hipodermis acuifera y parenquima acuifero, de las hojas de plantas en las diferentes condiciones de cultivo. En las hojas de plantas cultivadas y mantenidas in vitro (madres e hijas) (Figura 7 B,D), se pudo observar una cuticula poco desarrollada, en comparacion con las hojas de las plantas madres mantenidas ex vitro (Figura 7 A,C). En las secciones transversales de la lamina foliar de las plantas mantenidas in vitro, se observo una hipodermis acuifera y un parenquima acuifero, constituido por celulas redondeadas de menor tamano y menor numero de capas que las de las plantas ex vitro. Por otra parte, la hipodermis mecanica, esta presente unicamente en la planta madre ex vitro. En plantas mantenidas in vitro de Ananas comosus cv. Perola, tambien se reporta la presencia de una hipodermis y parenquima acuifero menos pronunciado (Santa Cruz et al., 2006).

Se podria sugerir que la presencia de hipodermis y parenquima acuifero, es un caracter fijado geneticamente y muestra plasticidad fenotipica en el numero de capas y tipos celulares. Es posible que el poco desarrollo de los mismos en las plantas in vitro, en comparacion con las plantas madres, sea efecto de las condiciones de iluminacion controladas y humedad alta. Sin embargo, la presencia, aunque en menor proporcion, de hipodermis y parenquima acuifero en las hojas de las plantas cultivadas in vitro, parece estar facilitando e incrementando la supervivencia de dichas plantas, cuando son transferidas a las condiciones de vivero.

En la Figura 8A se observa la hoja de la planta madre de la pina 'Espanola Roja' mantenida en vivero, mostrando una linea de haces vasculares, acompanados por dos lineas paquetes de fibras, ubicados uno a cada lado del mesofilo, mientras que en las hojas de la hija ex vitro y las de las otras dos condiciones, solo se observo una linea de haces vasculares principales y una de paquetes de fibras, a cada lado del mesofilo (Figura 8B).

En las secciones transversales de la lamina foliar de plantas micropropagadas de pina cultivadas in vitro y en el vivero, se pudo observar que estas presentaron un mesofilo homogeneo, sin diferenciacion en empalizada y esponjoso (Figura 8), contrariamente al mesofilo dorsiventral, reportado por Santa Cruz et al. (2006) para otras especies. En las dos condiciones de cultivo, la lamina foliar presento un parenquima acuifero constituido por celulas grandes redondeadas, con paredes delgadas, planas o con leves ondulaciones. Pacheco et al. (2008) reportan que existe en el mesofilo una diferenciacion entre parenquima de empalizada y esponjoso para Ananas comosus var. Erectifolius.

[FIGURA 7 OMITIR]

[FIGURA 8 OMITIR]

En las hojas de las plantas madres de pina del presente estudio, los paquetes de fibras extravasculares en conjunto con la epidermis, hipodermis mecanica y casquetes de fibras perivasculares, aumentan la rigidez foliar, ofreciendo un sosten mecanico, posiblemente como agente de proteccion del mesofilo durante condiciones de estres termico e hidrico (Krauss, 1949; Pyykko, 1966; Brighigna et al., 1984). Se puede sugerir que la reduccion de las fibras extra y perivasculares, es explicado por las condiciones de cultivo: alta humedad ambiental y baja intensidad de luz a las que estan sometidas las plantas de pina cultivadas in vitro. Estas plantas mantenidas in vitro, mostraron alteraciones anatomicas como: reduccion del engrosamiento de paredes de las celulas que intervienen en el sosten de la planta, presencia de tricomas glandulares, cuticula no distinguible, ausencia de acanalamiento en la epidermis inferior, reduccion de las capas de hipodermis acuifera y ausencia de aerenquima. Santa Cruz et al. (2006) tambien reportan ausencia de aerenquima en hojas de pina mantenidas in vitro. Aparentemente, las plantas de pina in vitro, no requieren de las ventajas que ofrece el aerenquima como la flexibilidad y mayor circulacion de aire en la lamina foliar, como fue sugerido por Mauseth (1988) para plantas crecidas en campo.

En la Figura 9 se observa un corte transversal de las hojas de la planta madre de la pina 'Espanola Roja', en el cual se observaron cavidades aeriferas (aerenquima), ubicadas entre los haces vasculares, lo cual no se observo en ninguna de las otras hojas estudiadas.

La Figura 10 A,B muestra escamas peltadas multicelulares en la cara adaxial de la epidermis de las plantas creciendo en condiciones in vitro, esto se observo tambien en las plantas ex vitro.

Segun Tomlinson (1969) las escamas peltadas representan una variacion natural distintiva para la familia Bromeliaceae.

[FIGURA 9 OMITIR]

[FIGURA 10 OMITIR]

En la Figura 11 A,B se muestran cristales de oxalato de calcio tipo rafidio, en las hojas de plantas de pina estudiadas, los cuales se encuentran con frecuencia en la hipodermis acuifera.

Proenca y Sajo (2007) reportan idioblastos que contienen cristales de oxalato de calcio, tipo rafidio, los cuales fueron encontrados en la hipodermis acuifera. Estos cristales son particularmente abundantes en las hojas de las plantas cultivadas in vitro y esto puede corresponderse a la composicion del medio de cultivo, el cual es rico en minerales como el calcio. Tomlinson, (1969); Sousa et al. (2005), Proenca y Sajo (2007) reportan que dichos cristales pueden tener caracter diagnostico para la familia Bromeliaceae.

Es bastante conocido que el fenotipo de las plantas que crecen en condiciones in vitro esta caracterizado por presentar, respecto a aquellas desarrolladas en ambientes ex vitro; tallos mas delgados, menor cantidad de ceras cuticulares y epicuticulares, reduccion de tejidos mecanicos de soporte, incremento de contenido de agua en las celulas, escasa capacidad fotosintetica, estomas con baja funcionalidad y crecimiento heterotrofo o mixotropo, lo cual indica que los cambios fenotipicos son inducidos por las condiciones de cultivo, es decir, como respuesta a la ausencia de factores estresantes que si se presentan en los viveros y en el campo (Agramonte et al., 1998; Hazarika, 2006).

[FIGURA 11 OMITIR]

En consecuencia, se quiere resaltar que las caracteristicas antes mencionadas, se presentaron en todas las plantas cultivadas y mantenidas in vitro, sin embargo, las mismas se revirtieron al realizar la aclimatacion. Esto sugiere que las plantas presentaron plasticidad fenotipica y que dichas diferencias corresponden a cambios inducidos por las condiciones del cultivo in vitro y no por el proceso de regeneracion al cual fueron sometidas.

CONCLUSIONES

En la pina 'Espanola Roja' se observo la formacion de raices y/o brotes en los explantes colocados en los medios para induccion de callo, sin necesidad de transferirlos a un medio de induccion de brotes. En el medio de cultivo MS2 (5 mg x [L.sup.-1] ANA y 0,25 mg x [L.sup.-1] BA) se observo la formacion de raices y vastagos via organogenesis indirecta y en el medio MS3 (2,5 mg x [L.sup.-1] 2,4-D) se produjo rizogenesis directa y formacion de brotes mediante organogenesis indirecta.

En esta investigacion se obtuvo un 100 % de plantas aclimatadas, empleando para ello, un sustrato compuesto con tierra negra y arena lavada, en proporcion 1:1.

El patron anatomico foliar observado es el tipico de la familia Bromeliaceae. Entre los haces vasculares, se observan canales de aerenquima y paquetes de fibras extravasculares, ausentes en las vitroplantas.

Los caracteres morfoanatomicos foliares que exhibieron alteraciones en las plantas de pina obtenidas in vitro se revirtieron en el proceso de aclimatacion y posteriormente al pasarlas a condiciones de vivero. En consecuencia, parecen ser cambios fenotipicos temporales, producto de las condiciones del cultivo in vitro y no del proceso de regeneracion al cual fueron sometidas.

El analisis morfoanatomico foliar es una herramienta que permitio evaluar los efectos de las condiciones del cultivo in vitro sobre las plantas de pina micropropagadas.

Recibido: Febrero 5, 2012

Aceptado: Septiembre 3, 2012

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Adriana Pineda (1), Teresa E. Vargas (1), Marcia Escala (2) y Eva de Garcia (1)

(1) Instituto de Biologia Experimental, Facultad de Ciencias, Universidad Central de Venezuela. Caracas. Venezuela. e-mail: eva.cristina.garcia@gmail.com
Cuadro 1. Reguladores de crecimiento utilizados para la induccion de
organogenesis en pina 'Espanola Roja'

Medio de   Reguladores de crecimiento
cultivo          ANA               BA               2,4-D
           (mg [L.sup.-1])   (mg [L.sup.-1])   (mg [L.sup.-1])

MS1              --                --                --
MS2               5               0,25               --
MS3              --                --                2,5

MS1 (medio control); MS2 (medio de Roostika y Marisma, 2003);
MS3 (medio propuesto por los autores)

Cuadro 2. Efecto del medio de cultivo sobre el proceso de
organogenesis en segmentos de bases de hojas de pina 'Espanola Roja'
a los tres y siete meses de cultivo

Medio de   Formacion de   Promedio de   Promedio de   Indice de
cultivo     callo (%)     raices por    brotes por    formacion
                           explante      explante     de brotes

                          Tres meses de cultivo
MS1             0              0             0            0
MS2            74 a         0,32 a        2,92 a        2,29
MS3            38 b         0,08 a        0,67 b        0,49

                          Siete meses de cultivo
MS1             0              0             0            0
MS2            84 a         1,34 a         4,7 a        3,85
MS3            76 a         0,46 a        0,98 b        0,71

MS1, MS2 y MS3 segun el Cuadro 1. Medias con letras distintas en una
variable indican diferencias significativas segun la prueba de Duncan
(P<0,05)

Cuadro 3. Caracterizacion morfoanatomica de hojas de plantas madre e
hija de pina 'Espanola Roja'

                               Planta madre
Caracteristicas           Ex vitro      In vitro
morfologicas y                        obtenida por
anatomicas                             induccion
                                        de yemas

Coloracion de la hoja      Rojiza        Verde
Margen espinoso          Presencia     Presencia
Cuticula                   Gruesa       Delgada
Presencia de escamas     Presencia     Presencia
  peltadas
Cristales tipo rafidio   Presencia     Presencia
Lineas de paquetes de    Dos lineas    Una linea
  fibras
Aerenquima               Presencia      Ausencia
Hipodermis mecanica      Presencia      Ausencia

                                 Planta hija
Caracteristicas            Ex vitro        In vitro
morfologicas y           obtenida por    obtenida por
anatomicas               organogenesis   organogenesis

Coloracion de la hoja        Verde           Verde
Margen espinoso            Presencia       Ausencia
Cuticula                    Delgada         Delgada
Presencia de escamas       Presencia       Presencia
  peltadas
Cristales tipo rafidio     Presencia       Presencia
Lineas de paquetes de      Una linea       Una linea
  fibras
Aerenquima                 Ausencia        Ausencia
Hipodermis mecanica        Ausencia        Ausencia
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Author:Pineda, Adriana; Vargas, Teresa E.; Escala, Marcia; de Garcia, Eva
Publication:BIOAGRO
Date:Jul 1, 2012
Words:5627
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