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Metodos geneticos para la reintroduccion de monos de los generos Saguinus, Aotus y Cebus (Primates: Cebidae) decomisados en Bogota, Colombia.

Genetic methods for the reintroduction of primates Saguinus, Aotus and Cebus (Primates: Cebidae) seized in Bogota, Colombia.

En un pais, con la megadiversidad que posee Colombia, es facil comprender que el trafico ilegal de fauna sea un problema frecuente. De los 45 millones de habitantes que habitan Colombia, aproximadamente unos siete millones se encuentran en la capital. Esto significa que una fraccion considerable de la fauna ilegalmente traficada en este pais, en algun momento transitara por la capital colombiana. La Secretaria Distrital Ambiental (SDA) es la institucion encargada de recibir, mantener, rehabilitar y reintroducir, cuando es posible, esa fauna ilegal decomisada por las autoridades pertinentes. Buena parte de esa fauna decomisada se obtiene en el Terminal de transporte terrestre y en el Aeropuerto de El Dorado, Bogota. Una fraccion de la fauna decomisada esta compuesta por mamiferos, siendo los roedores (sciuromorfos-ardillas-, especialmente) y los primates, los taxones mas representados. Uno de los problemas mas acuciantes, es la reintroduccion de esos ejemplares a su ambiente original. No existe una infraestructura fisica ni un presupuesto economico para mantener en cautiverio toda esa fauna procedente del trafico ilegal. Sin embargo, es necesario poder rehabilitar a los ejemplares decomisados para devolverlos al medio natural del que proceden. Una problematica es que los datos geograficos, acerca del origen de los ejemplares interceptados, se desconoce ya sea porque los propietarios de esos animales realmente lo ignoran (han pasado por multiples manos intermedias), o porque ofrecen una informacion confusa, o falsa, para no delatar a los traficantes originales o los lugares primarios de extraccion de esa fauna decomisada. Colombia se caracteriza por contar con multiples eco-regiones con caracteristicas ambientales muy diferenciadas (desde una perspectiva macrogeografica: Caribe, Choco-Pacifico, cordilleras andinas, llanos Orientales-Orinoquia y Amazonia), y muchos taxones poseen poblaciones en varias de esas macro-regiones ecologicamente bien diferenciadas. Templeton (1986, 1989) mostro que si existen poblaciones con rasgos particulares, o caracteristicas geneticas exclusivas, y si estas poblaciones no son particularmente pequenas en sus numeros efectivos, entonces, resulta vital la conservacion de la historia filogenetica distintiva y las co-adaptaciones correspondientes de cada una de las poblaciones implicadas. Este autor tambien senalo que se deben evitar perdidas, por hibridacion, de adaptaciones especificas a ambientes exclusivos debido a que la presencia de depresion exogamica destruye complejos geneticos perfectamente co-adaptados a las caracteristicas singulares de esos ambientes referidos. Por lo tanto, los animales previamente rehabilitados deben ser liberados en las zonas geograficas de las cuales fueron ilegalmente extraidos. Por ejemplo, Girman et al. (1995) mostraron la existencia de tres poblaciones fundamentales del amenazado perro salvaje africano, o licaon, (Lycaon pictus). Dos de ellas han sufrido un notable decrecimiento en los dos ultimos siglos, la del este y la del oeste africano. La mayor parte de los animales en cautiverio proceden de la poblacion de Africa del Sur. En un primer momento, se propuso utilizar los ejemplares mas numerosos procedentes de Africa del Sur mezclandolos con los escasos ejemplares del Africa Oriental. Sin embargo, con la utilizacion de RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) aplicados al ADN mitocondrial, se observo mas de un uno por ciento de divergencia nucleotidica promedio y la formacion de dos clados monofileticos, conteniendo cada uno de ellos tres haplotipos diferentes. Se determino, siguiendo los requisitos expuestos por Avise & Ball (1990), que ambos linajes representaban dos subespecies diferentes y, por lo tanto, se desestimaron los cruzamientos entre ejemplares sudafricanos y del Africa oriental.

Otra consideracion importante es que si se dan cruzamientos entre ejemplares de diferentes acervos geneticos es posible que en las primeras generaciones se de algun tipo de heterosis positiva para caracteres cuantitativos (por ejemplo, aumento de tamano corporal) pero, posteriormente, se ha detectado un claro descenso en la adaptabilidad de los descendientes (Lynch 1991).

La determinacion de que especies y taxones de primates existe en Colombia es compleja. No existe un consenso claro por parte de los autores, debido a la cambiante sistematica y compleja taxonomia de los primates neotropicales. Por ejemplo, Rylands et al. (1997) determinaron 31 especies y 51 taxones de primates en Colombia, con cuatro especies y 18 taxones endemicos. Russell A. Mittermeier, en el prologo del libro de Defler (2003), cita la existencia de 27 especies y 43 taxones de primates en Colombia, mientras que Defler (2003), en el mismo libro, comenta la posible existencia entre 26 y 32 especies de primates. Actualmente se sabe que Colombia ocupa la segunda posicion (junto con Peru) con respecto al numero de diferentes taxones de Primates en Latinoamerica (despues de Brasil) y la sexta o septima posicion mundial en numero de especies, despues de Brasil, Zaire, Camerun, Indonesia y Madagascar.

Por ese motivo, se inicio hace anos una intensa cooperacion, entre la SDA y el laboratorio de Genetica de Poblaciones Molecular-Biologia Evolutiva del Departamento de Biologia de la Pontificia Universidad Javeriana en Bogota, para intentar determinar el posible origen geografico de una buena parte de los primates decomisados en Bogota y poder proceder a su liberacion en regiones geograficas correctas. Este es un laboratorio que, desde 1996, empezo a recolectar y analizar, con procedimientos genetico moleculares, muestras de mamiferos neotropicales de un considerable numero de especies (carnivoros-incluyendo felidos, ursidos, canidos, procionidos y mustelidos-, cervidos, tayasuidos, tapiridos, delfines de rio y mamiferos marinos, algunos roedores, perezosos, armadillos, osos hormigueros y primates, con especial enfasis en los generos Alouatta, Ateles, Lagothrix, Pithecia, Cacajao, Callicebus, Cebus, Saimiri, Aotus, Saguinus, Callithrix y Cebuella).

Para determinar aspectos filogeneticos y filogeograficos con primates neotropicales se utilizaron las secuencias del gen mitocondrial citocromo oxidasa II (mtCOII). Se secuenciaron aproximadamente entre 600 y 730 pares de bases (pb) dependiendo de las especies de primates consideradas. Este gen mitocondrial se ha utilizado de forma exitosa para determinar la filogenia molecular de diversos primates neotropicales. Estos son los casos de Aotus (Ashley & Vaughn 1995, Plautz et al. 2009, Ruiz-Garcia et al. 2010a), Alouatta (Figueiredo et al. 1998, Cortes-Ortiz et al. 2003, RuizGarcia et al. 2010b), Ateles (Collins & Dubach 2000a,b, Nieves et al. 2005, Ruiz-Garcia et al. 2010c), Cebus apella (Ruiz-Garcia & Castillo 2010), Cebus capucinus (Ruiz-Garcia et al. 2010d), Cebus albifrons (Ruiz-Garcia et al. 2010e), Lagothrix (Ruiz-Garcia & Pinedo 2010a,b,c) y Saguinus leucopus (Ruiz-Garcia et al. 2010f) y otros calitricidos (Ascunce et al. 2002, Sena et al. 2002).

No obstante, este gen, como otros genes mitocondriales, puede presentar ciertos problemas para la resolucion de la filogenia de los primates, tales como la heterogeneidad en la composicion de bases en cada posicion codonica, diversas tasas de substitucion respecto a transiciones y transversiones, y saturacion, por evolucion muy rapida, de la tercera posicion nucleotidica en los codones. Sin embargo, Ascunce et al. (2003) demostraron que en estudios a nivel intra-especifico o intra-generico, las secuencias de este gen son informativas desde la perspectiva filogenetica, aunque no para la resolucion conjunta de todos los generos de primates neotropicales.

Por lo tanto, aprovechando el conocimiento adquirido en la filogeografia molecular de los generos y especies de primates referidos anteriormente, se procedio a analizar los primates recibidos por la SDA en el ano 2008, para proponer las areas geograficas idoneas para la liberacion de ejemplares decomisados, mediante la secuenciacion del gen mtCOII y la comparacion con los primates analizados previamente y que cuentan con un origen geografico preciso.

MATERIALES Y METODOS

Una vez que los animales decomisados llegaron a las instalaciones de la SDA, procedentes del Aeropuerto Internacional El Dorado o del terminal de transporte terrestre de Bogota, los animales fueron objeto de un reconocimiento veterinario para determinar su estado de salud. Los animales fueron anestesiados y se procedio con la extraccion de 1-3ml de sangre para las pruebas medicas correspondientes. Una pequena fraccion de esa sangre se deposito en tubos con EDTA disodico para el analisis genetico. Los protocolos seguidos fueron aquellos aceptados por el estado colombiano para el caso de fauna silvestre decomisada. De esos 133 especimenes recuperados, se analizaron, para este trabajo, 115 muestras que corresponden a cinco de los taxones incautados (tres especies de Cebus, una especie de Saguinus y diferentes taxones del genero Aotus). Tres de esas muestras fallaron en la amplificacion quedando, entonces, un total de 112 muestras secuenciadas. Las especies y el numero de ejemplares de cada una de ellas se puede observar en el Cuadro 1. Porcentualmente, el 51.13% de los primates decomisados correspondio a Saguinus leucopus, el 12.03% a Cebus albifrons, el 11.28% a Aotus sp, el 10.53% a Saimiri sciureus, el 8.27% a Cebus apella, el 3% a Saguinus oedipus, el 1.5% tanto para Cebus capucinus como para Callicebus cupreus y el 0.75% a Lagothrix lagotricha. Las especies cuyos individuos pudieron ser analizados, en un primer nivel de ejecucion, con secuencias procedentes de ejemplares muestreados en la naturaleza fueron: Saguinus leucopus, Aotus sp., y las tres especies de Cebus. Para S. leucopus, se disponian de 47 secuencias de especimenes con origen geografico conocido. Para C. albifrons, se contaba con 106 secuencias de origenes geograficos precisos, representando 10 taxones (subespecies "sensu" Hershkovitz 1949) diferentes de esta especie. Para Aotus, se disponia de 134 secuencias, representando todos los taxones de Aotus reconocidos hasta la fecha. Para C. apella, se conto con 34 secuencias representando la mayor parte de los taxones reconocidos en Latinoamerica y con origen geografico exacto. Finalmente, para C. capucinus se dispusieron 112 secuencias representando todas las poblaciones geograficas reconocidas en Colombia, Costa Rica y Guatemala. Tambien se podria haber asignado geograficamente el ejemplar de Lagothrix lagotricha, ya que se dispone de mas de 160 secuencias de este taxon con origen geografico conocido, pero la extraccion de ADN para ese especimen no fue de adecuada calidad. Los ejemplares de Saimiri decomisados estan proximos a ser asignados, pero los resultados no estan disponibles para el presente estudio.

Analisis moleculares: La extraccion del ADN de las muestras de sangre se realizo empleando el protocolo estandar de fenol-cloroformo (Sambrook et al. 1989). Una vez que se obtuvo el ADN, se realizo PCR (Reaccion en Cadena de la Polimerasa) para amplificar la region del gen mtCOII. Para dicha amplificacion se obtuvo un volumen final de 50[micron]l, con 5[micron]l de Mg[Cl.sub.2], 6[micron]l de Buffer 10X, 2[micron]l de dNTP's (4pmol de cada primer), 2[micron]l de ADN (50-100ng por [micron]l), 2[micron]l de cada uno de los cebadores H7766 (5'-AACCATTTCATAACTTTGTCAA-3') y L6955 (5'-CTCTTAATCTTTAACTTAAAAG-3') (Ashley & Vaughn 1995) y 2[micron]l de Taq Polimerasa GoTaq (Promega). En el caso de Saguinus leucopus, la secuencia fue de 701 pares de bases (pb), para Aotus sp y Cebus apella fue de 590pb, para C. albifrons fue de 696pb y para C. capucinus fue de 710pb. Todas las secuencias fueron obtenidas directamente por los autores y ninguna de ella proviene del GenBank.

Para llevar a cabo la PCR se empleo un termociclador Bio-Rad y las condiciones fueron una denaturacion inicial a 95[grados]C por 2min, y de 35 ciclos que constaron de tres pasos: una denaturacion a 95[grados]C por 45s, un segundo paso de anillamiento a 50[grados]C por 30s y un tercer paso de extension a 72[grados]C por 35s. Se llevo a cabo una extension final a 72[grados]C por 5min.

Para determinar la obtencion del amplificado esperado, se llevo a cabo una electroforesis en gel de agarosa al 2% tenido con bromuro de etidio, visualizandose el posible amplificado en un transiluminador de rayos UV.

Las muestras que amplificaron fueron purificadas mediante columnas de Qiagen. Las secuencias fueron obtenidas mediante un secuenciador automatico de ADN 377A (ABI). Las muestras fueron secuenciadas en ambas direcciones y todas las muestras que no presentaron una secuencia limpia fueron secuenciadas hasta dos veces mas.

El gen mtCOII es un gen indispensable que juega un papel transcendental en el paso oxidativo terminal del metabolismo energetico, debido a que cataliza la transferencia de electrones desde el citocromo c reducido a oxigeno produciendo agua. Tambien es un gen trascendente en la sintesis de ATP en el proceso de la fosforilacion oxidativa (Capaldi 1990). En ciertos primates (platirrinos, catarrinos y Hominoidea) se observo el doble de la tasa de substitucion aminoacidica que en los prosimios (Adkins & Honeycutt 1994) y la variacion encontrada, tanto en las secuencias nucleotidicas como aminoacidicas, es, en los primates, muy superior a la encontrada en otros mamiferos, como los roedores (Ramharack & Deeley 1987). Por ejemplo, el terminal carboxilico de la proteina COII es en extremo variable en los primates neotropicales y muestra adiciones y deleciones de aminoacidos respecto a lo encontrado en otros mamiferos (Adkins & Honeycutt 1994).

Analisis de la Informacion: Los alineamientos de las secuencias de mtCOII se llevaron a cambio manualmente y con el programa DNA Alignment (Fluxus Technology Ltd). El primer analisis llevado a cabo fue la aplicacion del programa FindModel para determinar, entre 28 modelos evolutivos nucleotidicos diferentes, cual era el mas probable. Una vez determinados cuales fueron los modelos evolutivos optimos, los mismos fueron incorporados a los siguientes analisis.

Para asignar los ejemplares decomisados, se emplearon diversas metodologias filogeneticas con tasas de transiciones-transversiones que oscilaron entre 5:1 a 15:1 (Ashley & Vaughn 1995). Se emplearon diferentes metodos de distancias geneticas como la de dos parametros de Kimura (1980), la de tres parametros de Tamura (1992) y la del metodo Log-Det (Nei & Kumar 2000) mediante dos algoritmos para construir arboles filogeneticos, "neighborjoining" y UPGMA (Saitou & Nei 1987, Sneath & Sokal 1973, Tamura et al. 2004). Tambien se emplearon metodos de maxima verosimilitud, de maxima parsimonia y dos procedimientos diferentes con metodos bayesianos (Ronquist & Huelsenbeck 2003, Drummond & Rambaut 2007). Los programas empleados fueron Mega 4.1, PAUP*4.0b8, MrBayes v. 3.1 y BEAST v. 1.4.8. Se empleraron 1000 repeticiones "bootstrap" para determinar la robustez de los diversos grupos encontrados, en el caso de los arboles mostrados en este trabajo.

Para la elaboracion de los arboles filogeneticos fue necesario contar con uno o varios grupos externos ("outgroups") y de esta manera poder enraizar correctamente los arboles obtenidos. En el caso de las relaciones de Saguinus leucopus se utilizaron muestras de las especies del mismo genero, S. oedipus (procedentes de Colombia), S. fuscicollis y S. labiatus (ambos procedentes de la Amazonia peruana), de varios taxones de Lagothrix lagotricha (lugens, lagotricha y cana) procedentes de Colombia y Brasil, y de C. albifrons de Colombia. En el caso de Aotus sp. se emplearon muestras de Cebus albifrons, Cebus apella, Ateles paniscus, Ateles chamek y Ateles geoffroyi, procedentes de Colombia, Brasil, Peru y Guatemala. Para los arboles de C. albifrons y C. capucinus, se utilizaron como miembros externos secuencias de Lagothrix lagotricha lugens procedentes de Colombia, mientras que para C. apella se utilizo como miembro externo a Aotus azarae boliviensis procedente de Bolivia. Todas esas muestras fueron directamente obtenidas en la naturaleza por el primer autor. Como este no es un analisis propiamente filogenetico, se muestra solamente un unico arbol por especie que presenta, lo mas claramente posible, la asignacion de los individuos decomisados con muestras procedentes de la naturaleza.

RESULTADOS

Se presenta el arbol filogenetico de los ejemplares decomisados, Saguinus leucopus, Fig. 1, Aotus, Fig. 2; Cebus albifrons, Fig. 3; Cebus capucinus, Fig. 4; Cebus apella, Fig. 5). Para Saguinus leucopus (Fig. 1), el arbol que se presenta es mediante el algoritmo "neighbor-joining" con la distancia de tres parametros de Tamura (1992). Se observo una muy baja diferenciacion entre las agrupaciones obtenidas (valores muy bajos del porcentaje de "bootstrap") y muy poca estructuracion en las ramas del arbol.

En la asignacion de los individuos del genero Aotus, se pudo determinar con exactitud a que taxones pertenecian los individuos decomisados. Para ello se muestra un arbol de maxima parsimonia y 69 ejemplares de Aotus, no se incluyeron todas las secuencias obtenidas previamente para este genero en el presente analisis por no ser necesario para ubicar los ejemplares decomisados (Fig. 2). Se determino un clado de A. vociferans (68% de "bootstrap"). En el interior de este clado se encontraron cuatro acervos geneticos diferenciados. Se observo que uno los individuos decomisados (SDA16) se agrupo en el tercer subconjunto de A. vociferans (32% de "bootstrap"), siendo esta especie de origen amazonico. Por lo tanto, de los ejemplares decomisados por la SDA, los Aotus procedian de la Amazonia. Se obtuvo otra agrupacion que correspondio a la especie A. griseimembra (97% de "bootstrap") de siete individuos. Un tercer ensamble, altamente relacionado con el anterior, correspondio a A. brumbacki (99% de "bootstrap") en el que se agruparon cuatro de los individuos.

Para Cebus albifrons, se muestra el arbol "neighbor-joining" con la distancia de tres parametros de Tamura (1992) (Fig. 3). Ciertas agrupaciones muestran ser muy solidas ya que poseen elevados porcentajes de "bootstrap", aunque la relacion entre esas agrupaciones principales no resulto bien establecida. En el norte de Colombia aparecen tres clados bien consolidados: uno conformado por C. a. versicolor, C. a pleei y C. a. cesarae; otro por C. a. leucocephalus, y un tercero por C. a. malitosus. Igualmente, se detectaron cinco acervos geneticos diferentes en los Llanos Orientales y el Amazonas. El Clado I Amazonico estuvo constituido exclusivamente por ejemplares de Vaupes. De este clado parece haber descendido el grupo integrado por versicolor-pleeicesarae. El Clado II podria estar compuesto por varios grupos diferentes, pero estarian basicamente relacionados con C. albifrons albifrons. El Clado III se extenderia por la Amazonia brasilena, colombiana y peruana y podria representar C. a. unicolor. El Clado IV estaria conformado por haplotipos dispersos por la Amazonia peruana, colombiana y brasilena y podrian representar C. a. yuracus. Este grupo podria haber generado C. a. leucocephalus de la parte norte de Colombia. El Clado V tambien se encontraria disperso por diferentes partes de la Amazonia colombiana y peruana y habria dado lugar a C. a. malitosus. Dos individuos decomisados pertenecieron al grupo versicolor, uno al grupo pleei, 10 al grupo de leucocephalus y uno no pudo ser asignado a ninguno de los taxones de C. albifrons analizados, mostrando una secuencia altamente divergente de los restantes C. albifrons analizados.

En el caso de Cebus capucinus, se presenta un arbol "neighbor-joining" con la distancia de dos parametros de Kimura (1980) (Fig. 4). No se incluyeron todas las secuencias disponibles de esta especie ya que no fueron necesarias para la funcion requerida. Se encontraron cuatro acervos geneticos. Un primer acervo perteneciente a la parte del norte del Choco, Sucre y Cordoba; un segundo acervo de la zona norte del Magdalena, Antioquia y Cauca; un tercero de Costa Rica y Guatemala; y en cuarto lugar, ciertos haplotipos diferenciados del Cauca. Los dos ejemplares analizados procedentes de la SDA presentaron una fuerte similitud genetica a los haplotipos del norte del Choco, Sucre y Cordoba.

[FIGURA 1 OMITIR]

[FIGURA 2 OMITIR]

[FIGURA 3 OMITIR]

[FIGURA 4 OMITIR]

En el caso de Cebus apella, se muestra el arbol con el metodo de maxima parsimonia (Fig. 5). Diez de los once ejemplares procedentes de la SDA mostraron una alta asociacion entre si y estuvieron relacionados con ejemplares procedentes de los Departamentos de Meta, Vichada, Arauca y Guainia. Este grupo, a su vez, estuvo asociado a un clado que contenia cuatro especimenes de C. apella de Guyana Francesa y un ejemplar capturado en el norte del rio Negro, relativamente cerca de Manaus (Brasil). Por lo tanto, esos ejemplares decomisados provienen de los Llanos Orientales colombianos y deberian ser liberados en esa area de Colombia. El unico animal que no quedo englobado en ese grupo (10800080) mostro ser extremadamente divergente y no pudo ser asignado a ninguno de los taxones de Cebus apella, o relacionados con C. apella, que se analizaron en el presente trabajo. Ninguno de los C. apella de la SDA tuvo un origen amazonico. En el arbol se observa un gran grupo basicamente amazonico con animales procedentes de diferentes regiones de la Amazonia colombiana, peruana, boliviana y brasilena. Dentro de este grupo tambien quedo agrupado un ejemplar de C. robustus muestreado en el estado brasileno Espiritu Santo. Relacionado con ese grupo tambien aparecio un grupo de ejemplares muestreados en el sur de Brasil (Mato Grosso) y Paraguay (C. a. paraguayanus=cay). Mas divergentes, y a los que se puede considerar especies diferenciadas de C. apella como han sugerido otros autores (Rylands et al. 1997, Groves 2001), aparecieron C. xanthosternos y C. nigritus.

[FIGURA 5 OMITIR]

DISCUSION

Saguinus leucopus: La asociacion de ejemplares de Saguinus leucopus en los diferentes clados es independiente del lugar geografico de procedencia de las muestras, por lo que es posible concluir que, para esta especie, se presenta un solo acervo genetico que se localiza a lo largo de todo su rango de distribucion, por lo que, la liberacion de ejemplares en cualquier lugar del rango geografico propio, no tendria efectos geneticos negativos "a priori" en las poblaciones receptoras. Se observo, tambien, como los haplotipos de S. oedipus (los cuatro ejemplares procedentes de la SDA) se encontraron entremezclados con los haplotipos de S. leucopus. Esto pone en evidencia que ambas especies estan altamente relacionadas desde una perspectiva filogenetica y algunos autores (como Hernandez-Camacho & Cooper 1976) las consideraron subespecies. Por el contrario, S. fuscicollis y, especialmente, S. labiatus estan filogeneticamente mas alejados de S. leucopus.

S. leucopus se localiza principalmente en el noreste de Antioquia, en los municipios de Caceres y Valdivia, en el valle medio del rio Nechi, el sur de Bolivar (incluyendo la isla de Mompos) y la orilla occidental del Rio Magdalena en el departamento de Caldas y en el norte de Tolima (hasta las cercanias de Mariquita) (Defler 2003, Morales-Jimenez et al. 2004). Los ejemplares aqui analizados procedentes del medio natural fueron muestreados en una zona del Tolima, en otra zona de Caldas y diversas areas de Antioquia, mas algunos ejemplares procedentes del Departamento de Bolivar. Los ejemplares decomisados no formaron agrupaciones consistentes con areas geograficas determinadas con lo que no se aprecio ninguna objecion para liberarlos en cualquier zona con las condiciones ecologicas pertinentes y dentro del rango de distribucion de la especie. Sin embargo, cabe resaltar que Leguizamon et al. (2006) y Ruiz-Garcia et al. (2010f) reportaron la capacidad de discriminar dos acervos geneticos diferentes en el rango de distribucion endemico en Colombia de esta especie, mediante nueve marcadores microsatelites (STRPs), uno correspondiente al sur de la distribucion (Departamento del Tolima) y otro mas al norte en el Departamento de Antioquia. Es posible que los microsatelites, al ser extremadamente polimorficos, hayan sido mas sutilmente afectados, que las secuencias mitocondriales, por procesos de deriva genetica que hayan acaecido en esas poblaciones debido a la destruccion de habitat, fijando diferentes alelos en cada uno de los dos acervos geneticos citados. Sin embargo, las secuencias mitocondriales pueden mostrar de una forma mas precisa como fue el proceso de colonizacion del area donde esta especie existe y como, primariamente, no hubo ninguna barrera para el flujo genico entre las poblaciones originales, que fueron dispersandose por el rango de distribucion geografica alcanzado por la especie. Por lo tanto, parece claro que no existe ningun proceso sub-especiativo en el seno de S. leucopus. Igualmente, el ADN mitocondrial reconstruye unicamente la evolucion de los linajes femeninos. Si existiera un flujo genico diferencial entre machos y hembras (con los machos presentando un flujo genico mas reducido que las hembras), ese evento tambien ayudaria a explicar las diferencias encontradas entre marcadores nucleares (microsatelites) y el ADN mitocondrial.

Aotus sp.: Resulto evidente que de los 14 Aotus decomisados analizados, 11 procedieron de dos taxones de cercania geografica a Bogota (griseimembra y brumbacki). Curiosamente, dos individuos decomisados quedaron agrupados con el grupo integrado por A. azarae azarae (norte de Argentina y Paraguay) y A. azarae boliviensis (Bolivia), cuando estas no son especies que se encuentren en Colombia. Eso induce a pensar que pueden haber llegado a Colombia especimenes de Aotus, probablemente, procedentes de Argentina o Paraguay. Es probable que la utilizacion de ejemplares del genero Aotus en laboratorios, donde se investiga acerca de la malaria y otras enfermedades tropicales, haya potenciado el trafico ilegal de otras especies de Aotus no presentes en Colombia (Ruiz-Garcia et al. 2010a). En Colombia estan presentes otros taxones de Aotus: A. lemurinus lemurinus (=hershkovitzi), en las montanas de las cordilleras Central y Oriental (siempre en altura); A. zonalis (A. lemurinus zonalis) en la zona chocoana alcanzando Panama; posiblemente A. trivirgatus en el area de Maipures (Departamento del Vichada) en la frontera de la Orinoquia entre Colombia y Venezuela, pudiendose, eventualmente, dar una especie adicional para Colombia, A. jorgehernandezi en la zona del Quindio (Torres et al. 1998, Defler & Bueno 2007). Futuros ejemplares de Aotus decomisados en Bogota podran ser asignados a cualquiera de los taxones presentes en Colombia, o Latinoamerica, ya que en nuestro laboratorio se han generado secuencias para todos los taxones de este genero.

Cebus albifrons: Se observo que la mayor parte de C. albifrons decomisados en el ano 2008 en Bogota (10/14) proceden de la orilla derecha del rio Magdalena atravesando los departamentos de Santander y norte de Santander hasta la region del Catatumbo. Esta es una especie que presenta una distribucion muy fragmentada en Colombia. Hershkovitz (1949) determino la existencia nueve subspecies de C. albifrons en Colombia, malitosus, cesarae, pleei, versicolor y leucocephalus en el norte del pais, adustus y albifrons en los Llanos Orientales; en la Amazonia unicolor y yuracus. Estudios posteriores (Hernandez-Camacho & Cooper 1976, Defler & Hernandez-Camacho 2002) disminuyeron el numero de subespecies para Colombia: cesarae, pleei, versicolor y leucocephalus que fueron asignados a una unica subespecie, versicolor, mientras que adustus, albifrons y unicolor a la unica subespecie, albifrons. Por el contrario, Ruiz-Garcia et al. (2010e) mostraron a nivel molecular como la clasificacion de Hershkovitz (1949) esta sustentada (con la excepcion de C. a. adustus) y, por lo tanto, es importante considerar los diferentes acervos geneticos de la parte norte del pais, y no liberar ejemplares de esta especie en cualquier lugar de la distribucion geografica de versicolor sensu Hernandez-Camacho & Cooper (1976). Igualmente importante tener en cuenta que en la Amazonia existen en simpatria dos o tres taxones de C. albifrons (grupos III, IV y V, siguiendo la nomenclatura de RuizGarcia et al. 2010e), lo cual dificultaria la liberacion de C. albifrons en diversas zonas de la Amazonia peruana, colombiana y brasilena. Sin embargo, todas las muestras decomisadas en Bogota parecen pertenecer a grupos del norte de Colombia, con la excepcion de un ejemplar que no pudo ser asignado a ningun taxon de C. albifrons en Colombia.

Cebus capucinus: Diversos autores han considerado cuatro subespecies de C. capucinus (Rylands et al. 1997): C. c. capucinus, propia de la Colombia continental en la zona Pacifica y Caribe; C. c. curtus, en la isla de Gorgona en el Pacifico colombiano; C. c. imitator, en Panama y Costa Rica; y C. c. limitaneus, en Nicaragua, Honduras y Belice (poblaciones de este taxa tambien estan presentes en Guatemala; Ruiz-Garcia, observ. pers.). Parece que en Colombia existen dos acervos geneticos definidos: uno que se extiende por el norte del Choco, Sucre y Cordoba y ciertas zonas del Cauca y Valle del Cauca, y otro, que se extiende por Antioquia y diversas areas del Magdalena y del Cauca. El primer acervo estaria mas relacionado con el centroamericano detectado, que con el segundo acervo determinado en territorio colombiano. Por otra parte, no pareciera consolidarse la existencia de dos subespecies en Centroamerica. Las secuencias de dos ejemplares de Costa Rica fueron muy semejantes a la de un individuo muestreado cerca de Livingstone (Guatemala). Esta es una especie infrecuente en los decomisos de Bogota, debido a la lejania entre su rango de distribucion y la capital colombiana.

Cebus apella: El analisis molecular con este taxon mostro basicamente que a Bogota arriban ejemplares de los Llanos Orientales, y no del Amazonas, y que esta poblacion esta altamente relacionada con el holotipo de la especie descrito por Linneo y restringido por Humboldt y Hershkovitz (1958) a la Guyana francesa, C. a. apella. Groves (2001) definio como C. a. fatuellus la forma de apella descrita en la parte superior de la cuenca del Magdalena por Tate y que el visualizo en el Departamento del Meta, en el rio Guaviare. Por lo tanto, se podrian dividir en dos subespecies diferentes esas poblaciones de C. apella al norte del Rio Amazonas, C. a. apella y C. a. fatuellus (esta ultima especifica de Colombia). Igualmente, la afirmacion de Hernandez-Camacho & Cooper (1976) por la cual unicamente existiria un unico acervo genetico de C. apella en Colombia parece incorrecto. Claramente, existen dos acervos geneticos diferenciados en este pais sudamericano. El ya comentado en los Llanos Orientales y norte de la Amazonia colombiana (Departamento del Guainia) y otro en el resto de la Amazonia colombiana que tambien se distribuye ampliamente por la Amazonia peruana, boliviana y brasilena. Este ultimo lo designaremos tentativamente C. apella macrocephalus. No parece que los otros taxones atribuibles a C. apella en la Amazonia occidental (y en otras partes de Brasil) tengan razon de ser a la luz de las secuencias del gen mtCOII: ejemplares que geografica y morfologicamente fueron clasificados "a priori" como C. a. maranonis, C. a. peruanus, C. a. pallidus (o C. libidinosus pallidus), C. a. juruanus (o C. libidinosus juruanus) e, incluso, C. robustus fueron parte de este gran clado basicamente, pero no exclusivamente amazonico. Sin embargo, existen tres clados bien sustentados por el porcentaje de "bootstrap" y que pueden conformar tres taxones, relacionadas con C. apella, pero diferentes. Este seria el caso de C. cay (=C. a. paraguayanus) y que nosotros consideramos una subespecie mas de C. apella porque sus distancias geneticas con respecto a C. a. macrocephalus son muy limitadas, C. xanthosternos (muestras procedentes del Centro de Primatologia de Rio de Janeiro donadas por el Dr. A. Pissinati y procedentes del sudeste del estado brasileno de Bahia) y C. nigritus (muestras procedentes de la provincia de Misiones, nordeste de Argentina). La taxonomia y filogeografia de C. apella, y taxones relacionados, se discute en Rylands et al. (2005) y Ruiz-Garcia & Castillo (2010).

Por lo tanto, las secuencias del gen mtCOII mostraron un alto poder de determinacion y asignacion de los primates decomisados, en Bogota, a diversos acervos geneticos, con una distribucion geografica especifica para las especies de primates colombianas. De este modo, es posible utilizar esta herramienta molecular para asignar ejemplares, que permita la reintroduccion, en las areas geograficas originales, antes de ser ilegalmente extraidos de sus respectivos ambientes. El metodo es replicable y rapido, y ya se ha conformado en Colombia el primer banco de secuencias para ese fin.

Sin embargo, para poder proceder en ese sentido, se hace necesario analizar previamente una elevada cantidad de muestras con origenes geograficos conocidos de taxones de esos generos, a lo largo de la geografia colombiana y de otros puntos de Latinoamerica (especialmente Peru, Ecuador, Venezuela y Brasil), ya que existe un trafico ilegal de fauna que implica varios paises latinoamericanos.

AGRADECIMIENTOS

Agradecemos los recursos economicos obtenidos mediante el proyecto "Fortalecimiento del control y prevencion del trafico ilegal de fauna silvestre, especialmente de primates, a traves de la determinacion de zonas sometidas a extraccion ilegal utilizando pruebas de genetica molecular de poblaciones" financiado por la SDA y la Pontificia Universidad Javeriana. La financiacion de los proyectos con genetica de poblaciones y filogeografia molecular de delfines de rio por parte de Colciencias (Proyecto 1203-09-11239; Geographical population structure and genetic diversity of two river dolphin species, Inia boliviensis and Inia geoffrensis, using molecular markers) y al Fondo para la Accion Ambiental (US-Aid) (120108 E0102141; Structure and Genetic Conservation of river dolphins, Inia and Sotalia, in the Amazon and Orinoco basins) permitieron al primer autor conseguir miles de muestras de mamiferos amazonicos en Colombia, Peru, Ecuador, Bolivia y Brasil, muchas de ellas pertenecientes a los primates estudiados. Sin la ejecucion de esos proyectos no se habrian podido conseguir buena parte de las muestras de primates que fueron comparadas con las de los primates decomisados por la SDA. Gracias a la Dra. Diana Alvarez, Pablo Escobar-Armel y Luisa Fernanda Mora-Castellanos por la invaluable ayuda en la obtencion de muestras de primates con un origen geografico preciso. Se agradece de forma especial al Ministerio de Medio Ambiente de Peru, a PRODUCE (Direccion Nacional de Extraccion y Procesamiento Pesquero de Peru), al Consejo Nacional del Ambiente y al Instituto Nacional de Recursos Naturales (INRENA) por su ayuda en la obtencion de los permisos de colecta en Peru. Igualmente agradecemos a la Direccion General de Biodiversidad y CITES de Bolivia por facilitar los permisos de recoleccion de muestras en ese pais. Se agradece de forma enfatica a las comunidades Ticuna, Yucuna, Yaguas, Witoto y Cocama en la Amazonia colombiana, a las comunidades Bora, Ocaina, Shipibo-Comibo, Capanahua, Angoteros, Orejon, Yaguas, Cocama, Kishuarana y Alama en la Amazonia peruana, a las comunidades Maruba, Matis, Mayoruna, Kanaimari, Kulina, Maku y Waimiri-Atroari en la Amazonia brasilena, y a las comunidades Siriono, Canichana, Cayubaba y Chacobo en la Amazonia boliviana. Damos gracias por la ayuda, en forma de muestras, proporcionadas por Armando Castellanos (Fundacion Zoobreviven) y Luis Albuja (Escuela Politecnica Nacional de Quito) desde el Ecuador, al Dr. Alcides Pissinatti del Centro de Primatologia de Rio de Janeiro (Brasil), quien nos hizo llegar dos muestras de Cebus xanthosternus, al Dr. Benoit de Thoysi, quien nos proporciono cuatro muestras de Cebus apella apella de Guyana Francesa y a Hugo Galvez (Iquitos, Peru), por proporcionar gran cantidad de muestras de Aotus, Saimiri, Saguinus y Cacajao. Agradecemos la ayuda prestada por Corantioquia, Corpoamazonia, Corpocaldas, Instituto Humboldt, URRAS, UNAU, WSPA, Natura, y Omacha (en Colombia), al Centro de Primatologia de Iquitos (Peru) y muy especialmente a la Coleccion Boliviana de Fauna (Dra. Julieta Vargas), a WCS Bolivia (Dr. Robert Wallace) y la Universidad de San Andres (Dra. Volga Iniguez) en La Paz (Bolivia).

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Manuel Ruiz-Garcia (1), Norberto Leguizamon (2), Catalina Vasquez (1), Karen Rodriguez (1) & Maria Ignacia Castillo (1)

(1.) Grupo de Genetica de Poblaciones Molecular-Biologia Evolutiva, Unidad de Genetica, Departamento de Biologia, Facultad de Ciencias, Pontificia Universidad Javeriana, Cra 7a No 43-82. Bogota DC, Colombia; mruiz@javeriana.edu.co, mruizgar@yahoo.es

(2.) Secretaria Distrital Ambiental (SDA), Bogota, DC, Colombia.

Recibido 16-VIII-2009. Corregido 19-I-2010. Aceptado 22-II-2010.
CUADRO 1

Composicion de especies de primates decomisados por
la SDA en 2008. En sombreado gris son las especies
analizadas molecularmente con resultados concluyentes
en cuanto al lugar geografico preciso y conveniente para
la liberacion. En blanco, muestras recibidas pero no
analizadas o no incluidas en el presente trabajo.

TABLE 1
Species composition of confiscated primates
by the SDA in 2008. In gray shadow, species
molecularly analyzed with clear results
regarding their right geographic origins
for liberation purposes. In white, samples
received but not analyzed or not included
in the current work.

Especie                  No. de
                       individuos

Cebus albifrons            16
Saguinus leucopus          68
Aotus sp.                  15
Cebus apella               11
Cebus capucinus            2
Saguinus oedipus           4
Saimiri sciureus           14
Lagothrix lagotricha       1
Callicebus cupreus         2
TOTAL                     133
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Author:Ruiz-Garcia, Manuel; Leguizamon, Norberto; Vasquez, Catalina; Rodriguez, Karen; Castillo Ignacia, Ma
Publication:Revista de Biologia Tropical
Article Type:Report
Date:Sep 1, 2010
Words:7596
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