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Multiplicacion en sistemas de inmersion temporal y enraizamiento ex vitro de ocumo blanco (Xanthosoma sagittifolium (L.) Schott).

Multiplication in temporary immersion systems and ex vitro rooting of white cocoyam (Xanthosoma sagittifolium (L.) Schott)

Introduccion

Las tendencias actuales en la agricultura estan orientadas hacia la busqueda de especies de cultivo que contribuyan al abastecimiento de alimento a bajo costo, proteccion de los recursos naturales, equidad y alivio de la pobreza. El cultivo de especies con raices y tallos reservantes cumple en su mayoria con estos requisitos. Dentro del grupo de tallos reservantes comestibles de importancia agricola se encuentran los generos Xanthosoma y Colocasia de la familia de las Araceas (Blanco y Valverde, 2004).

Xanthosoma sagittifolium (L.) Schott es comunmente conocido en Venezuela como ocumo blanco, y como malanga, quequisque, taro o yautia en las Antillas, Centroamerica y Suramerica. Por el alto valor nutricional de sus cormos o cormelos puede ser sustituto de la papa y su contenido de almidon es superior al de la yuca; ademas, el tamano del grano de almidon es extremadamente pequeno (de 1 a 3 [micron]m), lo que le permite que se recomiende como dieta alimenticia por su alta digestibilidad (Lopez et al., 1995). En algunos paises las hojas del ocumo blanco son consumidas como hortaliza (Seganfredo et al., 2001).

La propagacion de este cultivo es asexual, a partir de la siembra de cormelos o fragmentos del cormo, esto tiene como ventaja el mantenimiento de la identidad y estabilidad genetica de la descendencia. Sin embargo, este metodo de propagacion tiene como desventaja la diseminacion de plagas y enfermedades virales, fungosas y bacterianas (Zeledon, 2006), que pueden disminuir el rendimiento del cultivo (Rodriguez et al., 1999). Una de las principales limitantes para la produccion de esta especie por los pequenos y medianos productores es la falta de semilla de calidad (Matheus et al., 2006). Esta limitacion puede ser satisfecha principalmente con la implementacion de tecnicas de propagacion in vitro a partir de yemas axilares y apices caulinares de ocumo (Saucedo et al., 2008).

En el protocolo de micropropagacion de cualquier especie, algunos puntos claves son: la fase de multiplicacion por ser la mas costosa debido al uso de agentes gelificantes y mano de obra especializada (Perez et al., 1998; Adelberg et al., 2007); la fase de enraizamiento, la mas voluminosa, pues en ella cada brote, esqueje o yema debe crecer y desarrollar un tallo o pseudotallo y las primeras raices (Orellana, 1998), y la fase de aclimatizacion, donde se registran las mayores perdidas de plantas como consecuencia del cambio brusco de condiciones ambientales controladas por un ambiente con temperaturas mas altas y humedad relativa mas baja, estresante para la vitroplanta (van Huylenbroeck et al., 1998).

Las principales medidas que pueden adoptarse para dar respuesta a lo anteriormente planteado son el uso de medios de cultivos liquidos como via para reducir los costos y posibilitar la automatizacion de la micropropagacion (Preil, 2005). Otra de las medidas es el enraizamiento ex vitro, que permitiria una reduccion de los costos de un 30 al 60% (Agramonte et al., 1998). Ademas, seria posible acortar el tiempo del protocolo de micropropagacion, con lo cual se generaria una reduccion de la utilizacion de instalaciones con condiciones controladas durante la fase de enraizamiento in vitro (Saucedo et al., 2008).

Considerando la gran importancia economica del ocumo blanco para Venezuela y paises de Centroamerica, Suramerica y el Caribe, asi como la utilidad de la micropropagacion como metodo de propagacion masiva de plantas, se realizo la presente investigacion, cuyo objetivo fue evaluar la multiplicacion de brotes de ocumo blanco en sistemas de inmersion temporal y el enraizamiento ex vitro de los mismos.

Materiales y metodos

Esta investigacion se llevo a cabo en el laboratorio de biotecnologia vegetal "Profa. Silvia Leon de Sierralta", de la Facultad de Agronomia de la Universidad del Zulia.

El material vegetal empleado en los ensayos lo constituyeron brotes de ocumo blanco (Xanthosoma Sagittifolium (L.) Schott) establecidos in vitro a partir de plantas madres obtenidas de la finca Casa de Zinc ubicada en sector la Alemania-Socuy, de la parroquia Jose Ramon Yepez, municipio Jesus Enrique Losada. Los ensayos se realizaron bajo las condiciones de cultivo: temperatura de 26 [+ o -] 1[grados]C, intensidad luminica de 215 [micron]mol.[m.sup.-2].[s.sup.-1], bajo luz blanca fluorescente continua, y humedad relativa promedio de 46%.

Tiempo y frecuencia de inmersion en la multiplicacion in vitro de ocumo blanco en sistemas de inmersion temporal tipo RITA[R]

Para desarrollar un metodo de micropropagacion eficiente en sistemas de inmersion temporal es esencial optimizar los parametros tecnicos para cada cultivo, siendo el tiempo y la frecuencia de inmersion los parametros mas criticos del sistema. Para determinar dichos parametros mediante un diseno factorial se evaluaron dos frecuencias (3 y 6 veces al dia), dos tiempos de inmersion (5 y 10 min), y un control en medio de cultivo semisolido para un total de cinco tratamientos. El sistema de inmersion temporal utilizado fue el tipo RITA[R] (recipiente de inmersion temporal automatizado, Cirad, Francia) cuyo funcionamiento y caracteristicas son descritas por Etienne y Berthouly (2002).

La repeticion la constituyo un RITA[R] y se evaluaron cuatro repeticiones por tratamiento, cada uno con 200 mL de medio de cultivo de MS y diez frascos de vidrio, con 25 mL de medio de cultivo gelificado con 6 g.[L.sup.-1] de Agargel (Sigma Co) como control. En cada RITA[R] se cultivaron seis brotes y en los frascos de vidrios tres explantes en cada uno.

En todos los tratamientos se emplearon brotes de un cuarto subcultivo (cada subcultivo de 4 semanas). El medio de cultivo estuvo constituido por las sales y vitaminas de MS (Murashige y Skoog, 1962), suplementado con 3 mg.[L.sup.-1] de N6-bencilaminopurina (BAP), 30 g.[L.sup.-1] de sacarosa. Despues de cuatro semanas de cultivo se evaluaron las variables: promedio de brotes totales, promedio de brotes menores a 5 mm, promedio de brotes mayores a 5 mm, altura del brote --medida en centimetros desde la base del cormo hasta la zona distal de la hoja del brote mas largo--, y el promedio de masa fresca, el cual se calculo dividiendo la sumatoria de la masa de los explantes por recipiente de cultivo entre el numero de explantes sembrados. En el momento de la siembra in vitro de los brotes se les realizo un corte transversal por encima del meristemo central, a una altura de 2,5 cm, a fin de homogeneizar su tamano.

Densidad de brotes de ocumo blanco en sistemas de inmersion temporal tipo RITA[R]

Con el fin de determinar la cantidad de propagulos de ocumo blanco para sembrar en cada unidad RITA[R], durante la fase de multiplicacion se evaluaron tres densidades de 6, 9 y 12 brotes por cada RITA[R]. El numero de repeticiones fue de cinco por cada densidad. El medio de cultivo utilizado fue similar al senalado en el experimento 1. A las cuatro semanas se evaluaron las variables:

Numero de brotes, numero de brotes mayores a 5 mm, y menores a 5 mm, altura del brote e indice de incremento de crecimiento (IIC). El IIC se calculo mediante la formula (Vilchez et al., 2009): IIC = (MT-MBI) x MBI-1, donde MT es la masa fresca total, que incluye la masa de todo el brote inicial, de los brotes emitidos y de las hojas, y MBI es la masa del brote inicial. Al igual que en el ensayo anterior, en el momento de la siembra in vitro de los brotes se les realizo un corte transversal por encima del meristemo central, a una altura de 2,5 cm a fin de homogeneizar su tamano; posteriormente, el grupo de brotes que conformaron cada repeticion se pesaron en una balanza de precision (Ohaus modelo Adventurer), constituyendo de esta manera la MBI. Transcurridas cuatro semanas de cultivo en los RITA[R], el grupo de brotes que conformaron cada repeticion se pesaron nuevamente en la balanza de precision, constituyendo esta pesada el MT.

En todos los ensayos el pH del medio de cultivo se ajusto a 5,8 con soluciones 0,5 M de NaOH o HCl segun el caso, y posteriormente fue esterilizado en autoclave a 121[grados]C y 1,1 kg.[cm.sup.-2] durante 20 min.

Enraizamiento ex vitro de brotes de ocumo blanco

Para inducir la formacion de raices adventicias en brotes de ocumo blanco se emplearon brotes provenientes de la fase de multiplicacion in vitro de un decimo subcultivo, los cuales se cultivaron previamente en medio de cultivo de MS libre de reguladores de crecimiento por un periodo de cuatro semanas. Esto con el fin de reducir el efecto de la citoquinina, favorecer el alargamiento de los brotes y homogeneizar su tamano a 5-6 cm de altura.

Los brotes se sembraron en bandejas de germinacion plasticas negras de 75 mL de capacidad por hoyo, bajo condiciones de camara humeda con una temperatura de 25[grados]C y 75% de humedad relativa. El sustrato utilizado fue una mezcla de arena lavada y abono rio (2:1). Este ultimo es un abono organico que resulta de la descomposicion del material vegetal acumulado en la desembocadura de los rios. Este sustrato se esterilizo en autoclave por un periodo de 60 min. Los tratamientos evaluados fueron tres combinaciones de acido indolacetico (AIA) y acido naftalenacetico (ANA), y un control sin auxina: T1. 125 mg.[L.sup.-1] de AIA + 125 mg.[L.sup.-1] de ANA; T2. 250 mg.[L.sup.-1] de AIA + 250 mg.[L.sup.-1] de ANA; T3. 500 mg.[L.sup.-1] de AIA + 500 mg.[L.sup.-1] de ANA; T4. 0 mg.[L.sup.-1] de AIA + 0 mg.[L.sup.-1] de ANA (Control).

La formulacion de los reguladores de crecimiento fue en forma de polvo. El numero de repeticiones por tratamiento fue de ocho y la unidad experimental estuvo constituida por tres brotes.

Como tratamiento preventivo los brotes fueron sumergidos por 5 min en una solucion fungicida constituida por Ridomil[R] (Metalaxil + Mancozeb) a razon de 3 g.[L.sup.-1], antes de la aplicacion de la combinacion de auxinas.

Despues de cuatro semanas se evaluaron las variables numero de raices, longitud de la raiz mas larga, porcentaje de brotes enraizados y porcentaje de sobrevivencia. Los porcentajes se calcularon con base en el total de brotes por repeticion. Dada la importancia del proceso de aclimatizacion en condiciones ex vitro implicito en este experimento tambien se evaluaron las variables numero y longitud de hojas.

Todas las variables estudiadas fueron analizadas estadisticamente mediante varianza simple, y se realizo la prueba de comparacion de medias por Tukey, cuando las variables arrojaron diferencias estadisticas. Los valores de las variables expresadas en porcentaje X' = 2 x arc fueron transformados por X' = 2 x arcsen (V(x/100) + 0,5)). Todos los analisis estadisticos se realizaron con el programa computarizado Statistix version 8.0 para ambiente Windows de Microsoft[R] (Statistix, 2008).

Resultados y discusion

Tiempo y frecuencia de inmersion en la multiplicacion in vitro de ocumo blanco en sistemas de inmersion temporal tipo RITA[R]

En la tabla 1 se muestran los valores de las variables masa fresca total, altura del brote, numero de brotes mayores a 5 mm, menores a 5 mm y brotes totales evaluados despues de cuatro semanas de cultivo.

El cultivo de brotes de ocumo blanco en sistemas de inmersion temporal tipo RITA[R] produjo los mayores valores de numero de brotes totales, tratamiento que difirio del control (tabla 1). La mayor cantidad de brotes totales se obtuvo al realizar 6 inmersiones al dia con tiempos de 5 min o 10 min, respuesta que fue estadisticamente similar. Alvard et al. (1993) senalaron que la duracion de la inmersion del explante es probablemente el factor que merece mayor atencion en el diseno de sistemas de cultivo basado en la inmersion temporal. Berthouly y Etienne (2005) senalan la existencia de un periodo de adaptacion cuando se emplean bajas frecuencias de inmersion, debido a un estres causado por la desecacion de los brotes entre cada inmersion, que posteriormente es recuperado.

Zeledon (2006), con un tiempo de inmersion de 7 min tres veces al dia indico un valor para el numero de brotes de 1,63 brotes/explante, y Dottin (2000) con un tiempo de inmersion de 10 min 3 veces al dia obtuvo 13,2 brotes de ocumo cv. Mexico 8 al cultivarlo en sistema de inmersion temporal. Los valores de numero de brotes reportados por estos autores son inferiores a los encontrados en este experimento (15,27 brotes) empleando un tiempo de inmersion de 5 min y seis veces al dia.

Los mayores valores de masa fresca de brotes se obtuvieron en sistemas de inmersion temporal, siendo estadisticamente diferentes a los valores obtenidos con el control (tabla 1). Aunque no se detectaron diferencias entre las combinaciones de tiempo y frecuencia de inmersion evaluadas, se observo que existe una tendencia a obtener valores superiores de masa fresca cuando se realizan mas inmersiones al dia, lo cual pudiera estar relacionado con las relaciones hidricas, el intercambio gaseoso y el incremento de la toma de nutrientes que se logra en esta forma de cultivo (Escalona et al., 1999). Aspectos que de alguna forma favorecen el crecimiento y desarrollo vegetal. En este sentido, Berthouly y Etienne (2005) senalaron que el tiempo y la frecuencia de inmersion varian considerablemente dependiendo de la especie y el objetivo para el cual se utilizan los sistemas de inmersion temporal (organogenesis, brotes, germinacion de embriones, etc.), debido a que dichos parametros estan muy relacionados con la asimilacion de nutrientes.

La variable altura de los brotes cultivados en las unidades RITA[R] difirio significativamente de la registrada en medio de cultivo semisolido. Sin embargo, no se observaron diferencias con relacion al tiempo y la frecuencia de inmersion (tabla 1). En este sentido, Albany et al. (2005) senalaron que el cultivo en sistema de inmersion temporal promueve un mayor desarrollo de los brotes, que en algunos casos puede llegar a ser excesivo. La mayor altura de los brotes de ocumo en los sistema de inmersion temporal tipo RITA[R] pudo ser consecuencia de una mayor disponibilidad de los nutrientes ya que se ha senalado que la absorcion de estos se encuentra reprimida en los medios de cultivo semisolidos (Smith y Spoomer, 1995).

Desde el punto de vista practico, para el manejo de los brotes en la fase de multiplicacion in vitro se deberian seleccionar los brotes mayores a 5 mm para facilitar su manipulacion; brotes menores a 5 mm tienen pocas reservas y son poco vigorosos, lo que se traduce en un crecimiento lento en subcultivos posteriores, si son separados del brote madre, estos deben dejarse unidos a dicho brote hasta que esten aptos para crecer independientemente del tejido que les dio origen.

Un comportamiento similar al observado en este experimento para la variable altura del brote se ha reportado para otras especies como Anturium andraeanum (Del Rivero et al., 2004), D. alata (Cabrera et al., 2004) y D. cayenensis - D. rotundata (Cabrera et al., 2008).

Densidad de brotes de ocumo blanco en sistemas de inmersion temporal tipo RITA[R]

Despues de seis semanas de cultivo, el analisis estadistico detecto diferencias para las variables evaluadas numero de brotes totales, numero de brotes mayores a 5 mm, numero de brotes menores a 5 mm, altura del brote e indice de incremento de masa fresca (tabla 2). El mayor valor para el numero de brotes se encontro con la densidad de 9 brotes/recipiente, siendo este valor estadisticamente superior a las otras densidades evaluadas. En este experimento se pudo observar que por encima o por debajo de 9 brotes/recipiente, el numero de brotes totales disminuia. Este comportamiento fue similar para las variables numero de brotes menores a 5 mm y brotes mayores a 5 mm. Probablemente, la disminucion observada para el numero de brotes mayores a 5 mm en la densidad 12 brotes/ recipiente pudiera estar relacionada por estres en el brote debido a la competencia por nutrientes (Perez et al., 1998), lo cual se evidencio por la clorosis que presentaron algunos brotes en sus hojas mas viejas.

Etienne y Berthouly (2002) destacaron que la densidad de explantes es un factor determinante en un protocolo de micropropagacion, pero que ha sido poco estudiado en sistemas de inmersion. Los criterios para establecer la misma han sido tomados a partir de las experiencias practicas, conociendo el comportamiento de especies afines o simplemente se establece una densidad sobre la base de que el explante disponga de una cantidad de medio de cultivo. En otros casos se considera el diametro de vaso de cultivo y se maneja la misma densidad para todas las especies (Zeledon, 2006).

En otras especies como Psidium guajava L. (De Feria et al., 2003), D. alata L. (Cabrera et al., 2004), Sacharum sp y Musa AAAB (Posada et al., 2003), se ha reportado comportamiento similar al encontrado en este ensayo para el numero de brotes totales.

Con la densidad de 9 brotes/recipiente se obtuvo el maximo valor de brotes totales, de brotes menores a 5 mm y brotes mayores a 5 mm. Esto sugiere que con dicha densidad se logro mayor eficiencia para la multiplicacion in vitro de ocumo en sistema de inmersion temporal tipo RITA[R]. Ademas, se alcanzo la mayor cantidad de brotes separables del brote madre o inicial para el subcultivo. Salazar y Hoyos (2007) senalan que una densidad de siembra baja en sistemas de inmersion temporal seria inadecuada porque se subutilizarian los recipientes de cultivo y se ocasionaria perdida de medio de cultivo. Por otro lado, si se opta por una alta densidad de siembra se podria generar un crecimiento limitado de los brotes y una baja en su proliferacion.

Con las densidades de 6 y 12 brotes/recipiente se obtuvieron los maximos valores promedios de altura de brotes (tabla 2), los cuales difirieron estadisticamente de la densidad de 9 explantes/recipiente. Es evidente que la menor altura con la densidad de 9 explantes/recipiente es causada por un desvio de la produccion de biomasa hacia la formacion de brotes en detrimento del desarrollo de los mismos. Esto se puede reafirmar con el indice de incremento de crecimiento. Esta variable registro los mayores valores con la densidad de 9 explantes/recipiente.

Enraizamiento ex vitro de brotes de ocumo blanco

Despues del periodo de evaluacion, el analisis no detecto diferencias estadisticas significativas para las variables evaluadas (tablas 3 y 4), por lo que se determino el promedio general de las mismas y sus valores maximos y minimos para su discusion.

El porcentaje general de enraizamiento obtenido en este ensayo fue de 100% (tabla 3), comportamiento que indica que es una especie con alta capacidad de desarrollo de raices adventicias, lo cual es confirmado por el 100% de enraizamiento senalado por Saucedo et al. (2008) en el enraizamiento ex vitro de ocumo.

El porcentaje de enraizamiento tuvo una influencia en la sobrevivencia de las vitroplantas, ya que todas las plantas que sobrevivieron presentaron raices, obteniendose un porcentaje de sobrevivencia de 96,87% (tabla 3). Saucedo et al. (2008) senalaron que una buena calidad de los brotes en la fase previa a enraizamiento ex vitro garantiza que se formen y desarrollen varias raices, que le permitan comenzar la absorcion de nutrientes al trasplantarlos sobre un buen sustrato y convertirse en plantas obtenidas in vitro aclimatizadas listas para llevar al campo.

Zeledon (2006) y Chin-Ying et al. (2008) indican porcentajes de sobrevivencia de alrededor de 97%, similares a los obtenidos en este experimento (96,87%); mientras que Saucedo et al. (2008) senala un 100% de sobrevivencia en la aclimatizacion; porcentaje ligeramente superior al obtenido en este ensayo.

Las raices de las vitroplantas de ocumo se caracterizaron por ser blancas, finas, entre 2 y 3 mm de diametro, muy ramificadas y con incontables raices de tercer orden y pelos absorbentes. Estas caracteristicas garantizan un excelente sistema radical, lo cual implica una mayor probabilidad de aclimatizacion a condiciones ex vitro (Agramonte et al., 1998).

Se obtuvieron 9,1 raices, con una longitud de 11,2 cm (tabla 4). Saucedo et al. (2008), evaluando diferentes concentraciones de ANA mas AIA en el enraizamiento y la aclimatizacion ex vitro de ocumo blanco, encontraron que las mejores respuestas para las variables numero y longitud de raices se lograron con la combinacion de 500 mg.[L.sup.-1] ANA + 500 mg.[L.sup.-1] AIA. Estos resultados difieren de los obtenidos en el presente ensayo, donde no se encontraron diferencia entre los tratamientos evaluados. Esto pudiera ser debido a que en ciertas especies no es necesaria la adicion de auxinas para estimular la produccion y el desarrollo de raices (Taiz y Seiger, 2002). Esto es valioso a la hora de multiplicar o micropropagar comercialmente esta especie ya que al no utilizar estimuladores del enraizamiento los costos de produccion se reducen y se pueden ofrecer plantas mucho mas economicas y accesibles a los productores de ocumo.

El promedio general en este ensayo para el numero de hojas fue de 3,08 y para su longitud fue de 7,9 cm (tabla 4). Zeledon (2006) senalo 3 como valor mas alto de numero de hojas en la aclimatizacion de vitroplanatas de ocumo, coincidiendo con los resultados de esta investigacion, mientras que para la longitud de hojas este autor reporto 5 cm, a diferencia de este experimento donde se obtuvo un valor de 7,9 cm de longitud.

Las diferencias encontradas para la variable longitud de hojas senaladas por Zeledon (2006) y la obtenida en esta investigacion pudieron ser debidas a que el mencionado autor realizo el enraizamiento bajo condiciones in vitro las cuales tal vez fueron desfavorables para el desarrollo de este organo ya que se sabe que la tasa fotosintetica de las vitroplantas in vitro es baja, lo que conlleva una baja sintesis y produccion de energia que afecta directamente el crecimiento y desarrollo del mismo (Agramonte et al., 1998).

Conclusiones

El cultivo en sistema de inmersion temporal tipo RITA[R] en la fase de multiplicacion favorecio el crecimiento y la proliferacion de los brotes en ocumo blanco.

Se determino que el tiempo y la frecuencia de inmersion adecuados para multiplicacion in vitro de ocumo fue de 5 min seis veces al dia.

La densidad de 9 brotes/recipiente permitio mayor eficiencia en el uso del recipiente de sistema de inmersion temporal tipo RITA[R].

Bajo las condiciones de enraizamiento ex vitro evaluadas no es necesaria la aplicacion de reguladores de crecimiento para promover la formacion de raices adventicias en los brotes de ocumo blanco.

Agradecimientos

Los autores agradecen al Consejo de Desarrollo Cientifico y Humanistico de la Universidad del Zulia por el financiamiento del Proyecto del VAC-CONDESCC-0092-08 con el cual se llevo a cabo esta investigacion.

Recibido: septiembre 12 de 2010 Aprobado: mayo 30 de 2011

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Jorge Vilchez *, Nilca Albany **, Leonardo Martinez ***, Miguel Molina ****, Carolina Pirela *****, Mireya Molina *****, Carlos Alvarez ***** y Jorge Chirinos *****

* Profesor Asociado. Magister en Biotecnologia Vegetal, Departamento de Botanica, Laboratorio de Fisiologia Vegetal "Merylin Marin", Facultad de Agronomia, Universidad del Zulia, Republica Bolivariana de Venezuela. jvilchezp@fa.luz.edu.ve

** Profesora Asociado. Magister en Biotecnologia Vegetal, Departamento de Quimica, Facultad de Agronomia, Universidad del Zulia, Republica Bolivariana de Venezuela. nalbany@fa.luz.edu.ve

*** Asistente de Campo y Laboratorio. Ingeniero Agronomo, Departamento de Botanica, Laboratorio de Fisiologia Vegetal "Merylin Marin" Facultad de Agronomia, Universidad del Zulia, Republica Bolivariana de Venezuela. ljmartinez@fa.luz.edu.ve

**** Asistente de laboratorio. Tecnico superior en Quimica, Departamento de Quimica, Facultad de Agronomia, Universidad del Zulia, Republica Bolivariana de Venezuela. mmolina@fa.luz.edu.ve

***** Ingenieros Agronomos. Laboratorio de Biotecnologia "Profa. Silvia Leon de Sierralta", Facultad de Agronomia, Universidad del Zulia, Republica Bolivariana de Venezuela.
Tabla 1. Efecto del tiempo y frecuencia de inmersion en la
multiplicacion in vitro de brotes de Xanthosoma sagittifolium
(L.) Schott en sistemas de inmersion temporal tipo RITA[R]

                                            Altura
Tiempo         Frecuencia    Masa fresca   del brote
(min)          (veces/dia)   total(g)        (cm)

5                   3          2,13 a       6,00 a
                    6          3,24 a       5,69 a
10                  3          2,25 a       5,08 a
                    6          2,84 a       5,14 a
Control                        1,57 b       2,39 b
(semisolido)

                        Numero de brotes
Tiempo
(min)          Totales       < 5mm         > 5mm

5               3,87 b       2,75 b        1,12 b
               15,27 a       9,89 a        5,38 a
10              4,72 b       3,16 b        0,05 c
               11,83 a       7,22 ab       4,88 a
Control        3, 13 c       3,00 b        0,14 c
(semisolido)

Letras diferentes difieren para un P<0,05 segun
la prueba de medias de Tukey.

Tabla 2. Efecto de la densidad de brotes sobre la
multiplicacion de brotes de Xanthosoma sagittifolium (L.)
Schott en sistemas de inmersion temporal tipo RITA[R]

Densidad de   Altura del      Numero de brotes           Indice de
explantes     brote (cm)                               incremento de
(Explantes/                                             crecimiento
recipiente)                Totales   <5mm     >5mm

6               4,48 a     1,86 b    0,83 c   1,03 b      2,66 b
9               4,06 b     6,11 a    4,24 a   1,86 a      3,15 a
12              4,68 a     1,85 b    1,43 b   0,41 c      2,29 b

Letras diferentes difieren estadisticamente (P<0,05) segun la
prueba de medias de Tukey.

Tabla 3. Efecto de la combinacion de acido indolacetico
(AIA) y acido naftalenacetico (ANA) en el enraizamiento ex
vitro de vitroplantas y aclimatizadas de ocumo blanco
(Xanthosoma sagittifolium (L.) Schott).

Tratamiento            Sobrevivencia   Enraizamiento
                            (%)             (%)

125 mg x [L.sup.-1]       100 ns          100 ns
AIA + 125 mg x
[L.sup.-1] ANA

250 mg x [L.sup.-1]        92 ns          100 ns
AIA + 250 mg x
[L.sup.-1] ANA

500 mg x [L.sup.-1]       100 ns          100 ns
AIA + 500 mg x
[L.sup.-1] ANA

0 mg x [L.sup.-1]          96 ns          100 ns
AIA + 0 mg x
[L.sup.-1] ANA
(Control)

Promedio general           96,87            100

ns: no significativo para una probabilidad de P  [menor que a igual a]
0,05 segun la prueba de analisis de la varianza.

Tabla 4. Efecto de la combinacion de acido indolacetico
(AIA) y acido naftalenacetico (ANA) sobre el numero y
longitud de raices, numero y longitud de hojas en el
enraizamiento ex vitro de vitroplantas de ocumo blanco
(Xanthosoma sagittifolium (L.) Schott)

Tratamiento                Numero de      Longitud de
                             raices       raices (cm)

125 mg x          Media     9,48 ns        10,89 ns
[L.sup.-1] AIA    Minimo      2,00           2,20
+ 125 mg x        Maximo     13,00           18,20
[L.sup.-1] ANA

250 mg x          Media     9,04 ns        10,12 ns
[L.sup.-1] AIA    Minimo      6,00           2,10
+ 250 mg x        Maximo     13,00           13,50
[L.sup.-1] ANA

500 mg x          Media     9,34 ns        12,72 ns
[L.sup.-1] AIA    Minimo      6,00           6,60
+ 500 mg x        Maximo     14,00           19,50
[L.sup.-1] ANA

0 mg x [L.sup.-   Media     8,56 ns        11,00 ns
1] AIA + 0 mg x   Minimo      5,00           2,70
[L.sup.-1] ANA    Maximo       15            21,30
Promedio general              9,1            11,2
(Control)

Tratamiento                Numero de     Longitud de
                             hojas        hojas (cm)

125 mg x          Media     3,04 ns         8,72 ns
[L.sup.-1] AIA    Minimo      2,00           5,00
+ 125 mg x        Maximo      4,00           12,00
[L.sup.-1] ANA

250 mg x          Media     3,04 ns         7,22 ns
[L.sup.-1] AIA    Minimo      2,00           2,60
+ 250 mg x        Maximo      5,00           11,10
[L.sup.-1] ANA

500 mg x          Media     3,04 ns         7,64 ns
[L.sup.-1] AIA    Minimo      2,00           3,80
+ 500 mg x        Maximo      8,00           10,70
[L.sup.-1] ANA

0 mg x [L.sup.-   Media     3,20 ns         7,90 ns
1] AIA + 0 mg x   Minimo      2,00           2,80
[L.sup.-1] ANA    Maximo      4,00           12,00
Promedio general              3,08            7,9
(Control)
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Title Annotation:ARTICULO DE INVESTIGACION
Author:Vilchez, Jorge; Albany, Nilca; Martinez, Leonardo; Molina, Miguel; Pirela, Carolina; Molina, Mireya;
Publication:Revista Colombiana de Biotecnologia
Date:Jul 1, 2011
Words:6094
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