Printer Friendly

Inhibicion de la formacion de [beta]-hematina de especies colombianas de Piper spp. y Calophyllum spp. como potenciales agentes antimalaricos.

Inhibition of [beta]-hematin formation of Colombian species of Piper spp. and Calophyllum spp. As potential antimalarial agents

La malaria es causada por un parasito de genero Plasmodium, transmitido a los seres humanos por la picadura de la hembra del mosquito infectado de genero Anopheles, que se reproduce en regiones que combinan calor, humedad y vegetacion (OMS, 2017). Alrededor de 3 200 millones de personas estan en riesgo de contraer la enfermedad en 97 paises y se estima que ocurrieron en el mundo en el 2015, 198 millones de casos (intervalo: entre 124 millones y 283 millones) (OMS, 2016). Las principales especies de Plasmodium que afectan al hombre son P vivax y P falciparum, la mas peligrosa es P falciparum, dada su patogenicidad y resistencia a los principales antimalaricos que en muchas ocasiones puede llevar a la muerte del individuo. Existen otras dos especies de importancia, P malariae y P. ovale, que causan formas benignas de la malaria (Chin, 2005; Gelb, 2007). En sangre, se diferencian cuatro formas parasitarias asexuadas: anillos o trofozoitos jovenes, trofozoitos maduros, esquizontes que al romperse liberan, merozoitos que son las formas que invaden los eritrocitos. (Londono, Carmona, & Blair, 2002; Olumese, 2006). La biologia y bioquimica del Plasmodio son topicos de interes cientifico en el diseno de nuevos farmacos antimalaricos (Liu et al., 2018). La mayoria de los medicamentos antimalaricos que estan ahora en uso no son desarrollados sobre la base de blancos moleculares previamente identificados, sino productos del hallazgo de la actividad antimalarica de productos naturales utilizados tradicionalmente como tal (por ejemplo, quinina y la artemisinina). Recientemente, gracias a una mejor comprension de la bioquimica de los parasitos de la malaria, se han podido identificar blancos potenciales para el diseno de nuevos medicamentos, los cuales han dado pautas sobre el modo de accion de muchos antimalaricos (Robert, Dechy-Cabaret, Cazelles, Benoit-Vical, & Meunier, 2002; Fidock, Rosenthal, Croft, Brun, & Nwaka, 2004).

Una de las vias y/o modos de accion de mayor relevancia en la literatura actual es la inhibicion de biocristalizacion del grupo hemo generado principalmente por los derivados de la cloroquina (MacRaild, Pedersen, Anders, & Norton, 2012). En la mayoria de su ciclo de vida en humanos, el parasito de genero Plasmodium habita en los globulos rojos. Dentro de los eritrocitos, el evento inicial es la endocitosis de la hemoglobina, que es transportada hacia una organela denominada la vacuola digestiva acida (pH 5.2), donde los parasitos procesan entre un 60 y 80% de la hemoglobina presente en el globulo rojo. Aqui es donde la parte proteica (globina) es degradada por una serie de enzimas proteoliticas incluyendo plasmepsinas I, II, y IV, proteasa histoaspartica (HAP), falcipainas 2 y 3 y falcilisinas para generar peptidos. Estos son degradados a aminoacidos debido a la limitada capacidad del parasito para sintetizarlos, generando como subproducto el hemo libre ferriprotoporfirina (IX) (Fe (III) PPIX) o (FP); (el FP en la vacuola digestiva representa solo el 3-5% del volumen total del parasito). Debido al medio acido de la oxihemoglobina, el hierro se oxida de [Fe.sup.2+] a [Fe.sup.3+] con la consecuente produccion de un 0.5 equivalente molar de [H.sub.2][O.sub.2] (Egan & Ncokazi, 2005; Egan, 2008). Tanto el FP y [H.sub.2][O.sub.2] son moleculas toxicas que el parasito necesita destruir o neutralizar. El FP "libre" en eritrocitos infectados con P falciparum ha sido cuantificado en 0.1-0.4 mM. Incluso se ha llegado a estimar que la concentracion local puede ser mucho mayor (Kumar, Guha, Choubey, Maity, & Bandyopadhyay, 2007). Esto sugiere que el parasito vive en constante peligro, por lo que su mecanismo para la desintoxicacion de FP debe ser preciso para evitar los efectos toxicos de los residuos metabolicos de estos dos productos generados. Se estima que el parasito realiza una detoxificacion mediante uniones coordinadas entre los grupos carboxilato y los [Fe.sup.3+] presentes en la FP, propiciando un fenomeno de biocristalizacion entre estos grupos, generando asi un producto de color carmelita oscuro denominado hemozoina o pigmento malarico, el cual no es toxico debido a su insolubilidad en agua a pH fisiologico o acido (Fitch, 2004). La inhibicion de la desintoxicacion FP, causa una acumulacion de moleculas toxicas de FP que eventualmente destruyen la integridad de las membranas del parasito de la malaria. La hemozoina se ha identificado quimicamente mediante difraccion de rayos X y espectroscopia mossbauer y la cual fue comparada con un compuesto de sintesis conocido como [beta]-hematina. El entendimiento de este proceso de biocristalizacion de FP ha llevado a la identificacion y busqueda de una serie de posibles nuevos compuestos antimalaricos (Biamonte, Wanner, & Le Roch, 2013).

El genero Piper perteneciente a la familia Piperaceae, se distribuye en todo el mundo con aproximadamente 2 300 especies. Este genero tiene una gran importancia comercial y economica, para la industria de condimentos, farmaceutica, insecticida y se ha reportado una amplia gama de plantillas estructurales como lignanos, saponinas, fenoles flavonoides y alcaloides (Gupta, Arias, Correa, & Lamba, 1979; Benevides, Sartorelli, & Kato 1999; Prasad et al., 1995). Igualmente, Clusiaceae es una de las familias de plantas en la cual se han encontrado compuestos con actividad antimalarica, como xantonas y derivados del acilfloroglucinol. Se han reportado estos compuestos en plantas de los generos Hypericum, Vismia y Garcinia. En la familia Clusiaceae, el genero Calophyllum lo componen cerca de 200 especies, algunas de las cuales presentan reportes sobre compuestos de tipo cumarinas, xantonas y triterpenos con actividades antimalarica, analgesica, antiviral, antiulcerogenica, anticancer, antibacteriana, y molusquicida (Noldin, Isaias & Filho, 2006). Es asi como los generos Piper y Calophyllum pudieran ser fuentes de metabolitos secundarios, sus especies han sido poco estudiadas en el campo de la malaria y en los mecanismos de accion conocidos de los principales antimalaricos. Este trabajo tiene como objetivo evaluar la potencialidad de los extractos de diferente polaridad de las especies Piper piedecuestanum, C. brasiliense, C. longifolium y Calophyllum sp. en la inhibicion de la formacion de [beta]-hematina.

MATERIALES Y METODOS

Recoleccion del material vegetal: Se recolectaron tres tipos de muestras a partir del material vegetal: una muestra para especimen de herbario, muestras como testigos de los especimenes recolectados y muestras de hojas y tallos para la obtencion de los extractos. El especimen para herbario fue procesado, depositado, caracterizado taxonomicamente en el herbario Universidad de Antioquia (HUA), y determinado como Piper piedecuestanum Trel. & Yunck. (Voucher 164502) recolectado en Piedecuesta, Santander- Colombia. Calophyllum brasiliense Cambess recolectado en el departamento de Antioquia- Angelopolis (Voucher 162467), Calophyllum longifolium Willd recolectado en el departamento de Caldas- Norcasia (Voucher 166377) y una morfoespecie Calophyllum sp. recolectada en el departamento de Risaralda- Belen Umbria (Voucher 167392).

Preparacion de los extractos de diferente polaridad: El material vegetal se sometio a un proceso de desecacion a temperatura ambiente con aireacion y sin exposicion a la luz solar durante 10 dias, posteriormente se pulverizo el material en un molino industrial hasta un tamano de particula de 5 mm para iniciar el proceso de extraccion. Se llevo inicialmente el material vegetal molido a un proceso de percolacion hasta agotamiento (5 dias/3 veces), utilizando etanol (E) destilado como solvente con cada una de las plantas Piper piedecuestanum (PP) (0.236 kg mezcla de hojas y tallos), C. brasiliense Cambess (CB) (0.015 kg de tallos), C. longifolium L (CI) (0.016 kg mezcla de hojas y tallos). Por otra parte, el material vegetal seco y molido de 0.36 kg de hojas y tallos de P piedecuestanum (PPHT); 1.64 kg de hojas de C. brasiliense Cambess (CBH); 1.74 kg de tallos de C. brasiliense Cambess (CBT); 0.13 kg de mezcla de hojas y tallos de C. brasiliense Cambess (CBHT); 0.27 kg hojas de C. longifolium L. (CIH), 0,25 kg de tallos C. longifolium L. (CIT); 0.78 kg de mezcla hojas y tallos C. longifolium L. (CIHT); 0.51 kg de hojas Calophyllum sp. (CSH); 0.43 kg de tallos de Calophyllum sp. (CST); 0.75 kg de mezcla de hojas y tallos de Calophyllum sp. (CSHT), se extrajo sucesivamente por 10 dias mediante percolacion (3 x 4 L) hasta agotamiento con solventes de polaridad ascendente previamente destilados: eter de petroleo (H), diclorometano (D), acetato de etilo (AE), y metanol (M). Los extractos fueron codificados con las iniciales de cada planta, tipo de material vegetal y solvente empleado. Despues de tres dias se comenzo la concentracion del extracto a presion reducida en un rotavapor y posteriormente pesados para obtener los porcentajes de extraccion segun la ecuacion 1.

% de Extraccion = Peso Extracto/Peso Material Vegetal x 1 00

Inhibicion de la biocristalizacion de [beta]-hematina: Para la evaluacion de la inhibicion de la biocristalizacion de [beta]-hematina por los extractos se utilizo el metodo colorimetrico segun Parapini et al. 2000, 2004; con algunas modificaciones (Parapini, Nicoletta, & Erica, 2000, Parapini et al., 2004). Un total de 100 [micron]l de una solucion 1.562 mM de cloruro de hemina disuelto en NaOH 0.2 M, se distribuyo en microplacas de 96 pozos (0.4 [micron]mol/ Pozo) con pipeta multicanal junto con 50 [micron]l de diferentes concentraciones de extractos en un rango: 5.0-0.078 mg/ml disueltos en dimetilsulfoxido (DMSO) al 100% y el control CQ se evaluo en un rango de 3.0-0.094 mg/ml. Se adiciono por triplicado cada concentracion y se realizaron dos replicas del ensayo. En los pozos control se adicionaron 50 [micron]l de DMSO para pozos sin tratamiento y control de cloroquina como referencia. La formacion de [beta]-hematina se inicio mediante la adicion de 50 [micron]l de acido acetico 2.175 M hasta un pH final de 2.8 y 50 [micron]l de solucion tampon de acetato de sodio ([C.sub.2][H.sub.3]Na[O.sub.2] x 3[H.sub.2]O) 0.75 M. La placa se incubo a 37[grados]C durante 24 h y despues se centrifugo a 4 500 G durante 1 h. La fraccion soluble del material fue descartada. El resto se resuspendio con 200 [micron]l de DMSO: H2O relacion 1:1 para eliminar la hematina sin reaccionar. Las placas nuevamente se centrifugaron a 4 500 G durante 15 min por triplicado y el sobrenadante fue descartado. El precipitado, se disolvio en NaOH 0.2 M para la cuantificacion espectrofotometrica. Una alicuota de 50 [micron]l de cada pozo se transfirio a un nuevo plato con 150 [micron]l de 0.2 NaOH. Un blanco de muestra a las mismas concentraciones disuelto en 150 [micron]l de 0.2 NaOH fue empleado. Antes de las lecturas se verifico la formacion de [beta]-hematina en un Spectronic 20 UV-Vis en el rango de 250-800 nm. La cantidad de [beta]-hematina inhibida por cada uno de los extractos se determino midiendo la absorbancia (Abs) a 595 nm utilizando un lector de ELISA (BioRad) y se calculo el porcentaje de inhibicion de [beta]-hematina segun la ecuacion 2.

% de Extraccion = Abs muestra - Abs Blanco de muestra/Abs Control x 100

Analisis estadistico: Los resultados de los porcentajes de inhibicion de los diferentes extractos y las concentraciones evaluadas son presentados como la media y su desviacion estandar (Media [+ o -] DS). Se realizo un modelo de regresion logistica no lineal y un analisis de varianza de dos vias (ANOVA) con un nivel de confianza de P < 0.05 empleando el programa GraphPad Prism 5.

RESULTADOS

Los porcentajes de material obtenido de los extractos de las especies de Piper y Calophyllum con los diferentes solventes y las concentraciones inhibitorias medias sobre la produccion de [beta]-hematina se presentan en el cuadro 1. Los mejores rendimientos de extraccion lo tuvieron los extractos de diclorometano de la mezcla de tallos y hojas de las especies P piedecuestanum (PPHTExtD) con 1.75% y para las especies de Calophyllum se presentaron maximos de rendimientos de extraccion en porcentaje en peso con respecto al material vegetal en los extractos metanolicos de la especie C. brasiliense de 6.209% (CBHTExtM), de la especie C. longifolium fue 6.130% (CIHExtM) y de la especie Calophyllum sp. fue de 8.138% (CSHTExtM).

El ensayo colorimetrico de inhibicion de [beta]-hematina es simple, robusto y presenta un bajo costo-efectivo que puede ser empleado para un tamizaje de extractos a partir de plantas, con la finalidad de identificar sustancias promisorias como agentes antimalaricos (Vargas et al., 2011). La optimizacion de esta tecnica permitio informar por primera vez la actividad inhibitoria de la [beta]-hematina de 40 extractos obtenidos a partir de las especies P. piedecuestanum, C. brasiliense, C. longinforium, y Calophyllum sp. Para todos los extractos de las especies P. piedecuestanum, C. brasiliense, C. longifolium, Calophyllum sp. se encontro una adecuada relacion concentracion-respuesta con coeficientes de correlacion cercanos a uno ([R.sup.2]) estadisticamente significativos para todas las muestras evaluadas y con un nivel de confianza de P. En la figura 1 aparecen representados los extractos de diferente polaridad de las especies P. piedecuestanum y Calophyllum sp. que fueron capaces de inhibir la [beta]-hematina con una [CI.sub.50] < 3 mg/ ml. 19 extractos fueron seleccionados por su potencial capacidad de inhibir la formacion de [beta]-hematina. Es de resaltar que los extractos con mas potencial de inhibir la [beta]-hematina fueron los extractos en diclorometano y acetato de etilo de las especies de Calophyllum. Notese que los extractos; de tallos en diclorometano; de hojas en acetato de etilo C. de brasiliense; tallos y hojas en acetato de etilo; hojas en eter de petroleo; hojas en diclorometano de C. longinforium; hoja y tallo en metanol; hojas en acetato de etilo y en metanol de Calophyllum sp. fueron los que presentaron mayor actividad, indicando que los componentes presentes en estos extractos interaccionan fuertemente con la [beta]-hematina con valores inferiores al del farmaco de referencia que fue la Cloroquina, CQ con una [CI.sub.50] < 1.33 mg/ml.

DISCUSION

Varios trabajos notifican la actividad inhibitoria por parte de extractos de plantas en la formacion de la [beta]-hematina. Osorio, Montoya, Munoz, & Arango (2006) presentaron el reporte de extractos de acetato de etilo de los tallos de Rollinia pittieri y Pseudomalmea boyacana (Annonaceae) con un 98% de inhibicion de [beta]-hematina. Igualmente, Osorio et al. (2005; 2006) reportaron 36 extractos de diferente polaridad de otras especies de la misma familia de Annonaceae (Annona muricata, Desmopsis panamensis, Rollinia exsucca, Rollinia pittieri) los cuales presentaron capacidad de inhibir la [beta]-hematina con porcentajes de inhibicion mayores al 85% cuando fueron evaluados a na concentracion de 2.5 mg/ml. Vargas et al., (2011) probaron un total de 40 moleculas y 219 extractos de plantas, encontrando buenas correlaciones con respecto a la especificidad (compuestos puros 85%, extractos 93%) y el valor predictivo (compuestos puros 72%, extractos 50%) que obtuvieron en comparacion con la inhibicion del crecimiento de Plasmodium en un modelo in vitro con una buena correlacion. Por otra parte, se han reportado una serie de bisquinolinas, xantonas, una nueva clase de complejos metalicos de coordinacion, 8-aminoquinolinas, medicamentos antimalaricos sinteticos como el azul de metileno, y derivados, que han demostrado tener actividades antimalaricas que estan bien correlacionadas con sus capacidades para inhibir la polimerizacion del grupo hemo. Sin embargo, los detalles moleculares de esta inhibicion son desconocidos (Asghari-Khiavi et al., 2011). La identificacion de nuevas plantillas con mecanismos conocidos son necesarios para el desarrollo de tratamientos eficaces y seguros para la malaria, por lo que la evaluacion de la inhibicion de la formacion de la [beta]-hematina permite rastrear rutinariamente extractos de plantas con el objetivo final de identificar nuevas moleculas antimalaricas en una etapa inicial al descubrimiento de nuevos farmacos. Los positivos resultados obtenidos en este trabajo principalmente para los extractos de diclorometano y acetato de etilo de la especie C. brasiliense direccionan el estudio hacia la busqueda de sustancias activas mediante la separacion de sus principales componentes con el fin de encontrar sustancias con mecanismos similares a los antimalaricos convencionales.

En conclusion, este trabajo reporta la actividad inhibitoria de [beta]-hematina de las especies P. piedecuestanum, Calophyllum brasiliense, Calophyllum longifolium y Calophyllum sp. Los extractos de la especie de P piedecuestanum no presentaron capacidad de inhibicion mientras que si se presentaron resultados promisorios en las especies de Calophyllum donde la especie mas activa fue Calophyllum sp. con una [CI.sub.50] = 0.115 mg/ml, seguido de C. brasiliense con una [CI.sub.50] = 0.212 mg/ml y C. longifolium con una [CI.sub.50] = 0.233 mg/ml, lo que permite continuar con los estudios de estas especies promisorias y explorar los metabolitos activos mediante un ensayo bioguiado.

AGRADECIMIENTOS

Los autores agradecen el apoyo financiero del Ministerio de agricultura a traves del proyecto (No. 009-2007-V7552-38-07) y a Colciencias mediante las becas Francisco Jose de Caldas y al Grupo Malaria de la Universidad de Antioquia.

REFERENCIAS

Asghari-Khiavi, M., Vongsvivut, J., Perepichk, I., Mechler, A., Wood, B. R., McNaughton, D., & Bohle, D. S. (2011). Interaction of quinoline antimalarial drugs with ferriprotoporphyrin IX, a solid state spectroscopy study. Journal of Inorganic Biochemistry, 105(12), 1662-1669.

Benevides, P. J., Sartorelli, P., & Kato, M. J. (1999). Phenylpropanoids and neolignans from Piper regnellii. Phytochemistry, 52(2), 339-343.

Chin, J. (2001). El control de las enfermedades transmisibles (17[grados] Edicion). Maryland, EUA: Organizacion Panamericana de la Salud.

Christopher, A., MacRaild, M., Pedersen, R., & Anders, R. (2012). Lipid interactions of the malaria antigen merozoite surface protein 2. Biochimica et Biophysica Acta, 1818, 2572-2578.

Egan, T. J., & Ncokazi, K. K. (2005). Quinoline antimalarials decrease the rate of [beta]-hematin formation. Journal of Inorganic Biochemistry, 99(7), 1532-1539.

Egan, T. J. (2008). Recent advances in understanding the mechanism of hemozoin (malaria pigment) formation. Journal of Inorganic Biochemistry, 102(5-6), 1288-1299.

Fidock, D. A., Rosenthal, P. J., Croft, S. L., Brun, R., & Nwaka, S. (2004). Antimalarial drug discovery: efficacy models for compound screening. Nature Reviews Drug Discovery, 5(6), 509-520.

Fitch, C. D. (2004). Ferriprotoporphyrin IX, phospholipids, and the antimalarial actions of quinoline drugs. Life Sciences, 74(16), 1957-1972.

Gelb, M. H. (2007). Drug discovery for malaria: a very challenging and timely endeavor. Current Opinion in Chemical Biology, 11, 440-445.

Gupta, M. P., Arias, T. D., Correa, M., & Lamba, S. S. (1979). Ethnopharmacognositc observations on Panamanian medicinal plants. Part I. Quarterly Journal of Crude Drug Research, 17(3-4), 115-130.

Kumar, S., Guha, M., Choubey, V, Maity, P., & Bandyopadhyay, U. (2007). Antimalarial drugs inhibiting hemozoin ([beta]-hematin) formation: A mechanistic update. Life Sciences, 80(9), 813-828.

Liu, X., Wang, Y, Liang, J., Wang, L., Qin, N., Zhao, Y, & Zhao, G. (2018). In-depth comparative analysis of malaria parasite genomes reveals protein-coding genes linked to human disease in Plasmodium falciparum genome. BMC Genomics, 19(1), 312.

Londono, B., Carmona, J., & Blair, S. (2002). Comparacion de los metodos Optimal y gota gruesa para el diagnostico de malaria en una zona endemica sin epidemia. Biomedica, 22(4), 466-475.

MacRaild, C. A., Pedersen, M. 0., Anders, R. F., & Norton, R. S. (2012). Lipid interactions of the malaria antigen merozoite surface protein 2. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Biomembranes, 1818(11), 2572-2578.

Noldin, V. F., Isaias, D. B., & Filho, C. V. (2006). Calophyllum Genus: Chemical and pharmacological importance. Quimica Nova, 29(3), 549-554.

Olumese, P. (2005). Epidemiology and surveillance: changing the global picture of malaria-myth or reality? Acta Tropica, 95(3), 265-269.

Organizacion Mundial de la Salud (OMS). (2016). Estrategia Tecnica Mundial contra la Malaria 20162030. Organizacion Mundial de la Salud. Ginevra, Suiza: Recuperado de http://www.who.int/malaria/ publications/atoz/9789241564991/es/

Organizacion Mundial de la Salud (OMS). (2017). World malaria report 2017. Geneva, Suiza: World Health Organization Press. Retrieved from http://www.who. int/malaria/publications/world-malaria-report-2017/ report/en/

Osorio, E. J., Arango, G., Garcia, E., Munoz, K., Ruiz, G., Gutierrez, D., & Paco, M. A. (2005). Actividad Antiplasmodica In Vitro e Inhibicion de la Formacion de la [beta]-hematina de Plantas Colombianas de la Familia Annonaceae. Acta Farmaceutica Bonaerense, 24(4), 527-32.

Osorio, E., Arango, G., Garcia, E., Munoz, K., Ruiz, G., Gutierrez, D., & Gimenez, A. (2005). Actividad antiplasmodica in vitro e inhibicion de la formacion de la [beta]-hematina de plantas colombianas de la familia Annonaceae. Acta Farmaceutica Bonaerense, 24(4), 527-532.

Osorio, E. J., Montoya, G., Munoz, K., & Arango, G. (2006). Actividad antiplasmodial de alcaloides aporfinicos de Rollinia pittieri y Pseudomalmea boyacana (Annonaceae). Vitae, 13(1), 49-54.

Parapini, S., Basilico, N., Mondani, M., Olliaro, P, Taramelli, D., & Monti, D. (2004). Evidence that haem iron in the malaria parasite is not needed for the antimalarial effects of artemisinin. FEBS letters, 575(1-3), 91-94.

Parapini, S., Basilico, N., Pasini, E., Egan, T. J., Olliaro, P., Taramelli, D., & Monti, D. (2000). Standardization of the physicochemical parameters to assess in vitro the [beta]-hematin inhibitory activity of antimalarial drugs. Experimental parasitology, 96(4), 249-256.

Prasad, A. K., Tyagi, O. D., Wengel, J., Boll, P. M., Olsen, C. E., Bisht, K. S., & Parmar, V. S. (1995). Neolignans and a lignan from Piper clarkii. Phytochemistry, 39(3), 655-658.

Robert, A., Dechy-Cabaret, O., Cazelles, J., Benoit-Vical, F., & Meunier, B. (2002). Recent advances in malaria chemotherapy. Journal of the Chinese Chemical Society, 49(3), 301-310.

Vargas, S., Ioset, K. N., Hay, A. E., Ioset, J. R., Wittlin, S., & Hostettmann, K. (2011). Screening medicinal plants for the detection of novel antimalarial products applying the inhibition of [beta]-hematin formation. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 56(5), 880-886.

Ana M. Mesa (1,2), Silvia Blair (1) & Carlos Pelaez * (2)

(1.) Grupo de Investigacion Malaria. Sede de Investigacion Universitaria (SIU). Carrera 62 52-59. Torre 1. Lab. 610 SIU. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Instituto de Biologia, Universidad de Antioquia. A.A 1226. Medellin, Colombia; amaria.mesa@udea.edu.co, silviablairt@gmail.com

(2.) Grupo Interdisciplinario de Estudios Moleculares GIEM. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Institutode Quimica, Universidad de Antioquia. A.A 1226. Medellin, Colombia; carlos.pelaez@udea.edu.co

* Correspondencia

Recibido 03-V-2018.

Corregido 26-VII-2018.

Aceptado 24-VIII-2018.

Leyenda: Fig. 1. Inhibicion de la formacion de la [beta]-hematina por extractos de diferente polaridad de especies de genero Piper y Calophyllum.

Fig. 1. Inhibition of formation of [beta]-hematin by extracts of different polarity of species of genus Piper and Calophyllum.
CUADRO 1
Inhibicion de [beta]-hematina por los extractos de diferente polaridad
de P. piedecuestanum y Calophyllum

TABLE 1
Inhibition of [beta]-hematin by extracts of different polarities of P.
piedecuestanum and Calophyllum

Codigo            Especie                       Extracto

PPHExtH      P. piedecuestanum    Eter de petroleo, percolacion hojas
                                  y tallos 25[grados]C ZP* :5mm 10
                                  dias
PPHTExtD     P. piedecuestanum    Diclorometano, percolacion hojas y
                                  tallos 25[grados]C ZP* :5mm 10 dias
PPHTExtA     P. piedecuestanum    Acetato Etilo, percolacion hojas y
                                  tallos 25[grados]C ZP* :5mm 10 dias
PPHTExtM     P. piedecuestanum    Metanol, percolacion hojas y tallos
                                  25[grados]C ZP* :5mm 10 dias
CBHTExtH     C. brasiliense       Eter de petroleo, percolacion hojas
                                  y tallos 25[grados]C ZP* :5mm 10
                                  dias
CBHTExtD     C. brasiliense       Diclorometano, percolacion hojas y
                                  tallos 25[grados]C ZP*: 5mm10 dias
CBHTExtA     C. brasiliense       Acetato Etilo, percolacion hojas y
                                  tallos 25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CBHTExtM     C. brasiliense       Metanol, percolacion hojas y tallos
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CBTExtH      C. brasiliense       Eter de petroleo, percolacion tallos
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CBTExtD      C. brasiliense       Diclorometano, percolacion tallos
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CBTExtA      C. brasiliense       Acetato Etilo, percolacion tallos
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CBTExtM      C. brasiliense       Metanol, percolacion tallos
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CBHExtH      C. brasiliense       Eter de petroleo, percolacion hojas
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CBHExtD      C. brasiliense       Diclorometano, percolacion hojas
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CBHExtA      C. brasiliense       Acetato Etilo, percolacion hojas
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CBHExtM      C. brasiliense       Metanol, percolacion hojas
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CIHTExtH     C. longifolium       Eter de petroleo, percolacion hojas
                                  y tallos 25[grados]C ZP*: 5mm 10
                                  dias
CIHTExtD     C. longifolium       Diclorometano, percolacion hojas y
                                  tallos 25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CIHTExtA     C. longifolium       Acetato Etilo, percolacion hojas y
                                  tallos 25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CIHTExtM     C. longifolium       Metanol, percolacion hojas y tallos
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CITExtH      C. longifolium       Eter de petroleo, percolacion tallos
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CITExtD      C. longifolium       Diclorometano, percolacion tallos
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CITExtA      C. longifolium       Acetato Etilo, percolacion tallos
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CITExtM      C. longifolium       Metanol, percolacion tallos
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CIHExtH      C. longifolium       Eter de petroleo, percolacion hojas
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CIHExtD      C. longifolium       Diclorometano, percolacion hojas
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CIHExtA      C. longifolium       Acetato Etilo, percolacion hojas
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CIHExtM      C. longifolium       Metanol, percolacion hojas
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CSHTExtH     Calophyllum sp.      Eter de petroleo, percolacion hojas
                                  y tallos 25[grados]C ZP*: 5mm 10
                                  dias
CSHTExtD     Calophyllum sp.      Diclorometano, percolacion hojas y
                                  tallos 25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CSHTExtA     Calophyllum sp.      Acetato Etilo, percolacion hojas y
                                  tallos 25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CSHTExtM     Calophyllum sp.      Metanol, percolacion hojas y tallos
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CSTExtH      Calophyllum sp.      eter de petroleo, percolacion tallos
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CSTExtD      Calophyllum sp.      Diclorometano, percolacion tallos
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CSTExtA      Calophyllum sp.      Acetato Etilo, percolacion tallos
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CSTExtM      Calophyllum sp.      Metanol, percolacion tallos
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CSHExtH      Calophyllum sp.      Eter de petroleo, percolacion hojas
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CSHExtD      Calophyllum sp.      Diclorometano, percolacion hojas
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CSHExtA      Calophyllum sp.      Acetato Etilo, percolacion hojas
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias
CSHExtM      Calophyllum sp.      Metanol, percolacion hojas
                                  25[grados]C ZP*: 5mm 10 dias

Codigo          % rendimiento de la        [CI.sub.50] (mg-mL) X
             extraccion (g de extracto        [+ o -] DE ***/
              / g de material vegetal      Inhibicion de [beta]-
                     seco) **                  hematina ****

PPHExtH                0.668                      > 5.00
PPHTExtD               1.748                      > 5.00
PPHTExtA               1.116                      > 5.00
PPHTExtM               1.550                      > 5.00
CBHTExtH               1.791                2.610 [+ o -] 0.032
CBHTExtD               1.696                     ND *****
CBHTExtA               1.700                        ND
CBHTExtM               6.209                1.260 [+ o -] 0.048
CBTExtH                1.489                2.790 [+ o -] 0.037
CBTExtD                1.051                0.212 [+ o -] 0.056
CBTExtA                1.685                2.660 [+ o -] 0.028
CBTExtM                2.608                2.020 [+ o -] 0.039
CBHExtH                2.249                        ND
CBHExtD                2.902                        ND
CBHExtA                2.241                0.266 [+ o -] 0.046
CBHExtM                3.719                      > 5.00
CIHTExtH               1.529                0.908 [+ o -] 0.068
CIHTExtD               1.889                4.490 [+ o -] 0.039
CIHTExtA               1.661                0.429 [+ o -] 0.028
CIHTExtM               3.598                1.080 [+ o -] 0.057
CITExtH                0.500                0.982 [+ o -] 0.079
CITExtD                0.564                4.490 [+ o -] 0.051
CITExtA                0.347                        ND
CITExtM                0.931                1.080 [+ o -] 0.057
CIHExtH                2.868                0.233 [+ o -] 0.048
CIHExtD                2.026                0.299 [+ o -] 0.056
CIHExtA                1.298                        ND
CIHExtM                6.130                        ND
CSHTExtH               2.114                      > 5.00
CSHTExtD               1.400                1.970 [+ o -] 0.260
CSHTExtA               1.337                        ND
CSHTExtM               8.138                0.116 [+ o -] 0.029
CSTExtH                0.869                      > 5.00
CSTExtD                0.526                1.970 [+ o -] 0.089
CSTExtA                0.389                        ND
CSTExtM                1.145                0.115 [+ o -] 0.029
CSHExtH                3.271                0.436 [+ o -] 0.037
CSHExtD                0.886                        ND
CSHExtA                1.113                0.442 [+ o -] 0.023
CSHExtM                5.197                0.685 [+ o -] 0.034

* ZP: Tamano de particula.

** Dato de una sola replica.

*** X (Media) [+ o -] DE (Desviacion estandar).

**** Control positivo Cloroquina sobre inhibicion de [beta]/hematina a
595nm [CI.sub.50] = 1.331 [+ o /] 0.038 mg/ml.

***** ND=No determinado.
COPYRIGHT 2018 Universidad de Costa Rica
No portion of this article can be reproduced without the express written permission from the copyright holder.
Copyright 2018 Gale, Cengage Learning. All rights reserved.

Article Details
Printer friendly Cite/link Email Feedback
Author:Mesa, Ana M.; Blair, Silvia; Pelaez, Carlos
Publication:Revista de Biologia Tropical
Date:Dec 1, 2018
Words:4951
Previous Article:Efecto de la edad en la variacion geografica de caracteristicas morfometricas entre poblaciones de Boana cordobae (Anura: Hylidae).
Next Article:Indicadores ambientales de areas verdes urbanas para la gestion en dos ciudades de Costa Rica.
Topics:

Terms of use | Privacy policy | Copyright © 2021 Farlex, Inc. | Feedback | For webmasters |