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Evaluacion in vitro de hongos nematofagos en zonas arroceras de Costa Rica contra el nematodo agallador Meloidogyne javanica.

In vitro evaluation of nematophagous fungi of Costa Rica rice-growing regions against the root-knot Meloidogyne javanica

INTRODUCCION

El arroz (Oryza sativa L.) es uno de los granos de mayor importancia a nivel mundial no solo por su consumo sino por la cantidad de personas que dependen de el, sin embargo, su rendimiento se ve mermado por una serie de enfermedades y plagas entre ellas los nematodos fitoparasitos. Un genero particular es el nematodo agallador Meloidogyne sp., endoparasito sedentario presente en muchos cultivos agricolas (Casas y Herrera 2007) especialmente en regiones subtropicales y tropicales (Netscher y Sikora 1990). Entre los nematodos fitoparasitos es el mas importante desde el punto de vista economico por los danos que produce (Quereshi et al. 1984) con un ambito de hospederos de mas de 2000 especies de plantas (Barker 1985). De acuerdo con Sasser y Freckman (1987), Meloidogyne spp., es el mas danino entre los generos de fitonematodos. En plantaciones de arroz Meloidogyne sp., puede causar perdidas de hasta un 20% en arroz inundado y de un 30% en arroz semi-inundado (Tandigan et al. 1996, Prasad et al. 1985).

Hasta el momento los nematicidas sinteticos son la principal estrategia de combate contra este patogeno, seguido de la rotacion de cultivos y la utilizacion de plantas resistentes (Choleva et al. 2006). No obstante, muchos de estos productos quimicos son retirados del mercado por razones toxicologicas o estan previstos para su eliminacion gradual por lo que la investigacion de opciones de control es un tema de mucha importancia en los ultimos anos (Nico et al. 2004). En este sentido, el combate biologico con hongos antagonistas solos o en combinacion con otros metodos es una alternativa mas en el manejo de plagas (Agnenin 2011, Khan et al. 2011, Soto-Barrientos et al. 2011).

Un grupo que actualmente se estudia entre los organismos antagonicos de nematodos son los hongos nematofagos, los cuales incluyen a mas de 200 especies descritas alrededor del mundo con alto potencial como controladores biologicos (Kerry 2000). De acuerdo con su estrategia de captura, estos hongos se dividen en predadores o atrapa nematodos porque producen un sistema hifal que sujeta, mata y consume a su presa (Barron 1977), endoparasitos (Gray 1987), parasitos de huevos y hembras (Cave 1995) y productores de toxinas (Li et al. 2000).

En Costa Rica algunos estudios evidencian que los hongos nematofagos se encuentran ampliamente distribuidos en suelos del territorio nacional, especialmente en sistemas agricolas diversos (Orozco 2005, Barrientos et al. 2011, Peraza et al. 2011). Por lo tanto, el material para incorporar una estrategia de combate biologico de nematodos fitoparasitos se encuentra disponible en el pais. Una vez que se cuenta con una serie de candidatos para ser usados como controladores biologicos, el siguiente paso constituye la realizacion de pruebas que permitan la evaluacion de los mismos para seleccionar aquellos que presenten una mayor capacidad antagonica. Diversos aislamientos de hongos nematofagos han presentado capacidades antagonicas variables, como por ejemplo Trichoderma sp. (Eapen et al. 2005, Santhosh et al. 2005, Naserinasab et al. 2011), Paecilomyces sp. (Xiujuan et al. 2000, Siddiqui y Shaukat 2004), Fusarium sp. (Hyakumachi y Kubota 2004) y Monacrosporium sp. (Gonzalez et al. 2005). El presente estudio tiene como objetivo determinar la capacidad antagonica de hongos nematofagos aislados de zonas arroceras de Costa Rica contra huevos y juveniles del nematodo agallador M. javanica por medio de pruebas in vitro.

MATERIALES Y METODOS

Durante abril del 2008 a enero del 2009 se realizaron 13 giras de campo en 3 regiones productoras de arroz de Costa Rica: Pacifico Central, Huetar Atlantica y Chorotega con el objetivo de aislar hongos nematofagos. Para la busqueda de estos agentes de combate biologico se delimitaron en las fincas 3 areas de muestreo de 4 [m.sup.2] separadas entre si por una distancia de 50 m. En cada punto de muestreo, se recolecto con un barreno 5 submuestras de suelo a una profundidad de 20 cm. Las muestras fueron almacenadas en bolsas de polietileno debidamente etiquetadas y trasladadas al Laboratorio de Nematologia de la Escuela de Ciencias Agrarias de la Universidad Nacional en Heredia, Costa Rica, para su debido procesamiento y para realizar las pruebas de antagonismo in vitro. Con la ayuda de un GPS (Global Position System) se determinaron las coordenadas de cada punto de muestreo. Los sitios seleccionados para los muestreos presentaron las siguientes caracteristicas ambientales (Cuadro 1).

Desinfeccion de raices y nematodos agalladores

Masas de huevos y nematodos fueron obtenidas de plantaciones comerciales de tomate (Solanum lycopersicum) de la localidad de San Isidro de Heredia. Las plantas muestreadas evidenciaban sintomas visibles de agallamiento con una alta presencia de masas de huevos asi como de nematodos. Para la desinfeccion de raices se empleo la metodologia de Barker (1985), que aunque es para extraccion de huevos, permite la desinfeccion de los mismos ya que utiliza hipoclorito de sodio (NaOCL). Se coloco entre 20 a 50 g de raiz previamente lavada en un beaker con hipoclorito de sodio al 0,5% y se agito durante 3 min. La solucion se paso a traves de un tamiz de 0,001 pulgadas (25 UM) para retener los huevos, los cuales se lavaron posteriormente con agua destilada para eliminar el exceso de cloro y permitir su desinfeccion superficial.

Identificacion de la especie de Meloidogyne mediante diseno perineal

Hembras de Meloidogyne fueron extraidas con una aguja de diseccion a partir de raices con agallas visibles. Las hembras fueron transferidas a una gota de acido lactico al 45% y cortadas a la mitad para remover el contenido del cuerpo. En un estereoscopio y con la ayuda de un bisturi se realizaron cortes de la parte posterior con el objetivo de retirar el exceso de cuticula alrededor de la region ano-genital. Posteriormente, los disenos perineales se colocaron en un portaobjetos y se observaron en un microscopio Olympus BX50 a 100X. Cada montaje se comparo mediante la observacion de los rasgos morfometricos de los patrones perineales y mediante el uso de la clave de Taylor y Sasser (1983). Se identifico taxonomicamente la especie como M. javanica (Treub 1885) Chitwood 1949.

Preparacion del inoculo y determinacion de unidades formadoras de colonias (UFC)

Catorce hongos fueron seleccionados para las pruebas in vitro (Cuadro 2) y se cultivaron en un medio papa-dextrosa-agar (PDA) de acuerdo con la metodologia empleada por Khan y Goswami (2000). Esta tecnica consistio en cultivar previamente sobre un medio rico en nutrientes como PDA cada uno de los hongos aislados para permitir su rapido crecimiento. Una semana despues, se utilizo una asa bacteriologica cubierta con el hongo y se introdujo en un beaker con 20 ml de agua destilada esteril con Tween 80 (surfactante y emulsificante) y se agito por 30 segundos. Este procedimiento se realizo para cada uno de los hongos. Posteriormente homogenizada la suspension, se realizo el conteo de esporas en un hematocimetro y se determino la concentracion de conidios (ufc.[ml.sup.-1]) a depositar por plato Petri que oscilo entre 1 y 1,5 x [10.sup.6]. Pruebas preliminares de crecimiento micelial permitieron comprobar que cantidades mayores de micelio dificultaban la observacion de los nematodos. Los hongos se incubaron durante 4 dias a temperatura ambiente y luz natural para facilitar su crecimiento.

Pruebas de antagonismo in vitro

Se establecieron repeticiones de 10 cajas Petri de 9 cm de diametro por cada uno de los hongos seleccionados para evaluar el potencial antagonico. Cada caja contenia 22 ml de AA (20 g.[l.sup.-1]), medio pobre en nutrientes que permitio la esporulacion tenue del hongo en toda el area de la placa. Seguidamente cada plato Petri se inoculo con 200 L de las suspensiones de esporas, las cuales fueron dispersadas en forma homogenea sobre la superficie del medio con un triangulo de vidrio esterilizado. Luego se incubaron de 3 a 4 dias a temperatura ambiente (23-26[grados]C) y luz natural. Transcurridas 96 h, se deposito por plato Petri 0,5 ml de una suspension que contenia 150 juveniles y 100 huevos de M. javanica estandarizados previamente mediante el conteo de 5 alicuotas de 1 ml. Pasado el tiempo de incubacion cada caja se reviso en un microscopio invertido (Oympus CK30) a una magnificacion de 10X y 40X para verificar la capacidad antagonica de cada hongo mediante el conteo en el numero de nematodos vivos, muertos, parasitados y huevos parasitados o no parasitados. Como controles, se establecieron 5 cajas Petri con agar-agua (AA) mas el hongo y 5 cajas Petri con agar-agua (AA) con juveniles y huevos del nematodo unicamente.

Evaluacion (Diseno experimental)

Se utilizo un diseno completamente al azar con 10 repeticiones por tratamiento. La unidad experimental consistio en una caja Petri con medio agar agua (AA).

Variables de respuesta

1. Numero de nematodos vivos

2. Numero de nematodos muertos

3. Numero de nematodos parasitados

4. Numero de huevos sin parasitar

5. Numero de huevos parasitados

Las lecturas de las variables se realizaron a los 3 y 4 dias despues de la inoculacion de los juveniles y huevos del nematodo. En este ensayo in vitro se distinguieron 3 categorias de larvas: a) libres y vivas, aquellas que se desplazaban por la caja continuamente; b) parasitadas, aquellas en cuyo interior se encontro estructuras fungicas como esporas e hifas; o atrapadas en anillos como en el caso de Monacrosporium c) muertas, aquellas que permanecian rigidas o en inmovilidad permanente sin contacto del hongo. En el caso de los huevos, se determino si estaban parasitados o no parasitados. Se calculo la capacidad depredadora o parasitica (%) tanto de juveniles como de huevos de cada caja Petri de la siguiente manera:

% nematodos parasitados = No. de nematodos parasitados/Total de nematodos x 100

% huevos parasitados = No. de huevos parasitados/Total de huevos x 100

Analisis estadistico

Las variables obtenidas fueron de naturaleza dicotomica, ya que unicamente se observaron 2 resultados posibles: nematodos vivos o muertos, nematodos parasitados o no parasitados, huevos parasitados y no parasitados, por lo que los datos fueron transformados a logitos para un analisis de regresion logistica (RL). De esta manera, se determino como fue afectada la proporcion de exito, es decir, nematodos muertos o parasitados y huevos parasitados por los diferentes hongos.

La funcion logito fue y = log (p/1 - p),

Donde:

y = valor de logito.

p = probabilidad de que ocurra con exito en n ensayos binomiales.

n = numero de ensayos binomiales o sea numero de nematodos o de huevos por caja Petri.

Se considero que ocurrio un exito cuando un nematodo o huevo murio o fue parasitado. Finalmente, las proporciones estimadas de mortalidad o parasitismo de cada hongo y del testigo fueron comparados entre si mediante la prueba de Chi-cuadrado de Wald (SAS Institute Inc. 2008).

RESULTADOS Y DISCUSION

Evaluacion del antagonismo in vitro de hongos nematofagos

El analisis de regresion lineal (RL) mostro diferencias significativas en la capacidad antagonica de los 14 aislamientos de hongos nematofagos contra juveniles y huevos de M. javanica (p < 0,0001) para las variables de respuesta: nematodos vivos, muertos, parasitados y huevos parasitados (Cuadro 3).

Juveniles de Meloidogyne ([J.sub.2])

Los juveniles ([J.sub.2]) de M. javanica presentes en las cajas testigo sin hongos nematofagos presentaban movimiento despues de 3 dias de inoculados; sin embargo, a partir del cuarto dia su movimiento fue cada vez menor para finalmente morir por no tener una fuente de alimento. En el caso de las cajas que contenian hongos nematofagos, los juveniles de M. javanica presentaron movimiento vigoroso un dia despues de ser inoculados. No obstante, a los 2 dias siguientes muchos juveniles se observaron inmoviles, parasitados o atrapados en redes pegajosas. Los juveniles parasitados por los diferentes hongos se encontraron en un rango que oscilo entre 13% y 79% (Cuadro 3). El aislamiento que presento la mayor capacidad antagonica contra juveniles de M. javanica fue Tri3 de Trichoderma con un 79%, mientras que el que presento la menor capacidad antagonica fue Tril de Trichoderma con un 13%.

En las cajas Petri inoculadas con Tri3, Pae3 y FuO correspondientes a Trichoderma, Paecilomyces y F. oxysporum respectivamente, se observo la presencia de esporas adheridas a la cuticula de los juveniles que posteriormente germinaron y formaron micelio que consumio el contenido de los nematodos. Por lo tanto estos hongos nematofagos pueden considerarse endoparasitos. Por otra parte, las hongos Mo1 y Mo2 de Monacrosporium formaron redes pegajosas a las cuales se adhirieron los nematodos para ser posteriormente consumidos por el hongo, por lo tanto, estos hongos fueron considerados depredadores o atrapa-nematodos.

En las cajas Petri testigo sin hongos nematofagos, los juveniles vivos se encontraron en un 90%, mientras que en las cajas inoculadas con hongos nematofagos, los juveniles vivos se encontraron en un 9% a 53% (Cuadro 3). Los juveniles muertos sin senales aparentes de que fueron parasitados se encontraron en el rango de 10% a 56% principalmente por parte de los aislamientos Tri1 (56%), Tri2 (32%), Pae2 (39%) y Mo1 (40%) (Cuadro 3). Dado que el porcentaje de juveniles muertos en presencia de los aislamientos anteriores fue significativamente (p<0,0001) mas alto que el de los testigos (10%), fue probable la produccion de sustancias toxicas o antibioticas por parte de los hongos antes mencionados. La produccion de estas sustancias fue previamente reportada para varias especies de hongos nematofagos, Cylindrocarpon destructans, Verticillium chlamydosporium (Chen y Chen 2003); Pochonia chlamydospora, V. lecanii, P. lilacinus, Trichoderma sp. (Eapen et al. 2005); F. oxysporum (Athman 2006) y Trichoderma harzianum (Naserinasab et al. 2011).

Huevos

En las cajas testigo no se observaron huevos parasitados, mientras que en las cajas inoculadas con hongos nematofagos los huevos parasitados oscilaron entre 1% y 96%. Los aislamientos con mayor capacidad antagonica contra huevos de M. javanica fueron Tri2 (96%) y Tri1 (95%). Los aislamientos de Monacrosporium (Mo1 y Mo2) no presentaron actividad antagonica contra huevos de M. javanica por lo que los huevos sin parasitar se observaron en un 99% (Cuadro 3).

Trichoderma

Trichoderma es un hongo que presenta mecanismos directos e indirectos de antagonismo contra nematodos. Entre los mecanismos directos se encuentran el micoparasitismo y la produccion de nematotoxinas (Benitez 2004). Los mecanismos indirectos consisten en la competencia por nutrientes o espacio y la antibiosis (produccion de metabolitos) (Benitez 2004). De acuerdo con las observaciones y resultados obtenidos en esta investigacion, es probable que los Trichoderma sp., aislados de las zonas arroceras ejercieran efectos antagonicos directos de micoparasitismo y posible efecto nematotoxico sobre juveniles de M. javanica.

El micoparasitismo se observo como una invasion micelial agresiva que finalizo con la digestion total tanto de juveniles como de huevos en sus diferentes etapas de embriogenesis (Figura 1 A, B, C y D). El micoparasitismo en Trichoderma sugiere la existencia ya documentada de enzimas liticas como [beta]-1,3-gluconasa, N-acetilglucosaminidasa, quitinasa, glucanasa, celulasa y proteasa y de algunos antibioticos volatiles como 6-penthyl-[alfa]-pyrone, acido harcianico, acido heptelidico, alameticina, gliotoxina, gliovirina, glisoprenina, hadacidina, malformina, masoilactona, peptaibolitos, tricholin, y viridinas (Goldman et al. 1994). Estas enzimas liticas (quitinoliticas, proteoliticas) de diversos tipos y la accion de algunos antibioticos volatiles podrian explicar la desintegracion de la cuticula de juveniles y la cubierta de huevos. Ademas, las nematotoxinas son compuestos quimicos que pueden inactivar, inmovilizar o matar nematodos (Barron 1977, Kerry 2000, Siddiqui y Shaukat 2004a). La presencia de nematotoxinas en las cajas Petri inoculadas con Trichoderma represento un 30% en la cantidad de juveniles inmoviles sin signos de parasitosis. El numero de nematodos inmoviles presente en las cajas inoculadas con Trichoderma fue significativamente mayor al que se observo en los platos Petri testigos sin hongos, lo cual apoya la hipotesis de la produccion y liberacion al medio de nematotoxinas por parte de estos aislamientos.

[FIGURA 1 OMITIR]

Capacidades antagonicas llevadas a cabo contra Meloidogyne por parte de hongos del genero Trichoderma fueron previamente reportadas por Howell (2003), Gonzalez (2004), Siddiqui y Shaukat (2004a), Eapen et al. (2005), Santhosh et al. (2005) y Naserinasab et al. (2011). En el caso de esta investigacion, de los 7 aislamientos de Trichoderma probados, unicamente Tri3 y Tri4 presentaron una capacidad para parasitar juveniles (> 70%). Por otra parte, los 7 aislamientos de Trichoderma presentaron capacidades (> 70%) para parasitar huevos. Por lo tanto, todos los hongos del genero Trichoderma demostraron un buen desempeno como micoparasitos, algunos contra juveniles y otros contra huevos de M. javanica. Desigualdades en la especificidad de los hongos nematofagos son explicadas en funcion de diferencias en la capa cuticular, especificamente de receptores que facilitan la interaccion hongocuticula u hongo-pared al tratarse de huevos (Tunlid et al. 1992, Jaffee y Muldoon 1995a). En general, los hongos Trichoderma aislados de zonas arroceras de Costa Rica fueron mas eficientes al parasitar huevos que juveniles de M. javanica quizas al mostrar una actividad quitinolitica o capacidad de degradar quitina, complejo proteinico presente en la capa media de la pared de huevos. Todos los aislamientos de Trichoderma presentaron algun grado de nematoxicidad; sin embargo, Tri1 destaco de entre el resto de hongos debido a la presencia de mas de 50% de nematodos inmoviles, por lo que podria catalogarse como el mejor productor de nematotoxinas de los 7 hongos examinados.

Paecilomyces

Al igual que Trichoderma, en el caso de Paecilomyces se identificaron como mecanismos de antagonismo contra M. javanica, el micoparasitismo y produccion de nematotoxinas. Aislamientos de Paecilomyces tienen la capacidad de producir enzimas quitinoliticas que pueden destruir la pared de los huevos y la cuticula de juveniles (Zaki 1994, Xiujuan et al. 2000), lo cual facilita el proceso de micoparasitismo. Por otro lado, la produccion de nematotoxinas como leucinostatina y lilacinina por Paecilomyces fue previamente reportada en otras investigaciones (Barron 1977, Kerry 2000, Xiujuan et al. 2000, Siddiqui y Shaukat 2004). Estos datos coinciden con los de Khan et al. (2006) al demostrar que en etapas tempranas de la embriogenesis asi como en etapas mas prontas a la eclosion de huevos, estos fueron parasitados por aislamientos de Paecilomyces. En los resultados obtenidos se evidencio la capacidad de infectar todas las etapas del desarrollo de huevos y juveniles de M. javanica. Por ejemplo, Pae1, Pae2 y Pae3 ejercieron un efecto antagonico de nematodos en un 34%, 43% y 34%, mientras que parasitaron huevos en un 48%, 48% y 59% respectivamente. Estas diferencias eran de esperarse quizas por factores propios en la eficacia del control de estos hongos ya que pueden inhibir la capacidad de movimiento de algunos nematodos y la alteracion en los procesos vitales como la eclosion y la alimentacion. Como consecuencia en el caso de los nematodos afectados, pudieron morir al agotar sus reservas nutricionales y ser presa facil de los hongos como lo menciona Marban y Thomason (1985). De acuerdo con los resultados obtenidos, posiblemente algunas enzimas y sustancias facilitaron la capacidad antagonista debido a la mortalidad y parasitismo mostrada por estos hongos (Figura 2 A, B, C y D).

[FIGURA 2 OMITIR]

Fusarium

En la naturaleza, la capacidad antagonica de Fusarium opera a traves de mecanismos diferentes a los observados para Trichoderma y Paecilomyces. Algunos aislamientos de Fusarium son endofitos, los cuales colonizan raices sin causar dano alguno a la planta hospedante. Cuando Fusarium coloniza raices puede producir y liberar al suelo sustancias con accion repelente o nematicida (Dabatat y Sikora 2007, El-Fattah et al. 2007). Algunos aislamientos de Fusarium en un estado endofitico pueden producir sustancias promotoras de crecimiento vegetal e inductoras de resistencia contra nematodos fitoparasitos (Hyakumachi y Kubota 2004). En ensayos in vitro, algunos hongos del genero Fusarium mostraron capacidad antagonica al parasitar tanto juveniles como huevos. En esta investigacion los aislamientos Fusarium sp. (Fu) y F. oxysporum (FuO) mostraron una capacidad antagonica de 38,5% y 52,5% contra juveniles y huevos de M. javanica respectivamente (Figura 3 A y B). Datos similares fueron reportados por El-Fattah et al. (2007) para aislamientos no patogenicos de F. oxysporum usados en el control de M. incognita en raices de tomate. La presencia de juveniles inmoviles en las cajas Petri inoculadas con Fusarium sugiere la presencia de nematotoxinas en el medio, informacion que fue reportada previamente para este hongo por Dabatat y Sikora (2007) y El-Fattah et al. (2007).

[FIGURA 3 OMITIR]

Monacrosporium

Por ultimo, los aislamientos de Monacrosporium sp. (Mo1 y Mo2), mostraron un efecto parasitico bajo del 1% y 18% sobre juveniles y huevos debido quizas a que estos aislamientos presentaron una capacidad parasitica poco eficiente al comportarse mas de manera saprofita que depredadora. No obstante, se observo la presencia de nematodos atrapados en redes pegajosas (Figura 4 A, B, C y D). Por otra parte, el medio de cultivo que se utilizo quizas perjudico la efectividad del hongo en la reduccion del numero de estados infectivos ([J.sub.2]) ya que estudios realizados por Dijksteerhuis et al. (1994) determinaron que medios ricos en nutrientes como papa-dextrosa-agar (PDA) y harina de maiz-agar (HMA) favorecen un abundante crecimiento de micelio no asi agar-agua (AA) medio que se empleo en los ensayos de esta investigacion. Sin embargo, Nordbring (1998) senala que el desarrollo de micelio no esta relacionado con la actividad nematofaga; no obstante, Gonzalez et al. 2005, observaron en ensayos realizados in vitro una reduccion en el numero de larvas cuando el crecimiento micelial fue abundante con el uso de PDA y HMA. Se comprobo que M. ellipsosporium controlo eficientemente a M. incognita a nivel de invernadero y campo con reducciones en el numero de agallas del 42 al 49% (Mankau y Wu 1985). El control de M. javanica por accion de M. cionopagum en suelo fue aproximadamente del 100% en pruebas realizadas por Jaffee y Muldoon (1995b).

Esta investigacion genera el primer informe de la actividad predadora in vitro de los hongos Trichoderma sp., Paecilomyces sp., F. oxysporum y Monacrosporium sp., aislados de suelos arroceros de Costa Rica contra huevos y juveniles del nematodo agallador M. javanica. Los hongos evaluados mostraron diferencias en la actividad antagonica, lo cual podria estar relacionado directamente con los mecanismos de accion de cada aislamiento. Con base en los antagonistas aislados, se recomienda a futuro realizar muestreos en las regiones Brunca y Huetar norte no incluidas en esta

investigacion. De esta manera, se podria crear una micoteca de hongos nematofagos de todas las regiones arroceras con potencial para ser utilizados como biocontroladores de nematodos.

[FIGURA 4 OMITIR]

Recibido: 20/11/13 Aceptado: 05/05/14

AGRADECIMIENTOS

El primer autor, da las mas sentidas gracias al M.Sc. German Rivera del Laboratorio de Fitopatologia, UNA; al M.Sc. Fabio Chaverri de la Escuela de Ciencias Ambientales, UNA; al Ing. Fabio Blanco, profesor pensionado de la Escuela de Ciencias Agrarias por todos sus aportes y sugerencias en la parte estadistica del documento. Al "Programa interinstitucional de investigacion en biodiversidad y ecologia de organismos de suelo, con enfasis en sistemas de produccion limpia y control biologico" financiado mediante fondos FEES (Fondos de Educacion Estatal Superior), asi como a la Universidad Nacional por el apoyo logistico para llevar a cabo la investigacion.

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Walter Peraza Padilla (2)/*, Martha Orozco Aceves **, Alejandro Esquivel Hernandez *

(1) Resultados de la tesis de Maestria en Agricultura Alternativa con Mencion en Agricultura Ecologica.

(2) Autor para correspondencia. Correo electronico: walter. peraza. padilla@una. cr

* Laboratorio de Nematologia, Escuela de Ciencias Agrarias. Universidad Nacional. Heredia, Costa Rica.

** Laboratorio de Microorganismos de Suelo y Control Biologico. Universidad Nacional. Heredia, Costa Rica.
Cuadro 1. Principales caracteristicas ambientales de
las regiones arroceras muestreadas.

Region             Precipitacion   Altitud      Temp.
                    (mm/anual)     (msnm)    ([grados]C)

Huetar Atlantico       3525          50          27

Pacifico Central       3317           6          27
Chorotega              1200          20          28

Region               Humedad      Zona de      Canton
                   Relativa (%)    vida

Huetar Atlantico        84         Bh-T     Puerto Viejo,
                                              Sarapiqui
                                               Matina
                                              Talamanca
Pacifico Central        85         Bh-T        Parrita
Chorotega               70         Bh-S     Nicoya Canas

* Segun clasificacion de Holdridge (1982): Bh-T (Bosque
Humedo Tropical), Bh-S (Bosque Humedo Seco).

Cuadro 2. Generos, especies y origen de los aislamientos
utilizados en las pruebas de antagonismo in vitro contra
huevos y juveniles de M. javanica.

Genero o especie     Codigo   Procedencia

Trichoderma sp.      Tri1     Canas, Guanacaste
Trichoderma sp.      Tri2
Monacrosporium sp.   Mo1      Nicoya, Guanacaste
Paecilomyces sp.     Pae1
Trichoderma sp.      Tri3
Paecilomyces sp.     Pae2     Batan, Limon
Monacrosporium sp.   Mo2
Trichoderma sp.      Tri4
Trichoderma sp.      Tri5     La Delia, Sarapiqui. Heredia
Paecilomyces sp.     Pae3
Fusarium sp.         Fu
Trichoderma sp.      Tri6     Parrita, Puntarenas
Fusarium oxysporum   FuO
Trichoderma sp.      Tri7     Talamanca, Limon

Cuadro 3. Actividad parasitica y ovicida in vitro de los
hongos Trichoderma, Paecilomyces, F. oxysporum y
Monacrosporium contra el nematodo M. javanica.

CODIGO        HONGO        % Nema   % Nema      % Nema
                           Vivos    Muertos   Parasitados

Mo2       Monacrosporium    39 g     42 b        19 j
Mol       Monacrosporium    44 h     40 bc       17 j
Pael       Paecilomyces    35 fg     32 d       34 ghi
Pae2       Paecilomyces     18 c     39 bc       43 e
Pae3       Paecilomyces     29 e     37 c        34 gh
Fu           Fusarium       29 e     35 cd       36 fg
FuO        F. oxysporum    21 cd     39 bc       41 ef
Tri2       Trichoderma     39 gh     32 d        30 hi
Tri7       Trichoderma      24 d     22 e        54 d
Tri6       Trichoderma      53 i     18 f        29 i
Tri4       Trichoderma      13 b     16 f        71 b
Tri5       Trichoderma      22 d     13 g        66 c
Tri3       Trichoderma      9 a      12 g        79 a
Tril       Trichoderma     31 ef     56 a        13 k
Testigo                     90 j     10 g         0 0

CODIGO    % Huevos sin    % Huevos
           parasitar     parasitados

Mo2           99 i           1 i
Mol           99 i           1 I
Pael          52 h          48 h
Pae2          52 h          48 h
Pae3          41 f          59 f
Fu            46 g          54 g
FuO          49 gh          51 gh
Tri2          4 a           96 a
Tri7          16 c          84 c
Tri6          19 d          81 d
Tri4          11 b          89 b
Tri5          20 d          80 d
Tri3          26 e          74 e
Tril          5 a           95 a
Testigo      100 0           0 0

Porcentajes con diferente letra (a, b, c, d, e, f, g,
h, i, j) en la misma columna son significativamente
diferentes (p<0,0001) de acuerdo con la prueba de
Chi-cuadrado de Wald.
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Author:Peraza Padilla, Walter; Orozco Aceves, Martha; Esquivel Hernandez, Alejandro
Publication:Agronomia Costarricense
Date:Jul 1, 2014
Words:5956
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