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Estudio seroepidemiologico del Herpesvirus Bovino 1 (BoHV-1) en ganado destinado al sacrificio en la region del Magdalena Medio colombiano.

Seroepidemiologic study of the Bovine Herpesvirus 1 (BoHV-1) in the cattle destined to slaughtering in the Colombian Magdalena Medio region

Introduccion

El Herpesvirus Bovino 1 (BoHV-1) es un patogeno del ganado bovino que causa importantes perdidas economicas en todo el mundo (Campos et al., 2009); debidas a la disminucion en produccion ya sea en ganado con fines productivos de carne o leche y a las bajas tasas de fertilidad por los altos indices de abortos (Zapata et al., 2002). El BoHV-1 es un virus ADN, perteneciente a la familia Herpesviridae, subfamilia Alphaherpesviridae, genero Varicellovirus (Roizman et al., 1992). El virus presenta una gran variabilidad de cepas, las cuales son serologicamente indistinguibles. Sin embargo, con base en el analisis del genoma con endonucleasas de restriccion y sus respectivos patrones de migracion en gel, se han clasificado en tres tipos y en cinco subtipos: BoHV-1.1, BoHV-1.2a, BoHV-1.2b, BoHV-1.3a y BoHV-1.3b (Wyler et al., 1995). Posteriormente, los subtipos BoHV-1.3a y BoHV-1.3b fueron reclasificados como BoHV-5, el cual presenta un alto potencial neuropatogenico (Buchen-Osmond, 1998). El BoHV-1 presenta un rango amplio de posibles hospederos y alta capacidad para establecer infeccion latente. El ciclo reproductivo es relativamente corto, y crecen facilmente en cultivos celulares (Roizman & Pellett, 2001; Jones, 2003). El virus afecta naturalmente al bovino, especie en la que provoca la Rinotraqueitis Infecciosa Bovina (IBR), enfermedad respiratoria caracterizada por rinitis, traqueitis y fiebre, ademas de la vulvovaginitis/ balanopostitis pustular infecciosa (VPI/BPI) y aborto (Kahrs, 2001). Por lo que algunos autores sugieren que el BoHV-1 es el mas grande patogeno del ganado (Weiblen et al., 1992). Otros trastornos que produce este virus incluyen conjuntivitis, queratoconjuntivitis, enteritis (Takiuchi et al., 2005) y enfermedad neurologica (Silva et al., 2007), aunque la afinidad por este sistema se relaciona mas con el BoHV-5, que produce meningoencefalitis fatal (Meyer et al., 2001; Rissi et al., 2007).

En Colombia el BoHV-1 es uno de los agentes mas ampliamente distribuidos y se sospecha que es uno de los mayores generadores de perdidas economicas en la produccion ganadera (Ruiz et al., 2010). El virus fue reportado por primera vez en la decada del setenta (CIAT, 1972), desde entonces se han realizado diferentes estudios seroepidemiologicos (Zapata et al., 2002; Betancur et al., 2006) y aislamiento de algunas cepas nativas. Las primeras a comienzos de los anos 70 (CIAT, 1972, 1975); otra a mitad de los anos 90 a partir de muestras tomadas en los Llanos Orientales (Molano et al., 1996); y mas recientemente una en la Sabana de Bogota en 2001 (Piedrahita et al., 2005) y otra en Cordoba (Vera & Betancur, 2008). El alto numero de relatos de campo de enfermedad reproductiva en bovinos de la region del Magdalena Medio, motivo la realizacion de esta investigacion que tuvo como objetivo obtener informacion serologica de la presencia de este virus en la region, buscado aportar datos que en un futuro faciliten el establecimiento de un mapa epidemiologico regional y la busqueda de medidas de prevencion y control de la enfermedad.

Materiales y Metodos

Tipo de estudio y animales

Se realizo un estudio descriptivo con fuentes de informacion primarias y secundarias. El estudio se realizo a partir de un muestreo aleatorio en bovinos procedentes de diferentes departamentos de la region del Magdalena Medio, que llegaron durante dos dias a la Central de Sacrificio FRIOGAN ubicada en el municipio de La Dorada, departamento de Caldas. Se tomaron un total de 150 muestras de suero de igual numero de animales, utilizando puncion de la vena coccigea media de forma aseptica.

De cada animal se registro informacion sobre la edad, sexo, raza, procedencia, tipo de explotacion y plan sanitario al que fue sometido. Luego de colectar las muestras de sangre en tubos de ensayo, fueron centrifugadas a 500 G durante 10 minutos y los sueros almacenados en Eppendorf de 1,5 ml, posteriormente fueron transportados en refrigeracion hasta el Laboratorio de Patologia de la Universidad de Caldas.

Las muestras fueron congeladas a menos 20[grados]C, y posteriormente se llevaron al Laboratorio de Virologia de la UFSM, Rio Grande do Sul, Brasil, para realizar la prueba de seroneutralizacion en placa en busca de anticuerpos contra el Herpesvirus Bovino 1.

Prueba de seroneutralizacion

Despues de la inactivacion de los sueros a 56[grados]C durante 30 minutos, alicuotas de 50 [micron]L del suero fueron diluidas en medio esencial minimo (MEM) desde la primera dilucion (1:2) hasta la ultima (1:256), y fueron incubadas por dos horas a 37[grados]C con una concentracion constante de virus (100 TCDI50 [dosis infectivas en cultivo celular]) de la cepa Cooper del BoHV-1 en placas de polietileno de 96 pozos. Terminado el tiempo de incubacion, una suspension de 4 x [10.sup.6] celulas MDBK (Madin Darby Bovine Kidney) en MEM fue adicionada en cada una de las cavidades de la placa. Posteriormente, el complejo fue incubado en una camara de CO2 al 5% y a 37[grados]C durante tres dias. Al concluir este tiempo, se realizo la respectiva lectura, en la cual se considero como positivos a los sueros que inhibieran el 100% del efecto citopatico (ECP) causado por el virus (un suero negativo no tiene anticuerpos contra el virus y, por lo tanto, las celulas MDBK son destruidas en el momento de adicionar la cepa viral).

Analisis estadistico

El analisis se realizo mediante estadistica de tipo descriptiva utilizando el programa Microsoft[R] Excel[R] 2007 para Windows[R].

Resultados

Teniendo en cuenta como punto de corte la dilucion 1:2, 80 animales (53,3%) resultaron positivos para Herpesvirus Bovino 1, 68 (45,3%) fueron negativos y dos muestras presentaron toxicidad. En la Tabla 1 se observan los casos positivos en ocho titulos diferentes (sueros diluidos desde 1/2 hasta 1/256), ademas de los casos negativos (un suero negativo en la dilucion mas pequena, seguira comportandose negativo en las siguientes diluciones) y los resultados "toxicos", que son el producto del deterioro del cultivo celular por la muestra de suero, lo cual ocurre debido a la presencia de eritrocitos o alguna otra sustancia que inhibe el crecimiento de la celula.

Teniendo en cuenta que en la region del Magdalena Medio existen varios departamentos de Colombia, los bovinos reactores positivos que procedian de Cundinamarca correspondieron al 47,5% del total, seguido por animales que venian del departamento de Santander (26%), mientras que con porcentajes inferiores al 10% estuvieron los restantes semovientes que procedian de Antioquia, Caldas y Boyaca. Respecto a la edad y por la caracteristica de los animales que entran a las centrales de sacrificio, el 85% de los animales seropositivos se encontraba entre 24 y 48 meses, mientras que el 15% restante correspondio a individuos mas viejos. Discriminando por sexo, los machos representaron el 60% y las hembras el restante 40% del total de animales. El 90% de los animales procedia de explotaciones dedicadas al engorde de los mismos y solo un 10% procedia de ganaderias de doble proposito, por lo tanto, la raza Cebu represento el 85% del total de animales, mientras que el 15% restante fueron mestizos. El 100% de los animales recibio vacuna anti-aftosa y no se pudo establecer si los animales recibieron vacuna contra IBR.

Discusion y Conclusiones

Si bien el 53% (80/150) de los sueros analizados presentaron anticuerpos contra el BoHV-1 durante la prueba de seroneutralizacion en placa, no se puede afirmar que el 100% de estos anticuerpos son el producto de una respuesta humoral contra una cepa viral de campo, debido a que no se pudo establecer en el momento del muestreo si los animales recibieron vacuna contra la IBR; no obstante, puede resaltarse que los animales con titulos entre 1/32 y 1/64 que correspondieron a un 16% (24/150) (ver Tabla 1), sugieren la presencia de infeccion subclinica por el BoHV-1 y concuerda con lo descrito por autores como Rivera et al. (2004), quienes relatan que las infecciones subclinicas por el virus son una condicion generalmente presente en bovinos adultos; de igual forma, los titulos entre 1/128 y 1/256 que representaron un 2% (3/150) de los sueros, indican una presencia activa del virus en los animales o su reactivacion como consecuencia de factores estresantes tales como transporte y/o las practicas de manejo. Por ello, en este caso se puede considerar que estos titulos fueron el producto del desafio con cepas virales de campo e implico que los bovinos con esta condicion fueran responsables por el mantenimiento y/o la perpetuacion del virus en los hatos.

Los titulos menores a 1/32 correspondieron al 35% (53/150) de los sueros evaluados, el analisis de estas titulaciones es diferente, debido a que su presencia pudo ser el producto de anticuerpos contra vacunas anti-BoHV-1 o contra virus de campo; sin embargo, en este estudio, la posibilidad de interferencia de anticuerpos posvacunales sobre los resultados se considera baja debido a que el 90% de los sueros analizados procedian de animales dedicados al engorde.

Por otro lado, al analizar las variables registradas en cada uno de los animales, es necesario aclarar que el sistema oficial colombiano de inspeccion, vigilancia y control de la carne, en el Decreto 1500 de 2007 regula las caracteristicas de los bovinos que ingresan a la Central de Sacrificio e incide de forma directa sobre estas. Por lo tanto, esta razon determino que un alto porcentaje de animales estuviera en edades que oscilaron entre los 24 y 48 meses; sin embargo, es importante anotar respecto de la presentacion de anticuerpos contra el BoHV-1, que esta edad es optima para evitar la deteccion de anticuerpos maternales, lo que garantiza que los anticuerpos en los animales seropositivos son el producto del virus de campo o en su defecto anticuerpos pos-vacunales.

Asimismo, se debe resaltar que los bovinos en esta fase etaria, se encuentran en una etapa de produccion muy exigente que supone mayores niveles de estres en los animales, lo que es determinante en los casos de infeccion natural para la reactivacion de la latencia viral (Betancur et al., 2006). Igualmente, es en este periodo donde en algunas explotaciones especialmente las dedicadas al doble proposito o a la cria, se llevan a cabo los programas de prevencion de la enfermedad a traves de la vacunacion y, como efecto, se favorece la presencia de anticuerpos pos-vacunales, que dificulta la interpretacion de los resultados serologicos facilitando la confusion con reacciones generadas por virus de campo (Lemaire et al., 1995). Sin embargo, en este estudio, solo un 10% de los animales muestreados procedia de explotaciones de doble proposito y ninguno procedia de una explotacion dedicada a la cria, por ello se asume que la interferencia de anticuerpos pos-vacunales durante la prueba de seroneutralizacion es baja.

En cuanto al tipo de sistema productivo, el mayor numero de animales muestreados procedia de ganaderias dedicadas al engorde, lo que se relaciona directamente con la aptitud productiva de la region y no con una mayor susceptibilidad de este grupo de animales ante el virus. De la misma manera, este tipo de sistemas incide de forma directa sobre la proporcion de animales de una determinada raza y en algunos casos sobre el tipo de sexo; por ello, la mayoria de animales muestreados era de la raza Cebu o cruces de esta y el 60% fueron machos. En estas ganaderias dedicadas exclusivamente al engorde, se espera que ningun animal reciba vacuna contra IBR debido a que estos sistemas no tienen un fin reproductivo, por eso, se puede admitir que los titulos contra el BoHV-1 en este grupo de animales, son el resultado directo de la exposicion al agente o la reactivacion de la latencia viral, por lo tanto, en este estudio se considero que el 90% de los animales estuvo expuesto a cepas virales de campo en alguna etapa de su vida, y permite suponer que el virus se encuentra circulando en las regiones de las que procedian los bovinos.

La interpretacion de los titulos en aquellas ganaderias dedicadas al doble proposito (10%) (reproduccion y produccion de leche), es un poco diferente debido a las practicas de manejo que en general son mas intensivas que en el sistema de engorde, lo que posibilita una mayor facilidad de transmision del agente viral (Medici et al., 2000). Igualmente, porque en este tipo de sistemas el virus puede ser transmitido desde machos infectados a hembras o viceversa. En este sentido, en multiples estudios se ha reportado la importancia de los toros infectados como fuente de transmision y diseminacion de la infeccion por via venerea (Gongora et al., 1995; Betancur et al., 2006). De igual manera, las vacas tambien desempenan un importante papel epidemiologico, ya que pueden reactivar y excretar virus con capacidad infecciosa (Ruiz et al., 2010). Asi mismo, en este tipo de ganaderias, no se puede descartar el uso de vacunas (especialmente a virus vivo atenuado) como potencial fuente de infeccion. De acuerdo a Zapata et al. (2002), el virus vivo atenuado se puede replicar en el animal, establecer latencia y excretarse para infectar otros individuos susceptibles, lo que sugiere que esta pueda ser otra posible explicacion del origen de los anticuerpos en los animales procedentes de este sistema.

Respecto de la procedencia de los animales, se debe destacar que los socios comerciales que tiene la Central de Sacrificio desempenan un rol importante sobre el numero de animales procedentes de un departamento en particular, por lo que estos resultados no deben tomarse como indicativo epidemiologico que diferencie los departamentos del Magdalena Medio sobre la presencia de Herpesvirus Bovino, sin embargo, estos titulos permiten suponer una amplia distribucion del BoHV-1 en la region.

Desafortunadamente, en esta ocasion no se dispuso del historial sanitario de los animales, pero el hallazgo de altos titulos serologicos es indicativo de la presencia del virus en los hatos y pude estar asociado con trastornos del tracto reproductivo o respiratorio de los bovinos de estas regiones, con consecuencias economicas negativas para el sistema. De la misma manera, es importante revisar las medidas de prevencion y control de la enfermedad, pues la normatividad vigente para la movilizacion de bovinos en el pais, no contempla enfermedades infecciosas como la IBR, lo que facilita que esta infeccion pueda ser introducida desde zonas endemicas a zonas libres donde podria difundirse rapidamente a animales susceptibles con consecuencias nefastas.

En conclusion, basados en los resultados de la investigacion y en estudios previos realizados por el grupo de investigacion en la misma region (Piedrahita et al., 2010), es necesario que en la zona se desarrollen sistemas de evaluacion de riesgo y perdidas economicas inducidas por la presencia del virus, ademas de establecer los puntos criticos y los momentos adecuados para la vacunacion que permitan mantener el equilibrio agente, hospedador, medio y evitar las perdidas economicas. Ademas de recomendar la realizacion de nuevos estudios regionales tendientes al diagnostico directo del agente por aislamiento viral, se puede hacer uso de la prueba PCR (Reaccion de Cadena de la Polimerasa) o de la Inmunohistoquimica con el fin de caracterizar las cepas presentes en la region.

Agradecimientos

Al personal de la Central de Sacrificio FRIOGAN en el municipio de La Dorada (Caldas), y al personal del Sector de Virologia de la Universidad Federal de Santa Maria, Rio Grande do Sul en Brasil.

(Recibido: marzo 2, 2011; aprobado: abril 26, 2011)

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Luis Mauricio Montoya-Florez (1), Oscar Alejandro Chacon-Echeverry (1), Francisco Javier Pedraza-Ordonezw (1,2)

(1) Grupo de Investigacion en Patologia Veterinaria, Universidad de Caldas, Manizales, Colombia.

(2) Facultade de Ciencias Agrarias e Veterinarias-UNESP, Sao Paulo, Brasil. Departamento de Salud Animal, Universidad de Caldas, Manizales, Colombia.

maomontoya53@yahoo.es

* Financiado por la Vicerrectoria de Investigaciones y Postgrados de la Universidad de Caldas.
Tabla 1. Titulo de anticuerpos neutralizantes
contra Herpesvirus Bovino 1 en bovinos de la
region del Magdalena Medio.

Titulo      No. de      (%)
            muestras

               8        5,3
               5        3,3
1/8            20      13,3
1/16           20      13,3
16 1/32        13       8,6
1/64           11       7,3
1/ 128         2        1,3
1/256          1        0,6
Toxico         2        1,3
Negativo       68      45,3

Total         150      100,0
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Title Annotation:ARTICULO DE INVESTIGACION
Author:Montoya-Florez, Luis Mauricio; Chacon-Echeverry, Oscar Alejandro; Pedraza-Ordonez, Francisco Javier
Publication:Veterinaria y Zootecnia
Article Type:Report
Date:Jul 1, 2011
Words:3682
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