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Lasiodiplodia theobromae agente causal de la pudricion blanda de frutos de Artocarpus heterophyllus Lam. en Nayarit, Mexico/Lasiodiplodia theobromae agente causal de podridao mole de frutas de Artocarpus heterophyllus Lam. em Nayarit, Mexico.

La yaca (Artocarpus heterophyllus Lam.) es originaria de las selvas tropicales de India (APAARI, 2012) y se aprovecha principalmente el fruto (LOVE y PAULL, 2011). En Mexico, Nayarit es el principal estado productor de yaca al concentrar el 90 % de la superficie plantada destinando la mayor parte de la produccion a los Estados Unidos de America (SIAP, 2016). En Nayarit el cultivo de yaca produce fruta todo el ano (LUNA et al., 2013) y su produccion es afectada por enfermedades fungosas dentro de las cuales destaca la pudricion blanda en la epidermis de los frutos que inicia con un amarillamiento en el pericarpio, aproximadamente un mes antes de que el fruto llegue a madurez fisiologica. Los patogenos asociados a la pudricion de frutos de yaca son Rhizopus stolonifer (Enrenb.) Vuill. en India (GHOSH et al., 2015) y Tailandia (R. artocarpi Racib. = R. stolonifer) (APAARI, 2012). Nelson (2005) menciona que Rhizopus arrhizus A. Fisch. (= R. oryzae Went & Prins. Geerl.) y R. stolonifer tambien son capaz de causar pudricion en frutos de yaca con perdidas del 15 al 32 % (GHOSH, 1994). Ni et al. (2008) y Rahman et al. (2015) reportaron a Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl. y Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary en frutos de yaca en Taiwan y Bangladesh, respectivamente. En Nayarit, Ragazzo et al. (2011) reportaron a Aspergillus niger Tiegh. como el patogeno causante de la pudricion poscosecha de frutos de yaca. Por lo anterior, el objetivo de esta investigacion fue identificar mediante caracteres morfologicos y moleculares el patogeno de la pudricion blanda en frutos de yaca en Nayarit, Mexico. Los muestreos se realizaron en las localidades de El Llano y Las Varas en los municipios de San Blas y Compostela. Se recolectaron frutos con sintomas de pudricion blanda, se secciono el tejido de la zona de avance de la enfermedad, se desinfecto con NaClO al 3 % por 2 min, se enjuago con agua destilada esteril en tres tiempos por 2 min y se coloco en toallitas de papel esteril para su secado a temperatura ambiente, finalmente se sembraron en cajas de Petri (SYM[R]) con medio de cultivo papa dextrosa agar (PDA-BIOXON [R]) y se incubaron a 28 [degrees]C [+ or -] 2 [degrees]C por 7 dias [R]) (AGRIOS, 2005), una vez desarrollados los hongos, se purificaron mediante la tecnica descrita por Manandhar et al. (1995) para obtener cultivos monosporicos y posteriormente realizar la identificacion morfologica a nivel de genero mediante claves taxonomicas de Barnett y Hunter (2006). La inoculacion se realizo en frutos asintomaticos en estado de madurez fisiologica mediante dos procedimientos, el primero consistio en causar lesiones (heridas de 2 [cm.sup.2]) en el fruto y el segundo consistio en inocular a los frutos sobre el pericarpio (sin causarles heridas). El inoculo consistio en segmentos de PDA con micelio de 0.5 [cm.sup.2] mientras que los testigos consistieron de segmentos de PDA sin inoculo infectivo. Los frutos inoculados se incubaron a 23 [degrees]C y 74 % de humedad relativa, se revisaron diariamente y los que mostraron sintomas de pudricion se procesaron para el reaislamiento. Se describieron los caracteres morfologicos macroscopicos cualitativos y cuantitativos del hongo patogeno realizando preparaciones semipermanentes. La extraccion de ADN se realizo por PCR a partir de un cultivo de 3 dias de crecimiento en medio de cultivo solido PDA a 28 [degrees]C mediante la tecnica descrita por AHRENS y SEEMULLER (1992). Se amplifico la region espaciadora transcrita interna (ITS) del ADN utilizando los cebadores ITS5 (5'-TCCTCCGCTTATTGA TATGC-3') e ITS4 (5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3') (WHITE et al., 1990) y se secuencio. De los 150 fragmentos de tejido sembrados en PDA, se aislaron los generos: Colletotrichum sp., Aspergillus sp., Cunninghamella sp., Rhizopus sp. y Lasiodiplodia sp., sin embargo, solo Lasiodiplodia sp. reprodujo el sintoma de pudricion blanda en el area inoculada (Fig. 1), a los 5 dias post-inoculacion (dpi) en 87.5 % de los tejidos con herida y en tejido sin herida se manifesto a los 6 dpi en un 62.5 %, en ambos casos se presento la pudricion total de los frutos a los 9 dpi. Los sintomas y el tiempo de aparicion fue similar a lo reportado por Ni et al. (2008) en Taiwan en frutos de yaca, quienes a los 6 dpi con L. theobromae, los frutos con herida mostraron sintomas en el area inoculada, principalmente manchas amarillentas, que se tornaron de color cafe y finalmente adquirieron un color cafe marron oscuro de aspecto humedo y sobre ellas se observo el desarrollo de micelio y esporulacion de color gris a negro. El crecimiento diario promedio de la pudricion con herida fue de 5.58 cm de longitud por 4.46 cm de ancho, los frutos inoculados sin herida de longitud crecio 5.73 cm y de ancho 5.23 cm. Algunas manchas alcanzaron un tamano de 12 cm lineales en 4 dias, mientras que Ni et al. (2008), reporta un tamano de manchas de 10 cm en 5 dias.

Lasiodiplodia theobromae mostro un crecimiento uniforme y continuo in vitro con un promedio de 4.6 cm, del primer al quinto dia, las colonias desarrollaron micelio algodonoso abundante de color blanco-grisaceo aereo que se torno gris olivaceo, el centro de la caja se observo un color gris oscuro mientras que al reverso fue grisaceo (1-3 dias), despues se torno negro; a los 20 dias se observaron conidiomas picnidiales. Los conidios jovenes fueron ovales, hialinos y de paredes delgadas sin septos mientras que los conidios maduros mostraron un color marron oscuro y de paredes gruesas con un tabique mediano y estriaciones longitudinales.

Haque et al. (2005) reportaron a esta enfermedad como el tizon de la hoja en yaca en Bangladesh causada por L. theobromae (=Botryodiplodia theobromae Pat.). En el Pacifico Sur de Asia se registro a L. theobromae ocasionando defoliacion prematura de hojas y la enfermedad rosada en ramas junto con otras especies de Lasiodiplodia (APAARI, 2012). A nivel mundial ha sido registrado en diversos cultivos tales como fresa (Fragaria x ananassa Duchense) en Turquia (YILDIZ et al., 2014), pomelo (Citrus grandis L. Osbeck) en China (LUO et al., 2011), naranja china (Fortunella margarita Lour. Swingle) en Taiwan (KO et al., 2004), aguacate (Persea americana Mill.) en Italia (GARIBALDI et al., 2012), mango (Mangifera indica L.) en Pakistan y Brasil (SHAHBAZ et al., 2009; MARQUES et al., 2013), rambutan (Nephelium lappaceum L.) en Sri Lanka (SIVAKUMAR et al., 1997), papaya (Carica papaya L.) en Brasil (QUEIROZ et al., 1997), maranon (Anacardium occidentale L.) en Brasil (CARDOSO et al., 2002), longan (Dimocarpus longan L.) en Puerto Rico (SERRATO-DIAZ et al., 2014), entre otros. En Mexico, L. theobromae se ha reportado en cultivos fruticolas como zapote (Pouteria sapota (Jacq.) HE Moore y Stearn) (MORALES et al., 2008; VASQUEZ-LOPEZ et al., 2009), vid (Vitis vinifera L.) (URBEZ-TORRES et al., 2008), nuez (Carya illinoensis Wood) (ALVIDREZ-VILLARREAL et al., 2 012), papaya (Carica papaya L.) (ROJO, 2013) y mango (Mangifera indica L.) (SANDOVAL-SANCHEZ et al., 2013). Con base a las pruebas de patogenicidad positiva, caracteres morfologicos y secuencia genomica en el GENBANK (NCBI, 2017), se obtuvo una homologia del 99 % con L. theobromae, (numero de acceso KX462997.1: KM278132.1) por lo que se determino que este patogeno es el agente causal de la pudricion blanda marron de los frutos de yaca en Nayarit, Mexico, siendo el primer reporte de este patogeno asociado a frutos de yaca en el pais, ademas, de mostrar la capacidad de causar la enfermedad en frutos con o sin heridas.

DOI: http://dx.doi.org/10.1590/0100-29452018018

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Maria de Los Angeles Medina Tiznado (1), Gregorio Luna Esquivel (2), Octavio Jhonathan Cambera Campos (2), Leobarda Guadalupe Ramirez Guerrero (2), Claudio Rios Velasco (3)

Corresponding author: gollole@hotmail.com

Received: February 08, 2018.

Accepted: March 09, 2018.

(1) Post degree on Agricultural, Biological Sciences, Autonomous University of Nayarit, Xalisco, Nayarit, Mexico. Km 9, Tepic-Compostela Highway, Xalisco, Nayarit, Mexico. P. C. 63155. E-mail: eleazar_225@hotmail.com

(2) Professor-Researcher of Post degree in Agricultural Biological Sciences- Academic Unit of Agriculture, Autonomous University of Nayarit. Km. 9, Tepic-Compostela Highway, Xalisco, Nayarit, Mexico. P. C. 63155. E-mail: gollole@hotmail.com, jhony695@gmail.com, leo.ram89@ hotmail.com

(3) Center for Research in Food and Development, AC, Cuauhtemoc Unit, Av. Rio Concho s / n Industrial Park, City Cuauhtemoc, Chihuahua Mexico. P. C. 31570 E-mail: claudio.rios@ciad.mx

Caption: Figura 1--Sintomas de pudricion de frutos de yaca causados por Lasiodiplodia theobromae, A) Testigo con herida, B) Testigo sin herida, C) Pudricion marron a partir del area inoculada con herida, D) Inicio de sintoma de la enfermedad a partir del area inoculada sin herida E) Pudricion completa del fruto y esporulacion del patogeno F) Pudricion interna de fruto (zona de avance de la enfermedad).
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Title Annotation:Plant Protection
Author:de Los Angeles Medina Tiznado, Maria; Esquivel, Gregorio Luna; Campos, Octavio Jhonathan Cambera; Gu
Publication:Revista Brasileira de Fruticultura
Date:Dec 15, 2018
Words:2541
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