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Obtencion, evaluacion y manipulacion del semen de verraco en una unidad de produccion mexicana.

Introduccion. El objetivo de esta comunicacion fue presentar a la comunidad veterinaria las tecnicas de obtencion, manipulacion, conservacion, dilucion y evaluacion del semen de verraco, asi como la adecuacion del espermograma y el reporte de las principales anomalias detectadas. Se detalla la experiencia recogida a traves del tiempo en varias unidades de produccion porcina vinculadas a facultades de veterinaria de universidades mexicanas, en el convencimiento de que si bien el tema es muy conocido en el ganado bovino, esta menos difundido para los porcinos. Las descripciones se iniciaran con las instalaciones necesarias para la obtencion del semen.

El area de recoleccion. Potro. El local de recoleccion debe estar limpio y debe ser facil de desinfectar (9). Tambien debe ser lo suficientemente amplia para brindar seguridad y confort para el operador, quien debera trabajar de pie (2, 8). El suelo debe lavarse diariamente (eliminando heces, semen y otros desechos). Semanalmente, la limpieza (Figura 1) deberia incluir una desinfeccion de suelo, paredes, "potro" y otros materiales utilizados en las maniobras.

El "potro" (Figura 2) debe ser solido y estar fijo al suelo para poder resistir el peso del verraco y sus embates durante la fase de excitacion; debe admitir la posibilidad de ajustar la altura y regular la inclinacion para adaptarse al tipo de verraco. Debe admitir un facil acceso del operador para manipular el prepucio y estar dotado de un recubrimiento que pueda ser higienizado pero que a la vez permita conservar el olor del verraco para su estimulacion (2, 8) . La utilizacion de una alfombra en la parte trasera del potro puede evitar resbalones, permitiendole al verraco un buen salto en el primer intento (9).

[FIGURA 1 OMITIR]

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Material para colectar el semen. Preferentemente, el eyaculado debe depositarse en vasos de carton tapados con gasa medica (Figura 3) o filtro de papel. Los mejores resultados se obtienen con gasa doblada en varios grosores (x4, x8) y ajustada al vaso con una banda elastica (2, 8). Tambien puede usarse bolsitas plasticas desechables o vasos de precipitado (de vidrio), aunque estos ultimos requieren ser previamente esterilizados. Sean cuales fueren los envases elegidos, antes de la recoleccion deberan ser colocados dentro de un termo calibrado a 30 [grados]C (2, 9).

Para evitar el choque termico del semen, debe disponerse de un termo identificado con los datos del verraco. El termo debe limpiarse tras cada recolecta y antes de utilizarlo debe precalentarse en un ambiente estanco a 38 [grados]C (p.ej. un armario cercano al local de recoleccion, con aislamiento de telgopor, en el que se instala un foco conectado a un termostato fijado a 38 [grados]C, configurando un area de almacenamiento tibia, seca y libre de polvo (2, 9).

Todas las manipulaciones deberan ser efectuadas empleando guantes de polivinilo no empolvados. Evitar el uso de guantes de latex para cirugia (empolvados), ya que el polvo utilizado puede danar a los espermatozoides. Una vez colocado los guantes y para evitar la contaminacion, no se debe tocar al verraco, instrumental, instalaciones o cualquier otra cosa excepto el pene del cerdo (9).

Preparacion del verraco. Dado que el prepucio constituye una potencial fuente de contaminacion, es necesario higienizarlo y cortar los pelos mas largos e higienizarlo. El masajeo que implica esta maniobra favorecera la estimulacion sexual. Se recomienda que esta labor sea realizada con guantes de polivinilo exentos de talco (2, 8). Acto seguido se acondicionara el "potro" donde eyaculara el verraco, que usualmente no se resiste ni plantea ningun problema, especialmente si esta entrenado. Es imperativo que el "potro" se encuentre bien ajustado y fijado al piso, caso contrario el animal puede fallar en su intento y resistirse a montas ulteriores. Resulta conveniente que los componentes de la "cabalgadura" emitan olores "estimulantes" para el cerdo, lo cual se consigue impregnando un pano con semen u orina de cerdas en celo (9).

Obtencion del semen. Para la tecnica de recoleccion por mano enguantada los pasos a seguir son: asegurar que el recipiente (termo) este identificado con el numero del verraco; esperar que el pene sobresalga del prepucio mientras el verraco se excita sobre el potro; tomar el pene con la mano (sin apretar) para que el verraco se acostumbre al contacto; mantener el pene horizontalmente para evitar derrames sobre las manos, capaces de contaminar la colecta; excitar la extremidad del pene con los dedos pulgar o menique; cuando el pene sobresalga del prepucio, apretar la extremidad del pene teniendo la precaucion de dejar sobrepasar la punta fuera de la mano (Figura 4) (9).

Al comienzo de la eyaculacion se debe seguir apretando la extremidad del pene, aplicando presion discontinua para estimular la eyaculacion. Desechar la primera parte del eyaculado (fraccion pre-espermatica: fluido claro, acuoso y con elevado recuento bacteriano). Recoger la fraccion siguiente (fraccion espermatica, rica en espermatozoides, reconocible como un fluido blanquecino) en un vaso de carton tapado con gasa. Esta porcion contiene el 80-90% de todas las celulas espermaticas presentes en el eyaculado. La emision debera ser recolectada hasta que su aspecto cambie a un fluido mas claro y acuoso (fraccion post-espermatica), el cual debera ser desechado. Es necesario llegar siempre al final de la eyaculacion, que dura de 5 a 20 minutos, y esperar la retractacion del pene. Por ultimo, pulverizar el pene y el prepucio con una solucion de clorhexidina para desinfectarlos. El termo debera ser colocado (dentro de los 15 minutos posteriores a la recoleccion del eyaculado), en una camara o ambiente a 37 [grados]C .

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Fracciones del eyaculado. Las primeras secreciones (10-15 ml) corresponden a la "fraccion pre-espermatica", un liquido procedente de las glandulas bulbouretrales o de Cowper, a menudo contaminado ya que es el primero en atravesar las vias genitales terminales. La "fraccion espermatica" es rica en espermatozoides y su volumen varia entre 50 y 150 ml, dependiendo de factores como estacion del ano, duracion del dia, temperatura exterior, medio ambiente social, nutricion, raza, edad y tamano de los testiculos. Es un fluido de color blanco lechoso, constituido principalmente por espermatozoides y secreciones de las vesiculas seminales y prostata. La ultima fraccion (post-espermatica) es pobre en espermatozoides y su volumen puede alcanzar 200-300 ml. Procede esencialmente de la prostata y glandulas de Cowper. Es de color blanquecino transparente y presenta abundantes grumos. Durante la recolecta el semen puede llegar a aglutinarse, por lo que se propone la utilizacion de 80-100 ml de cualquier diluyente comercial para semen de cerdo precalentado a 37 [grados]C en el fondo del vaso o bolsa de recolecta (2, 8, 9). Una vez recolectado, el semen debera permanecer durante varios minutos en camara estanca a 37 [grados]C. Durante todo el examen debera ser mantenido a 35-37 [grados]C en bano maria (1-3, 8).

Factores que afectan la calidad seminal. El estres termico es la primera causa de variacion de la calidad del semen, en particular en zonas con clima continental, donde las variaciones termicas pueden ser importantes. Una amplitud de 10 [grados]C junto a una temperatura ambiental maxima por encima de los 27 [grados]C tendra repercusiones sobre la calidad del semen (1, 3, 8) . Tambien deben tenerse en cuenta la raza y la edad. No todas las razas ostentan similares manifestaciones de libido ni analogos niveles cuali-cuantitativos de produccion seminal.

A veces, algun problema fisico inherente a la raza es capaz de afectar la recoleccion de semen, como en los verracos de raza Pietrain, cuya conformacion muscular puede limitar el salto sobre el potro, sobre todo al envejecer (8, 9, 11) Otros factores que inciden negativamente son los ritmos de recoleccion demasiado frecuentes, el tipo de alimentacion, la aparicion de patologias y otros factores sobre los cuales aun no se conocen debidamente sus efectos, como el fotoperiodo (ritmo nictameral), aconsejandose lapsos de 12-14 h de luz natural, de ser necesario completados con luz artificial (11, 12).

Valoracion de volumen y color. En primera instancia deberan estimarse las caracteristicas macroscopicas del eyaculado. El volumen se determinara en una probeta o en las propias bolsas plasticas graduadas. Debera observarse si el color es normal (blanco lechoso) o bien si aparecen otras tonalidades, indicativas de alteraciones patologicas del aparato reproductor o contaminaciones con orina durante la eyaculacion (8, 10, 11).

Motilidad. Para este examen microscopico se requiere utilizar una cantidad muy pequena de semen, a efectos de evitar la formacion de "capas" de espermatozoides en el portaobjetos. Luego de homogeneizar el eyaculado (manualmente o con un agitador de vidrio), se tomara una muestra con un tubo capilar o una micropipeta automatica, o bien empleando la "tecnica de las tres gotas" (11, 12). Una vez depositada la muestra se tapara con un cubreobjeto y se colocara sobre la platina del microscopio, para evaluar los movimientos de los espermatozoides (a 200x) (1, 2, 8).

La estimacion de la motilidad espermatica indicara la capacidad de movimiento de los espermatozoides, valorando la motilidad individual. Se trata de una evaluacion cuali-cuantitativa que estima la tasa de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100%) y la calidad (tipos) de motilidad (escala de 0 a 5) (11, 12). Los espermatozoides inmoviles deberan considerarse "muertos". La tasa de espermatozoides vivos se calculara por diferencia entre la estimacion inicial del numero total de espermatozoides de un campo del microscopio, menos el numero de espermatozoides inmoviles del mismo campo. Es aconsejable realizar esta maniobra en varios campos del microscopio. Debido a la dificultad de expresar numericamente la cantidad de espermatozoides vivos, la valoracion se expresa en porcentajes (1, 2, 8, 12).

La calidad seminal puede expresarse en funcion del tipo de motilidad (desplazamiento) de los espermatozoides vivos, partiendo de la hipotesis que indica que cuanto mas rapido y rectilineo sea el desplazamiento, mayor sera su potencial fecundante. Existe una escala valorativa que consta de cinco categorias, 1: ligero temblor de los espermatozoides, 2: trayectos sinuosos con desplazamientos muy lentos, 3: trayectos sinuosos con desplazamiento bien visible, 4: 50% de trayectos rectilineos con un desplazamiento muy rapido, y 5: 100% de los trayectos rectilineos con desplazamientos muy rapidos (1, 3, 8).

Ademas de estas tecnicas de valoracion subjetiva existen otros metodos mas sofisticados apoyados en sensores electricos y tecnicas fotoelectricas computarizadas, que permiten obtener indicadores del movimiento espermatico tales como velocidad, tipo de movimiento, trayectoria recorrida y desplazamiento angular, entre otros (8, 9, 11). Sin embargo, estos sistemas tienen inconvenientes al ser utilizados con espermatozoides de verraco, debido a su alta variabilidad en funcion de la temperatura, actividad inhibitoria del plasma seminal y concentracion espermatica (1, 3, 8).

Anomalias. Las principales son la presencia de impurezas en el semen y los fenomenos de aglutinacion. Esta ultima es el acumulo de espermatozoides (muertos o vivos), que pueden estar adheridos a celulas epiteliales o bien, unidos cabeza con cabeza. Este fenomeno (Figura 5) puede ser observado tanto en el eyaculado fresco, como en el semen diluido (11, 12).

El grado de aglutinacion suele medirse en una escala de 0 a 3. El grado 3 corresponde a mas de un 30-40% de espermatozoides aglutinados. En algunas ocasiones, la presencia de aglutinacion leve (de 0 a 2), desaparece al realizar la mezcla del eyaculado con el diluyente, merced a la estabilizacion quimica que proporciona este ultimo, observandose posteriormente, una disminucion del grado de aglutinacion (1, 3, 8). Entre las posibles causas de aglutinacion pueden consignarse: presencia de restos de gel procedente de las glandulas bulbouretrales (filtrado defectuoso), concentracion muy elevada de espermatozoides en el eyaculado, mala calidad espermatica (espermatozoides muertos o con baja vitalidad), shock termico por manipulacion inadecuada del semen, contaminacion bacteriana del eyaculado (bacterias resistentes a la gentamicina pueden provocar aglutinacion en el semen), presencia de gran cantidad de celulas epiteliales o descamaciones y cambios en el pH del plasma seminal, generalmente asociados a procesos inflamatorios o disfunciones que afectan a las glandulas accesorias del verraco.

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Las gotas citoplasmicas son residuos del citoplasma normal de la fase de maduracion epididimaria y se clasifican en dos grupos principales (1, 2, 8). Las gotas proximales deben considerarse como verdaderas anomalias ya que se deben a una falla de maduracion, la cual se asocia generalmente a la ausencia de poder fecundante. Las gotas distales (Figura 6) a menudo desaparecen algunas horas despues de la recoleccion o durante la conservacion en frio; se trata de un indicador a ser considerado "con indulgencia" ya que corresponde a una falta de maduracion mucho mas leve.

Los flagelos torcidos o enroscados sobre si mismos (Figura 7) son anomalias importantes ya que los espermatozoides afectados no podran desplazarse en el momento de la fecundacion (8, 9, 11).

Las anomalias del acrosoma son las mas importantes para evaluar el poder fecundante, ya que de la integridad del acrosoma depende el reconocimiento por parte del ovocito y la penetracion en la membrana pelucida. La apreciacion del acrosoma requiere de una amplia experiencia y de un examen en contraste de fases (1, 3, 8).

Los limites permitidos para las diferentes anomalias son: un minimo de 70% de espermatozoides vivos, motilidad con calificacion minima de 3 y un maximo de anomalias compuestas de gotas proximales y flagelos torcidos del 20%. Para la integridad acrosomal el porcentaje maximo de lesiones permitidas sera tambien del 20% (8, 9, 11).

Recuento de espermatozoides. Permite determinar, para el total eyaculado, el numero optimo de dosis utilizables (con 3 mil millones de espermatozoides vivos). En nuestras unidades de produccion porcina el metodo mas utilizado es el recento en camara. Para ello, 1 ml de semen se mezcla con 99 ml de solucion de recuento (citrato de sodio 3,4% tratado con formol). Una gota de este preparado sera depositado con una micropipeta, sobre la camara de recuento. Se contaran unicamente las cabezas de los espermatozoides localizados en las cuatro cuadriculas que conforman las esquinas de la camara, a partir del margen superior izquierdo, desplazandose hacia la derecha.

La concentracion de espermatozoides se resolvera multiplicando: M x 400 x 10 x 200 x 10, teniendo en cuenta que M: media de espermatozoides contados, 400: superficie del cuadradito (1/400 [mm.sup.2]), 10: altura entre la camara y el cubreobjetos (1/10 mm) [cifra que puede variar segun el tipo de camara], 200: factor de dilucion, 10: conversion de [mm.sup.3] a ml. Para obtener el numero total de espermatozoides del eyaculado debera multiplicarse la concentracion/ml por la cantidad de ml colectados (1-3, 8, 9-12).

Dilucion del semen, diluyentes. Los diluyentes estan concebidos para aumentar el volumen del eyaculado y preservar la viabilidad de los espermatozoides. Basicamente proveen una fuente adecuada de nutrientes, un ambiente que proteja a los espermatozoides contra la disminucion de temperatura, electrolitos para mantener una adecuada presion osmotica, substancias buffer que protejan al semen contra cambios extremos de pH, y antibioticos que inhiban el crecimiento bacteriano (5).

El plasma seminal por si solo no asegura una conservacion duradera del semen. Por lo tanto, para poder conservar los espermatozoides durante periodos prolongados es necesario que se reduzca la actividad metabolica de los espermatozoides, mediante la dilucion en un medio adecuado y la reduccion de la temperatura. Las peculiares particularidades que presenta el espermatozoide porcino hace que sea muy sensible al shock por frio, el cual genera una alteracion de la viabilidad espermatica debido a que cuando se reduce la temperatura los movimientos laterales de los fosfolipidos que componen la membrana se ven reducidos y se producen separaciones de fases lipidicas, desencadenando alteraciones irreversibles en las proteinas de las membranas (2, 5).

Componentes de los diluyentes. Los diluyentes deben aportar los nutrientes necesarios para el mantenimiento metabolico de la celula espermatica (glucosa), protegerla frente al shock termico por frio (albumina serica bovina), controlar el pH del medio (bicarbonato, tri (hidroximetil) aminometano TRIS, acido N-(2-hidroxietil) piperazin-N'-(2-etanosulfonico) HEPES), mantener la osmolaridad (NaCl, KCl) e inhibir el desarrollo microbiano (antibioticos) (4, 6, 7).

El espermatozoide genera la energia necesaria para mantener su metabolismo celular y la motilidad del flagelo, principalmente a traves de las vias glicoliticas. Estos procesos se desarrollan en las mitocondrias localizadas en la pieza intermedia del espermatozoide. La glucosa es la fuente de energia mas frecuentemente utilizada en la composicion de los diluyentes, aunque similares resultados se obtienen empleando galactosa, fructosa, ribosa o trehalosa. Por su parte, el pH del semen recien eyaculado se encuentra proximo a 7,4 y su disminucion afecta el metabolismo energetico y la motilidad del espermatozoide. La glicolisis desplegada por la celula espermatica provoca la disminucion del pH intracelular y la concomitante reduccion del metabolismo celular, alteraciones que pueden ser controladas por medio de tampones (bicarbonato, citrato, TRIS, HEPES y otros) (3, 4, 6, 7, 9).

El espermatozoide porcino ostenta una presion osmotica de 290-300 mOsm/l y es capaz de tolerar desde 240 hasta 380 mOsm/l. Los rangos entre 250 y 290 mOsm/l no afectan la viabilidad espermatica, pero por debajo de 200 mOsm/l se produce una reduccion significativa de la motilidad. Los diluyentes isotonicos (300 mOsm/l) compuestos por sales sodicas y potasicas son los mas utilizados (5). Con el fin de prevenir o retardar alteraciones en la estructura de las membranas de los espermatozoides, los diluyentes suelen incluir "estabilizadores de membrana" (seroalbumina bovina BSA, hidroxi-tolueno butilado BTH, acido etilen-diaminotetra-acetico EDTA, polivinil pirrolidona PVP-40 y alcohol polivinilico (3, 9).

Los antibacterianos contenidos en los diluyentes seminales actuan controlando la contaminacion microbiana que se produce principalmente durante el proceso de la obtencion del semen. El agregado de antibioticos frena la proliferacion de germenes (E. coli, Salmonella sp., Pseudomonas sp. y otros) favorecida por la presencia de glucosa y por la temperatura de mantenimiento (15-16 [grados]C). La contaminacion bacteriana genera alteraciones como disminucion de la motilidad, aglutinacion espermatica, alteraciones del acrosoma y reduccion del pH hasta niveles acidos (5,7 a 6,4), que conducen a una reduccion del tiempo de conservacion de las dosis seminales. La adicion de penicilina y estreptomicina (1 g/l) fue en un principio la combinacion mas utilizada, posteriormente se emplearon con exito aminoglicosidos como gentamicina, neomicina y kanamicina, en concentraciones proximas a los 200 mg/l (2, 3, 5, 9).

La Oficina Internacional de Epizootias (OIE) aconseja que cuando los diluyentes contengan leche, yema de huevo u otras proteinas de origen animal, tales productos deberan estar libres de patogenos o esterilizados. Asimismo permite la adicion de antibioticos siempre que sean declarados. Por su parte, la Union Europea (UE, directiva 90/429) regula las normas aplicables a las importaciones de semen porcino postulando que se debera utilizar una combinacion de antibioticos eficaces contra leptospiras y micoplasma, cuya concentracion debera tener un efecto minimo equivalente a 500 UI de estreptomicina, 500 UI de penicilina y 150 mg de lincomicina por ml (4-7).

Tipos de diluyentes. Para semen de verraco, el diluyente base (de referencia) mas difundido es el Beltsville Thawing Solution, conocido como "BTS". Contiene 37 g/l de glucosa (aporte energetico), 6 g/l de citrato sodico y 1,25 g/l de EDTA (agentes quelantes estabilizadores de membranas), 1,25 g/l de bicarbonato sodico y 0,75 g/l de cloruro potasico (equilibrio ionico y pH), asi como 0,60 g/l de penicilina y l g/l de dihidroestreptomicina (antibacterianos). Variantes de esta formula son los "diluyentes para conservacion de corta duracion" (1 a 3 dias, utiles para ser preparados y utilizados en la misma granja) y "larga duracion" (mas de 4 dias), que se utilizan cuando es mas larga la distancia entre el lugar de produccion seminal y el lugar donde va a ser utilizado el semen. Los diluyentes empleados en los procesos de congelacion del semen porcino estan basados en la utilizacion de yema de huevo y glicerol como agentes crioprotectores, una concentracion elevada de azucares (glucosa, fructosa) y la adicion de un agente detergente (3, 4, 6, 7, 9).

Para que los diluyentes cumplan su cometido debera respetarse la tasa de dilucion estipulada. El efecto tampon y la accion protectora de membranas solo funcionaran con diluciones dentro del rango entre 1/10 y 1/25. Esta norma sera tanto mas importante cuanto mas largo sea el periodo de conservacion perseguido 2, 5 . Para evitar el shock termico, el semen debera verterse (lentamente) hacia el diluyente tras haber verificado que la temperatura de ambos fluidos sea compatible. Los tipos de almacenaje escogido (botellas flexibles, bolsas, equipos de inseminacion que incluyan dosis y cateteres) deben limitar al maximo el contacto entre el aire y el semen (anaerobiosis) (4, 6, 7).

Conservacion del semen. El metodo de referencia para la conservacion de semen de verraco a corto plazo, es la refrigeracion progresiva por etapas, a temperaturas entre 15 y 17 [grados]C, con el cual se logran buenos resultados en fertilidad (mayores del 90%), al contrario de lo que acontece en otras especies (vacas, ovejas, cabras) (8, 9, 11). La reduccion de la temperatura debe hacerse en 2-3 h, hasta que el semen alcance la temperatura ideal para su conservacion (15 a 17 [grados]C). La reduccion de la temperatura inducira disminucion del metabolismo y la motilidad espermatica, contribuyendo a frenar el crecimiento bacteriano (2, 5). Temperaturas inferiores a 14 [grados]C provocan alteraciones de la membrana espermatica y temperaturas superiores a 20 [grados]C no logran minimizar el metabolismo espermatico ni detener el crecimiento bacteriano, circunstancias que disminuyen la vida util del semen.

Para la conservacion a largo plazo (de 3 a 7 dias) es aconsejable: escoger los mejores verracos (por examen del semen, acrosomas, resistencia osmotica u otros); verificar la compatibilidad del diluyente y del verraco (a veces algunos diluyentes no son los convenientes para algunos verracos); escoger un diluyente para larga conservacion (que posea componentes capaces de controlar los residuos metabolicos y mantener la integridad de la membrana); aguardar un tiempo (una hora) para la adaptacion del semen diluido a temperatura ambiente (20-22 [grados]C) antes de empezar la refrigeracion; rotar 1-2 veces diarias las dosis para evitar los efectos nefastos de la sedimentacion (8, 9, 11).

REFERENCIAS

(1.) Ashok A. 2006. Correlation of reactive oxygen species levels with the fertilization rate after in vitro fertilization: a qualified meta-analysis. Fertil Steril 84: 228-231.

(2.) Carmona MM. 2004. Crecimiento y finalizacion del cerdo. Tesis de Maestria, Universidad Nacional Autonoma de Mexico, Mexico, 347 p.

(3.) Carvajal G, Cuello C, Ruiz M, Vazquez MJ, Martinez AE, Roca J. 2004. Effects of centrifugation before freezing on boar sperm cryosurvival. J Androl 25: 389-396.

(4.) Cerolini S, Maldjian A, Pizzi F, Gliozzi TM. 2001. Changes in sperm quality and lipid composition during cryopreservation of boar semen. J Reprod Fertil 121: 395402.

(5.) Cremades T, Roca J, Rodriguez MH, Abaigar T, Vazquez JM, Martinez E. 2005. Kinematic changes during the cryopreservation of boar spermatozoa. J Androl 26: 610-618.

(6.) Gadea J, Marco MA. 2003. Los diluyentes de inseminacion artificial porcina. Rev Investig Agric 1: 17-27.

(7.) Gadea J, Selles E, Marco MA, Coy P, Matas C, Romar R, Ruiz S. 2004. Decrease in glutathione content in boar sperm after cryopreservation. Theriogenology 62: 690701.

(8.) Gadea J. 2005. Sperm factors related to in vitro and in vivo porcine fertility. Theriogenology 63: 431-444.

(9.) Hazel LN. 2005. The science and practice of pig production. Tesis de Doctorado, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Nacional Autonoma de Mexico, 292 pp.

(10.) Sancho S et al. 2007. Effects of cryopreservation on semen quality and the expression of sperm membrane hexose transporters in the spermatozoa of Iberian pigs. Reproduction 134: 111-121.

(11.) Selles E, Gadea J, Romar R, Matas C, Ruiz S. 2003. Analysis of in vitro fertilizing capacity to evaluate the freezing procedures of boar semen and to predict the subsequent fertility. ReprodDomest Anim 38: 66-72.

(12.) Waterhouse KE, Hofmo PO, Tverdal A, Miller RR. 2006. Within and between breed differences in freezing tolerance and plasma membrane fatty acid composition of boar sperm. Reproduction 131: 887-894

Cordova Izquierdo, A. [1]; Perez Gutierrez, J.F. [2]; Mendez Hernandez, W. [3]; Villa Mancera, A.E. [4]; Huerta Crispin, R. [4]

[1] Departamento de Produccion Agricola y Animal, Universidad Autonoma Metropolitana, Unidad Xochimilco, Mexico, DF; [2] Facultad de Veterinaria, Universidad Complutense de Madrid, Espana; [3] Division de Ciencias Agropecuarias, Universidad Juarez Autonoma de Tabasco, Mexico; [4] Facultad de Veterinaria, Benemerita Universidad Autonoma de Puebla, Mexico. E-mail: acordova@correo.xoc.uam.mx

Recibido: 2 diciembre 2014 / Aceptado: 14 enero 2015
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Author:Cordova Izquierdo, A.; Perez Gutierrez, J.F.; Mendez Hernandez, W.; Villa Mancera, A.E.; Huerta Cris
Publication:Revista Veterinaria
Date:Jul 1, 2015
Words:4441
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