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Evaluacion de la actividad antifungica de extractos etanolicos de dos morfotipos de Raphanus raphanistrum l. sobre tres hongos fitopatogenos.

Evaluation of the antifungal activity of two ethanolic extracts of Raphanus raphanistrum morphotypes on three phytopathogenic fungi

INTRODUCCION

Los extractos obtenidos a partir de plantas han ido ganando interes cientifico, dado que se ha reportado que presentan actividad antibacteriana y antifungica (Briceno et al., 2011). Estos reportes atribuyen esta actividad a los diferentes metabolites secundarios que estan presentes en los extractos vegetales (Vig et al., 2009). Los extractos obtenidos de plantas pertenecientes a la familia botanica Brassicaceae se caracterizan por presentar diversas actividades biologicas, dentro de las cuales se encuentran propiedades antimicrobiana, antiviral, antifungica e insecticida (Bjorkman et al., 2011; Mendoza-Garcia et al., 2014). Estas cualidades se deben, entre otros, a diferentes compuestos tales como glucosinolatos, isotiocinatos (Malik, 2009) y fitoalexinas (Pedras y Ahiahonu, 2005; Ahuja et al., 2012).

En el caso de la especie Raphanus raphanistrum L. perteneciente a la familia Brassicaceae, se han identificado glucosinolatos como son glucoiberina, glucorafanina, gluconapina, glucobrassicina, glucosinalbina, gluconasturtina, progoitrina, glucocrucina, glucorafenina y glucotropaeolina (Malik, 2009). Los tres ultimos conforman mas del 90% de estos compuestos en esta especie, lo cual en terminos de cantidad equivale a unos 5,70 pinol por planta en la etapa de cotiledon, mientras que en la etapa de floracion representa unos 1942,4 [micron]mol por planta. En el estado de silicua (frutos) este valor disminuye en un 35 %, lo cual equivale a 1262,56 [micron]mol por planta (Malik, et al., 2010). Estos valores resultan similares a los reportados por Brown et al. (2003) para Arabidopsis lhaliana, quienes reportan altas concentraciones de glucosinolatos en los organos reproductivos, encontrando en las inflorescencias 25-30 [micron]mol x [g.sup.-1], en las silicuas 15-25 [micron]mol x [g.sup.-1] y en las semillas 63 [micron]mol x [g.sup.-1].

En la familia Brassicaceae se reporta la produccion de otros metabolites secundarios, tales como las fitoalexinas, estos son compuestos antimicrobianos de bajo peso molecular, sintetizados por las plantas como respuesta al estres de diferente origen, incluido el ataque de patogenos (Agrios, 2005; Pedras y Ahiahonu, 2005; Ahuja et al., 2012). Sin embargo, aun no existe evidencia de produccion de fitoalexinas por R. raphanistrum a juzgar por la bibliografia revisada.

En Colombia, los reportes de ataques de B. cinerea, C. acutatum y F. oxysporum sobre diversos cultivos (Rodriguez et al., 2010) y sus efectos sobre la produccion agricola son importantes (Sanabria et al., 2010). Es sabido que el control de estos patogenos, basado en el uso de productos de sintesis artificial, puede tener consecuencias sobre la aparicion de resistencias y contaminacion, por esta razon, se inicio el estudio de extractos etanolicos obtenidos de los frutos y la parte aerea (tallos y hojas) de R. raphanistrum (Brassicaceae). Con la intencion final de evaluar su actividad antifungica potencial, basada en afectar el crecimiento micelial y la produccion de conidios de B. cinerea, C. acutatum y F. oxysporum.

MATERIALES Y METODOS

Material biologico. Muestras, consistentes de plantas completas fueron colectados en la Sabana Norte de Bogota (04[grados] 55' N; 74[grados] 05' W). Luego, en el laboratorio, el material fue seccionado en raiz, tallos, hojas y frutos, antes de deshidratarlo a 25 [grados]C durante 8 dias (Mendoza-Garcia et al., 2014). Una vez deshidratado el material, con excepcion de la parte subterranea, fue utilizado en los posteriores procedimientos. Ejemplares completos fueron depositados en el Herbario Nacional Colombiano ubicado en la Universidad Nacional sede Bogota D.C., bajo los numeros de coleccion 573006, 573007, 573008 y 573009. Los ejemplares fueron identificados como Raphanus raphanistrum, sin embargo difieren en el color de la flor (morada, blanca, crema y terracota). Esta caracteristica esta ligada al estado fenologico de la planta, en el caso de la flor morada esta se torna de color blanco despues de la fecundacion (Conabio, 2009) y para el caso de flor terracota en experimentos preliminares se observo comportamiento similar y la flor va adquiriendo un color amarillo muy leve denominado crema (resultados no mostrados). Incluso, es posible encontrar plantas en las cuales la perdida de color o bien no ocurre, o se verifica de manera muy lenta.

Los hongos, B. cinerea, C. acutatum y F. oxysporum, fueron obtenidos de la coleccion del Laboratorio de Fitopatologia de la Universidad Militar Nueva Granada. Estos aislamientos fueron reactivados en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 25 [grados]C. Obtencion de extractos etanolicos. Una vez seco el material para preparar los extractos se separo por color de flor y dos organos: vastago (incluyendo hojas y tallo) y frutos, asi fueron obtenidas ocho fuentes para extraer, a las cuales se les asigno un codigo: vastago de flor terracota: VT; fruto de flor terracota: FT; vastago de flor crema: VC; fruto de flor crema: FC; vastago de flor morada: VM; fruto de flor morada: FM; vastago de flor blanca: VB; fruto de flor blanca: FB. Este material fue triturado, utilizando un procesador de alimentos. Se tomaron de 150 a 300 g de material molido, y se maceraron en etanol 96 % durante 72 horas, agitando vigorosamente esta mezcla dos veces al dia (Ayambo, 2006). Pasado este tiempo, la mezcla fue filtrada y sometida a destilacion a presion reducida a 45 [grados]C. El residuo obtenido se dejo secar por 24 horas a 35 [grados]C y se almaceno a temperatura ambiente (21 [+ o -] 2 [grados]C) hasta su utilizacion (Colegate y Molyneaux, 2008).

Efecto sobre el crecimiento micelial y la produccion de conidios in vitro. Los aislamientos de los hongos B. cinerea, C. acutatum y F. oxysporum fueron cultivados en PDA, a un medio de concentracion recomendada, complementado con 0,0; 0,1; 1,0 y 10,0 [micron]g-m[L.sup.-1] de los extractos obtenidos. Los medios complementados, una vez servidos, se dejaron almacenados por 24 horas antes de ser inoculados para permitir una completa homogenizacion. La inoculacion se llevo a cabo colocando en el centro de la caja de Petri (60 mm x 15 mm) un disco de 3 mm de diametro y 3 mm de altura, obtenido de zonas de crecimiento activo de cultivos de los hongos (Soliman y Badeaa, 2002; Castillo et al., 2010). Estas cajas se incubaron a 21 [+ o -] 2 [grados]C, hasta que el hongo de algun tratamiento alcanzaba el borde de la caja, para B. cinerea y F. oxysporum, mientras que en el caso de C. acutatum se incubo por 8 dias, ya que este hongo necesita mas tiempo para colonizar hasta el borde la caja de Potril. Cumplida esta incubacion, el crecimiento micelial se determino tomando dos medidas del diametro de la colonia, la primera al azar y la segunda perpendicular a esta, el promedio de estas medidas se utilizo para el calculo del area ocupada por la colonia, la cual se contrasto contra el area del tratamiento control (0,0 [micron]g-m[L.sup.-1]) (Soliman y Badeaa, 2002), determinando el porcentaje de inhibicion segun la formula: Inhibicion = 100[(CT)/C], donde C denota el crecimiento radial del micelio en el control y T el crecimiento radial del hongo en el tratamiento a evaluar. En consecuencia, ya que se asume que el control tuvo un crecimiento micelial del 100 % (sin inhibicion), este valor no es presentado en las tablas de resultados.

El efecto sobre la produccion de conidios se determino mediante el conteo de estos, cosechados al final del experimento de inhibicion. Para colectar los conidios se procedio a desprenderlos con la ayuda de un rastrillo de vidrio, utilizando para ello tres alicuotas de 3 mL de agua, la suspension se diluyo hasta [10.sup.-2], y se procedio a contarlos utilizando una camara de Neubauer. Los resultados de los conteos se utilizaron para estimar el numero de conidios/[cm.sup.2] de la colonia fungica.

Determinacion del efecto fungicida o fungistatico. Para determinar si el efecto observado era un efecto fungistatico o fungicida, discos de 3 mm de diametro y 3 mm de altura fueron tomados de los bordes de las colonias crecidas en cada uno de los tratamientos anteriores e inoculados sobre PDA a concentracion completa. Estas cajas fueron incubadas a 21 [+ o -] 2 [grados]C durante 72 horas, luego de las cuales se evaluo si ocurrio o no crecimiento de hifas (Soliman y Badeaa, 2002; Veloz-Garcia et al., 2010). Aquellos casos en los que las hifas reactivaran su crecimiento se considero que el efecto del extracto era fungistatico, y aquellas en las que no ocurriera crecimiento se asumio que el efecto era fungicida.

Determinacion de la concentracion minima inhibitoria. Para establecer la concentracion minima inhibitoria se utilizo el metodo de dilucion en agar descrito arriba, pero en este caso se implementaron concentraciones intermedias a las evaluadas en las pruebas de inhibicion (0,0; 1,0; 2,5; 5,0 y 10,0 [micron]g x m[L.sup.-1]). Se utilizaron dos placas excavadas de vidrio (placas de tincion) de 12 pozos, esteriles. En cada pozo, se sirvieron 150 [micron]L de medio suplementado con los extractos, dejando homogenizar por 1 hora. Posteriormente, en cada pozo se sembro un disco de 3 mm de diametro y 3 mm de altura obtenido de zonas de crecimiento activo de cultivos de hongos. Las placas se incubaron a 21 [+ o -] 2 [grados]C y se evaluaron una vez que los hongos de algun tratamiento alcanzaran el borde del pozo.

Todos los tratamientos de estos experimentos fueron repetidos cuatro veces. Se establecieron tres replicas por tratamiento y cada una consistio de una caja de Petri.

Para el analisis estadistico se establecieron los intervalos de confianza para cada una de las diferencias con relacion al control, utilizando la version 3.0.1 del programa R (R Development Core Team, 2005).

RESULTADOS Y DISCUSION

Efecto de diferentes extractos etanolicos sobre el crecimiento micelial de B. cinerea, C. acutatum y F. oxysporum. En el Cuadro 1 se puede notar el efecto sobre el crecimiento micelial de los 8 extractos evaluados en este trabajo. En caso de B. cinerea, cinco de los extractos ejercieron un efecto inhibitorio del crecimiento micelial cuando se utilizaron a la dosis mas alta (10 [micron]g x m[L.sup.-1]) siendo el extracto que ejercio la mayor inhibicion el extracto de plantas de flor morada (FM). Los extractos provenientes de plantas en etapa fenologica de flor terracota y flor crema no presentaron efecto inhibitorio a ninguna de las concentraciones utilizadas cuando se trato de los extractos de vastago, VT y VC, mientras que los provenientes de fruto, FT y FC, si presentaron efecto inhibitorio pero solo a la concentracion mas alta evaluada. Los extractos provenientes de plantas de flor morada y flor blanca, ejercieron efecto inhibitorio que se mantuvo a medida que se aumento la concentracion evaluada, con la excepcion del extracto proveniente de vastago de plantas de flor blanca (VB). En este caso, su efecto a dosis intermedia y alta no muestran diferencia, estadisticamente significativa, con el obtenido en ausencia de extracto. El extracto obtenido de frutos de plantas de flor blanca (FB) resulto el unico que ejercio actividad inhibitoria a todas las concentraciones evaluadas.

El efecto inhibitorio bajo y, en algunos casos, ausente encuentra explicacion en la posible resistencia a compuestos antifungicos que podria mostrar B. cinerea. Esta resistencia ha sido explicada por la presencia de sistemas de transporte transmembranal, como los llamados transportadores ABC (ATP-binding cassette transporters) y las MFS (major facilitator supcrfamily). Estos sistemas pueden excretar desde el citoplasma un amplio rango de sustratos, entre ellos metabolites toxicos y compuestos antifungicos quimicamente heterogeneos (Elad et al., 2007). Y en el caso de comprobarse la produccion de fitoalcxinas por la planta, podria estar ocurriendo un proceso de detoxificacion de las mismas, el cual consiste en la transformacion de su estructura quimica para convertirlas de compuestos antifungicos a compuestos inocuos o menos agresivos para el patogeno, lo cual puede causar que la inhibicion generada por el extracto no sea tan eficiente (Pedras y Ahiahonu, 2005). Ademas, Islam (2000) puso en evidencia que algunas fitoalexinas, pertenecientes a la familia Brassicaceae, tienen poco efecto sobre el hongo.

La respuesta de C. acutatum, a la mayoria de los extractos se muestra dependiente de la dosis. Es decir, ocurrio la estimulacion, o la inhibicion, del crecimiento micelial segun la dosis utilizada en el tratamiento. La primera respuesta se observa en los tratamientos con dosis baja e intermedia de los extractos (0,1 y 1,0 [micron]g x m[L.sup.-1]), con la excepcion del extracto VM (Cuadro 1). Al utilizar dosis mayores (10,0 [micron]g x m[L.sup.-1]) el efecto cambia, resultando en la inhibicion del crecimiento por los extractos VT, FT, VC, FC, y VB, mientras que para los demas extractos la respuesta no es significativamente diferente del control. Estos resultados sugieren la ocurrencia de hormesis, la cual se ha descrito como un efecto paradojico de estimulacion de respuesta por bajas concentraciones de un factor y, la inhibicion de esa respuesta a altas concentraciones del factor (Calabrese y Baldwin, 2003). Este fenomeno ha sido reportado como una respuesta, presentada por algunos hongos, a las condiciones de estres (Lopez-Diazguerrero et al., 2013), tambien se ha observado al evaluar el efecto de inhibidores de crecimiento sobre diferentes organismos (Oliva et al., 2003), y nuestros resultados parecen apoyar la hipotesis de que esto ocurre en este sistema.

El efecto de los extractos sobre el crecimiento micelial de F. oxysporum sugiere dependencia del origen del extracto. Los extractos VT, FT, VC y FC, no presentaron efecto detectable a concentraciones baja e intermedia, pero si a la mas alta concentracion utilizada (Cuadro 1). La respuesta a los demas extractos evaluados se caracterizo por no ser significativamente diferente del control cuando se evaluo el efecto de dosis intermedia, mientras que a la dosis mas alta (10,0 [micron]g x m[L.sup.-1]) inhibio el crecimiento. Este grupo de extractos, evaluado a la mas baja concentracion, presento un comportamiento de inhibicion del crecimiento, salvo VM y FM cuyos efectos fueron similares al control (Cuadro 1).

Los resultados muestran que los extractos provenientes de plantas de flor terracota y crema (VT, FT, VC y FC) presentan efectos similares frente a cada hongo particular (Cuadro 1), lo cual pudiera en alguna forma estar asociado a la presencia de diferentes fitohormonas en la etapa fenologica correspondiente a cada color de flor. En todos los extractos, la mayor inhibicion se presento a la mayor concentracion (10 [micron]g x m[L.sup.-1]). Por otra parte, se esperaba que los extractos obtenidos de frutos presentaran mayor efecto inhibitorio debido a la cantidad de metabolitos secundarios que acumulan como un mecanismo de proteccion de los propagulos (Malik, 2009), los resultados parecen corroborar esta idea.

Efecto in vitro de diferentes extractos sobre la conidiacion de B. cinerea, C. acutatum y F. oxysporum. Como se desprende del Cuadro 2, la mayoria de los tratamientos aplicados a B. cinerea no tuvieron una diferencia estadisticamente significativa con el control sin extracto. Un unico extracto presento un efecto inhibitorio constante a lo largo de todas las concentraciones evaluadas, y fue el VC. Los demas tratamientos que produjeron un efecto inhibitorio se pueden separar en dos grupos, el primero esta formado por FT y FC, los cuales a bajas concentraciones ejercieron un efecto inhibitorio. El segundo grupo es el FB, el cual a dosis intermedia y alta, 1,0 y 10,0 [micron]g x m[L.sup.-1] respectivamente, mostro un efecto inhibitorio. Una explicacion para la inhibicion observada es provista por el trabajo de Mari et al. (1993), quienes mostraron que la presencia de isotiocianatos resulta tener actividad biocida contra B. cinerea, aunque la intensidad y especificidad son variables. Adicionalmente, la disminucion en la esporulacion de este hongo es congruente con lo reportado por Drobnica et al. (1967), quienes sostienen que dicha actividad se asocia a los isotiocianatos, incluso cuando no hay inhibicion del crecimiento micelial. Por ultimo, el efecto de los extractos de frutos era esperable al considerar que deben proteger los propagulos contra predadores (Malik, 2009) y los rangos de concentracion en los cuales son activos en este caso apunta a reforzar esa idea. Llama la atencion la falta de actividad mostrada por el extracto FM, el cual resulto muy activo en el control del crecimiento micelial de B. cinerea, lo cual apunta a la necesidad de explorar en detalle la composicion del extracto a futuro.

El efecto de los extractos sobre la produccion de conidios de C. acutatum (Cuadro 2) en una clara estimulacion de la produccion de estos, con tres excepciones: los casos de FB a concentracion baja c intermedia, y VB a baja concentracion. Asi a medida que aumento la concentracion de los extractos, aumento la produccion de conidios, lo cual se debe a que C. acutatum responde al estres generado por los extractos aumentando la produccion de conidios corroborando lo establecido por Osorio-Concepcion et al. (2013). Adicionalmente, al contrastar los resultados obtenidos para crecimiento y produccion de conidios se puede notar que los tratamientos que afectan mas severamente el crecimiento son los que inducen una mayor conidiacion, lo cual puede considerarse como una reafirmacion de lo propuesto por Osorio-Concepcion et al. (2013).

Para el caso de la produccion de conidios de F. oxysporum (Cuadro 2), los resultados son parecidos a los obtenidos en el caso anterior. De los tratamientos que produjeron resultados que difieren de manera significativa del control, solo uno de ellos produjo reduccion de la conidiacion el extracto VB, todos los demas indujeron un aumento de la cantidad de conidios producidos por unidad de area. El extracto VB produjo el mayor efecto inhibitorio a concentracion intermedian (1 [micron]g x m[L.sup.-1]).

Estudios previos han mostrado que la respuesta de los hongos a los estimulos externos, por ejemplo extractos vegetales y concentraciones empleadas, es variable (Espinosa-Garcia y Langenheim, 2003). Es por esto que algunos extractos inhiben el crecimiento micelial de unos hongos y otros actuan mejor inhibiendo la produccion de conidios, hecho que podria explicar el porque los resultados obtenidos en este trabajo varian entre los tres hongos usados.

Actividad fungicida o fungistatica. Se evidencio que los extractos presentaron actividad fungistatica. Esto se demostro al reinocular los hongos sometidos a cada tratamiento en un medio sin complementar, y se observo crecimiento micelial despues de 3 a 5 dias, indicando fungistasis.

Concentracion minima inhibitoria. La concentracion minima inhibitoria de los extractos no pudo ser determinada, debido a que el micelio de los hongos mostro crecimiento, aun en la concentracion mas alta (10,0 [micron]g x m[L.sup.-1]) del extracto etanolico.

CONCLUSIONES

No existe una respuesta general de los diferentes hongos ante los diversos extractos. La utilizacion de las mayores concentraciones de estos indujo en la mayoria de los casos una respuesta de inhibicion del crecimiento, la cual resulto ser de tipo fungistatico. Sin embargo, debe destacarse que C. acutatum presento ocurrencia de hormesis al menos para crecimiento micelial.

La conidiacion fue particularmente estimulada por los extractos, lo cual apunta a una respuesta ante el estres, que aun cuando ha sido reportada para uno de los hongos, B. cinerea, resulto una respuesta comun en nuestros experimentos.

No es posible generalizar sobre las actividades de un extracto particular, sin embargo aunque no pudo ser calculada una CMI es posible afirmar que si se registraron efectos los cuales ameritan posterior estudio para posibles aplicaciones practicas.

AGRADECIMIENTO

A la Dra. Silvia Restrepo por su lectura critica y sus aportes en la preparacion final de este articulo. A la Vicerrectoria de Investigaciones de la Universidad Militar Nueva Granada, Proyecto CIAS 940.

LITERATURA CITADA

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Gina Sanchez-Leon (1), Andrea Vargas-Rincon (1) y Pedro Jimenez (1)

(1) Grupo Integrado de Investigaciones en Quimica y Biologia, Facultad de Ciencias Basicas y Aplicadas, Universidad Militar Nueva Granada, Campus Nueva Granada. Cajica, Colombia, e-mail: pedro.jimenez@unimilitar.edu.co

Recibido: Junio 5, 2014

Aceptado: Enero 5, 2015
Cuadro 1. Intervalos de confianza y significancia estadistica para
las medias del efecto inhibitorio de diferentes extractos sobre
crecimiento micelial de B. cinerea (Be), C. acutatum (Ca) y F.
oxysporum (Fox)

Hongo   Extracto        Dosis ([micron]g x m[L.sup.-1])

                          0,10                  1,00

Bc         VT             0,00                  0,00
Bc         FT             0,00                  0,00
Bc         VC             0,00                  0,00
Bc         FC             0,00                  0,00
Bc         VM        (-2,67; 19,06)        (-0,28; 16,70)
Bc         FM        (-0,25; 18,97)       (14,87; 27,74) *
Bc         VB        (1,07; 17,76) *       (-0,17; 14,56)
Bc         FB        (3,42; 24,54) *      (1,12; 15,37) *
Ca         VT      (-17,32; -9,27) **    (-17,9; -4,06) **
Ca         FT      (-26,25;-13,96) **    (-25,79;-16,32) **
Ca         VC      (-31,91;-16,58) **     (-28,21;-13,24)
Ca         FC      (-27,88; -14,94) **   (-27,19;-13,37) **
Ca         VM        (-40,71; 3,10)      (-53,02; -8,88) **
Ca         FM      (-55,11;-14,87) **    (-67,44;-18,87) **
Ca         VB       (-32,81;-5,97) **    (-47,24;-15,96) **
Ca         FB       (-36,31;-3,70) **    (-54,30;-1,63) **
Fox        VT             0,00                  0,00
Fox        FT             0,00                  0,00
Fox        VC             0,00                  0,00
Fox        FC             0,00                  0,00
Fox        VM         (-3,18; 9,97)        (-0,79; 12,88)
Fox        FM             0,00             (-1,30; 4,02)
Fox        VB       (3,20;24,89) *        (-0,28; 23,59)
Fox        FB       (10.70: 44.57) *       (-0.30: 25.65)

Hongo   Extracto   Dosis ([micron]g x m[L.sup.-1])

                         10,00

Bc         VT            0,00
Bc         FT       (3,34; 10,72) *
Bc         VC            0,00
Bc         FC      (10,05; 27,06) *
Bc         VM       (6,88; 33,00) *
Bc         FM      (31,25; 48,33) *
Bc         VB        (-0,3; 15,49)
Bc         FB       (0,72; 28,20) *
Ca         VT       (6,79; 16,61) *
Ca         FT      (20.64; 30,96) *
Ca         VC       (8,70; 26,53) *
Ca         FC      (44,79; 59,39) *
Ca         VM       (-8,21; 22,78)
Ca         FM      (-4,26; -5,97) **
Ca         VB       (9,41; 21,69) *
Ca         FB       (-31,93; 7,96)
Fox        VT      (32,51; 58,20) *
Fox        FT      (28,16; 57,47) *
Fox        VC      (22,70; 46,43) *
Fox        FC      (50,42; 67,49) *
Fox        VM      (44,49; 51,52) *
Fox        FM      (56,56; 62,12) *
Fox        VB      (37,32; 47,85) *
Fox        FB      (35.49: 46.88) *

Los asteriscos indican diferencias significativas con relacion al
control (P [menor que o igual a] 0,05): * Efecto inhibitorio y
** Efecto estimulatorio. Los valores 0,00 y los no marcados con
asterisco indican ausencia de diferencias significativas (P>0,05).
V = vastago; F = fruto; T = flor terracota; C = flor crema;
M = flor morada; B = flor blanca

Cuadro 2. Intervalos de confianza y significancia estadistica para
las medias del efecto inhibitorio sobre la conidiacion de B. cinerea
(Bc), C. acutatum (Ca) y F. oxysporum (Fox)

Hongo   Extracto           Dosis ([micron]g x m [L.sup.-1])

                             0,10                       1,00

Bc         VT        (-259.958; 772.387)         (-812.656; 673.815)
Bc         FT        (294.182; 800.013) *        (-26.832; 800.639)
Bc         VC        (261.490; 793.414) *       (447.527; 964.032) *
Bc         FC        (605.854; 887.503) *        (-408.280; 834.473)
Bc         VM      (-13.963.603; 1.699.687)     (-2.960.953; 617.121)
Bc         FM      (-2.418.064; 1.154.387)     (-2.418.064; 1.154.387)
Bc         VB       (-482.648; 1.005.375)        (-864.815; 787.614)
Bc         FB        (-855.162; 753.681)       (555.283; 1.058.353) *
Ca         VT        (-851.764; 445.792)      (-6.999.368; -298.402) **
Ca         FT        (-812.333; 555.799)       (-4.505.588; 24.355) *
Ca         VC      (-1.498.128;-134.254) **   (-3.916.887;-833.948) **
Ca         FC       (-5.972.370; 255.870)       (-9.170.100; 892.386)
Ca         VM       (-1.122.140; 889.875)     (-3.151.636; -392.417) **
Ca         FM        (-564.032; 301.970)        (-1.802.070; 11.594)
Ca         VB        (139.179; 787.074) *        (-533.889; 499.507)
Ca         FB        (68.484; 925.623) *        (143.778; 941.230) *
Fox        VT        (-177.098; 320.833)         (-883.089; 187.422)
Fox        FT         (-93.736; 498.736)        (-3.375.592; 645.592)
Fox        VC        (-238.310; 404.738)      (-1.857.109; -849.320) **
Fox        FC         (-787.816; 50.877)      (-1.732.232;-1020.320) **
Fox        VM       (-1.598.665; 678.495)     (-2.804.886; -784.799) **
Fox        FM        (-810.152; 415.719)      (-3.511.174; -473.481) **
Fox        VB        (-327.151; 616.104)         (460.802; 952.534)*
Fox        FB       (-1.509.892; 313.623)       (-1.328.417; 485.068)

Hongo   Extracto   Dosis ([micron]g x m [L.sup.-1])

                                 10,00

Bc         VT             (-120.999; 961.765)
Bc         FT             (-21.094; 589.823)
Bc         VC            (787.899; 988.048) *
Bc         FC             (-699.650; 546.999)
Bc         VM          (-10.552.468; 2.110.200)
Bc         FM            (-1.665.511; 338.259)
Bc         VB             (-131.818; 950.000)
Bc         FB           (447.233; 1.030.040) *
Ca         VT        (-16.855.876; -4.839.244) **
Ca         FT          (-29.1459; -6.453.880) **
Ca         VC        (-16.886.000; -4.839.244) **
Ca         FC        (-35.676.048; -7.504.382) **
Ca         VM         (-9.743.013; -2.586.367) **
Ca         FM         (-18.099.071;-3.591.578) **
Ca         VB           (-92.125;-2.749.334) **
Ca         FB           (-65.927; -830.041) **
Fox        VT          (-1.672.513;-133.328) **
Fox        FT          (-2.527.509; -533.419) **
Fox        VC             (-601.879; 256.347)
Fox        FC          (-2.101.846; -817.374) **
Fox        VM             (-908.214; 701.958)
Fox        FM          (-1.524.425;-263.701) **
Fox        VB            (117.496; 975.398) *
Fox        FB             (-700.910; 844.197)

Los asteriscos indican diferencias significativas con relacion al
control (P [menor que o igual a] 0,05), * Efecto inhibitorio y
** Efecto estimulatorio. V = vastago; F = fruto; T = flor terracota;
C = flor crema; M = flor morada; B = flor blanca
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Author:Sanchez-Leon, Gina; Vargas-Rincon, Andrea; Jimenez, Pedro
Publication:BIOAGRO
Date:Apr 1, 2015
Words:5314
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