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Extracto etanolico de Baccharis genistelloides (carqueja) sobre el cancer de colon inducido con 1,2-dimetilhidrazina en ratas.

Effect of Baccharis genistelloides (carqueja) ethanol extract on 1,2-dimethylhydrazine-induced rodent's colon cancer

INTRODUCCION

El cancer de colon muestra una marcada incidencia y mortalidad en ambos sexos siendo un delicado problema de salud humana, hecho que es favorecido por la resistencia farmacologica y los marcados efectos adversos de los agentes usados clinicamente. Por ello es la busqueda constante de productos naturales con eficacia demostrada y con minimos efectos adversos.

Si bien es cierto que al presente no se ha obtenido informacion de Baccharis genistelloides (carqueja) sobre estudios relacionados con el cancer de colon, pero si se tiene sobre cancer gastrico inducido en ratas, resultando en una reduccion del cancer gastrico y de marcador de estres oxidativo con extracto etanolico de las hojas de Baccharis genistelloides (2). Por ello, esta investigacion es propuesta en virtud a la presencia de flavonoides y compuestos fenolicos en la planta (3).

Una amplia variedad de flavonoides y compuestos fenolicos han mostrado poseer efectos anticarcinogenicos y antimutagenicos. Es asi que flavonoides, como la quercetina presente en el genero Baccharis, han mostrado tener efecto antioxidante y anticancerigeno (4).

La mutacion del gen K-ras es el inicio en el proceso de formacion de celulas cancerigenas y por ende la proliferacion de estas; ademas, esta mutacion ocurre antes de la formacion de adenocarcinomas (5). Por su lado, el oxido nitrico (NO) refuerza la activacion de la mutacion del gen K-ras (6) y a su vez favorece la angiogenesis y lipoperoxidacion en los tumores colonicos inducidos en ratas (7).

Los objetivos del presente trabajo fueron: 1) Determinar la eficacia quimioprotectora del extracto etanolico de las hojas de Baccharis genistellodes sobre el cancer de colon inducido en ratas; 2) Determinar la dosis efectiva media del extracto etanolico de las hojas de Baccharis genistelloides que puede inhibir el desarrollo de cancer de colon inducido en ratas; 3) Determinar los niveles de oxido nitrico al administrar extracto etanolico de las hojas de Baccharis genistelloides en ratas con cancer de colon inducido; 4) Determinar el nivel de un marcador de estres oxidativo al administrar extracto etanolico de las hojas de Baccharis genistelloides en ratas con cancer de colon inducido; y, 5) Observar posibles cambios histopatologicos por administracion diaria de extracto etanolico de las hojas de Baccharis genistelloides en ratas normales, durante un periodo de 23 semanas.

METODOS

El material biologico consistio en ratas albinas de cepa Holtzman, con peso al inicio de la investigacion de 145 +/- 15 g, de 3 meses de edad, machos, procedentes del Bioterio del Instituto Nacional de Salud del Ministerio de Salud, mantenidos en un ambiente a temperatura de 21[grados]C, con dieta y agua a libertad. La planta medicinal consistio en las hojas de Baccharis genistelloides (carqueja).

La planta entera fue recolectada en el Anexo de Ocopilla, distrito de Huancayo, Provincia de Huancayo, Departamento de Junin, en el mes de febrero, y posteriormente fue identificada en el Museo de Historia Natural de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. La planta entera fue secada bajo sombra y en lugar fresco.

En la preparacion del extracto etanolico, segun Lock, 1994 (8), la planta entera fue desecada bajo sombra durante un periodo de 2 semanas; luego se separo las raices de la planta. Las hojas y tallos fueron molidos en un molino a cuchillas electrico, hasta obtener polvo fino y homogeneo. La preparacion de extractos fue por maceracion etanolica, donde 5 kg de polvo de planta total seca fueron macerados en etanol al 96%, durante 8 dias, con agitaciones diarias de 10 minutos, en envases de color ambar y protegidos de la luz solar directa. Se filtro con papel filtro de porosidad mediana y se concentro a sequedad, en estufa a 40, obteniendose un residuo seco de peso constante, al que se le denomino extracto etanolico seco.

Con relacion a la marcha fitoquimica, segun Lock, 1994 (8), a cada reaccion de identificacion de metabolitos secundarios presentes en el extracto etanolico seco se realizo con los reactivos especificos (5 mg del extracto problema con 5 gotas de reactivo), reportando en los resultados la presencia o ausencia del metabolito.

La induccion de cancer de colon en ratas Holtzmann por 1,2-dimetilhidrazina (DMH) se realizo segun Namasivayam y col., 2004 (9), con modificaciones en pesos de ratas y el tiempo de administracion de DMH. Se empleo 48 ratas Holtzman de 3 meses de edad, con pesos 130 g a 160 g, aproximadamente, agrupadas en seis grupos de ocho cada uno. Los pesos de los animales fueron evaluados semanalmente durante las 23 semanas que duro el estudio. Los tumores intestinales fueron inducidos mediante una inyeccion subcutanea semanal de 20 miligramos de 1,2-dimetilhidrazina (DMH) por kilogramo de peso corporal, durante 17 semanas. La DMH fue preparada como una solucion que contenia 400 mg de DMH disuelta en 100 mL de agua destilada esteril, conteniendo 37 mg de EDTA como agente estabilizador, y mantenida dicha solucion a pH 6,5 con hidroxido de sodio.

La administracion del extracto etanolico de las hojas de Baccharis genistelloides (carqueja) (EEBG) y suero fisiologico fue por via oral, haciendo uso de una sonda metalica, iniciandose una semana antes de la primera inoculacion del DMH hasta las 23 semanas que duro el estudio.

Para la determinacion de la eficacia quimioprotectora del extracto etanolico de las hojas de Baccharis genistelloides, se asigno los tratamientos para cada grupo de la siguiente manera: el Grupo 1 (control) recibio suero fisiologico, el Grupo 2 recibio 100 mg/kg EEBG, el Grupo 3 recibio DMH, el Grupo 4 DMH mas 100 mg/kg de EEBG, el Grupo 5 DMH mas 250 mg/kg de EEBG y el Grupo 6 DMH mas 500 mg/kg de EEBG.

En la semana 22, los animales fueron sacrificados por dislocacion cervical, extrayendose el intestino, higado y rinon, los cuales fueron conservados en una solucion de formol al 10%; luego, se realizo los cortes histologicos de cada organo, para su respectivo estudio histopatologico.

El colon fue retirado y lavado suavemente con solucion salina para remover la sangre y los detritos adheridos al tejido; zonas de masa tumoral fueron fijadas en solucion de formol al 10%, tamponado por 7 dias; luego, se selecciono partes de 3-5 [micron]m y fueron incluidas en parafina, y posteriormente tenidas con hematoxilina y eosina. Los criterios de evaluacion fueron en base a las observaciones microscopicas: adenoma, adenocarcinoma Insitu, adenocarcinoma glandular, adenocarcinoma glandular y escamoso.

Para determinar la dosis efectiva media (DEM), se utilizo el metodo de regresion Probits, usando programa SPSS y teniendo en cuenta los grupos 3, 4, 5 y 6, a quienes se les administro DMH y dosis crecientes de extracto etanolico de las hojas de Baccharis genistelloides + DMH (100 mg/kg, 250 mg/kg y 500 mg/kg). La variable evaluada fue el numero de ratas protegidas (sin presencia de lesion) por cada grupo.

Para la determinacion de los niveles de oxido nitrico, segun Katrina y col., 2001 (10), se extrajo muestra de sangre por puncion cardiaca de cada una de las ratas tratadas, 5 mL por muestra, las cuales fueron recolectadas en tubos heparinizados, homogenizadas mediante agitacion constante y depositadas en un recipiente con agua helada para estabilizarlas, durante 10 minutos. Se procedio a centrifugar durante 15 minutos, a 3 500 rpm, para separar los elementos formes del plasma. Se extrajo el plasma mediante micropipetas y se deposito en tubos numerados correlativamente.

Las muestras de plasma obtenidas fueron sometidas a desproteinizacion en medio alcalino, mediante la adicion de las sustancias en la siguiente proporcion:
Plasma             0,8 mL
[H.sub.2]O         0,6 mL
Na(OH) 1M          0,1 mL
ZnS[O.sub.4] 30%   0,1 mL


Entre la adicion de la sustancia alcalina, Na(OH), y la sustancia atrapadora de proteinas, ZnS[O.sub.4], hubo un intervalo de 5 minutos. Posteriormente, se ejercio agitacion constante por 10 minutos, obteniendose una suspension lechosa. Se procedio a centrifugar durante 15 minutos, a 3 500 rpm, y se separo el plasma desproteinizado (incluido los controles) en una nueva bateria.

Para el analisis espectrofotometrico, a la bateria conteniendo plasma desproteinizado se le adiciono Zn metalico, dejandolo reposar durante 1 hora y 45 minutos, de manera de reducir los nitratos en nitritos. Transcurrido el tiempo, se centrifugo durante 15 minutos a 3 500 rpm, para separar el precipitado de la nueva solucion de plasma. A la nueva solucion se le adiciono reactivo de Griess A (acido sulfanilico al 1% en acido fosforico al 5%); 5 minutos despues, reactivo de Griess B (N-1-naftiletilendiamina al 0,1% en agua destilada). Se dejo reposar por 10 minutos, tornandose de un grisaceo mas claro. Finalmente, se procedio a la lectura en el espectrofotometro UV-VIS (LaboMed) a una longitud de onda de 546 nm. Las lecturas de absorbancia obtenidas fueron transformadas a concentracion plasmatica en [micron]M.

Para la determinacion de un marcador de estres oxidativo, de la muestra de sangre extraida por puncion cardiaca de cada una de las ratas tratadas, se separo el suero, y el estres oxidativo se midio mediante la prueba de lipoperoxidacion, siguiendo la tecnica de Buege y col., 1978 (11), midiendo la produccion de malondialdehido (MDA) expresado en nmol/ mL en plasma que, al reaccionar con el acido tiobarbiturico (TBA), forma un complejo coloreado que sera leido a 535 nm en un espectrofotometro UV-VIS (LaboMed).

Los analisis de los resultados de oxido nitrico, estres oxidativo, evolucion de pesos fueron presentados en un cuadro descriptivo, considerando media, des viacion estandar, intervalo de confianza, minimos y maximos. Tambien, se aplico analisis de homogeneidad de varianza, asi como analisis de varianza (Anova), realizando comparaciones multiples si en los resultados existia diferencia significativa (p<0,05) y analisis de varianza con multiples comparaciones de Turkey en caso de que la varianza fuera heterogenea.

RESULTADOS

Taxonomicamente, la planta medicinal fue identificada como Baccharis genistelloides (Lamarck) Persoon. El rendimiento fue de 23,5 gramos, de 250 gramos de plantas enteras secas y molidas, equivalente al 9,4% de las plantas enteras. Al realizar el analisis fotoquimico, se identifico a los flavonoides, compuestos fenolicos y taninos en regular cantidad, mientras que los alcaloides estaban en abundante cantidad (tabla 1).

[FIGURA 1 OMITIR]

La figura 1 representa la evolucion del crecimiento con respecto al peso corporal durante todo el estudio. En la semana veintidos, se observo que los pesos ganados por el grupo normal era mayor que el grupo EEBG 100 mg/kg, a su vez mayor al grupo DMH + EEBG 500 mg/kg, que fue mayor al grupo DMH + EEBG 250 mg/kg, mayor al grupo DMH + EEBG 100 mg/kg y mayor al grupo DMH.

[FIGURA 2 OMITIR]

En la figura 2 se observa los resultados histopatologicos; en la figura 2a se muestra al grupo control, observandose un colon sin alteraciones significativas, estructuras celulares conservadas; en la figura 2b se muestra al grupo que recibio 100 mg/kg de EEBG, donde se observa el colon sin alteraciones significativas, celulas hipertroficas sin anormalidades; en la figura 2c esta el grupo que recibio solo DMH, donde el colon presenta adenocarcinoma indiferenciado (glandular y escamoso); en la figura 2d se muestra al grupo que recibio DMH + 100 mg/kg de EEBG, donde se observa adenocarcinoma glandular en el colon; en la figura 2e esta el grupo que recibio DMH + 250 mg/kg de EEBG, en el que el colon presenta adenoma, doble fila de celula (adenocarcinoma in situ, porque no ha pasado la membrana basal), desmoplasia; y, finalmente, en la figura 2f se muestra al grupo que recibio DMH + 500 mg/kg, donde se observa al colon con adenoma, zonas de hipoplasia glandular, abundantes macrofagos, infiltracion del parenquima por celulas mononucleares (reaccion cronica al toxico).

Los valores de dosis efectiva media (DEM) son descritos en la tabla 2 y figura 3.

El EEBG disminuyo los niveles plasmaticos de nitritos en las ratas tratadas con DMH 20 mg/kg (tabla 3).

Se observo que la dosis de 500 mg/kg de EEBG disminuyo mejor los niveles nitritos. Estos niveles de nitritos en los animales tratados solamente con DMH fueron superiores a todos los grupos tratados con EEBG (figura 4).

La tabla 4 muestra la concentracion plasmatica de malondialdehido (MDA) en el grupo normal y grupos experimentales. Se observa ademas que el grupo que recibio las dosis de 500 mg/kg de EEBG disminuyo mejor la concentracion plasmatica de MDA (figura 5).

DISCUSION

Los estudios sobre la actividad antitumoral de Baccharis genistelloides, especiticamente sobre el cancer de colon, son escasos.

Hasta el momento se ha comunicado que el extracto etanolico de Baccharis genistelloides (EEBG) ha mostrado tener un efecto quimioprotector in vivo de neoplasia gastrica inducida en ratas machos (2); asi mismo, se encuentra estudios in vitro de especies del genero Baccharis, en los que se inhibio la lipoperoxidacion, disminuyendo los niveles de radicales libres (12), redujeron la mutacion genetica de microorganismos previniendo la caries dental (13), y que presentaron actividad antitumoral en el modelo de infeccion de discos de patata con A. tumefaciens, los que transforman las celulas normales de la patata en celulas tumorales (14).

En el presente estudio in vivo se ha demostrado que el EEBG, probablemente en virtud a la presencia de flavonoides (tabla 1), ha mostrado tener un efecto protector dosis dependiente en el desarrollo de cancer de colon en ratas machos inducido con 1,2 dimetilhidrazina (DMH), asi como una reduccion de los niveles de oxido nitrico (NO) y marcadores de estres oxidativo.

[FIGURA 3 OMITIR]

El estudio fitoquimico del EEBG revelo la presencia de alcaloides en abundante cantidad. Se sabe que los alcaloides son solubles en solventes polares como el etanol, tanto en su forma de sal como de base libre (15).

Si bien es cierto que algunos alcaloides han mostrado tener actividad antioxidante -como en el caso de alcaloides de la vinca y bocconia arborea (16)-, pero no pertenecen a la familia Asteraceae, por lo que no se puede afirmar que son los mismos alcaloides que contiene el Baccharis genistelloides.

Se conoce alcaloides comunes de la familia Asteraceae; tenemos a los alcaloides pirrolizidinicos, los cuales son hepatotoxicos y carecen de actividad farmacologica (17). Hasta el momento, se ha informado sobre la presencia del alcaloide 'bacariana', el cual es comun en el Baccharis coridifolia y Baccharis megapotamica, y al cual solo se le atribuye una actividad toxica.

Tomando en cuenta la informacion antes comentada sobre los alcaloides, se deduce que estarian en gran cantidad en el EEBG y no se desliga la posibilidad que hayan contribuido en coadyuvar al efecto quimioprotector, pero no se dejaria de lado que la presencia de flavonoides sean los otros agentes contribuyentes en el efecto, pues hasta la fecha se ha informado que las actividades farmacologicas del genero baccharis se deben principalmente a los flavonoides y que estas hipotesis son interesantes para generar investigaciones siguientes o futuras. Pero, el objetivo de la presente investigacion fue evaluar el efecto quimioprotector del EEBG sobre el sobre el cancer de colon.

En el estudio se hallo la presencia de flavonoides y compuestos fenolicos en regular cantidad. Estos hallazgos concuerdan con otra comunicacion (3), al evaluar el extracto etanolico de toda la planta de Baccharis genistelloides (carqueja) procedente de Brasil y Peru (Cajamarca), donde indican haber encontrado la presencia de flavonoides, chalconas, glucosidos del acido fenilpropanoico, poliacetilenos, un diterpeno, glucosidos de flavona, compuestos fenolicos. Hasta el momento se sabe que las principales acciones farmacologicas del genero Baccharis se deben generalmente a la presencia de flavonoides y terpenos; esto conduce al estudio de flavonoides que van a tener actividad antimutagenica (3). Tanto el cirsiliol, eupatrin, cirsimaritin, genkwanina, rutina y quercetina son algunos de los flavonoides presentes en el genero Baccharis (12), donde principalmente la quercetina seria la que tendria actividad reductora de iones superoxido (ONOO-) y lipoperoxidacion (4,12).

La 1,2-dimetilhidrazina (DMH) es el agente procarcinogenetico mas usado para producir cancer de colon experimental en roedores; se metaboliza en el higado, dando como resultado al intermediario azoximetano, el cual finalmente se metaboliza a un agente carcinogenetico 'ion diazonium' (18), que, por alquilacion de macromoleculas como el ADN, produce mutacion (18) y tambien es capaz de producir efectos toxicos en lugares diferentes del tumor (19). Tambien, se ha demostrado que la DMH potencia la accion de dos enzimas, favoreciendo la formacion de cancer de colon: la B-glucoronidasa que hidroliza los glucoronidos biliares en el colon produciendo agliconas -compuestos toxicos cancerigenos- y la musinasa, que hidroliza a la mucina responsable de la proteccion de la mucosa del colon (9). De esta forma se entiende que el incremento de ambas enzimas frente a la administracion de DMH potencia la actividad cancerigena.

[FIGURA 4 OMITIR]

Segun la Sociedad Nacional del Cancer (National Cancer Society), en el cancer de colon se presenta un fenomeno que consiste en una reduccion severa del peso en el paciente, denominado 'caquexia relacionada al cancer'. Esta reduccion de peso puede deberse a que las celulas cancerosas utilizan mucho del suministro de energia del cuerpo; ademas, a que el exceso de citoquinas (comun en el cancer) ejerce alteracion sobre el metabolismo, en donde el procesamiento de comida y construccion de proteinas se ven afectados. Hasta el momento, se sabe que el factor de trascripcion AP-1 presenta una regulacion diferencial en el musculo esqueletico durante el crecimiento tumoral, lo que sugiere que este factor esta implicado en el desarrollo de la caquexia asociada al cancer (20).

Al inicio del estudio se observo que el peso corporal en todos los grupos no presento diferencia significativa (f>>0,05). A partir de la septima semana, se observo la reduccion de peso severa (caquexia) en los grupos que recibieron DMH, evidenciandose mejor en la semana 14 hasta llegar a la semana 22, donde se observo macroscopicamente que el promedio de peso corporal en los animales estudiados disminuyo en el grupo tratado solo con DMH al compararlo con el grupo normal y los que recibieron EEBG mas DMH, observandose un mayor incremento de peso en el grupo normal y el grupo que recibio solo EEBG (figura 1). Se noto que los animales que solo recibieron DMH presentaron una marcada reduccion del peso corporal.

El efecto quimioprotector de las distintas dosis del extracto etanolico de las hojas de Baccharis genistelloides frente a adenomas y adenocarcinomas inducidos por DMH fue mejor a dosis de 500 mg/ kg, porque solo hubo incremento de glandulas colonicas e infiltrado celular cronico, con presencia de mononucleares en el parenquima y zonas de hipoplasia glandular con abundantes macrofagos (figura 2f). Con la dosis de 250 mg/kg se aprecio adenocarcinoma in situ, indicando que no hubo compromiso fuera de la membrana basal (figura 2e), mientras que a la dosis de 100 mg/kg se observo adenocarcinoma glandular (figura 2d). Sin embargo, los animales que solamente recibieron toxico sin Baccharis genistelloides presentaron desorganizacion celular, llegando a provocar adenocarcinoma infiltrante mixto, glandular y escamoso (figura 2c), con niveles elevados de oxido nitrico y marcador de estres oxidativo encontrados en la presente investigacion (figuras 4 y 5). Por lo anterior, el efecto quimioprotector de la planta fue dosis dependiente y podria deberse a que los flavonoides contienen en su estructura quimica un numero variable de grupos hidroxilo fenolicos y excelentes propiedades de quelacion del hierro y otros metales de transicion, lo que les confiere una gran capacidad antioxidante (21).

Por lo expuesto, los flavonoides desempenan un papel esencial en la proteccion frente a los fenomenos de dano oxidativo y se ha observado que tienen efectos terapeuticos en un elevado numero de patologias, incluyendo la cardiopatia isquemica, la aterosclerosis o el cancer (22). Hasta el momento se ha demostrado en estudio in vivo que, al administrar el flavonoide quercetina por via oral en dosis altas, inhibe la carcinogenesis del cancer de colon en ratas machos inducido por azoximetano (AOM) (4).

[FIGURA 5 OMITIR]

El extracto etanolico de las hojas de Baccharis genistelloides (carqueja) ha mostrado brindar actividad quimioprotectora del cancer de colon inducido en ratas machos por DMH a una dosis efectiva media de 377,25 mg/kg.

La cuantificacion de oxido nitrico para esta investigacion fue mediante el dosaje de nitritos en plasma (10). El oxido nitrico es una molecula que se presenta en exceso en el cancer de colon inducido en roedores y en carcinomas humanos, llegando a ser un indicador de celulas colonicas tumorales (9). Al parecer, los macrofagos que se infiltran en el tumor podrian generar factor de crecimiento vascular del endotelio (VEGF) y que el NO es el que regula la actividad del VEGF en la angiogenesis y el reforzamiento de la permeabilidad vascular y retencion macromolecular y agentes lipidicos (EPR) propio de los tumores (23). Adicionalmente, el ion superoxido ([O.sub.2.sup.-]) podria generarse de varias maneras en los tejidos tumorales: a causa del reclutamiento de macrofagos y neutrofilos (24), via xantino oxidasa en tumores solidos (25) y por accion de la oxido nitrico sintetasa (NOS), en ausencia de L-arginina (26). El NO y el [O.sub.2.sup.-] pueden reaccionar simultaneamente de forma acelerada, generando otro ion mucho mas activo y lesivo, peroxinitrito (ONO[O.sup.-]) (27), el cual estaria involucrado directamente con la EPR, ya que este seria el responsable de la activacion de metaloproteinasas de la matriz (MMPs), que tienen rol importante en la invasion tumoral, metastasis y angiogenesis. La activacion de las MMPs generaria una cascada de proteinasas, las que producirian potentes agentes vasoactivos como la bradiquinina (7), favoreciendo la formacion de los tumores colonicos.

Por otro lado, se observo que la oxido nitrico sintetasa inducible (iNOS) se encuentra incrementada en la mutacion del gen K-ras, produciendo la formacion de criptas fosiles aberrantes (CFA) (5) y que, ademas, la inhibicion del iNOS disminuye el crecimiento y proliferacion de los tumores en el colon (28).

El NO tambien refuerza la produccion de la COX-2 en el cancer de colon, el cual por medio de la GE2 producira angiogenesis (29). En la carcinogenesis del colon inducida con AOM, el COX-2 se encuentra incrementado (28). Se ha observado que los inhibidores de iONS no solo reducen el iONS sino tambien la activacion de la COX-2 (30). Ha quedado establecido que los inhibidores de iONS pueden suprimir la formacion de CFA (31). Por lo tanto, la reduccion del NO tambien reducira la produccion de COX-2 y por ende la angiogenesis.

Como era de esperarse en este estudio, los animales que recibieron solamente DMH fueron los que presentaron mayor nivel de NO en plasma y los que recibieron tratamiento con 500 mg/kg de EEBG presento el menor incremento de NO con respecto a los animales que recibieron dosis menores de EEBG (tabla 3 y figura 4) y una mejor respuesta histopatologica en cuanto a la formacion de adenocarcinomas. Estos estudios evidencian la trascendencia del NO en los adenocarcinomas en celulas colonicas y que la reduccion de este es importante para prevenir la formacion, crecimiento y proliferacion de tumores.

El estres oxidativo puede ser cuantificado mediante el indicador malondialdehido nmol/mL (MDA), que es una sustancia producto de la reaccion con el acido tiobarbiturico.

El nivel de MDA cuantificado en las ratas en tratamiento fue superior en las que recibieron solamente DMH, mientras que en las que recibieron tratamientos con EEBG descendieron significativamente, siendo mas marcado en el grupo que recibio dosis de 500 mg/kg (tabla 5, figura 10). Estos resultados indican una reduccion del estres oxidativo por el tratamiento con EEBG, lo cual es favorable para la proteccion del colon, ya que frente a un estres oxidativo severo se puede desencadenar una carcinogenesis por especies reactivas como el ion superoxido (O2-) y el ion hidroxilo (OH-), que son liberados a la circulacion sanguinea, resultando en el plasma una lipoperoxidacion en ratas tratadas con DMH. Desde que se sabe que el estres oxidativo eleva la produccion de prostaglandina, y ademas interrumpe la produccion de la glutation peroxidasa conllevando al cancer de colon, se ha tomado importancia en productos que modularian el estres oxidativo (30).

En este estudio se observo que la lipoperoxidacion asociada con el incremento de los niveles de oxido nitrico en la circulacion sanguinea refuerza la induccion de cancer con DMH en ratas y que EEBG estaria contribuyendo en la prevencion de adenocarcinomas colonicos. Los mecanismos implicados en dicha prevencion serian: a) reduciendo la sintesis de oxido nitrico y lipoperoxidacion a nivel de las celulas colonicas; b) previniendo la formacion de peroxinitritos, mutacion del gen K-ras y sintesis de COX-2 responsable de la angiogenesis; y, c) reduciendo la accion de las enzimas B-glucoronidasa y mucinasa.

Al haberse demostrado que extracto etanolico de Baccharis genistelloides (carqueja) tiene efecto quimioprotector en el colon de ratas, se recomienda ampliar estudios de genotoxicidad, toxicidad y seguridad a dosis repetidas con tiempos prolongados, a fin de evidenciar un producto natural con potencial quimioprotector del cancer de colon, ya que se estaria contribuyendo en mostrar una alternativa terapeutica a base de productos naturales tales como Bacharis genistelloides (carqueja), a fin de coadyuvar con el mejoramiento de los signos y sintomas del cancer de colon.

Manuscrito recibido el 16 de mayo de 2010 y aceptado para publicacion el 10 de junio de 2010.

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Hugo Justil [1], Jorge Arroyo [2,3], Jose Valencia [1]

[1] Facultad de Farmacia y Bioquimica, Universidad Nacional Mayor de San Marcos

[2] Instituto de Investigaciones Clinicas, Facultad de Medicina, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Lima, Peru.

[3] Laboratorio de Farmacologia, Facultad de Medicina, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Lima, Peru.

* Trabajo de tesis para optar al grado academico de Magister en Farmacologia Experimental. Facultad de Medicina, Universidad Nacional Mayor de San Marcos.

Correspondencia:

Dr. Jorge Arroyo Acevedo

Seccion Farmacologia

Facultad de Medicina, UNMSM.

Av. Grau 755.

Lima 1, Peru.

Correo-e: jorgeluis_arroyoacevedo@yahoo.es
Tabla 1. Marcha fotoquimica del extracto etanolico de las hojas de
Baccharis genistelloides.

                       Alcaloides   Flavi-   Sapo-    Compuestos
                                    noides   ninas    fenolicos

Dragendorf                 3
Shinoda                               2
Espuma                                         1
Tricloruro ferrico                                        2
Gelatina
Ueberman-Burcharc
Ninhidrina
Molish (alfa naftol)

                       Taninos   Esteroides    Aminoacidos   Glico-
                                 terpenicos      libres      sidos

Dragendorf
Shinoda
Espuma
Tricloruro ferrico
Gelatina                  2
Ueberman-Burcharc                     0
Ninhidrina                                          0
Molish (alfa naftol)                                           1

Donde: 0) ausencia, 1) poca cantidad 2) regular cantidad 3) abundante
cantidad.

Tabla 2. Determinacion de la dosis efectiva media del extracto
etanolico de las hojas de Baccharis genistelloides (carqueja) en ratas
con cancer de colon inducidas con DMH, tomando como referencia el
numero de ratas lesionadas y de ratas protegidas.

    Tratamiento         n        No           No
                             lesionadas   protegidas

DMH + suero             8        8            0

DMH + EEBG 100 mg/kg    8        6            2
DMH + EEBG 250 mg/kg    8        5            3
DMH + EEBG 500 mg/kg    8        3            5

    Tratamiento               Resultados            %          %
                                                  Lesion   Proteccion

DMH + suero            Adenocarcinoma glandular    100         0
                       y escamoso
DMH + EEBG 100 mg/kg   Adenocarcinoma glandular     75         25
DMH + EEBG 250 mg/kg   Adenocarcinoma in situ      62,5       37,5
DMH + EEBG 500 mg/kg   Adenoma                     37,5       62,5

DMH: valores de dosis efectiva media; EEBG: Baccharis genistelloides.

Tabla 3. Efecto del extracto etanolico de hojas de Baccharis
genistelloides (carqueja) sobre los niveles de nitritos en plasma de
ratas. Los valores estan dados en promedio +/- DE. Grupos de 8 ratas
cada uno, comparados con prueba de diferencia significativa minima,
con una p < 0,05.

Variable                Tratamiento               Valor medio

             Normal                               3,51 + 1,39
             Baccharis genistelloides 100 mg/kg   2,99 + 1,77
Nitritos     Dimetilhidrazina (DMH) 20 mg/kg      5,89 + 1,48
micromol/L   B. genistelloides 100 mg/kg + DMH    2,89 + 1,28
p < 0,05     B. genistelloides 250 mg/kg + DMH    3,18 + 1,22
             B. genistelloides 500 mg/kg + DMH    2,58 + 0,76

Variable                Tratamiento                  Intervalo de
                                                    confianza 95%

                                                  inferior   superior

             Normal                                 2,87       4,05
             Baccharis genistelloides 100 mg/kg     2,05       3,75
Nitritos     Dimetilhidrazina (DMH) 20 mg/kg        4,92       6,15
micromol/L   B. genistelloides 100 mg/kg + DMH      2,03       3,35
p < 0,05     B. genistelloides 250 mg/kg + DMH      2,52       4,12
             B. genistelloides 500 mg/kg + DMH      1,91       3,05

Tabla 4. Efecto del extracto etanolico de hojas de Baccharis
genistelloides sobre los niveles de malondialdehido en plasma de
ratas. Los valores estan dados en promedio + DE. Grupos de 8 ratas
cada uno, comparados con prueba de diferencia significativa minima,
con una p < 0,05.

Variable                    Tratamiento              Valor medio

                 Normal                              6,83 + 0,51
                 Baccharis genistelloides 100 mg/kg  9,60 + 1,56
Malondialdehido  Dimetilhidrazina (DMH) 20 mg/kg     6,33 + 0,80
micromol/L       B. genistelloides 100 mg/kg + DMH   6,43 + 1,08
p<0,05           B. genistelloides 250 mg/kg + DMH   6,67 + 0,58
                 B. genistelloides 500 mg/kg + DMH   5,67 + 0,57

Variable                    Tratamiento                 Intervalo de
                                                        confianza 95%

                                                     inferior  superior

                 Normal                                6,23      7,11
                 Baccharis genistelloides 100 mg/kg    8,56     10,12
Malondialdehido  Dimetilhidrazina (DMH) 20 mg/kg       5,68      7,15
micromol/L       B. genistelloides 100 mg/kg + DMH     5,51      7,39
p<0,05           B. genistelloides 250 mg/kg + DMH     6,12      7,01
                 B. genistelloides 500 mg/kg + DMH     5,16      6,11
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Author:Justil, Hugo; Arroyo, Jorge; Valencia, Jose
Publication:Anales de la facultad de medicina
Article Type:Report
Date:Jun 22, 2010
Words:6162
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