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Formacion de endosporas en Clostridium y su interaccion con el proceso de solventogenesis. .

Endospore formation in Clostridium and its interaction with solventogenesis

Introduccion

Dentro de los mecanismos de diferenciacion celular encontrados en las celulas procariotas, tal vez el mas reconocido es la produccion de endosporas, que ha sido estudiado principalmente en microorganismos Gram-positivos del genero Bacillus y en menor escala en Clostridium. Los clostridios, que como caracteristica fisiologica importante se consideran bacilos anaerobicos, aparecieron como una clase separada de forma previa al evento de la gran oxidacion (-2.700 millones de anos atras), mientras que Bacillus, identificado como un bacilo Gram-positivo aerobio, aparecio hace aproximadamente 2.300 millones de anos como una clase divergente (de Hoon et al., 2010; Battistuzzi et al., 2004). La compleja red de expresion de genes que abarca la esporulacion, ha sido ampliamente estudiada en este ultimo grupo de microorganismos, y asi mismo ha servido de modelo para comprender dicho sistema en otros procariotas, porque a pesar de los recientes progresos, el estudio de la genetica de Clostridium permanece en un estado de desarrollo menor.

Dentro del genero Clostridium existen varias especies de alto impacto en la industria de las biorefinerias, por su capacidad de producir los solventes Acetona, Butanol y Etanol (ABE) por medio de fermentacion a partir de fuentes celulosicas, carbohidratos simples o glicerol (Patakova et al., 2012). El uso de ingenieria genetica para mejorar este proceso fermentativo ha dedicado sus esfuerzos principalmente a incrementar la produccion natural de butanol, a ampliar el rango de posibles sustratos utilizados y a incrementar la tolerancia a los solventes por parte de la celula (Papoutsakis, 2008). Se han empleado varias estrategias, dentro de las cuales esta la expresion policistronica de genes de produccion de butanol en organismos heterologos que no tienen la capacidad natural de esporular como Pseudomonas putida, que presento un rendimiento maximo de produccion de butanol a partir de glicerol puro de 122 mg/L (Nielsen et al., 2009). Otras herramientas como sistemas promotores inducibles, estrategias de supresion, microarreglos de ADN, mutagenesis por transposicion, mutagenesis sitio dirigida por medio de la herramienta ClosTron II y tecnologia de ARN anti-sentido, se han implementado hasta el momento en la busqueda del aumento de los rendimientos de produccion de solventes (Durre, 2011a; Heap et al., 2010; Papoutsakis, 2008).

Con la tendencia actual de comprender globalmente la informacion que se puede obtener a partir de tecnicas moleculares de punta y generar modelos predictivos de los organismos vivos a partir de la biologia de sistemas, se considera fundamental entender las redes regulatorias y metabolicas para poder implementar estrategias de manipulacion exitosas en microorganismos como Clostridium, que permitan incrementar su potencial biotecnologico (Lee et al., 2005). Es por esta razon que la presente revision pretende discutir dos procesos metabolicos y fisiologicos de gran importancia en este microorganismo, la esporulacion y la solventogenesis, que hasta el dia de hoy se sabe estan conectados principalmente por la proteina reguladora maestra Spo0A.

Esporulacion de bacterias Gram-positivas

El fenomeno de la esporulacion de bacterias Gram-positivas ha sido ampliamente investigado, especialmente en el genero Bacillus y en menor escala en Clostridium. Estos microorganismos son capaces de producir una espora por celula altamente resistente a condiciones ambientales adversas a traves de una intrincada red de interacciones ADN-proteina y proteina-proteina (De Hoon et al., 2010). La espora, que en terminos morfologicos difiere significativamente de la celula vegetativa, esta compuesta en la mayoria de los casos por una envoltura externa conocida como exosporium, seguida hacia el interior por las capas de proteina de la cubierta y la corteza, que esta conformada por peptidoglicano. Despues de esta estructura se encuentra el protoplasto de la espora, que comprende pared celular de la celula germinal, membrana y el llamado nucleo, en el que se encuentran enzimas, ribosomas, dipicolinato de calcio y ADN asociado a proteinas pequenas acido solubles (SASP por sus siglas en ingles) (Mitchell, 2001).

Estados morfologicos de la esporulacion

Tanto los bacilos como los clostridios tienen siete estados morfologicos dentro del desarrollo de la esporulacion. En la fase I el ADN se reconfigura adquiriendo forma de filamento axial, bajo un proceso reversible. Posteriormente en el segundo paso (fase II) se forma una doble membrana asimetrica, para continuar en la etapa III, donde se constituye la conocida pre-espora *** (1). Entre las dos membranas que se encuentran en la celula se forma la corteza de la espora que esta compuesta de peptidoglicano modificado (fase IV) (Atrih & Foster, 2001), despues de la cual se genera la cubierta de la espora de naturaleza proteica rica en residuos de cisteina, en la etapa V (Labbe, 2005). Sin embargo, se ha encontrado que para algunos microorganismos como p.ej. Clostridium pasteurianum y C. botulinum, se forma inicialmente la cubierta y despues la corteza (Labbe, 2005). Por ultimo, en el paso VI se da el proceso de maduracion de la espora con la consecuente sintesis de acido dipicolinico, la incorporacion de calcio y el desarrollo de la resistencia y se da lugar al estado VII, donde actua una enzima litica para liberar a la espora de la celula progenitora (Labbe, 2005). Es asi como, se genera este tipo de celula diferenciada, que hasta el momento se reconoce como la forma viva mas resistente.

Desarrollo de la esporulacion

El inicio de la esporulacion en los clostridios solventogenicos se da por eventos como el descenso dramatico del pH extracelular o la exposicion a oxigeno a diferencia de Bacillus donde se da por la limitacion de nutrientes (Higgins & Dworkin, 2012; Paredes et al., 2005; Sauer et al., 1995). Los clostridios acumulan material de reserva similar a la amilopectina, llamado genericamente granulosa, que servira como fuente de carbono y energia durante la formacion de la endospora. Esto induce un hinchamiento de la celula, conocido como el "estado clostridial", donde se observa la forma de cigarrillo, tipica de esta forma transicional previa a la diferenciacion (Durre & Hollergschwandner 2004). Una vez la bacteria percibe las condiciones adversas que influencian el proceso, se fosforila el regulador maestro de la transcripcion conocido como Spo0A, que activa o reprime la expresion de genes importantes para el proceso, al unirse a blancos especificos de ADN (Mitchell, 2001; Ravagnani et al., 2000).

[FIGURA 1 OMITIR]

El proceso de fosforilacion de Spo0A para iniciar el mecanismo de esporulacion ha sido ampliamente estudiado en Bacillus subtilis y es reconocido como un sofisticado sistema de transduccion de senales con multiples componentes (Figura 1) (Paredes et al., 2005; Burbulys et al., 1991; Perego, 1998). Cabe destacar que, cuando se obtuvo la secuencia del genoma de C. acetobutylicum, no se encontraron genes ortologos de la fosfotransferasa B (Spo0B) y de Spo0F, fundamentales para la fosforilacion de Spo0A en Bacillus (Nolling & Breton, 2001). Debido a evidencias como esta, en conjunto con el analisis de genomas de otros organismos de este genero, se han propuesto diferentes estrategias por medio de las cuales los clostridios pueden fosforilar a Spo0A, tales como el uso de quinasas huerfanas que fosforilen directamente al regulador maestro (Durre & Hollergschwandner 2004). Steiner y colaboradores avalaron esta teoria en 2011, demostrando que por medio de histidin-quinasas huerfanas, existian dos posibles vias alternas a traves de las cuales podia darse este fenomeno (Steiner et al. 2011). Se encontro que la proteina Cac0323 por una parte y las Cac0903 y Cac3319 por otra, podrian fosforilar directamente a Spo0A en Clostridium acetobutylicum (Burbulys et al., 1991; Durre 2011a; Steiner et al., 2011).

Una vez fosforilado, Spo0A puede reprimir la expresion de genes como el que codifica para la proteina AbrB, que juega un papel fundamental en la transicion entre el crecimiento vegetativo y la esporulacion (Scotcher et al., 2005). Asi mismo, induce la expresion de genes que contienen la informacion necesaria para producir factores sigma especificos del proceso de esporulacion, regulando de forma eficiente y coordinada este mecanismo (Durre, 2005). Se han encontrado en Clostridium genes homologos de los factores sigma estudiados en Bacillus, mostrando que la arquitectura modular de la red de regulacion de la esporulacion esta altamente conservada entre estas bacterias (De Hoon et al., 2010; Santangelo et al., 1998; Durre & Hollergschwandner, 2004). El factor alternativo [[sigma].sup.H], que se expresa de forma constitutiva, permite en conjunto con Spo0A-P, la expresion de los genes del operon spoIIA, que codifica a aF (factor sigma ubicado en la pre-espora), el factor anti-sigma SpolIAB que mantiene a [[sigma].sup.F] inactivo y el factor anti-anti sigma SpolIAA que puede formar un complejo con SpoIIAB cuando este esta unido a ADP, permitiendo a [[sigma].sup.F] activarse. A su vez, [[sigma].sup.F] permite la transcripcion de los genes SpolIGA y SpoIIGB, que codifican para una proteasa que permite la activacion del factor [[sigma].sup.E], presente en la celula madre. Este factor a su vez permite la activacion del factor [[sigma].sup.G] en la pre-espora, que favorece despues la expresion de [[sigma].sup.K] en la celula madre (Durre, 2005a; Durre & Hollergschwandner, 2004; Hilbert & Piggot, 2004; Santangelo, 1998; Sauer et al., 1995). Este proceso de expresion consecutiva de genes se da de forma similar en los clostridios que hasta ahora se han estudiado. Sin embargo, en especies como C. beijerinckii, la expresion de los genes que producen [[sigma].sup.E] y [[sigma].sup.G] se da de forma mas acelerada, ocasionando que la formacion de la pre-espora y la endospora se den en menor tiempo (Shi & Blaschek, 2008).

Solventogenesis en Clostridium

Cuando las celulas de Clostridium entran en la fase estacionaria de crecimiento, en el momento en el que comienzan a diferenciarse, remodelan su metabolismo para dirigir tanto el flujo de carbono como de electrones ya no a la produccion de biomasa, sino a la produccion de solventes en un proceso conocido como solventogenesis (Amador-Noguez et al., 2011), el cual le permite incrementar los niveles de pH externo. El proceso biotecnologico para producir acetona, butanol y etanol (ABE) por parte de clostridios solventogenicos se destaco durante la primera parte del siglo pasado por ser la segunda fermentacion mas importante despues del etanol. Como tal, la produccion microbiana de butanol fue reportada inicialmente por Louis Pasteur, pero fue Chaim Weizmann quien aislo el microorganismo Clostridium acetobutylicum y en 1915 patento la fermentacion, especialmente para producir acetona durante la primera guerra mundial. Posteriormente los esfuerzos se dirigieron a la produccion de butanol como laca para automoviles (Jones & Woods, 1986). Actualmente, resurgio el interes de implementar nuevamente este tipo de biorefinerias debido a la aplicacion de butanol como biocombustible, especialmente en China que cuenta con 11 plantas de produccion y Brasil que cuenta con una planta. Sin embargo, todas estas instalaciones basan su produccion en el uso de sustratos como melazas o almidones, que suelen tener altos costos para procesos de este tipo, sin contar con que compiten con suministros nutricionales (Durre, 2011a).

La fermentacion acetobutilica se desarrolla en general siguiendo dos fases: acidogenica y solventogenica. En la primera el microorganismo crece activamente y los azucares son convertidos en acidos acetico y butirico en mayor proporcion, con la consecuente disminucion de pH que ocasiona, en conjunto con otros factores, un cambio metabolico en la celula dando lugar a la segunda fase (solventogenica). En este punto los acidos son reconsumidos y convertidos en acetona y butanol, permitiendo a la celula estar activa metabolicamente por mas tiempo al incrementar el pH externo. Sin embargo, los solventes, en especial el butanol, tambien son toxicos para la celula, por lo que la formacion de endosporas comienza de forma simultanea con la solventogenesis, de modo que las redes regulatorias de los dos procesos estan cercanamente relacionadas (Durre, 2008).

C. acetobutylicum toma los azucares por medio del sistema de fosfotransferasas, y utiliza la ruta metabolica de Embden-Meyerhof (EMP) para obtener piruvato que es posteriormente oxidado a acetil-CoA por medio de la piruvato:ferredoxin oxidoreductasa (Ezeji et al., 2010; Jang et al., 2012). La ferredoxina reducida es una fuente de hidrogeno, mientras que el NADH generado durante la glicolisis es usado para producir acido butirico (Buckel, 2005). Despues que se producen dos moleculas de acetil-CoA, estas pueden convertirse ya sea a productos oxidados como la acetona, el acetato o C[O.sub.2], o a metabolitos reducidos como el butanol, butirato o etanol (Gheshlaghi, Scharer, Moo-Young, & Chou, 2009). El proceso de acetogenesis genera una molecula de ATP por cada molecula de acetil-CoA por medio de la fosforilacion a nivel de sustrato. En esta via, el acetil-CoA se convierte en acetil-fosfato por la accion de una fosfotransacetilasa (Pta). Finalmente, la acetato quinasa (Ack) interviene en la produccion de acetato y ATP. Por su parte, en la fermentacion de butirato, el acetil-CoA obtenido a partir de la decarboxilacion del piruvato acoplado con la reduccion de

la ferredoxina, se condensa por medio de la enzima tiolasa (Thl) para producir acetoacetil-CoA, que es reducido a butiril-CoA. Por medio de una fosfotransbutirilasa (Ptb) este se convierte en butiril-fosfato, y finalmente una quinasa (Buk) produce butirato y ATP (Figura 2) (Jones & Woods, 1986).

En la fase solventogenica actua la enzima acetoacetil-CoA: Acetato/butirato--coenzima A transferasa (Ctf) que cataliza la conversion de los acidos producidos previamente en la fase exponencial en sus derivados de Acil CoA y acetoacetato. Despues la enzima Acetoacetato descarboxilasa (Adc) convierte este ultimo compuesto en C[O.sub.2] y acetona. El Acetil CoA puede ser transformado en etanol, que se produce en bajas concentraciones de forma constante durante las dos fases de la fermentacion, por medio de la enzima acetaldehido deshidrogenasa y una alcohol deshidrogenasa. Para producir butanol, la enzima butiraldehido/ butanol deshidrogenasa E (AdhE o Aad) transforma el butiril-CoA en butiraldehido, que posteriormente se transforma en butanol por medio de la butanol deshi drogenasa (BdhB o BdhII) (Figura 2) (Jones & Woods, 1986).

Los genes que codifican estas enzimas han sido ampliamente estudiados, especialmente aquellos que estan organizados en los operones sol y adc, los cuales se localizan en un megaplasmido conocido como pSOL1. Particularmente el operon monocistronico adc, tiene como gen estructural el que codifica para la enzima acetoacetato descarboxilasa, la cual cataliza el ultimo paso durante la via de formacion de acetona, y por ende es necesario para remover el exceso de acetoacetato (Durre et al., 2002). El operon sol contiene la informacion de las dos subunidades de la CoA transferasa (ctfA y ctfB), y de la aldehido/alcohol deshidrogenasa E (adhE) (Durre et al., 2002; Cornillot et al., 1997; Fischer et al., 1993).

[FIGURA 2 OMITIR]

Relacion de las redes de solventogenesis y esporulacion en Clostridium

La solventogenesis es inducida por Clostridium con el fin de contrarrestar el efecto de la presencia de acidos producidos, para otorgar a la celula tiempo para completar la formacion de endosporas (Durre et al., 2002). Cuando disminuye el pH, dichos acidos se encuentran en su forma no disociada y son capaces de pasar la membrana celular por difusion, alterando el gradiente de protones alrededor de esta estructura celular y ocasionando en ultimas la muerte de la celula. El reconsumo de acidos por medio de la enzima acetoacetil-CoA: Acetato/butirato--coenzima A transferasa para su transformacion en solventes, incrementa el pH externo, permitiendo a la celula garantizar su supervivencia por largos periodos al darle la posibilidad de esporular (Durre, 2005b). De igual forma, el inicio de la produccion de solventes y esporas esta acoplado con la sintesis de granulosa, por lo que se han realizado diferentes estudios que sugieren mecanismos de regulacion similares para estos 3 eventos fisiologicos (Ravagnani et al., 2000). Woolley y Morris mostraron que mutantes deficientes en las tres respuestas fueron capaces de revertir esta accion de forma espontanea, mostrando que la perdida de capacidades era una consecuencia pleiotropica de una lesion en algun gen regulatorio global (Woolley & Morris 1990). Ravagnani y colaboradores postularon en el ano 2000 que es Spo0A el regulador maestro de estos procesos (Ravag nani et al., 2000).

Spo0A es una proteina perteneciente al grupo de reguladores de respuesta bacterianos, que tiene dos dominios conectados por una region variable. La region N- terminal o fosfoaceptora, contiene un residuo de acido aspartico conservado que sirve como sustrato para la fosforilacion, modulando la actividad de la proteina (Schmeisser & Brannigan, 2000). Por otra parte, la region C-terminal o efectora contiene un motivo helice-vuelta-helice de union a ADN conservado entre homologos de Spo0A de microorganismos formadores de endosporas de los generos Bacillus y Clostridium (Gutierrez & Montoya 2009; Schmeisser et al., 2000). Esta region tiene afinidad por la secuencia consenso de ADN 5'-TGNCGAA-3' conocida como la "caja 0A", localizada en regiones regulatorias; afectando de forma directa o indirecta diferentes procesos caracteristicos de la fase estacionaria de crecimiento (Ravagnani et al., 2000).

El gen adc es controlado por un unico promotor que al parecer es inducido por Spo0A, ya que se han encontrado tres cajas 0A en la region regulatoria 5' del operon. Sin embargo, se ha demostrado que otros factores de transcripcion tambien estan implicados en la regulacion de este promotor (Durre, 2008; Durre et al., 2002). Adicionalmente se sabe que el estado de relajacion del ADN tiene un efecto inductor sobre el gen adc, es asi como el desenrrollamiento del ADN en combinacion con Spo0A y determinados factores de transcripcion, promueven la induccion de adc (Durre, 2005a; Durre et al., 2002; Ravagnani et al., 2000). En un estudio del proteoma de cepas de C. acetobutylicum capaces e incapaces de formar esporas, se mostro que en el microorganismo con mutacion knockout del gen que produce Spo0A, no se encontraba ni esta proteina ni la proteina Adc (Sullivan & Bennett, 2006). Por su parte, el operon sol tiene corriente arriba de su promotor, una caja 0A. Harris y colaboradores generaron en 2002 una cepa con Spo0A inactiva por mutacion sitio-dirigida que mostro concentraciones minimas de solventes respecto a la cepa patron e incapacidad de formar endosporas, contrario a una cepa con sobre-expresion de Spo0A, que mostro una produccion de butanol mayor que la cepa control y un proceso de esporulacion acelerada, soportando la hipotesis de que este regulador de respuesta controla positivamente a las dos redes mencionadas (Harris et al., 2002).

Cuando Spo0A se encuentra fosforilado puede actuar igualmente como represor de la expresion de ciertos genes, tales como el que codifica para el regulador AbrB (gen abrB310 en Clostridium), que previene el inicio temprano de la esporulacion, inhibiendo la transcripcion de genes especificos de la esporulacion en la fase exponencial de crecimiento (Higgins & Dworkin, 2012; Scotcher & Bennett, 2008). En una investigacion realizada en 2005, Scotcher y colaboradores utilizaron ARN antisentido contra abrB310 en una cepa de C. acetobutylicum, y observaron disminucion en la produccion de solventes, sugiriendo inicialmente que podia ser este el regulador de la transicion entre acidogenesis y solventogenesis (Scotcher et al., 2005). Scotcher y Bennett reportaron un nuevo estudio en 2008, donde hicieron uso de vectores reporteros de [beta]-galactosidasa en cepas silvestres y en cepas con Spo0A defectuoso, y corroboraron la regulacion negativa de Spo0A sobre abrB310 y otro gen homologo conocido como abrB3647. En este mismo estudio reconocieron que AbrB310 es necesario mas no suficiente para dar inicio al proceso solventogenico, soportando la hipotesis de que Spo0A actua como controlador maestro de esta red metabolica (Scotcher & Bennett, 2008).

En los ultimos anos se han realizado varias aproximaciones para identificar el papel que juegan otros genes importantes en la regulacion de la esporulacion dentro de la solventogenesis. Una de estas investigaciones evaluo el papel de la fosfatasa SpoIIE, que se encarga de remover fosfato del factor anti-antisigma SpoIIAA, permitiendo al final que el factor [[sigma].sup.F] sea activo en la pre-espora y se pueda continuar el proceso. Se concluyo que la sobreexpresion del gen spoIIE no afectaba de forma directa a la solventogenesis, asi como que los cambios en el perfil de produccion de solventes en las celulas con represion de la expresion del gen estaban mediados por los efectos ocasionados en la esporulacion (Scotcher & Bennett, 2005). En un estudio mas reciente se establecio el papel de los factores [[sigma].sup.E] y [[sigma].sup.G], concluyendo que este ultimo factor no tiene rol alguno en la regulacion de la solventogenesis, y que al inactivarse el gen sigE pueden producirse solventes dependiendo del estado fisiologico del inoculo, lo que sugiere que no hay un vinculo directo con la solventogenesis, pero que las dos redes pueden desacoplarse en un estado temprano de la diferenciacion celular (Tracy et al., 2011).

Avances en ingenieria genetica y metabolica relacionados con esporulacion y solventogenesis

Tal y como se ha mencionado anteriormente, el regulador de respuesta Spo0A constituye el vinculo entre las redes de esporulacion y solventogenesis. Sin embargo, ya que las esporas no son metabolicamente activas, se considera ideal tener celulas capaces de producir solventes sin sufrir el proceso de diferenciacion, por lo que se han considerado diversas estrategias, desde sobreexpresar genes de solventogenesis en cepas que no esporulan, hasta desacoplar las dos redes. Cornillot y colaboradores re-introdujeron los genes de solventogenesis en 2 cepas degeneradas sin capacidad de formar esporas (M5 y DG1), restableciendo la capacidad de producir butanol, pero en concentraciones menores a la cepa de referencia (Cornillot et al., 1997). Posteriormente, el grupo de E. Papoutsakis intento incrementar la produccion de butanol usando como modelo la cepa M5, sobreexpresando genes de solventogenesis y realizando knockout de genes de acidogenesis, observando la necesidad de entender y controlar el flujo de electrones en la ruta metabolica, punto crucial para los microorganismos anaerobicos (Sillers et al., 2008). Por otra parte, Alsaker y col. realizaron un estudio en 2004 donde evaluaron el efecto de la sobreexpresion de Spo0A sobre el estres inducido por butanol (en una cepa modificada para tal efecto), que mostro una incrementada tolerancia a este solvente (Alsaker et al., 2004).

Para poder desacoplar de forma exitosa las dos redes y por tanto crear una cepa de C. acetobutylicum capaz de producir solventes mas no de esporular, se ha evaluado la inactivacion de la expresion de diferentes factores sigma y de SpoIIE, como se menciono previamente (Relacion de las redes de solventogenesis y esporulacion en Clostridium). Al inactivar los factores [[sigma].sup.F] y [[sigma].sup.E], que muestran su maximo nivel de expresion en la fase II, previo a la division asimetrica, los microorganismos son capaces de producir solventes, pero la productividad depende de la edad del inoculo. Cuando se interrumpe la expresion de SpoIIE o de [[sigma].sup.G], las cepas se comportan de la misma manera que la cepa patron en cuanto a la solventogenesis (Tracy et al., 2011). Este tipo de estudios ha permitido tener una mirada comprensiva de los procesos que constituyen el ciclo de vida de los clostridios sacaroliticos, y reconocer que hace falta conocimiento sobre otros reguladores que controlan el cambio de acidogenesis a solventogenesis y como interactuan con el regulador maestro Spo0A, y asi poder plantear estrategias de ingenieria metabolica exitosas para incrementar la produccion de solventes (Tracy et al., 2012; Jones et al., 2011; Lutke-Eversloh & Bahl, 2011; Papoutsakis, 2008).

Conclusion

Clostridium genera esporas como un medio para sobrevivir ante condiciones adversas, tal y como lo hace Bacillus mediante un mecanismo altamente conservado, que presenta diferencias entre estos dos generos especialmente en el inicio del sistema, controlado por la fosforilacion del regulador maestro Spo0A. Es esta proteina, perteneciente al grupo de los reguladores de respuesta, el vinculo fundamental entre dos redes de expresion de genes de importancia en el ciclo de vida de la celula: esporulacion y solventogenesis. La presencia de "cajas 0A" en regiones regulatorias de operones de genes relacionados con las dos rutas lo demuestran, asi como los efectos demostrados experimentalmente sobre la esporulacion y la solventogenesis en ausencia de esta proteina. Al ser la solventogenesis un bioproceso de alto impacto biotecnologico, se considera de gran valor el hecho de poder entender la regulacion a nivel molecular de la obtencion de solventes a partir de acidos, para de esta manera poder plantear tacticas de ingenieria genetica y metabolica que permitan incrementar de forma eficiente la rentabilidad de este proceso.

Recibido: septiembre 15 de 2012

Aprobado: junio 12 de 2013

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*** (1) Pre-espora: Compartimiento producido despues de la division asimetrica de la celula, cuando se ha completado la fusion de la doble membrana o engolfamiento (Paredes et al., 2005)

Ximena Perez Mancilla, Microbiologa Industrial, M.Sc. Instituto de Biotecnologia de la Universidad Nacional de Colombia. xcperezm@unal.edu.co

Dolly Montoya Castano, Profesora Titular Universidad Nacional de Colombia. Ph.D. M.Sc. Instituto de Biotecnologia de la Universidad Nacional de Colombia. dmontoyac@unal.edu.co. Autor de correspondencia
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Author:Perez Mancilla, Ximena; Montoya Castano, Dolly
Publication:Revista Colombiana de Biotecnologia
Date:Jul 1, 2013
Words:6108
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