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Hymenolepis microstoma (Cestoda: Hymenolepididae) en ratones caseros (Mus musculus) de Lima, Peru.

Hymenolepis microstoma (Cestoda: Hymenolepididae) in house mice (Mus musculus) from Lima, Peru

Introduccion

Los cestodos de la familia Hymenolepididae (Cyclophyllidea) son parasitos de diversas especies de aves y pequenos mamiferos, principalmente roedores, insectivoros y quiropteros (Czaplinski & Vaucher 1994). Algunas especies de esta familia tienen importancia para la salud publica y pueden causar enfermedades graves en personas inmunocomprometidas, principalmente las especies que parasitan a roedores (Macnish et al. 2003, Marangi et al. 2003, Olson et al. 2003).

Los principales reservorios de estos cestodos zoonoticos son los roedores comensales Rattus rattus, Rattus norvegiens y Mus musculus (Foronda et al. 2011). Estos roedores actuan como hospederos definitivos para Hymenolepis diminuta, Hymenolepis nana (=Rodentolepis nana) e Hymenolepis microstoma (Nkouawa et al. 2016, Foronda et al. 2011, Macnish et al. 2003). Estos cestodos tienen una distribucion cosmopolita y son capaces de infectar a humanos (Nkouawa et al. 2016). El presente estudio utiliza el diagnostico morfologico y molecular, analizando parcialmente el gen mitocondrial citocromo c oxidasa 1 (cox1), para demostrar la presencia H. microstoma en el raton casero (M. musculus), provenientes de Lima, Peru, agregando asi un nuevo registro geografico para el parasito.

Material y metodos

En Julio del 2017, haciendo un monitoreo parasitologico en roedores plaga, 12 cestodos fueron colectados del conducto biliar del raton (M. musculus) provenientes del distrito de Santiago de Surco en Lima, Peru. Los cestodos fueron fijados en formol al 4% caliente y luego preservados en etanol al 70%. Algunos proglotis gravidos fueron preservados en etanol absoluto para estudios moleculares.

Estudio morfologico.--Los proglotidos fueron tenidos con tricromico de Gomori, deshidratados en series sucesivas de etanol hasta etanol absoluto, clarificados en eugenol y montados en balsamo de Canada. Los escolex fueron montados temporalmente en medio Berlese para facilitar la observacion y medicion de los ganchos rostelares. Las microfotografias se hicieron usando un microscopio Carl Zeiss (Axioskop 40) y las medidas se obtuvieron con el programa de analisis de imagenes Leica IM50 (Version, 4.0 R117). Las medidas se expresan en milimetros (mm) y micrometros (pm). Las caracteristicas metricas se mencionan en rango con el promedio y el error estandar (ES) en parentesis.

Diagnostico molecular.--El ADN fue extraido de proglotis gravidos de algunos especimenes utilizando la metodologia descrita por Gomez-Puerta et al. (2016). Para ellos, algunos segmentos de proglotis gravidos fueron colocados y deshidratados en viales de plastico de 0,2 ml. Luego se anadieron a los viales 100 [micron]L de solucion de Chelex al 5% y 10 [micron]L de proteinasa K (20 mg/mL). Los viales se incubaron en un termociclador utilizando el siguiente programa: 1 hora a 57[grados]C, 10 minutos a 95[grados]C, 1 minuto a 37[grados]C, 10 minutos a 95[grados]C y finalmente 15 minutos a 15[grados]C. Las muestras de ADN se almacenaron a -70 [grados]C hasta su uso. Se utilizo la reaccion en cadena de la polimerasa (PCR) para amplificar un fragmento de aproximadamente 400 pares de bases (pb) del gen mitocondrial citocromo c oxidasa 1 (cox1) utilizando los protocolos y cebadores JB3 y JB4.5 descritos por Bowles y McManus, 1994. Los productos de PCR se secuenciaron usando un secuenciador automatizado ABI 3100 (Applied Biosystems). Las secuencias se ensamblaron utilizando el programa ChromasPro 1.7.6 (http://www.technelysium. com.au/ChromasPro.html). Todas las secuencias se compararon con secuencias de referencia obtenida del GenBank mediante el BLASTn (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov). Las secuencias se alinearon utilizando el programa BioEdit (http://www.mbio. ncsu.edu/bioedit/bioedit.html). El Programa MEGA7 (http:// www.megasoftware.net/) fue utilizado para generar un arbol filogenetico a traves del metodo "neighbor-joining" con la distancia de 2-parametros de Kimura, este metodo es util para comparar grandes juegos de datos de secuencias con bajos niveles de divergencia (Tamura et al. 2004). La secuencia obtenida en este estudio se deposito en el GenBank con acceso No. MG570384 . Los especimenes estudiados fueron depositados en la Coleccion de Parasitos del Laboratorio de Epidemiologia y Economia Veterinaria de la Facultad de Medicina Veterinaria, UNMSM (FMV-599), Lima, Peru.

Resultados

Cestodos delgados y largos con una longitud total del estrobilo de 4.2 a 8.5 (5.5; ES= 2) cm y un ancho maximo de 832 -1,384 (986; ES=12) pm. El escolex tiene 212 - 260 (228; ES=2) [micron]m de ancho, con 4 ventosas de 80 - 111 (99; ES=4) pm de diametro.

El rostelo mide 55 - 72 (66; ES=3) [micron]m de largo y 32 - 50 (40; ES=3) [micron]m de ancho, es armado con 24 - 26 ganchos de forma cricetoide. La longitud de los ganchos fue 14 - 16 (15; ES=0.1) [micron]m de largo. El saco rostelar tiene 73 - 89 (79; ES=3) pm de profundidad y 48 - 66 (56; ES=3) [micron]m de ancho maximo.

La disposicion de los proglotis son de forma craspedote. Los proglotis inmaduros miden 92 - 164 (124; ES=4) [micron]m de largo y 371 - 445 (409; ES=3) [micron]m de ancho. Los proglotis maduros miden 180 - 271 (221; ES=3) [micron]m de largo y 595 - 896 (752; ES=17) [micron]m de ancho. Los proglotis gravidos tienen una longitud de 230 - 372 (297; ES=8) [micron]m y un ancho de 1001 -1384 (1159; ES=32) [micron]pm.

El sistema masculino esta formado por tres testiculos, uno poral y dos aporal, de forma oval o esfericos de 120 - 181 (145; ES=2) [micron]m de largo y 115 - 166 (143; ES=2) [micron]m de ancho. Presenta una vesicula seminal externa de 109 - 225 (162; ES=9) pm de longitud y 69 - 119 (91; ES=3) [micron]m de ancho. El saco del cirro mide 143 - 207 (172; ES=3) [micron]m de longitud y 37 - 57 (45; ES=2) [micron]m de ancho maximo. La vesicula seminal interna tiene una longitud de 68 - 197 (101; ES=3) [micron]m y un ancho maximo de 40 - 89 (55; ES=2) [micron]m .

El sistema femenino consiste en un ovario lobulado , situado en la zona medial del proglotis, con una longitud de 77 - 121 (103; ES=6) [micron]m y un ancho de 153 - 388 (261; ES=31) [micron]m . La vagina es delgada y se localiza debajo del saco del cirro. El poro genital es unilateral y dextral, se abre en el tercio superior del lado del proglotis. Los proglotis gravidos contienen numerosos huevos, los cuales miden 83 - 94 (88; ES = 1) [micron]m de largo y 69 - 87 (80; ES = 2) [micron]m de ancho. Los huevos presentan 3 - 5 (4; ES = 0.2) filamentos polares. Las oncosferas tienen un diametro de 38 - 44 (42, ES = 0.5) [micron]m y los ganchos de las oncosferas miden 16 - 19 (17; ES = 0.2) [micron]m de largo.

La identidad genetica de H. microstoma se determino por la alineacion de la secuencia parcial del gen cox1. La secuencia obtenida en este estudio tuvo 418pb y fue alienada con secuencias de H. microstoma obtenidas del GenBank (JN258051,

LC063188 y AB494473) (Nkouawa et al. 2016, Foronda et al. 2011, Okamoto et al. 1997). Las secuencias de H. microstoma obtenidas del GenBank fueron colectados de ratones (M. musculus) de Espana y Japon. Nuestro resultado mostro que las secuencias del presente estudio y las del GenBank tenian mas del 99% de identidad entre ellas, con 2 y 3 nucleotidos de diferencia con las muestras de Espana y Japon, respectivamente. El analisis filogenetico (Fig. 1) mostro dos ramas (clusters) para H. microstoma, una para los especimenes de Peru y Espana, y otra para los especimenes de Japon. Debido a esta baja variabilidad genetica, esto podria indicar que H. microstoma se introdujo en Peru desde un pais Europeo.

Discusion

Los parametros morfologicos y la secuencia parcial del gen cox1 coincidieron con estudios previos de H. microstoma (Nkouawa et al. 2016, Cunningham & Olso 2010, Okamoto et al. 1997).

Esta especie de cestodo ha tenido mucha discrepancia respecto a su nomenclatura. Hymenolepis microstoma fue descrita por primera vez como Taenia microstoma, posteriormente fue incluida dentro del genero Hymenolepis (Blanchard, 1891). Sin embargo, Spasskii (1954), realizo una revision de la familia Hymenolepididae de mamiferos y traslado a H. microstoma dentro del genero Rodentolepis. Schmidt (1986) realizo una revision de las especies de cestodos y considero a Rodentolepis sinonimo del genero Vampirolepis, quedando asi el nombre de Vampirolepis microstoma. En la ultima revision taxonomica de la familia Hymenolepididae, Czaplinski y Vaucher (1994) consideran valido al genero Rodentolepis. Sin embargo, estudios actuales siguen considerando la nomenclatura del parasito como H. microstoma (Nkouawa et al. 2016).

Hymenolepis microstoma se caracteriza por parasitar el conducto biliar del hospedero mamifero. Los huevos que contienen oncosferas son expulsados con las heces al medio ambiente y pueden ser ingeridos por la etapa adulta o larval de un escarabajo apropiado (Tribolium confusum, T. castaneum, Tenebrio molitor y Oryzaephilus surinamensis), el cual actua como hospedero intermediario (Dvorak et al. 1961). Los hospederos definitivos naturales para H. microstoma incluyen una amplia lista de roedores de los generos Apodemus, Dendromus, Leggada, Mastomys y Mus), jerbos (Meriones Illiger) y ratones de campo (Microtus Schrank) (Schmidt 1986, Litchford 1963). Sin embargo, es mas frecuente hallarlo en M. musculus tal como lo demuestra este estudio.

En un estudio se evaluo experimentalmente el poder infectivo de H. microstoma en Mus musculus, Rattus norvegicus y Mesocricetus auratus, y concluyeron que M. musculus es la especie mas adecuada como hospedero definitivo. Esto debido a que el porcentaje de infeccion fue hasta 80% en M. musculus comparado con el hamster (M. auratus), el cual fue 30% y no logrando la infeccion en R. norvegicus (Dvorak et al. 1961).

Los estadios adultos de H. microstoma e H. nana son distinguibles morfologicamente (Baer & Tenora 1970, Czaplinski & Vaucher 1994). Algo peculiar es la forma morfologica de los huevos de H. microstoma, los cuales son muy similares con los huevos de H. nana, las medidas de los huevos y oncosferas, asi como la posicion de los filamentos polares son muy similares entre ellos (Macnish et al. 2003, Baer & Tenora 1970).

Los hallazgos de H. microstoma en humanos (Macnish et al. 2003) sugiere la importancia del uso de herramientas moleculares para la deteccion e identificacion de cestodos hymenolepididos colectados de humanos, especialmente en especias morfologicamente similares. Debido a la confirmacion de H. microstoma en ratones M. musculus, un roedor que tiene estrecha relacion con los humanos, se requerira realizar futuros estudios epidemiologicos para saber el estado actual de infeccion en humanos y la comprension de la dinamica de transmision del parasito.

doi: http://dx.doi.org/10.15381/rpb.v25i3.15213

Literatura citada

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Luis A. Gomez-Puerta *, Cesar A. Valdivia-Carrera

Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Facultad de Medicina Veterinaria. Laboratorio de Epidemiologia y Economia Veterinaria. Av. Circunvalacion 2800, San Borja. Lima, Peru.

* Autor para correspondencia:

E-mail: Luis A. Gomez-Puerta: lgomezp@unmsm.edu.pe; lucho92@yahoo.com

ORCID Luis A. Gomez-Puerta: http://orcid.org/0000-0002-7909-979X

E-mail: Cesar A. Valdivia-Carrera: cesararturovc@gmail.com

ORCID Cesar A. Valdivia-Carrera: http://orcid.org/0000-0002-8597-0676

Presentado: 01/12/2017

Aceptado: 02/09/2018

Publicado online: 25/09/2018

Informacion sobre los autores:

LAGP y CAVC: realizaron los muestreos; analizaron los datos; redactaron, revisaron y aprobaron el manuscrito.

Los autores no incurren en conflicto de intereses.

Leyenda: Figura 1. Relacion filogenetica del gen cox1 de Hymenolepis microstoma y otras especies de himenolepididos. Se utilizaron secuencias del GenBank (AB494473, LC063188 y JN258051) como controles. El numero en parentesis "()" representa el codigo de acceso en el GenBank para el especimen correspondiente, seguido del pais de procedencia.
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Title Annotation:NOTA CIENTIFICA
Author:Gomez-Puerta, Luis A.; Valdivia-Carrera, Cesar A.
Publication:Revista peruana de biologia
Date:Aug 1, 2018
Words:2635
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