Printer Friendly

Farkli Sivi Besiyerlerinde Trypanosoma cruzi'nin Ureme Yogunluklarinin Karsilastirilmasi ve Kriyoprezervasyonu/Comparison of Reproduction Densities in Different Liquid Media of Trypanosoma cruzi and Cryopreservation.

GIRIS

Amerikan Trypanosomiosis'i olarak da bilinen Chagas hastaligi (CH), protozoon parazit Trypanosoma cruzi (T. cruzi)'nin neden oldugu zoonotik bir hastaliktir. T. cruzi'nin dunya capinda alti milyon ile yedi milyon kisiye bulastigi tahmin edilmektedir. Hastalik 21 Latin Amerika ulkesinde endemiktir ve onemli bir halk sagligi problemidir (1). T. cruzi enfeksiyonu zoonoz oldugundan hastaligin devami icin insan zorunlu bir ara konak degildir. Insan rastlantisal olarak enfekte olmaktadir. Vektoru Triatoma cinsi Reduviid bocekler Amerika kitasinin guney yarisinda ve Guney Arjantin'de bulunmaktadir. Vektor ozellikle hayvan barinaklarinda yasamakta ve hayvanlari enfekte etmektedir. Insan enfeksiyonu, vektorun insandan kan emmesi sirasinda etkeni diski ve vucut sivilariyla insana bulastirmasi sirasinda gerceklesir. T. cruzi, 150 tur evcil ve vahsi memeliden izole edilmistir (2, 3). CH, her ne kadar vektor kaynakli bir hastalik olarak gorulse de ozellikle triatomalarla yakin temasta olan kirsal kesimlerde oral bulasmanin gittikce arttigi gorulmektedir. Gida kaynakli bulas, hastaligin yayilmasinda onemli bir unsurdur ve sadece rezervuar barinaklarinda degil vektor tarafindan isirilma ihtimali dusuk olan bolgelerde bile insanlar icin bir tehdit olusturmaktadir. Bu durum hastalik prevalansinin yuksek olmasinin nedenlerindendir (4).

Gunumuzde CH'nin tanisina yonelik yeni test kitleri ve tani yontemleri gelistirilmesi buyuk onem arz etmektedir. Trypanosoma epimastigot formlarinin aksenik kulturlerde uretilmesi, hastalik tanisinin desteklenmesinin yani sira, hayvan modelleri disinda parazit susunun devami icin oldukca onemlidir. Parazit kultuvasyonu, parazit biyokimyasi, immunolojik calismalar ve molekuler testlerde buyuk avantaj saglamaktadir. Ayrica parazitin metabolik yollari, antijenik degisim mekanizmalari ve hastaligin kontrolu icin etkin bir ilac gelistirilmesi gibi diger onemli konular ile de arastirma yapmayi mumkun kilmaktadir (5).

Bu calismada T. cruzi susunun farkli sivi besiyerlerinde ureme yogunluklari arastirilmistir. Amacimiz T. cruzi susunun gerek kulturde canlilik suresi gerekse ureme hizi bakimindan en iyi sivi besiyeri ortamini tespit etmek ve calisilan susun kriyoprezervasyonunu saglamaktir.

YONTEMLER

T. cruzi susunun sivi azot tankindan cikarilip uretilmesi

Manisa Celal Bayar Universitesi Parazit Bankasi'nda sivi azot tankinda saklanan American Type Culture Collection (ATCC) 50825 T. cruzi susunun epimastigot formu sivi azot tankindan uygun kosullar altinda cikarildi. Cikarilan kriyovialler hizli bir sekilde 25 [degrees]C'lik su banyosunda tamamen cozulene kadar bekletildi. Tup icerigi konik tuplere aktarildiktan sonra urun hacminin uc kati oraninda ayni isidaki PBS ile karistirildi. 800 rpm de bes dakika santrifuj edildi. Supernatan atildi. Elde edilen T. cruzi susu, Novy-MacNe-al-Nicolle (NNN) besiyerine ekilerek 25 [degrees]C'de inkube edildi.

Sivi kulturlerin hazirlanmasi ve T. cruzi susunun ureme potansiyelinin degerlendirilmesi

RPMI 1640 (Gibco, USA), Medium 199 (M199, Gibco, USA), Schneider's insect Medium (SIM, Sigma, USA), Nutrient Broth (NB, Merck, Germany) ve Brain Heart infusion Broth (BHIB, Fluka, USA) besiyerleri ticari olarak satin alindi. Her bir besiyeri, kullanim talimatina gore hazirlandiktan sonra ekim yapilmadan once %10 fetal calf serum (FCS), 200 U penisilin/ml ve 0,2 mg streptomisin/ml eklenip 25 ml'lik flasklara beser ml olacak sekilde dagitildi. NNN besiyerinde uretilen T. cruziepimastigotlari, hazirlanan besiyerlerine [10.sup.5] epimastigot/ml olacak sekilde birer ml eklendi ve 25[degrees]C'lik etuvde inkube edildi. Ekimleri yapilan kultur ortamlari 24 gun sure ile gun asiri epimastigot yogunluklari bakimindan degerlendirildi. Degerlendirme, Thoma lami yardimiyla canli epimastigotlar sayilarak yapildi. Ayrica kultur ortamlarindan alinan ornekler giemsa ile boyanarak parazitin morfolojik yapisi degerlendirildi. Calismada bes farkli kultur ortami degerlendirildi. Her kultur ortami uc tekrarli calisildi.

T. cruzi susunun kriyoprezervasyonu

RPMI 1640 besiyerinde ureyen epimastigotlarin 22'inci gunde NNN besiyerine yapilan subkulturunde basarili bir sekilde uredigi gozlendi. NNN besiyerinde ureyen epimastigotlar steril falcon tuplerine aktarildi ve 4400 rpm 10 dk +4[degrees]C'de santrifuj edildi. Santrifuj isleminden sonra supernatant atildi ve pellet uzerine 10 ml fosfat tampon solusyonu (PBS) eklenerek homojenize edildi. Yikama islemi uc kez tekrarlandi. Son santrifujden sonra supernatatn atilarak pellet uzerine [10.sup.5] ml/epimastigot olacak sekilde PBS eklendi. Eepimastigot sayisi thoma lami yardimiyla mikroskopta sayilarak ayarlandi. Hazirlanan epimastigot suspansiyonu uzerine %15 Dimetilsulfoksit (DMSO) eklenerek suspansiyon homojen bir sekilde karistirildi. Suspansiyon kriyo tuplerine aktarildi ve kriyo tupleri Coolcell kutularina yerlestirilerek -86[degrees]C'de bir gece bekletildi. Ertesi gun Coolcell kutularindan cikarilan kriyo tupleri sivi azot tankina aktarildi. Sivi azot tankina aktarilan T. cruzi epimastigotlari iceren kriyo tupu alti ay sonra cikarilarak 25[degrees]C'lik su banyosunda eritildi. Epimastigotlarin mikroskop altinda canlilik ve hareketlilikleri kontrol edildi. Daha sonra NNN besiyerine ekimleri yapilarak 25[degrees]C'lik etuv icerisinde inkubasyona birakildi.

Istatistiksel Analiz

Calismamizdan elde edilen veriler GraphPad Prism (vs6, California, USA) programina yuklenerek verilerin degerlendirilmesinde Sidak's multiple comparisons testi kullanildi ve yanilma duzeyi 0,05 olarak alindi.

BULGULAR

Arastirmamizda bes farkli sivi besiyeri ortaminda T. cruzi susunun ureme yogunlugu 24 gun sure ile test edildi. Arastirma verileri incelendiginde T. cruzi epimastigotlarinin NB ve BHIB besiyer-lerinde uremedigi tespit edildi. Gruplar arasi ilk 10 gunluk veriler incelendiginde RPMI 1640, M199 ve SIM besiyerinde T. cruzi epimastigotlarinin ureme potansiyeli acisindan aralarindaki fark onemsiz bulundu (p>0.05). RPMI 1640, M199 ve SIM besiyerlerinin 12'inci gun ile 24'uncu gun arasi veriler incelendiginde RPMI 1640 besiyerinin diger besiyerlerine gore T. cruzi epimastigotlarinin ureme yogunlugu acisindan farki onemli iken (p<0.05), M199 ve SIM besiyeri arasindaki fark onemsiz bulundu (p>0.05, Tablo 1, Sekil 1).

RPMI 1640, M199 ve SIM besiyerinden alinan ornekler giemsa ile boyanarak preparatlar hazirlandi ve mikroskobik olarak incelendi. Mikroskobik inceleme sonucunda 8'inci ve 18'inci gunler arasinda bol miktarda T. cruzi epimastigotlari gorulurken (Resim 1a), 18'inci ve 20'inci gunler arasinda bazi epimastigotlarin amastigot formuna donustugu tespit edildi (Resim 1b). Ayni besiyerlerinde 20 ve 24'uncu gunler arasinda amastigot yogunlugunun arttigi goruldu (Resim 1c). Yapilan mikroskobik incelemede 24'uncu gunden sonra T. cruzi epimastigotlarinin kulturlerde hemen hemen tamamen amastigot forma donuserek uremenin yavaslayarak neredeyse durdugu tespit edildi (Resim 1d).

Sivi azot tankindan alti ay sonra cikarilan kriyoprezervasyonu yapilan T. cruzi epimastigotlarinin NNN besiyerlerinde uredigi gozlendi.

TARTISMA

Chagas hastaligi Latin Amerika ulkelerinde buyuk bir halk sagligi problemidir. Ozellikle insanlarin endemik olmayan bolgelere gocleri sebebiyle bu hastalik genis bir alana yayilmistir. Bu gun yillik 20.000 yeni vaka bildirilmektedir. Hastalik kan ve organ nakli, konjenital olarak ve oral yollarlada bulasabilmektedir (6). Bu durumda hastaligin tanisi buyuk onem arz etmektedir. Akut fazda parazitin mikroskobik olarak saptanmasina dayali yontemler oldukca spesifik olmasina ragmen bu yontemlerle enfekte oldugu bilinen kisilerin sadece %20-50'sinde parazit saptanabilmistir (7). Kisa sureli akut fazin ardindan kanda parazitemi seviyesi oldukca dusuk kronik faz baslar ve bu evrede tani oldukca zordur (8).

Kronik evrede teshisin en az iki serolojik test ile gerceklestirilmesi gerekir (9). Klinik olarak suphelenilen ve mikroskobik incelemelerde parazit saptanamayan olgularda parazit kultivasyonunun gerekliligi bildirilmektedir (3). Yapilan bir arastirmada ozellikle kronik fazin teshisinde kultivasyonun serolojik (IFT, CFT, HA) ve xenodiagnozise gore daha iyi sonuclar verdiginden bahsedilmistir. Hasta gruplarinda yapilan taramalarda serolojik testlerden %26, xenodiagnozisden %27,5 oraninda pozitiflik saptanirken kultivasyon sonrasinda bu oranin %55.08 oldugu tespit edilmistir (10). Baska bir calismada yine hemokultur, xsenodiyagnoze gore daha duyarli oldugundan bahsedilmis ancak parazit kulturunun rutinde kullanilabilmesi icin gelistirilmesi gerektigi sonucuna varilmistir (11).

Son yillarda bazi arastirmacilar, deneysel calismalarin disinda pratikte de kullanilabilecek ve parazitin formunu degistirmeden uzun sure canliligini koruyabildigi farkli kultur yontemleri gelistirmeyi hedeflemislerdir (5, 12, 13). Ancak yine de butun calismalarda uygulanabilecek tek bir protokol olusturulamayip calismalar hala devem etmektedir (12). Yapilan bir calismada, yeni bir kultur ortami bes fakli T. cruzi klinik izolati ile test edilmistir. Gelistirilen kultur ortamina katilan ve LM14 ve LM14B olarak kodlanan maddelerin kultur ortaminda parazitin morfolojisini 40 pasaj sonrasinda bile uzun sure korudugu bildirilmistir (12). Bizim calismamizda ise T. cruzi susu RPMI 1640, M199 ve SIM kultur ortamlarinda uretildi ve 18'inci gunden itibaren uc besiyerinde de parazitin form degistirdigi, amastigot forma donustugu tespit edilmistir. Kulturlerde 24'uncu gun itibariyle parazitin hemen hemen tamamen amastigot forma donustugu ve uremenin yavaslayarak durdugu gozlenmistir.

Parazit kulturleri, bilimsel calismalar icin buyuk onem arz etmektedir. Parazitin aksenik kulturlerde uretilmesi parazit biyokimyasi, immunolojik, fizyolojik ve molekuler calismalarda buyuk avantaj saglamaktadir. Arastirmamizda birbirinden farkli bes sivi besiyeri ortaminda T. cruzi epimastigotlarinin ureme potansiyelleri test edilmis olup bunlardan ikisinde uremenin olmadigi calisma sonucunda gorulmustur. Calismaya alinan diger uc besiyerinde (RPMI 1640, M199 ve SIM) 24'uncu gun sonunda en iyi ureme potansiyeli RPMI 1640 besiyerinde gorulmus ve ureme potansiyeli acisindan M199 ve SIM'e gore anlamli bir fark olusturmustur (p<0.05). Bunun yani sira calismaya alinan kultur ortamlarinda 18'inci gunden itibaren parazitin amastigot formunun kulturlerde tespit edilmesi de arastirma bulgularindandir.

Protozoon parazitlerin in vivo ve in vitro devamliligi bazi problemleri de beraberinde getirmektedir. Kulturlerde ve model organizmalarda belirli araliklarla yapilmasi gereken pasajlarin, buyuk bir is gucu gerektirmesinin yani sira suslarin kaybi, bakteri ve mantar kontaminasyonlari, parazitin biyolojik ve metabolik ozelliklerindeki degismeler bu problemlerden bazilaridir ve bunlarin buyuk bir kismi kriyoprezervasyon ile onlenebilmektedir (14). Protozoon parazitlerin kriyoprezervasyonu ile ilgili bircok calisma yapilarak krioprezervasyonun onemi vurgulanmistir (15-17). Gelistirilen kriyoprezervasyon yontemleri ile Trypanosoma parazitlerinin 7 yila kadar canliliklarini korudugu belirtilmistir (18). Biz bu calismada laboratuvarimizda rutin olarak kullandigimiz kriyoprezervasyon protokolunu belirttik.

SONUC

T. cruzi susunun epimastigot formu ile planlanan arastirmalarda bol sayida epimastigot elde etmek icin oncelikle RPMI 1640 besiyerinin daha sonra M199 ve SIM besiyerlerinin tercih edilmesinin uygun olacagi kanisina varilmistir. Epimasgot formu ile yapilacak calismalar icin calisma planinin 18. gune kadar, amastigot formu ile yapilacak calismalarda ise planlamanin 18. gunden sonra yapilmasinin uygun olacagi dusunulmustur. T. cruzi susunun epimastigot formunun %15 DMSO yogunlugunda sivi azot tankinda kriyoprezervasyonu yapilarak uzun sure saklanabilecegi gorulmustur. Bu sekilde saklanan parazitlerin gerektiginde tekrar canlandirilarak calismalarda basari ile kullanilabilecegi kanisina varilmistir.

Hakem Degerlendirmesi: Dis bagimsiz.

Yazar Katkilari: Fikir--A.O.; Tasarim--A.O.; Denetleme--A.O.; Kaynaklar--A.O., T.K., I.C., A.Y., N.O.; Malzemeler--A.O., T.K., I.C., A.Y., N.O.; Veri Toplanmasi ve/veya Islemesi--A.O., T.K., I.C., A.Y., N.O.; Analiz ve/veya Yorum--A.O., T.K., I.C., A.Y., N.O.; Literatur Taramasi--A.O., T.K., I.C., A.Y., N.O.; Yaziyi Yazan--A.O., T.K., I.C., A.Y., N.O.; Elestirel Inceleme--A.O., T.K., I.C., A.Y., N.O.

Cikar Catismasi: Yazarlar cikar catismasi bildirmemislerdir.

Finansal Destek: Yazarlar bu calisma icin finansal destek almadiklarini beyan etmislerdir.

Peer-review: Externally peer-reviewed.

Author Contributions: Concept--A.O.; Design--A.O.; Supervision--A.O.; Resources--A.O., T.K., I.C., A.Y., N.O.; Materials--A.O., T.K., I.C., A.Y., N.O.; Data Collection and/or Processing--A.O., T.K., I.C., A.Y., N.O.; Analysis and/or Interpretation--A.O., T.K., I.C., A.Y., N.O.; Literature Search--A.O., T.K., I.C., A.Y., N.O.; Writing Manuscript--A.O., T.K., I.C., A.Y., N.O.; Critical Review--A.O., T.K., I.C., A.Y., N.O.

Conflict of Interest: Authors have no conflicts of interest to declare.

Financial Disclosure: The authors declared that this study has received no financial support.

KAYNAKLAR

(1.) WHO. Chagas Disease (American Trypanosomiasis): World Health Organization; 2017. Available from: http://www.who.int/mediacent-re/factsheets/fs340/en/.

(2.) Dario MA, Rodrigues MS, Barros JH, Xavier SC, D'Andrea PS, Roque AL, et al. Ecological scenario and Trypanosoma cruzi DTU characterization of a fatal acute Chagas disease case transmitted orally (Espirito Santo state, Brazil). Parasit Vectors 2016; 9: 477. [CrossRef]

(3.) Toz SO, Ertabaklar H, Ozbel Y. Ozcel'in tibbi parazit hastaliklari, Trypanosomiosis. Ozcel MA, Ozbel Y, Ak M, editorler: Meta Basim, Izmir: Turkiye Parazitoloji Dernegi; 2007.

(4.) de Noya BA, Gonzalez ON, Robertson LJ. Trypanosoma cruzi as a foodborne pathogen: Springer, Cham; 2015. ISBN: 978-3-319-23409-0. [CrossRef]

(5.) Kumar R, Singh J, Singh R, Kumar S, Yadav S. Comparative efficacy of different in vitro cultivation media for Trypanosoma evansi isolated from different mammalian hosts inhabiting different geographical areas of India. J Parasit Dis 2015; 39: 174-8. [CrossRef]

(6.) Dias JCP. Chagas Disease (American Trypanosomiasis). Arthropod Borne Diseases: Springer; 2017. p. 245-75.

(7.) Gomes YM. PCR and sero-diagnosis of chronic chagas' disease biotechnological advances. Appl Biochem Biotechnol 1997; 66: 107-19. [CrossRef]

(8.) Rassi A, Rezende J, Luquetti A, Rassi Jr A. Clinical phases and forms of Chagas disease. American trypanosomiasis (Chagas disease) One hundred years of research 1st edition Burlington (MA): Elsevier Inc. 2010: 709-41.

(9.) CDC. Parasites - American Trypanosomiasis (also known as Chagas Disease): Centers For Disease Control and Prevention; 2017. Available from: https://www.cdc.gov/parasites/chagas/diagnosis.html.

(10.) Chiari E, Dias JCP, Lana M, Chiari CA. Hemocultures for the parasitological diagnosis of human chronic Chagas' disease. Rev Soc Bras Med Trop 1989; 22: 19-23. [CrossRef]

(11.) Minter-Goedbloed E, Minter DM, Marshall TF. Quantitative comparison between xenodiagnosis and haemoculture in the detection of Trypanosoma (Schizotrypanum) cruzi in experimental and natural chronic infections. Trans R Soc Trop Med Hyg 1978; 72: 217-25. [CrossRef]

(12.) De Paula Lima CV, Batista M, Kugeratski FG, Vincent IM, Soares MJ, Probst CM, et al. LM14 defined medium enables continuous growth of Trypanosoma cruzi. BMC Microbiol 2014; 14: 238. [CrossRef]

(13.) Lemos M, Souza C, da Costa SG, Souto-Padron T, D'agosto M. Isolation and in vitro culture of trypanosomes from Leptodactylus ocellatus from the Atlantic forest in a new experimental culture medium. J Parasitol 2013; 99: 164-7. [CrossRef]

(14.) Miyake Y, Karanis P, Uga S. Cryopreservation of protozoan parasites. Cryobiology 2004; 48: 1-7. [CrossRef]

(15.) Filardi LS, Brener Z. Cryopreservation of Trypanosoma cruzi bloodstream forms. J Eukaryot Microbiol 1975; 22: 398-401.

(16.) Raether W, Michel R, Uphoff M. Effects of dimethylsulfoxide and the deep-freezing process on the infectivity, motility, and ultrastructure of Trypanosoma cruzi. Parasitol Res 1988; 74: 307-13. [CrossRef]

(17.) Santos R, Furtado C, Martins J, Martins A. Influence of the cryopreservation at nitrogen temperature on the vaccinic ability of the" PF" strain of Trypanosoma cruzi (author's transl). Rev Bras Pesqui Med Biol 1978; 11: 99-104.

(18.) Yaeger RG. Long term cryopreservation of the amastigote stages of hemoflagellates. J Eukaryot Microbiol 1988; 35: 114-5. [CrossRef]

Ahmet Ozbilgin (1) [iD], Tugba Kaya (1) [iD], Ibrahim Cavus (1) [iD], Ahmet Yildirim (1) [iD], Necati Ozpinar (2*) [iD]

(1) Manisa Celal Bayar Universitesi Tip Fakultesi, Tibbi Parazitoloji Ana Bilim Dali, Manisa, Turkiye

(2) Cumhuriyet Universitesi Veteriner Fakultesi, Sivas, Turkiye

Cite this article as: Ozbilgin A, Kaya T, Cavus I, Yildirim A, Ozpinar N. Comparison of Reproduction Densities in Different Liquid Media of Trypanosoma cruzi and Cryopreservation. Turkiye Parazitol Derg 2018; 42(4): 249-53.

Gelis Tarihi: 27.11.2017

Kabul Tarihi: 07.09.2018

Received: 27.11.2017

Accepted: 07.09.2018

Sorumlu Yazar / Corresponding Author: Necati Ozpinar E.mail: necatiozpinar@gmail.com

DOI: 10.5152/tpd.2018.5750
Tablo 1. T. cruzi epimastigotlarinin sivi kulturlerdeki uremesinin
ortalamasi (x105, Ort[+ or -]SS)

           2. Gun            4. Gun            6. Gun

RPMI 1640  1,00[+ or -]0,00  1,67[+ or -]0,58  2,67[+ or -]0,58
M199       1,00[+ or -]0,00  1,00[+ or -]0,00  1,67[+ or -]0,58
NB         1,00[+ or -]0,00  0,33[+ or -]0,58  0,00[+ or -]0,00
BHIB       1,00[+ or -]0,00  0,33[+ or -]0,58  0,00[+ or -]0,00
SIM        1,00[+ or -]0,00  1,00[+ or -]0,00  1,33[+ or -]0,58

           8. Gun            10. Gun           12. Gun

RPMI 1640  4,33[+ or -]0,58  7,00[+ or -]1,00  9,67[+ or -]0,58
M199       2,67[+ or -]0,58  5,33[+ or -]0,58  6,67[+ or -]0,58
NB         0,00[+ or -]0,00  0,00[+ or -]0,00  0,00[+ or -]0,00
BHIB       0,00[+ or -]0,00  0,00[+ or -]0,00  0,00[+ or -]0,00
SIM        3,00[+ or -]1,00  5,00[+ or -]1,00  6,00[+ or -]1,00

           14. Gun            16. Gun            18. Gun

RPMI 1640  13,00[+ or -]1,00  26,33[+ or -]0,58  39,33[+ or -]5,51
M199        9,33[+ or -]0,58  14,00[+ or -]1,00  21,33[+ or -]1,53
NB          0,00[+ or -]0,00   0,00[+ or -]0,00   0,00[+ or -]0,00
BHIB        0,00[+ or -]0,00   0,00[+ or -]0,00   0,00[+ or -]0,00
SIM         9,67[+ or -]0,58  15,67[+ or -]1,53  22,00[+ or -]1,73

           20. Gun             22. Gun              24. Gun

RPMI 1640  79,00[+ or -]10,54  110,33[+ or -]10,50  126,67[+ or -]5,77
M199       32,33[+ or -]1,53    49,67[+ or -]3,51    71,00[+ or -]3,61
NB          0,00[+ or -]0,00     0,00[+ or -]0,00     0,00[+ or -]0,00
BHIB        0,00[+ or -]0,00     0,00[+ or -]0,00     0,00[+ or -]0,00
SIM        33,00[+ or -]2,00    46,67[+ or -]3,51    71,67[+ or -]2,89

Ort: Ortalama; SS: Standart Sapma; M199: Medium 199; NB: Nutrient
Broth; BHIB: Brain Heart infusion Broth; SIM: Schneider's insect Medium
COPYRIGHT 2018 AVES
No portion of this article can be reproduced without the express written permission from the copyright holder.
Copyright 2018 Gale, Cengage Learning. All rights reserved.

Article Details
Printer friendly Cite/link Email Feedback
Title Annotation:Original Investigation
Author:Ozbilgin, Ahmet; Kaya, Tugba; Cavus, Ibrahim; Yildirim, Ahmet; Ozpinar, Necati
Publication:Turkish Journal of Parasitology
Date:Dec 1, 2018
Words:2942
Previous Article:The Importance of Checking Leishmania Promastigotes Viability in the Proteomics Analysis of Secretions/Sekresyonlarin Proteomiks Analizinde...
Next Article:Gastrointestinal Sistem ve Dermatolojik Yakinmalari Olan Hastalarda Blastocystosis Prevalansi ve Blastocystis spp. Yogunlugunun Semptomatolojiye...

Terms of use | Privacy policy | Copyright © 2020 Farlex, Inc. | Feedback | For webmasters