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Histological response to inducers of morphogenetic processes in Citrus latifolia Tan/Respuesta histologica a inductores de procesos morfogenicos en Citrus latifolia Tan/Resposta histologica a indutores de morfogenese em Citrus latifolia Tan.

Introduccion

La produccion de citricos se ve afectada por diferentes problemas fitosanitarios causando grandes perdidas en la produccion mundial, por lo que es necesario el uso de tecnologias como ingenieria genetica para el desarrollo de variedades comerciales de citricos resistentes a plagas y enfermedades (Rocha-Pena et al., 1995). En Mexico el limon persa (Citrus latifolia Tan.) es un citrico de gran importancia comercial, con frutos que se caracterizan por ser de gran tamano, carentes de semillas, y su mejoramiento genetico tradicional se dificulta por carecer de embriones sexuales. Actualmente no se cuenta con un protocolo de regeneracion in vitro que permita la aplicacion de la ingenieria genetica para su mejoramiento; uno de los pasos mas importantes para la transformacion es la obtencion de brotes adventicios, por lo que se requiere de un protocolo de regeneracion eficiente (Perez-Tornero et al., 2000). En citricos se han usado segmentos internodales y epicotilos de semillas germinadas in vitro como explantes. El uso de los fitoreguladores como bencilaminopurina (BAP), acido indolacetico (AIA), acido naftalenacetico (ANA), isopentiladenina (2iP) y 2,4-acido diclorofenoxyacetico (2,4-D) en el medio de cultivo favorecen la brotacion adventicia permitiendo la transformacion genetica en diversos genotipos de citricos, tales como naranja dulce (Citrus sinensis), naranjo agrio (C. aurantium), citrange (sweet orange x trifoliate orange), limon (C. limon), limon mexicano (C. aurantifolia) y pomelo (C. paradisi) (Gutierrez-E et al., 1997; Bond and Roose, 1998; Ghorbel et al.,2000; Yu et al., 2002; Pena et al., 2004).

En el caso de C. latifolia, conocido como limon persa, el establecimiento in vitro mediante hipocotilos de semilla no es posible y la obtencion de brotes adventicios mediante segmentos internodales, ademas de presentar una excesiva contaminacion por hongos y bacterias in vitro. Los protocolos que funcionan para otros citricos no funcionan para C. laifolia. Los inductores de la brotacion adventicia tales como adenina, sulfato de adenina, triacontanol y acido-4-fluorofenoxiacetico (4-FAA) han favorecido organogenesis adventicia en Picrorhiza scrophulariflora, Cichorium intybus L., Bixa orellana, Costus speciosus, Salvia officinalis, Arachis hypogaea, Malus domestica, Cerasus fruticosa, Ipomea batatas, Phraggmites communis, Allium cepa (Tanikawa et al., 1996; Tanikawa et al., 1998; Tantos et al., 2001; Malaabadi et al., 2005; Grzegorczyk et al., 2006; Luo et al., 2006; Nandagopal and Ranjitha 2006; Bantawa et al., 2009; Parimalan et al., 2009; Kamata et al., 2011; Verma et al., 2011; Lee et al., 2012), pero en citricos no se conoce el efecto de estos inductores. Estudios histologicos realizados en algunos citricos (Citrus sinensis, Troyer citrange y Carrizo citrange) reportan modificaciones en los tejidos del explante, particularmente en el cambium vascular (Garcia-Luis et al., 1999; Almeida et al., 2003; Pena et al., 2004; Almeida et al., 2006; Tavano et al., 2009). Bajo el supuesto de que hay inductores de la brotacion no probados en C. latifolia, en el presente trabajo se estudian los cambios histologicos y morfogenicos inducidos por adenina, sulfato de adenina, 4-FAA y triacontanol en segmentos internodales de C. latifolia provenientes de campo.

Materiales y Metodos

Muestreo de material vegetal y establecimiento in vitro

En los meses de marzo y abril de 2012 (primavera) se colectaron varetas jovenes de arboles adultos (10 anos) de limon persa de las localidades de Las Palmas, Nayarit (21[degrees]40'N, 105[degrees]19'O) y Martinez de la Torre, Veracruz (20[degrees]02'N, 97[degrees]05"O), Mexico. Se retiraron espinas y hojas, se lavaron con agua y jabon antibacterial liquido (salvo[R]), y posteriormente se probaron tres compuestos para la desinfestacion: Kasumin[R] (1mH'1), Preservative for Plant Tissue Culture Media (PPM[R]) (1ml x [l.sup.-1]) y Agry-Gent Plus[R] (0,5g x [l.sup.-1]) por 12h. Las varetas se disectaron en segmentos de 5cm y se desinfectaron con etanol 70% en agitacion (250rpm) por 3min, una solucion de hipoclorito de sodio comercial (cloralex[R]) al 20% (v/v) durante 20min en agitacion (250rpm) y, finalmente, se lavaron tres veces con agua destilada esteril. Se establecieron segmentos internodales de 1cm, un segmento por tubo de ensayo, con el extremo basal en contacto con el medio de cultivo base (Murashige and Skoog, 1962) suplementado con tiamina HCl 2mg x [l.sup.-1]; piridoxina HCl 2mg x [l.sup.-1]; glicina 0,4mg x [l.sup.-1]; acido nicotinico 1mg x [l.sup.-1]; mioinositol 100mg x [l.sup.-1]; pantotenato de calcio 5mg x [l.sup.-1]; PPM 1mg x [l.sup.-1]; 3% de sacarosa y 0,7% de agaragar (Merk), ajustando el pH a 5,7 con NaOH 1M. Se probaron cuatro tratamientos que fueron adicionados al medio base: a) 0,2 mg x [l.sup.-1] acido-4fluorofenoxiacetico (4-FAA); b) 100mg x [l.sup.-1] adenina; c) 100mg x [l.sup.-1] sulfato de adenina; y d) 4,9mg x [l.sup.-1] triacontanol, 2mg x [l.sup.-1] BAP y 0,0089mg x [l.sup.-1] AIA. Los explantes establecidos se colocaron en un cuarto de incubacion a 30 [+ or -]2[degrees]C con fotoperiodo de 16h de luz (blanca, fria y con una intensidad luminica de 35-50[micro]mol x [m.sup.-2][s.sup.-1]). Los subcultivos se realizaron cada 30 dias. Se establecieron explantes procedentes de Nayarit y Veracruz con 100 repeticiones por tratamiento, la unidad experimental fue un explante.

Analisis histologico

Se muestrearon tres segmentos internodales por tratamiento, 10 dias despues del establecimiento (DDE) de cada experimento. Cada explante se corto longitudinalmente para obtener dos mitades con una navaja doble filo y se fijaron por 48h en solucion FAA (10% formaldehido, 50% etanol, 5% acido acetico glacial y 35% agua). Se deshidrato gradualmente en etanol y xileno, y se incluyo en parafina. En un fragmento de cada explante se realizaron cortes longitudinales y en el otro fragmento cortes transversales, de 15[micro]m, con un microtomo rotatorio (American Optical modelo 820).

Las secciones obtenidas se tineron con safranina 'O' salina (0,05% safranina 'O', 2% NaCl y agua) y verde fijo FCF (0,12% de verde fijo FCF en etanol 95%) segun Zavaleta et al. (2003). Las observaciones se realizaron en un microscopio Axioscop 2 Plus con camara Axicam Mrc 5 (Carl Zeiss, Alemania).

De las preparaciones obtenidas se eligieron 2 laminillas por cada repeticion para un total de 16 cortes. Con la finalidad de analizar diferentes regiones del explante, se estudiaron cortes discontinuos identificados por su posicion en 3, 7, 11 y 15, y se estandarizo el analisis de dos campos visuales por corte, analizando un total de 60 cortes y 120 campos visuales por tratamiento por experimento.

Variables evaluadas

Las variables histologicas evaluadas fueron 14: 1) ancho de xilema secundario interfascicular, medida desde cambium vascular hasta el elemento traqueal mas interno de la region interfascicular (AXIF); 2) ancho de xilema fascicular (primario mas secundario), medido desde cambium vascular hasta el elemento traqueal mas interno del xilema primario (AXF); 3) numero de elementos traqueales en xilema fascicular, medidos desde cambium vascular hasta el ultimo elemento traqueal en la zona vascular (TXF); 4) ancho de floema, desde las fibras de floema primario hasta cambium vascular (AF); 5) ancho de corteza externa, medido desde la epidermis hasta las fibras de floema primario (AC); 6) diametro de elementos traqueales de xilema fascicular, celulas de vasos seleccionadas al azar (DTXF); 7) diametro de celulas de corteza, celulas de parenquima seleccionadas al azar en la zona media de la corteza (DCC); 8) diametro de celulas de medula, celulas de medula seleccionadas al azar en la zona proxima al xilema (DCM); y 9) brotes adventicios, identificacion de meristemos y trazas foliares en la periferia del corte (BA). Para cortes longitudinales las variables evaluadas fueron: 10) ancho de corteza, medido desde la epidermis hasta floema, en la parte superior del corte (AC), 11) indice de dilatacion del cambium y floema, medido desde el cambium a las fibras de floema en la parte distal del explante (DCF); 12) altura de callo, tejido que sobresale del explante, el cual fue medido desde la superficie del corte hasta el punto mas alto del callo (AlCa); 13) meristemoides, conjunto de celulas pequenas agrupadas, con alta actividad mitotica, con nucleos prominentes y citoplasma denso (M) y 14) meristemos en fila, celulas en fila, resultado de divisiones perpendiculares al eje longitudinal del explante (MF). Se utilizo el analizador de imagenes AxionVision Le Rel 4.3.

En aquellas variables donde se requirio medir celulas individuales (diametro de elementos de vaso, corteza y medula) se tomaron tres medidas por campo visual.

Analisis estadistico

Todas las variables fueron analizadas estadisticamente, excepto los meristemos en fila, que son variables cualitativas. Para el analisis las variables (excepto altura de callo y puntos meristematicos) fueron sometidas a una homogenizacion de datos, para asociar los cambios al efecto del compuesto utilizado independientemente del tamano inicial del explante; para ello se eliminaron maximos y minimos en cada repeticion. El resto de los valores ([micro]m) se dividieron entre 1/4 de diametro del explante ([micro]m), se promediaron los datos y se diseno una matriz que fue analizada mediante el paquete estadistico SAS System version 9.0 bajo un diseno experimental completamente al azar (ANOVA). Por lo anterior, los resultados estan expresados en terminos relativos. La comparacion de medias se realizo con la prueba de Tukey ([alpha] = 0.05). Adicionalmente se realizo un analisis de correlacion mediante el coeficiente de correlacion de Pearson y se calculo el area bajo la curva de las variables ancho de floema, indice de dilatacion de tejido vascular, altura de callo y formacion de regiones meristemoides. El indice de dilatacion de tejido vascular se calculo con la relacion del DCF distal entre el DCF basal.

Resultados

Respuesta morfogenica de los explantes

Todos los tratamientos dieron origen a la formacion de callo entre los 10 y 20 DDE en ~75% de los explantes establecidos en los tratamientos con adenina, sulfato de adenina y triacontanol. El callo fue turgente, compacto y de color verde rodeando la medula del explante (Figura 1A-C). Con el tratamiento de 4-FAA el callo se formo desde los 10 DDE en el 90-100% de los explantes, cubriendo totalmente la superficie de corte y dando origen a un callo de mayor tamano con respecto al resto de los tratamientos, turgente, color verde o blanco y de apariencia compacta (Figura 1D).

Analisis histologico

La estructura original del explante (dia 0) esta caracterizado por una epidermis uniestratificada formada por celulas pequenas, cristales (drusas) subepidermicos, una corteza de 20-23 estratos de celulas parenquimaticas muy vacuoladas y espacios intercelulares con glandulas oleaginosas de distribucion aleatoria. El explante presento crecimiento secundario con la presencia de un cilindro vascular continuo, un cambium vascular, xilema y floema secundario. El floema primario estuvo caracterizado por la presencia de paquetes de fibras (Figura 2). El xilema secundario estuvo compuesto elementos de vaso y fibras, ocupando un diametro 400 [+ or -] 58[micro]m en corte transversal. Las celulas de la medula fueron de parenquima poliedricas, con algunos espacios intercelulares y de gran tamano (2,04) en la parte central (Figura 2B). En cortes longitudinales se observaron los mismos tejidos, pero se corroboro la forma isodiametrica de las celulas de la corteza y medula (Figura 2C).

La repuesta morfogenica se inicio en todos los tratamientos a los 10 DDE. Los principales cambios estructurales observados en el medio suplementado con 0,2mg x [l.sup.-1] de 4-FAA (Figura 2D-F) se localizaron en la zona del cambium vascular, en donde se identifico un aumento en el numero de capas celulares debido a las divisiones tangenciales en el meristemo, produciendo una dilatacion en la zona del floema, region de la cual se formo tejido de callo que se extendio sobre el explante (Figura 2F). El aumento del tamano del callo se produjo a partir de divisiones anticlinales de la corteza. El xilema y la medula no parecen contribuir a la formacion de callo.

Con el tiempo los cambios histologicos aumentaron; en la zona del cambium continuaron las divisiones periclinales, ocasionando engrosamiento en esta region (18 a 24 capas de celulas), hubo mayor dilatacion del tejido vascular y aumento en el tamano del callo. Todos los tratamientos indujeron la formacion de callo. El tratamiento que promovio los mayores cambios celulares fue 4-FAA (Figura 2E, F), en el cual tambien se observo actividad mitotica en la region cortical, principalmente en la region cercana al floema, promoviendo un aumento de tamano del callo. Dentro de los cambios mas importantes inducidos por 4-FAA estuvo la formacion de meristemoides a partir de los 20 DDE, distribuidos predominantemente (70%) en la periferia del callo (Figura 3). Los meristemoides son agrupamientos concentricos de celulas meristematicas de forma isodiametrica, paredes delgadas, nucleos prominentes y citoplasma denso. Los meristemoides tambien se identificaron en los tratamientos de sulfato de adenina y adenina pero en menores porcentajes (1-2%). El aumento de tamano del callo en altura se debio principalmente a la diferenciacion de meristemos en fila provenientes de la region del cambium, con predominio de divisiones tangenciales sucesivas que formaron hileras (Figura 3). Es sabido que la brotacion adventicia es el resultado de la interaccion de varios factores (Marques et al., 2011); en el presente trabajo se logro la formacion de un brote en el tratamiento de adenina a los 20 DDE, proveniente de celulas meristematicas del cambium; el nuevo brote desarrollo un meristemo apical y primordios foliares sin una diferenciacion clara de tejido vascular (Figura 4).

A los 30 DDE en el tratamiento de 4-FAA, continuo el aumento el volumen del callo por meristemos en fila, dilatacion de la region del cambium y floema, y aumento en el numero de regiones meristemoides.

Con la finalidad de evaluar los cambios estructurales promovidos por los compuestos usados en el presente estudio se analizaron 14 variables cuyos resultados se muestran en la Tabla I. Las variables que mostraron diferencias estadisticas fueron: ancho relativo de floema, indice de dilatacion de tejido vascular, altura de callo y formacion de regiones meristemoides. Estas variables indican una respuesta morfogenica al tratamiento.

Las cuatro variables involucradas con la morfogenesis adventicia mostraron un incremento en sus valores conforme transcurrian los dias de evaluacion. Se identifico una correlacion positiva entre las variables de ancho de floema (AF) e indice de dilatacion del cambium y floema (DCF), mientras que en el resto de las variables no se encontraron correlaciones significativas.

Con la finalidad de identificar el mejor tratamiento en las variables ancho de floema, indice de dilatacion del tejido vascular y altura de callo, se realizo un analisis de area bajo la curva (ABC), el cual consiste en la incorporacion de todos los datos mediante un analisis en el tiempo, que arroja como resultado una grafica en la que se generan diferentes areas bajo la curva correspondientes a cada tratamiento. De acuerdo a este analisis los mejores tratamientos para las variables evaluadas fueron sulfato de adenina y 4-FAA. El sulfato de adenina modifico significativamente (a=0,05) el ancho relativo del floema en los explantes de Veracruz, y el 4-FAA modifico significativamente ([alpha] = 0,05) el indice de dilatacion de tejido vascular (Veracruz) y la altura de callo (Nayarit y Veracruz). Referente a la variable de regiones meristemoides esta solo se presento en el tratamiento con 4-FAA.

Discusion

El interes en inducir morfogenesis adventicia radica en que es uno de los principales factores limitantes que previene el desarrollo de tecnologias de transformacion genetica empleando Agrobacterium tumefaciens y otros medios de transferencia de genes, ya que se requiere de celulas en desarrollo para integrar el ADN foraneo en el genoma de la especie en cuestion. Tomando en cuenta la importancia de generar citricos resistentes a plagas y enfermedades mediante ingenieria genetica, se ha obtenido brotacion adventicia con semillas de citricos tales como el naranjo dulce y citrange (Bond y Roose, 1998; Yu et al., 2002 ; Pena et al., 2004), el naranjo agrio (Gutierrez et al., 1997; Ghorbel et al., 2000; Palacios et al., 2004; Roman et al., 2005), pomelo, volkameriano y alemow (Palacios et al., 2004; Roman et al., 2005; Febres et al., 2007) y limon mexicano (Roman et al., 2005; Loeza et al., 2011; Soler et al., 2012). En los trabajos mencionados los brotes adventicios se obtuvieron de plantulas provenientes de la germinacion in vitro de semillas. En naranja Washington Navel, Bond y Roose (1998) usan los embriones del 1% de la poblacion de plantas que presentan semillas.

La regeneracion de plantulas esta influenciada por la especie, el genotipo, el explante, la planta madre de la que se obtiene el explante, el medio de cultivo, los reguladores de crecimiento (concentracion e interaccion), las condiciones de crecimiento (temperatura, fotoperiodo). En resumen, el fenomeno es multifactorial, por lo que definir el protocolo de laboratorio requiere tiempo. Petri et al. (2005) mencionan que los arboles frutales son de los mas recalcitrantes en producir brotes adventicios; estos autores desarrollaron un protocolo con hojas de durazno empleando pulsos y diferentes dias de exposicion en ANA y 2,4-D, en interaccion con las poliaminas putrescina y espermidina e inhibidores de etileno como tiosulfato de plata (STS) y aminoetoxyvinyl glicina (AVG). En el presente trabajo al establecer segmentos internodales de limon persa in vitro, provenientes de arboles maduros de campo, se logro la obtencion de brotes adventicios en un bajo porcentaje (1%), aun con el uso de 4-FAA, sulfato de adenina, adenina y triacontanol, compuestos que han promovido exitosamente la organogenesis adventicia en otras especies, como son los casos de Bixa orellana (Parimalan et al., 2009), Picrorhiza scrophylariiflora P. (Bantawa et al., 2009), Cichorium intybus L. (Nan-dagopal and Ranjita, 2006) y Ipomea batatas L. (Luo et al., 2006).

Para la regeneracion de plantulas a partir de explantes como epicotilos y segmentos internodales se requiere de la interaccion de varios factores a fin de inducir una respuesta favorable (Gutierrez et al., 1997; Garcia-Luis et al., 1999; Yu et al., 2002; Pena et al., 2004). Ramesh et al., (2005) afirman que el uso de sulfato de adenina en concentraciones superiores a 80mg x [l.sup.-1] no induce una respuesta organogenica. En el caso de triacontanol y 4-FAA, la respuesta varia dependiendo de la especie, en algunas especies lenosas el triacontanol logro inducir microplantulas a partir de segmentos nodales (Tantos et al., 2001), mientras que en frijol no promueve ningun cambio (Mukeshimana et al, 2012); en contraste, favorecen la formacion de callo y brotacion adventicia en Allium cepa a partir de semillas en suspension e Ipomea batata a partir de peciolos (Tanikawa et al., 1998; Luo et al., 2006; Kamata et al, 2011).

En estudios previos en citricos se ha observado que los brotes adventicios provienen de celulas parenquimaticas del callo, el cual se origina a partir de intensas divisiones periclinales de la region del cambium en respuesta del estimulo hormonal del medio de cultivo (Garcia-Luis et al., 1999; Pena et al., 2004; Almeida et al., 2006). Estos resultados indican que ante la presencia de ciertos compuestos las celulas se vuelven competentes y capaces de reaccionar para inducir regeneracion y formacion de brotes en explantes de naranja dulce y citrange. En forma similar a otros citricos, en limon persa, la formacion de callo en todos los tratamientos fue a partir de divisiones periclinales de celulas del cambium, debido a la totipotencialidad de estas celulas, que tienen la capacidad de dividirse e iniciar morfogenesis bajo condiciones de cultivo adecuadas (Pena et al., 2004; Almeida et al., 2006). Aunque en todos los medios de regeneracion probados se observo la formacion de callo, fue el tratamiento con 4-FAA y adenina donde se presento una mayor desdiferenciacion y formacion de un brote adventicio respectivamente.

Algunos autores mencionan que compuestos de tipo auxinico son practicamente innecesarios en el medio de cultivo para inducir morfogenesis en citricos, ya que tiene un efecto marginal comparado con las citocininas, principalmente BAP (Garcia-Luis et al., 1999; Almeida et al., 2003; Tavano et al., 2009). Sin embargo en este estudio, en presencia de 4-FAA al que se atribuye un efecto tipo auxina, se identificaron cambios morfogenicos tales como la formacion de meristemos en fila que aumentaron el tamano del callo, regiones meristemoides localizadas y disminucion en el tamano de celulas de corteza resultado de la activa division celular. Estas respuestas pudieron estar asociadas al uso de auxinas y citocininas en el medio las cuales, solas o combinadas, pueden inducir cambios celulares y organogenesis adventicia de acuerdo a varios autores (Pena et al., 2004; Luo et al, 2006; Lee et al., 2012). Otro factor determinante es la concentracion de fitohormonas endogenas en sectores especificos (basal) del explante, que actuan sinergicamente en la formacion de callo y brotes adventicios en diferentes especies, jugando un papel muy importante en la competencias de celulas para la transformacion en citricos (Pena et al., 2004). A los 20 DDE en el medio de cultivo, las celulas han respondido a la presencia del inductor produciendo regiones meristemoides, por lo que a este tiempo procederia cambiar de medio de cultivo para inducir la brotacion.

A los 20 DDE en el medio de cultivo las celulas respondieron a la presencia de los compuestos precursores de fitohormonas, produciendo regiones meristemoides; sin embargo, estas no lograron diferenciarse en brotes adventicios posiblemente porque hizo falta un estimulo adicional para inducir el cambio en las celulas. Probablemente, despues de los 20 dias de que los segmentos internodales permanezcan en presencia de 4-FAA (0,2mg x [l.sup.-1]) seria recomendable cambiarlos a un medio de cultivo que contenga reguladores del crecimiento principalmente citocininas asociadas con la induccion de la brotacion.

En limon persa no se habia estudiado el uso de inductores de brotacion inusuales, como adenina, sulfato de adenina, triacontanol y 4-FAA para induccion de brotes adventicios.

Conclusiones

El estudio histologico y analisis estadistico permitio estudiar y analizar los cambios en celulas y tejidos, promovidos por 4-FAA, adenina, sulfato de adenina, triacontanol, BAP y AIA en las concentraciones y combinaciones propuestas, en explantes internodales de C. latifolia. Se identificaron cuatro variables involucradas directamente con la morfogenesis: presencia de meristemoides, ancho relativo de floema, indice de dilatacion de tejido vascular, altura de callo y formacion de regiones meristemoides.

Para futuros trabajos se propone el uso de explantes adicionales como hojas y apices de arboles jovenes mantenidos en condiciones controladas de sanidad y nutricion de invernadero.

Este es el primer reporte del uso de adenina y 4-FAA para la induccion de meristemoides y brotes adventicios en explantes internodales de limon persa (Citrus latifolia) provenientes de arboles adultos de campo.

Recibido: 04/08/2014. Modificado: 04/04/2015. Aceptado: 08/04/2015.

AGRADECIMIENTOS

Los autores agradecen al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologia por la beca de maestria concedida a la estudiante Adriana Isabel Perez Luna (312346).

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Adriana Isabel Perez-Luna. Ingeniera Bioquimica, Universidad Autonoma de Coahuila, Mexico. Maestria en Ciencias en Fruticultura, Colegio de Postgraduados, Mexico. Investigador, INIFAP, Mexico.

Maria Alejandra Gutierrez-Espinosa. Licenciatura en Agronomia, Universidad Autonoma Metropolitana-Xochimilco, Mexico. Maestria en Ciencias en Fruticultura, COLPOS, Mexico. Ph.D., University of Florida, EEUU. Profesora Investigadora. Colegio de Postgraduados. Direccion: Posgrado en

Fruticultura, COLPOS. Km 36.5 carretera Mexico-Texcoco. Montecillo. Texcoco. Estado de Mexico C.P.56230. e-mail: alexge@colpos.mx

Hilda Araceli Zavaleta-Mancera. Licenciatura en Biologia, Universidad Autonoma Metropolitana-Iztapalapa, Mexico. Maestria en Ciencias en Botanica, COLPOS, Mexico. Ph.D., University of Wales, RU. Profesora Investigadora, COLPOS, Mexico.

Alejandrina Robledo Paz. Licenciatura en Biologia, Universidad Nacional Autonoma de Mexico. Maestria en Ciencias en Genetica, COLPOS, Mexico. Doctorado en Ciencias, CINVESTAVIPN Irapuato, Mexico. Profesora Investigadora. COLPOS, Mexico.

Gustavo Mora Aguilera. Ingeniero Agronomo Parasitologo, Universidad Autonoma de Chapingo, Mexico. Maestria en Ciencias en Fitopatologia, COLPOS, Mexico. Ph.D., University of Florida, EEUU. Profesor Investigador, COLPOS, Mexico.

TABLA I

EFECTO DE ADENINA (A), TRIACONTANOL (T), SULFATO DE ADENINA (SA)
Y 4-FAA EN EXPLANTES DE LIMON PERSA DE DOS PROCEDENCIAS

                               Nayarit (marzo)

Variables      Tes        A          T          SA       4-FAA

AXIF *        7,2 a     7,7 a      12,7 a      7,9 a     7,3 a
AXF *        12,3 a    12,9 a      18,5 a     13,0 a     12,0 a
TXF *         0,8 a     0,9 a      1,2 a       0,8 a     0,7 a
AF *         11,7 a    17,0 a      14,7 a     16,8 a     13,5 a
AC *         20,1 a    27,6 a      26,4 a     24,4 a     24,0 a
DTXF *        1,7 a     2,1 a      2,00 a      1,7 a     1,5 a
DCC *         2,2 a     2,8 a      2,8 a       2,6 a     1,8 a
DCM *         2,5 a     3,1 a      2,9 a       3,0 a      2 a
BA **           A         A          A           A         A
AC *         24,2 a    28,3 a      30,2 a     28,4 a     27,4 a
DCF *         1,1 c    1,4 a b    1,3 a b      1,2c      1,4 a
AlCa            -      141,8 b   313,7 a b     44,9c    843,4 a
M *             -       0,1 b      0,0 b       0,1 b     7,4 a
MF **           A         A          A           A         P

                               Veracruz (abril)

Variables      Tes        A          T          SA       4-FAA

AXIF *       12,5 a     7,9 a      8,2 a      12,7 a     6,8 a
AXF *        19,0 a     12,6 a     11,5 a     16,0 a     11,8 a
TXF *         1,2 a     0,7 a      0,7 a      1,0 a      0,7 a
AF *         11,5 b     11,9 b     20,7 b     25,0 a     11,7 b
AC *         20,6 a     20,4 a     26,5 a     21,5 a     22,3 a
DTXF *        1,9 a     1,7 a      1,7 a      2,0 a      1,6 a
DCC *         2,5 a     2,3 a      2,6 a      2,1 a      1,8 a
DCM *         2,8 a     2,8 a      3,1 a      2,5 a      2,4 a
BA **           A         P          A          A          A
AC *         32,6 a     20,9 a      28 a      24,8 a     20,4 a
DCF *         1,2 b     1,4 b      1,7 b      1,4 b      2,1 a
AlCa            -      342,9 b    419,0 b    404,1 b    757,4 a
M *             -       0,0 b      0,0 b      0,0 b      7,6 a
MF **           A         A          A          A          P

* Variables que representan el promedio de 240 cortes. AXIF: ancho
de xilema secundario interfascicular, AXF: ancho de xilema
fascicular, TXF: numero de elementos traqueales en xilema
fascicular, AF: ancho de floema, AC: ancho de corteza externa,
DTXF: diametro de elementos traqueales de xilema fascicular, DCC:
diametro de celulas de corteza, DCM: diametro de celulas de medula,
BA: brotes adventicios, AC: ancho de corteza, DCF: indice de
dilatacion del cambium y floema, AlCa: altura de callo, M:
meristemoides, MF: numero de meristemos en fila.

** Variables cualitativas donde A: ausencia y P: presencia.

Valores con letras distintas en una fila son estadisticamente
diferentes ([alpha] = 0,05).
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Author:Perez-Luna, Adriana Isabel; Gutierrez-Espinosa, Maria Alejandra; Zavaleta-Mancera, Hilda Araceli; Ro
Publication:Interciencia
Date:May 1, 2015
Words:5476
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