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Flora bacteriana cloacal y nasal de Lepidochelys olivacea (Testudines: Cheloniidae) en el pacifico norte de Costa Rica.

RESUMEN

Con el objetivo de determinar la flora normal aerobia, nasal y cloacal de la tortuga lora (Lepidochelys olivacea), entre los meses de julio y agosto del 2002, se colectaron muestras bacteriologicas de 45 quelonios aparentemente sanos, durante el desove en Playa Nancite, Parque Nacional Santa Rosa, Costa Rica, a traves del uso de hisopos esteriles que se introdujeron en la cloaca y en uno de los conductos nasales. De las muestras recolectadas se obtuvieron e identificaron un total de 99 aislamientos, incluyendo 10 grupos de Gram-negativos y 5 de Gram-positivos. De cada tortuga se obtuvo un promedio de 0.7 bacterias de la cloaca y 1.4 de las cavidades nasales. Las bacterias mas frecuente halladas fueron Aeromonas spp. (13/45) y Citrobacter freundi (6/45) en la cloaca, y Bacillus spp. (32/45), Staphylococcus aureus (6/45) y Corynebacterium spp. (5/45) en las cavidades nasales. En este investigacion, la flora microbiana de las tortugas lora resulto constituida por microorganismos potencialmente patogenos para las tortugas y el ser humano.

Palabras clave: Lepidochelys olivacea, tortuga lora, flora bacteriana, enfermedades bacterianas, Nancite, Costa Rica.

Abstract: Cloacal and nasal bacterial flora of Lepidochelys olivacea (Testudines: Cheloniidae) at the North Pacific coast of Costa Rica. The aerobic cloacal and nasal bacterial flora of 45 apparently healthy female olive ridley sea turtles (Lepidochelys olivacea) was studied at Nancite nesting beach, in Santa Rosa National Park (Costa Rican North Pacific) during July and August 2002. Bacterial samples were obtained by inserting sterile swabs directly into the cloaca and the nasal cavities of the turtles. Ninety-nine aerobic bacterial isolates, including 10 Gram negative and 5 Gram positive bacteria, were recovered. The most common bacteria cultured were Aeromonas spp. (13/45) and Citrobacter freundi (6/45) from cloacal samples and Bacillus spp. (32/45), Staphylococcus aureus (6/45) and Corynebacterium spp. (5/45) from nasal ducts. The results of the present study showed that the aerobic bacterial flora of nesting female olive ridleys was composed of several potential human and animal microbe pathogens.

Key words: Lepidochelys olivacea, ridley sea turtle, bacterial flora, bacterial disease, Nancite, Costa Rica.

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Durante muchos anos las especies de tortugas marinas han sufrido una fuerte disminucion en sus poblaciones por varias causas, principalmente antropicas: consumo de huevos y carne, uso del carapazon para la fabricacion de artesanias, captura accidental en redes de pesca y palangres, colisiones con barcos, contaminacion y destruccion del habitat de alimentacion y de desove (National Research Council 1990). Poco se conoce sobre el impacto de las enfermedades infecciosas bacterianas en las poblaciones de tortugas marinas en estado natural y sobre el papel que varios microorganismos puedan desarrollar como agentes patogenos (Glazebrook y Campbell 1990b). Muchas bacterias han sido identificadas como las causantes de enfermedades en tortugas marinas mantenidas en cautividad (Keymer 1978, Glazebrook et al. 1981, Lauckner 1985, Glazebrook y Campbell 1990a, Glazebrook et al. 1993). Sin embargo, se conoce que muchos microorganismos pueden ser causa de elevada mortalidad en otras especies de animales marinos de vida libre (Medway 1980, Ghittino et al. 1984, Gulland 1999). Ademas, muchas de estas bacterias son patogenas para los humanos. Recientemente, Vibrio mimicus en Costa Rica (Campos et al. 1996) y Salmonella chester en Australia (O'Grady y Krause 1999) fueron asociadas a enfermedades humanas por consumo de huevos y carne de tortugas marinas, respectivamente. Este trabajo tiene el objetivo de determinar la flora aerobia microbiana, nasal y cloacal, de la tortuga lora (Lepidochelys olivacea).

MATERIALES Y METODOS

Se recolectaron muestras bacteriologicas de 45 hembras (promedio largo curvo carapazon 68.16 cm), entre los meses de julio y agosto del 2002, en Playa Nancite (10[grados]48'17" N, 85[grados]41'58" W), Parque Nacional Santa Rosa, provincia de Guanacaste, Costa Rica.

En la noche, mientras se realizaba el desove se introdujeron hisopos esteriles directamente en la cloaca, frotando entre la mucosa de la pared. Luego, despues de haber limpiado la arena de la parte externa del rostro con un pano de papel esteril desechable, hisopos esteriles se introdujeron en uno de los conductos nasales.

Todas las muestras fueron puestas en medio de transporte Stuart's (Difco) y llevadas, en menos de 24h en un contenedor termico con hielo al Laboratorio de Bacteriologia de la Escuela de Medicina Veterinaria, Universidad Nacional, Heredia, Costa Rica. El material obtenido de los hisopos nasales se cultivo en agar sangre (Oxoid), agar MacConkey (Difco) y agar manitol sal (BBL).

Los hisopos cloacales se cultivaron en agar sangre, agar MacConkey y agar XLD (Oxoid). Ademas, para detectar la presencia de Salmonella, las muestras cloacales fueron incubadas a 37[grados]C por 18h en medio de enriquecimiento Rappaport-Vassiliadis-Soya peptone (RVS) Broth (Oxoid), luego sembradas en medio de cultivo XLD agar. Las placas se incubaron a 27[grados]C aerobicamente y despues de 24h fueron examinadas. Si el crecimiento bacteriano en este tiempo resultaba escaso o nulo, las placas se dejaron incubando por otras 24h.

Cada colonia fue separada y aislada en placas de agar sangre, clasificadas por la reaccion de Gram y finalmente identificadas con pruebas bioquimicas rutinarias (Bisping y Amtsberg 1988). Algunos aislamientos fueron identificados hasta genero y otros hasta especie. La identificacion de las bacterias Gram-negativas se confirmo usando el sistema Api (bio-Merieux). Despues del desove, todas las tortugas fueron sometidas a un examen clinico externo y solamente los resultados obtenidos de los analisis de las hembras consideradas aparentemente sanas fueron incluidas en este estudio.

RESULTADOS

De las muestras cultivadas se obtuvo un total de 99 aislamientos bacterianos, incluyendo 10 grupos de Gram-negativos y 5 de Gram-positivos. Del total, 35 bacterias fueron encontradas en la cloaca y 64 en las cavidades nasales. Nueve grupos bacterianos se aislaron en la cloaca y 11 grupos en las cavidades nasales, 5 grupos se encontraron en los dos sitios anatomicos de muestreo (Cuadro 1). Aeromonas spp. fue el microorganismo mas frecuentemente aislado en la cloaca (13/45), seguido de Citrobacter freundi (6/45), Salmonella spp. (3/45), Acinetobacter spp. (3/45) y Pseudomonas aeruginosa (3/45).

Bacillus spp. fue el mas frecuente hallado en las cavidades nasales (32/45), seguido de Staphylococcus aureus (6/45), Corynebacterium spp. (5/45), Pseudomonas spp. (4/45), Acinetobacter spp. (4/45), Proteus mirabilis, Aeromonas spp. y Lactobacillus spp. (3/45).

De cada tortuga se obtuvieron un promedio de 0.7 bacterias de la cloaca y 1.4 de las cavidades nasales. En las muestras cloacales predominaron los microorganismos Gramnegativos (33/35), mientras que en las primeras vias respiratorias los Gram-positivos (46/64). Enterococcus faecalis fue el unico microorganismo Gram-positivo hallado en la cloaca.

DISCUSION

El significado de la flora bacteriana que se puede encontrar en reptiles se entiende solo cuando se considera la interaccion que existe entre los hospederos y el medio ambiente. Snipps et al. (1980) y Lawrence y Needham (1985) observaron como las especies de bacterias que se aislan en tortugas en buen estado de salud frecuente no se diferencian significativamente de las que se encuentran en tortugas enfermas. La posibilidad que estas puedan determinar condiciones patologicas dependen por los detalles circunstanciales y lo mas importante es el estado de estres y patologias concomitantes (Jacobson et al. 1998, Raidal et al. 1998, Dickinson et al. 2001). Todavia un importante aspecto a considerar parece ser la densidad de microorganismos que se pueden aislar, considerablemente mas abundantes en individuos enfermos (Jacobson et al. 1991, Dickinson et al. 2001). Tal condicion se verifica probablemente porque los sujetos inmunodeprimidos no son capaces de responder adecuadamente a una infeccion, favoreciendo asi la proliferacion masiva de bacterias presentes en individuos sanos.

Aeromonas spp., Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Proteus spp., Acinetobacter spp., Citrobacter spp., son bacterias potencialmente patogenas, que pueden portarse como oportunistas, ingresar en los tejidos danados por traumas o aprovechar las condiciones de estres causando enfermedades graves. Estas bacterias en tortugas marinas en cautividad, han sido asociadas a enfermedad cutanea septicemica ulcerativa, dermatitis papilar, dermatitis focal erosiva, dermatitis ulcerosa traumatica, dermatitis necrosante, estomatitis ulcerosa, rinitis obstructiva, queratoconjuntivitis, septicemia, bronconeumonia y osteomielitis (Lauckner 1985, Glazebrook y Campbell 1990a, Glazebrook et al. 1993).

Un grupo de enfermedades debidas a la infeccion por Vibrio alginolyticus, Aeromonas hydrophila y Flavobacterium spp., conocidas como Estomatitis Ulcerativa-Rinitis Obstructiva-Bronconeumonia, fue la causa de altas tasas de mortalidad, proximas al 70%, en ejemplares juveniles de Caretta caretta y Chelonia mydas mantenidas en cautividad (Glazebrook et al.1993). Corynebacterium spp. fue asociado a encefalitis de caracter multifocal en ejemplares juveniles de Caretta caretta (George et al. 1995).

Existen mas de 2300 serotipos de Salmonella, muchos de los cuales fueron encontrados en reptiles silvestres y en cautiverio (Mermin et al. 1997), y algunos de estos en quelonios marinos (Keymer et al. 1968, Keymer 1978, Glazebrook y Campbell 1990a, Raidal et al. 1998, O'Grady y Krause 1999). Estos microorganismos son conocidos como causa de enfermedades oportunistas principalmente cuando los hospederos estan debilitados y ocasionalmente como causa de gastroenteritis en los seres humanos por consumo de carne de tortuga (O'Grady y Krause 1999). Se considera actualmente que las tortugas marinas no son vectores de Salmonella como ocurre con otros reptiles (Johnson-Delaney 1996).

En reptiles terrestres, coliformes y Enterobacter spp. son asociados a enfermedades locales y generales (Hoff et al. 1984, Glazebrook y Campbell 1990a). Proteus mirabilis y Bacillus spp. son considerados saprofitas y parte de la flora normal que se encuentra sobre la piel de tortugas marinas (Glazebrook y Campbell 1990a).

Bacterias del genero Vibrio frecuentemente aisladas a partir de diferentes tipos de muestras de tortugas marinas y asociadas a varias patologias en este grupo de reptiles (Glazebrook et al.1981, 1993, Aguirre et al. 1984, Obendorf et al. 1987, Campos et al. 1996, Acuna et al. 1999), no fueron halladas en este estudio, utilizando metodos de cultivo y de aislamiento convencionales (Quinn et al. 1999, Carnahan y Andrews 2000).

Los estudios de la flora bacteriana en animales de vida libre son de fundamental importancia pues permiten conocer el papel que juegan estos microorganismos en las enfermedades infecciosas y como afectan la supervivencia de las poblaciones de tortugas marinas en condiciones naturales dentro del equilibrio biologico de estos vertebrados. Considerando que la densidad de los microorganismos resulta mayor en reptiles con inestable estado de salud, pensamos que este aspecto puede ser utilizado como un importante indice para identificar grupos de animales inmunodeprimidos o enfermos, evaluando la flora bacteriana de una poblacion durante varios anos. En fin, el conocimiento de la flora indigena de animales silvestres es importante para entender los riesgos potenciales de la zoonosis.

En esta investigacion demostramos, en hembras de tortugas lora aparentemente sanas, la presencia de un amplio espectro de bacterias, muchas de las cuales son patogenas para el ser humano y animales.

AGRADECIMIENTOS

Nuestro agradecimiento al Area de Conservacion Guanacaste por su apoyo en el uso de las infraestructuras. A Humberto Cedeno, Ana Jimenez, Magaly Caballero, Javier Gonzalez de la Escuela de Medicina Veterinaria, Heredia, Costa Rica, por su apoyo y valiosa colaboracion durante la realizacion de esta investigacion.

Recibido 21-I-2003. Corregido 16-XII-2004. Aceptado 28-IX-2005.

REFERENCIAS

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Mario Santero (1), Carlos Mario Orrego (2) & Giovanna Hernandez Gomez (3)

(1) Laboratorio de Parasitologia, Escuela de Medicina Veterinaria, Universidad Nacional, Heredia, Costa Rica. marisant@libero.it

(2) Programa Regional Manejo de Vida Silvestre, Universidad Nacional, Heredia, Costa Rica. carlosmario@hotmail.com

(3) Laboratorio de Bacteriologia, Escuela de Medicina Veterinaria, Universidad Nacional, Heredia, Costa Rica. giovah@ns.medvet.una.ac.cr
CUADRO 1
Clases de bacterias obtenidas a partir de hisopos de la cloaca (C)
y conductos nasales (CN) de tortugas lora (n=45)

                                    C %              CN %
      Bacterias                (n. positivas)   (n. positivas)

1)  Acinetobacter spp.             6.6% (3)         8.8% (4)
2)  Aeromonas spp.                28.8% (13)        6.6% (3)
3)  Alcaligenes faecalis           2.2% (1)            0
4)  Bacillus spp.                     0            71.1% (32)
5)  Citrobacter freundi           13.3% (6)            0
6)  Corynebacterium spp.              0            11.1% (5)
7)  Enterobacter agglomerans          0             4.4% (2)
8)  Enterococcus faecalis          4.4% (2)            0
9)  Escherichia coli               6.6% (3)         2.2% (1)
10) Lactobacillus spp.               0              6.6% (3)
11) Proteus mirabilis              2.2% (1)         6.6% (3)
12) Pseudomonas aeruginosa         6.6% (3)         2.2% (1)
13) Pseudomonas spp.                  0             8.8% (4)
14) Salmonella spp.                6.6% (3)            0
15) Staphylococcus aureus             0            13.3% (6)
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Author:Santoro, Mario; Orrego, Carlos Mario; Hernandez Gomez, Giovanna
Publication:Revista de Biologia Tropical
Date:Mar 1, 2006
Words:3004
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