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Molecular expression of Villin in jejunum of weaned pigs after oral intake of LPS from E. coli/Expresion molecular de la Vilina en yeyuno de lechones posdestete que consumieron LPS de E. coli/Expressao molecular da Vilina no jejuno de leitoes recem desmamados que consumiram LPS de E. coli.

Introduccion

Los sistemas modernos de produccion porcina han avanzado hacia la obtencion de animales destetados a edades mas tempranas y con mejores indices de conversion de alimento (37,10). Actualmente, los lechones son destetados entre los 14-28 dias de edad, como resultado, al momento del destete los lechones son ahora mas livianos y su sistema digestivo esta menos desarrollado, especialmente el intestino delgado, lo que los hace mas susceptibles a problemas digestivos en el periodo posdestete (31).

Previo al destete, las vellosidades intestinales son largas, bien estructuradas y muy eficientes en la absorcion de nutrientes. Esto se debe a que la renovacion de los enterocitos durante la lactancia es minima, ya que las celulas de las glandulas intestinales son capaces de reemplazar los enterocitos de las vellosidades a la misma velocidad a la que son descamados (11). Al momento del destete, la longitud de las vellosidades se reduce casi a la mitad, provocando la aparicion de una mayor proporcion de enterocitos debiles e inmaduros en los extremos de las vellosidades 31, lo que se traduce en la disminucion en la absorcion de nutrientes 48. El alimento que no es digerido y absorbido en intestino delgado queda disponible en ciego y colon, generando una intensa actividad y proliferacion de la poblacion microbiana, principalmente enteropatogena, desencadenando procesos diarreicos (19). Para que los procesos de digestion y absorcion de nutrientes se den de una manera satisfactoria, es necesario que se mantenga la integridad de las celulas funcionales de las vellosidades, los enterocitos. Los enterocitos estan conformados por diferentes estructuras, dentro de las cuales, la vilina es de gran importancia 31. La vilina es una proteina cuya funcion es dar soporte, elasticidad y motilidad a las celulas de las vellosidades. Por lo anterior, la expresion de esta proteina es de gran importancia para el desarrollo de las vellosidades y por ende, para los procesos fisiologicos de estas. Sin embargo, la expresion de esta proteina puede ser alterada drasticamente por los procesos fisiologicos desencadenados por el destete y por la presencia de infecciones microbianas en los animales (7).

En la lactancia, las bacterias predominantes en estomago e intestino delgado suelen ser lactobacilos y estreptococos 23. El destete precoz y en particular si este se realiza bruscamente, provoca un periodo breve de ayuno y la desaparicion de la poblacion de lactobacilos del tracto gastrointestinal, favoreciendo el aumento de la poblacion de E. coli, la cual al cumplir su ciclo, muere y libera desde sus paredes productos proinflamatorios como el lipopolisacarido (LPS). El LPS es un agente que causa sintomatologia similar a una sepsis y es reconocido por cualquier hospedero mamifero como una entidad patogenica importante (1).

El LPS es reconocido por receptores especificos en la membrana celular, activando a su vez varias rutas de senalizacion celular, cuyas cascadas de traduccion favorecen el aumento en la produccion de citoquinas proinflamatorias, las cuales producen cambios importantes en la estructura y capacidad funcional del intestino 20. Aunado a lo anterior, el LPS en el medio intestinal, causa el incremento en el transporte paracelular indiscriminado de moleculas, y en las alteraciones de la estructura y capacidad funcional del intestino. Estos cambios a nivel intestinal, estan representados por la disminucion en el tamano de las vellosidades, debido posiblemente a la disminucion en la expresion de vilina y a la consecuente aparicion de enterocitos debiles e inmaduros que las conforman (9).

Dado que la administracion de LPS de E. coli es uno de los modelos mas empleados en estudios para simular procesos infecciosos agudos, por tener acciones altamente reproducibles y carecer de los efectos secundarios asociados a las infecciones cronicas, el objetivo de este trabajo fue determinar el efecto de la adicion de diferentes niveles de LPS de E. coli sobre la expresion molecular de vilina en yeyuno de lechones posdestete.

Materiales y metodos

Consideraciones eticas

Todos los procedimientos experimentales fueron llevados a cabo de acuerdo a las guias propuestas por "The International Guiding Principles for Biomedical Research Involving Animals" (5). Esta investigacion fue avalada por El Comite de Etica en la Experimentacion Animal de la Universidad Nacional de Colombia, Sede Medellin (CEMED 001del 26 de Enero de 2009).

Localizacion

El trabajo de campo se realizo en el Centro San Pablo, perteneciente a la Universidad Nacional de Colombia, Sede Medellin, ubicado en el municipio de Rionegro, paraje "El Tablacito", localizado a 2100 msnm, con una temperatura entre 12 y 18[degrees]C, correspondiendo a una zona de vida bosque muy humedo Montano Bajo (bmh-MB). Animales

Se utilizaron 52 lechones resultado de un cruce alterno Duroc x Landrace, destetados exactamente a los 21 dias de edad, con un peso de 6.5 [+ or -] 0.5 kg. Estos lechones fueron alojados en grupos de ocho, en jaulas provistas de comedero de canoa y agua a voluntad, las cuales fueron ubicadas en un cuarto con temperatura controlada a 26 [+ or -] 3[degrees]C.

Dietas

En este experimento se evaluaron cuatro dietas experimentales, una dieta control (basal) y otras tres conteniendo LPS de E. coli, serotipo 0111:B4 (SigmaAldrich, Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) asi:

--Dieta Basal (DB): Sin adicion de LPS.

--Dieta 1 (D1): DB mas la adicion de 0.3 [micro]g de LPS /mg de alimento.

--Dieta 2 (D2): DB mas la adicion de 0.5 [micro]g de LPS /mg de alimento.

--Dieta 3 (D3): DB mas la adicion de 1.0 [micro]g de LPS /mg de alimento.

La dieta basal ofrecida a los animales tuvo como componente leche y algunos de sus derivados; ademas, fue enriquecida con vitaminas, minerales y lisina HCL. Las dietas se balancearon para cumplir con todos los minimos nutricionales requeridos y propuestos por el NRC (25) (Tablas 1 y 2). La cantidad de alimento ofrecido por jaula fue de 300 g/dia, sin embargo, se suministro alimento adicional cuando los animales lo requirieron. Las dietas experimentales se proporcionaron desde el dia 1 del destete hasta el sacrificio, el cual se realizo de manera secuencial o escalonada durante los primeros 10 dias posdestete. Durante la lactancia no se suministro alimento solido a los lechones.

Durante la fase experimental se sacrificaron 52 lechones de la siguiente forma: el dia inicial o dia 1 (dia del destete), se sacrificaron 4 lechones, que representaron el grupo de referencia para verificar el estado general de salud y la evaluacion macroscopica del estado de los organos de los animales antes de suministrar el LPS. Los dias cinco, siete y 10 posdestete fueron sacrificados cuatro lechones de cada tratamiento.

Todos los lechones fueron sacrificados 2.5 horas despues de su ultima comida. Los animales se sedaron por inhalacion de dioxido de carbono durante 3 minutos y fueron sacrificados por exanguinacion, mediante seccion de la vena yugular. Despues del sacrificio, los lechones se colocaron en posicion decubito dorsal, se disecciono la region abdominal y se extrajo completamente el intestino delgado desde la union pilorica hasta la valvula ileo-cecal (35). El intestino fue alineado y medido en una mesa sin ningun tipo de tension. Posteriormente este se dividio en tres regiones (duodeno, yeyuno, e ileon) de igual tamano y se tomaron 20 cm del centro del yeyuno. Una vez cortadas las porciones, la digesta contenida en cada una de ellas se removio mediante lavado por infusion con solucion salina fria segun lo descrito previamente (21,30). Las muestras para analisis de RNA fueron congeladas inmediatamente en nitrogeno liquido, donde se conservaron hasta su analisis en el laboratorio. Las muestras de intestino para los estudios morfometricos se perfundieron con formalina buferada al 10% hasta realizar las determinaciones de laboratorio (40).

Extraccion de RNA total y chequeo de la calidad del material de vilina

Se extrajo el RNA total de las muestras de intestinos previamente almacenadas en nitrogeno liquido empleando el ULTRACLEAN[TM] Tissue & Cells RNA Isolation Kit (MO BIO Laboratories, Inc.). En todos los casos se pesaron 25 mg de tejido (lo maximo recomendado por el fabricante) en una balanza analitica y se continuo con el protocolo descrito en el Kit. Para llevar a cabo la ruptura del tejido se emplearon morteros de losa y nitrogeno liquido. Las superficies y el material de trabajo se trataron antes con DEPC (dietilpirocarbonato) para remover posibles RNAasas. Las muestras de RNA total obtenidas con el procedimiento permanecieron almacenadas a -70[degrees]C durante todo el experimento y solo se tomaron alicuotas en hielo para realizar los analisis. Para evaluar la integridad del material extraido se corrieron todas las muestras en gel de agarosa con bromuro de etidio al 1% (100V por 50 min), para observar las bandas de rRNA (RNA ribosomal). En caso de no visualizar una buena cantidad de material o no ver claramente las bandas de rRNA, se repitio la extraccion empleando condiciones identicas (8).

Sintesis de cDNA a partir de RNA total

Para sintetizar cDNA (DNA copia) a partir del RNA total extraido se empleo el QuantiTect[R] Reverse Transcription Kit (QUIAGEN). El Kit utiliza cebadores hexamericos aleatorios y cebadores de poli-Timidinas para maximizar la reaccion de retro-transcripcion, obteniendo tanto copias del rRNA como mRNA. Para todas las reacciones de retrotranscripcion se utilizo la misma cantidad de muestra (1pg de RNA en cada reaccion), con base en los resultados de la cuantificacion. Brevemente el protocolo tiene dos pasos: una primera etapa en la que se remueven restos de DNA genomico, para luego adicionar la enzima (Taq polymerase, BIOLASE[R]) y los nucleotidos trifosfatados para hacer la sintesis del cDNA. Todo el ensayo se realizo teniendo en cuenta las recomendaciones del fabricante. El cDNA obtenido se almaceno a -20[degrees]C durante los demas ensayos (18).

RT-PCR a partir de cDNA para vilina y el gen de expresion constitutiva

Los cebadores para el gen de interes y de expresion constitutiva (Ciclofilina) se muestran en la tabla 3. Estos cebadores fueron tomados de la literatura, verificando que su diseno hubiera sido realizado en los bordes intron/ exon para evitar la amplificacion de DNA genomico. Adicionalmente, se sometieron a diversos analisis bioinformaticos para verificar su especificidad con el fragmento de mRNA o rRNA estudiado y la ausencia de estructuras secundarias, como la formacion de lupas o dimeros entre si o con el otro cebador (4, 18).

Estrategia de normalizacion, procesamiento de datos obtenidos y cuantificacion relativa

Para establecer los niveles de expresion del gen de vilina, se empleo un metodo de cuantificacion relativa usando un gen de expresion constitutiva (Ciclofilina), siguiendo las recomendaciones de diversas publicaciones en cuanto a la escogencia del gen y la estrategia global de normalizacion 24, 38, 15. La cantidad de material del que se extrajo el RNA, la cantidad de RNA en la reaccion de retrotranscripcion y la cantidad de cDNA para la amplificacion en la PCR fue identica para todas las muestras. El gen de expresion constitutiva escogido fue validado en ensayos anteriores bajo condiciones experimentales similares (26). Los resultados obtenidos se analizaron utilizando el software The ImageJ (User Guide) Version 1.43.

Deteccion de la expresion de mRNA de Vilina por RTPCR y cuantificacion de los productos de PCR.

La amplificacion por RT-PCR del mRNA de Vilina se realizo en muestras individuales de yeyuno (28). El protocolo general de la PCR fue el siguiente:

--Ciclofilina: 95[degrees]Cx1 min; 37 ciclos 95[degrees]Cx30 seg; 58[degrees]Cx30 seg; 72[degrees]Cx40 seg; 72[degrees]Cx3 min; 10[degrees][Cx.sup.[infinity]]

--Vilina: 95[degrees]Cx1 min; 37 ciclos 95[degrees]Cx30 seg; 57[degrees]Cx30 seg; 72[degrees]Cx40 seg; 72[degrees]Cx3 min; 10 0[Cx.sup.[infinity]].

La densidad de los productos de RT-PCR de vilina se analizo en unidades relativas a la densidad de la banda del gen de expresion constitutiva (gen de ciclofilina).

Diseno estadistico

El experimento se realizo segun un diseno de bloques al azar (para un total de dos bloques) en un arreglo factorial de 4X4 (4 dietas experimentales por 4 edades posdestete) (36). Para la conformacion de los bloques se tomo en consideracion el peso inicial de los animales. A cada animal le fue asignado uno de los 16 tratamientos y cada tratamiento tuvo cuatro repeticiones. El analisis estadistico se realizo con el procedimiento de Modelos Lineales Generales (GLM) del programa SAS[R] (34). Las diferencias entre las medias de los tratamientos fueron determinadas por minimos cuadrados y analizadas por ANOVA. Para realizar la comparacion de los promedios entre tratamientos se utilizo una prueba de Duncan (P < 0,05).

Resultados

Los cerdos que consumieron la dieta basal presentaron un buen estado de salud, mientras que los animales que recibieron LPS en la dieta basal mostraron incrementos en la temperatura rectal por encima de 38[degrees]C durante todo el experimento. No obstante, estos cerdos no presentaron signo alguno de enfermedad que causara su retiro o sacrificio inmediato. Ademas, al nivel en que se fijo el suministro diario de alimento no hubo sobrantes.

Los datos de expresion molecular de vilina se obtuvieron de la relacion entre la expresion del gen de vilina y la expresion del gen constitutivo (Ciclofilina). En este trabajo se evaluo la expresion molecular de vilina en yeyuno en la dieta basal durante los diferentes periodos posdestete con el fin de determinar el efecto exclusivo del destete sobre la expresion de esta proteina. En la tabla 4 pueden observarse los datos obtenidos con la dieta basal (DB) durante los distintos periodos posdestete experimentales en yeyuno.

Para la variable vilina se presento una disminucion estadistica significativa (P < 0,01) en la expresion molecular a partir del dia uno posdestete, donde en el dia 5 posdestete los animales presentaron los menores valores de expresion (0,78). Sin embargo, con el transcurso de los dias, se aprecia una recuperacion parcial en la expresion de las proteinas, llegando a su nivel maximo el dia 10 posdestete, sin igualar los valores obtenidos el dia 1 posdestete (P < 0,01).

Los promedios generales de la expresion molecular de vilina estudiados entre cada uno de los tratamientos y periodos de exposicion se pueden observar en las tablas 5 y 6. En este experimento, no se encontro interaccion estadistica entre las diferentes concentraciones de LPS y los periodos posdestete en que fueron sacrificados los cerdos para ninguna de las variables en estudio, por lo que no fue necesario analizar y desglosar dichos factores de manera independiente.

Para la proteina de arquitectura intestinal vilina se presentaron disminuciones significativas (P < 0,01) entre las diferentes dietas (Tabla 5), donde los animales que consumieron D3 presentaron los menores valores de expresion molecular (0,57) en comparacion con los animales que consumieron DB (0,94). Sin embargo, no se presentaron diferencias estadisticas significativas entre D2 y D3 (P > 0,01).

Con respecto al parametro expresion molecular de vilina durante los periodos de exposicion a LPS, la evaluacion en conjunto de todos los animales (DB, B1, D2 y D3; Tabla 6) presento una disminucion estadistica significativa (P < 0.01) a partir del dia uno posdestete, donde los animales con 10 dias de destetados presentaron los menores valores (0,41).

Discusion

El epitelio intestinal sirve como una barrera fisica dinamica, la cual bajo condiciones normales regula la absorcion de nutrientes, iones y agua (Pie et al., 2004). Sin embargo, bajo diversas situaciones de estres, como es el caso del destete, se presentan cambios en la estructura de las microvellosidades y a su vez en las proteinas de union a actina, especificamente vilina, la cual es responsable de la organizacion y el mantenimiento del citoesqueleto de las vellosidades 32. Por lo anterior, la disminucion en la expresion molecular de la proteina vilina en los animales que consumieron DB, podria estar asociada con las respuestas inflamatorias e inmunes provocadas por diferentes manifestaciones de estres durante el periodo del destete, dentro de las que se encuentran la separacion abrupta de la madre, la ubicacion en nuevos grupos sociales y el cambio de alimento (17). Todo lo anterior podria verse representado en el acortamiento de las vellosidades.

Por otro lado, los animales que recibieron las diferentes dietas experimentales mostraron disminucion en la expresion molecular de vilina, lo que es consecuente con los datos reportados por Athman (2), donde ratones infectados con S. flexneri mostraron lesiones en las vellosidades, caracterizadas principalmente por descamacion, edema e inflamacion de enterocitos, provocando la ruptura de los filamentos de actina. Aunado a lo anterior, la dinamica del citoesqueleto de actina mediada por vilina, puede ser alterada por la presencia de algunos compuestos en altas concentraciones como sodio o sulfato de dextrano durante procesos infecciosos. Ademas, la actividad de vilina es afectada por diversas senales producidas por eventos caracteristicos del destete, dentro de los cuales se encuentra el ayuno.

Las proteinas del citoesqueleto, especificamente vilina, desempenan un papel fundamental en la organizacion y estructura del borde en cepillo de las microvellosidades. Debido a lo anterior, en este trabajo los animales que consumieron durante tiempos prolongados y en mayores concentraciones LPS, mostraron los menores valores de expresion molecular de vilina, siendo el dia 10 posdestete el mas critico. Igualmente Peiffer (27), en un estudio in vivo en celulas caco-2 que fueron infectadas con cepas DAEC (E.coli difusamente adherente), se observo que las proteinas de union a actina de las microvellosidades, incluida vilina, padecen un proceso de desprendimiento, alterando la estabilidad y resistencia de la estructura y a su vez el tamano de las vellosidades.

Despues del destete, en el intestino delgado se observan cambios a nivel funcional y estructural que suceden dentro de las primeras 24 horas posdestete y generalmente los cerdos manifiestan varios sintomas de estres caracterizados por un periodo de subalimentacion; disminucion en la altura de las vellosidades (atrofia), incremento en la profundidad de las glandulas (14, 39), reducciones en la actividad especifica de las enzimas digestivas, reduccion en la capacidad de absorcion (48) y por ende, disminucion en la tasa de crecimiento. La atrofia de las vellosidades, es producida por la reduccion de las proteinas de arquitectura, entre ellas vilina, lo que produce una disminucion en la superficie para la digestion y absorcion de nutrientes 7 a 14 dias posdestete, correspondiendo al tiempo en que se presenta el problema llamado "caida del destete", representado por la reduccion en los procesos de digestion y absorcion de nutrientes, deshidratacion, y diarreas 33.En la presente investigacion se observaron disminuciones en la expresion del gen de vilina, causada por el estres inducido por el destete y al consumo de los diferentes niveles de LPS, corroborrando los resultados encontrados por Hedemann et al. (13); Vente-Spreeuwenberg et al. (40, 41); Wang et al. (42). Efectos similares se han observado luego de la infeccion experimental con E. coli en cerdos gnotobioticos (43).

Segun lo anterior, el periodo posdestete se caracteriza por una reduccion inmediata pero transitoria en el consumo de alimento, que conduce a un estado de desnutricion y de retraso en el crecimiento; y por la aparicion de signos de inflamacion intestinal temprana. Estos factores afectan varios aspectos de la arquitectura y las funciones del intestino delgado, entre los cuales se han reportado la atrofia de las vellosidades (3, 14, 39).

Conclusiones

El destete esta asociado con multiples factores que generan la presentacion de estres en los animales, provocando la disminucion en la expresion del gen de vilina, y a su vez, cambios morfologicos en la mucosa intestinal, representados por el acortamiento de las vellosidades y la presentacion del sindrome de diarrea posdestete.

El LPS de E. coli tiene un efecto sobre los parametros morfologicos intestinales, debido especificamente a la disminucion en la expresion del gen de vilina. Este efecto contribuye a la reduccion de la altura de las vellosidades y al incremento del ancho de las mismas, afectando los procesos de absorcion intestinal de nutrientes y por ende, los parametros productivos durante esta etapa.

De los hallazgos obtenidos se desprende que es necesario realizar mas investigaciones sobre la fisiologia digestiva asociadas a la patologia ocasionada por endotoxinas como LPS, para mejorar la comprension de los mecanismos causantes de problemas digestivos y sus posibles estrategias terapeuticas en el critico periodo posdestete.

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(47.) Yoo D, Lo W, Goodman S, Ali W, Semrad C, Field M. Interferon-gamma downregulates ion transport in murine small intestine cultured in vitro. Am J Physiol 2000; 279: G1323-G1332.

(48.) Zhenfeng Z, Deyuan O, Xiangshu P, Sung WK, Yanhong L, et al. Dietary Arginine Supplementation Affects Microvascular Development in the Small Intestine of Early-Weaned. Pigs J Nutr 2008; 138: 1304-1309.

Johana Andrea Ciro Galeano [1], Zoot, MSc, Dr Sci (C); Albeiro Lopez Herrera [2], Zoot, MV, MSc, Dr Sci; Jaime Parra Suescun [2] *, Zoot, MSc, Dr Sci

* Autor para correspondencia: Jaime Parra Suescun. Calle 59A No.63-20, Autopista Norte; Bloque 50, Piso 2, Oficina 202, Medellin, Antioquia, Colombia.

[1] Profesora, Fundacion Universitaria Autonoma de las Americas. Estudiante Doctorado en Ciencias Agrarias, Universidad Nacional de Colombia. Grupo BIOGEM. Colombia.

[2] Profesor. Universidad Nacional de Colombia Sede Medellin. Facultad de Ciencias Agropecuarias. Grupo BIOGEM. Colombia. Tel: +57 44309043; Fax: +57 443090425. A.A. 1779, Medellin, Colombia. Email: jeparrasu@unal.edu.co

(Recibido: 12 de julio, 2013; aceptado: 9 de noviembre, 2013)

* Para citar este articulo: Ciro Galeano JA, Lopez Herrera A, Parra Suescun J. Expresion molecular de vilina en yeyuno de lechones posdestete que consumieron LPS de E. coli. Rev CES Med Zootec. 2013; Vol 8 (2): 32-41
Tabla 1. Composicion de la dieta basal.

Tratamiento                 %

Leche en polvo              59.0
Caseina                     6.05
Dairylac 80 (lactosa) (A)   15.0
Proliant 1000 (suero) (B)   8.0
Hemoglobina                 2.5
Almidon de maiz             4.32
Aceite de palma             2.363
Sal de mar                  0.203
Fosfato monodiclcico       0.314
Sal comun                   0.4
Lisina                      0.439
Metionina                   0.326
Treonina                    0.279
Triptofano                  0.061
Adsorvente de Toxinas (C)   0.05
Vitaminas (D)               0.36
Minerales (E)               0.12
Saborizantes (F)            0.217

(A) Dairylac 80 (Pro-Ag Products Ltd, Winnipeg, Canad)

(B) Proliant 1000 (Alitecno S.A.C., Lima, Peru)

(C) Toxibond (Biomix, Medellin, Colombia)

(D) Composicion por kg de alimento: vitamina A 1020 UI, vitamina
D 198 UI, vitamina E 6 UI, vitamina K 1.20 mg, riboflavina 7.20
mg, vitamina B12 0.04 mg, colina 968.58 mg, niacina 36 mg, cido
pantotenico 16.55 mg, tiamina 30 mg, piridoxina 31 mg, biotina
0.08 mg, cido folico 0.75 mg.

(E) Composicion por kg de alimento: cobre 14.40 mg, hierro 120 mg,
manganeso 36 mg, selenio 0.30 mg, yodo 0.96 mg, zinc 144 mg.
FVainilla dulce, esencia de frutas (Prodia, Medellin, Colombia).

Tabla 2. Anlisis Proximal de la dieta basal.

Tratamiento               %

Proteina Cruda (%)        21.0
Extracto Etereo (%)       8.35
Cenizas (%)               5.42
Humedad (%)               7.215
Energia bruta (Kcal/kg)   3708.0

Toma de muestras de tejido intestinal

Tabla 3. Secuencia de primers utilizados y
referencia bibliogrfica de donde fueron tomados.

GenT            Secuencia                       [degrees]
                                                  alineacion

Ciclofilina F   5'-GCTCCACGGGAGGTTTCTG -3'
Ciclofilina R   5'-GGTACACCTGTCAAACGGTAACG-3'    58[degrees]C
Vilina F        5'-ACCCACAAACCCACCAA -3'
Vilina R        5'-CCATCTCTTGCTGCCAAACTATC-3'   56.8[degrees]C

GenT            Referencia

Ciclofilina F
Ciclofilina R
Vilina F
Vilina R            2

(1) (Paulin et al., 2007), 2 (Xu et al., 2011)

Tabla 4. Cambios en la expresion molecular de vilina en
yeyuno de lechones destetos que consumieron la dieta
basal (DB) durante el periodo posdestete (efecto del
destete).

Variable          Periodo posdestete (dias)            EEM

              1          5          7          10

Vilina     1.17 (a)   0.78 (b)   0.81 (b)   1.00 (c)   0.04

(a,b,c) Dentro de una misma fila, medias con diferente superindice
son estadisticamente significativas (P < 0.01).

EEM: Error estndar de la media.

Tabla 5. Cambios en la expresion molecular de vilina en
yeyuno de lechones destetos que consumieron las
diferentes dietas experimentales hasta el dia 10 posdestete.

            DB         D1         D2         D3      EEM

Vilina   0.94 (a)   0.72 (b)   0.69 (b)   0.57 (c)   0.03

(a, b, c) Dentro de una misma fila, medias con diferente superindice
son estadisticamente significativas (P < 0,01).

EEM: Error estndar de la media.

Tabla 6. Cambios en la expresion molecular de vilina
en yeyuno de lechones destetos que consumieron las
dietas experimentales durante diferentes edades
posdestete.

Variable              Periodo posdestete (dias)        EEM

              1          5          7          10

Vilina     1.17 (a)   0.63 (b)   0.56 (b)   0.41 (c)   0.03

(a, b, c) Dentro de una misma fila, medias con diferente
superindice son estadisticamente significativas (P < 0,01).

EEM: Error estndar de la media.
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Author:Galeano, Johana Andrea Ciro; Herrera, Albeiro Lopez; Suescun, Jaime Parra
Publication:Revista CES Medicina Veterinaria y Zootecnia
Date:Jul 1, 2013
Words:5427
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