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Estudio lectinhistoquimico del utero de alpacas (vicugna pacos) bajo tratamiento superovulatorio.

Lectinhistochemistry Study Of The Uterus Of Alpacas (Vicugna Pacos) Under Superovulation Treatment

INTRODUCCION

La produccion de alpacas en el Peru es de gran importancia socioeconomica (Montes et al., 2008; Quispe et al., 2009). Una de sus principales limitantes es la baja tasa de prenez, la cual esta directamente relacionada con una alta tasa de mortalidad embrionaria (Novoa, 1991), que puede llegar al 50% dentro de los primeros 35 dias de gestacion (Fernandez-Baca et al., 1970).

Una de las causas de mortalidad embrionaria puede ser la inadecuada implantacion del blastocisto en el utero, ya que se sabe que durante el proceso de implantacion se requiere un estrecho contacto entre el trofoblasto del blastocisto y el glicocaliz del epitelio uterino (Tachi et al, 1970). Whyte y Allen (1985) comprobaron la abundancia de glicanos o polisacaridos, tanto en las superficies uterinas como en las del trofoblasto; ademas, se sabe que los glicoconjugados participan en varias funciones reproductivas, incluyendo el momento de aposicion y adhesion del embrion al utero (Psychoyos, 1986).

En el raton, cerdo, asno, caballo y camello se conoce que la presencia de glicoconjugados en la interfase materno-fetal es de gran importancia, ya que permitirian las interacciones entre los componentes placentarios fetales y maternos, jugando un rol importante en la implantacion y en el mantenimiento de la gestacion (Richa et al, 1985; Cross et al, 1994; Geisert et al, 1995; Jones et al, 2000; Koncurat et al, 2004). Asimismo, alteraciones en el patron de glicosilacion podrian afectar el proceso de implantacion (Garcia et al., 2007). Intentos fallidos para obtener hibridos entre dos especies se atribuyen a una inadecuada formacion de las interdigitaciones maternales; es decir, el epitelio uterino no modifica su arquitectura porque no hay una adecuada estimulacion por medio del embrion ante una falla en la comunicacion entre ambos tejidos (Jones et al., 2002).

Dentro de los cambios que ocurren en el endometrio uterino, es importante conocer el patron de glicosilacion que se da en el utero de la alpaca, ya que en otras especies se sabe que ciertos cambios son causantes de infertilidad y podrian estar relacionados a enfermedades reproductivas (Cipolla et al., 1998; Cobo et al, 2004; Sant'Ana et al., 2009). Por otro lado, no se disponen de estudios lectinhistoquimicos que permitan comparar el patron de glicosilacion de una hembra sometida a un tratamiento hormonal de superovulacion con una hembra que no lo haya sido, asi como el posible efecto en los cambios uterinos por las hormonas empleadas en el proceso de superovulacion.

El presente estudio tuvo por objetivo determinar, mediante el uso de la tecnica de lectinhistoquimica, las variaciones en el patron de glicosilacion del epitelio uterino en alpacas sometidas a un tratamiento de superovulacion con FSH, GnRH y hCG frente a alpacas no tratadas.

MATERIALES Y METODOS

El estudio se realizo en los laboratorios de Fisiologia Animal y de Reproduccion Animal de la Facultad de Medicina Veterinaria, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Peru. La coleccion de muestras se realizo entre los meses de julio a setiembre de 2011.

Animales

Se utilizaron 10 alpacas adultas, variedad Huacaya, con 6 a 8 anos de edad, las cuales habian tenido un promedio de cinco partos previos y se encontraban destinadas para el consumo. Los animales fueron evaluados clinicamente, ninguno se encontraba en lactacion y por ecografia rectal (Ecografo Aloka SS500, transductor Modo B de 7.5 MHz) se determino que estaban vacias. Asimismo, su historia clinica indicaba que no habian sido sometidos a tratamientos hormonales.

Tratamientos

Los animales fueron divididos en dos grupos de cinco animales cada uno.

Sin tratamiento superovulatorio (NSO): Las alpacas fueron sacrificadas en el camal de Nunoa, Puno. Se confirmo que los animales no estaban gestantes y no presentaban cuerpo luteo o foliculos ovaricos mayores de 4 mm, considerandose que se encontraban en fase de anestro. Se tomaron muestras en forma inmediata al sacrificio.

Con tratamiento superovulatorio (SO): Los animales fueron sometidos a un tratamiento de superovulacion para la obtencion de ovocitos (Huanca et al., 2009). Se determino la presencia de foliculos [menor que o igual a]7 mm mediante ecografia, momento en el cual se administro 1 ml de GnRH (Conceptal, Intervet, Holanda), equivalente a 0.042 mg de acetato de buserelina, con el fin de inducir la ovulacion (dia 0 en el tratamiento). El dia 2 se realizo ecografia para confirmar la ovulacion en base al criterio de la desaparicion del foliculo previamente observado, administrandose FSH (Folltropin V, Bioniche, Canada) en dosis diaria dividida cada 12 horas por 4 dias, con una dosis total de 200 mg por animal. En el dia 5 se aplico 1000 UI de gonadotropina corionica humana (hCG) (Lutropin V, Bioniche, Canada). El dia 6 se realizo una laparatomia exploratoria para la extraccion del tracto reproductivo.

Toma de Muestras y Procesamiento

Se tomaron muestras del tracto reproductivo entre aproximadamente 2 cm de la region media del cuerpo del utero y de la seccion media de cada cuerno uterino, y se colocaron en formol buferado al 10%. Las muestras obtenidas fueron reducidas a 0.5 cm de ancho por 0.5 cm de largo y fueron procesadas como muestras histologicas e incluidas en parafina.

Se prepararon cortes de 5 pm de espesor que fueron colocados en laminas portaobjetos embebidas en Poly-L-lysina (P 8920, Sigma-Aldrich), y sometidas a tecnicas histoquimicas y de lectinhistoquimica (Gretchen et al., 1979; Montuenga et al., 2009).

Estudio Histoquimico

Reaccion de Schiff-Acido Peryodico (PAS): Se utilizo para demostrar la presencia de polisacaridos simples y polisacaridos complejos neutros. Este metodo da resultado positivo ante la presencia de glucogeno, mucinas y sialomucinas.

Coloracion Azul Alcian con pH 2.5: El grado de reactividad de esta tecnica varia en funcion del pH del medio, lo cual permite distinguir mucopolisacaridos o polisacaridos acidos especificos. Esta coloracion se utilizo para determinar la presencia de mucinas sulfatadas acidas debiles.

Estudio Lectinhistoquimico

Se utilizaron 14 lectinas biotiniladas del Kit I y del Kit II de lectinas de Vector Laboratories (Burlingame, CA, EEUU) y se empleo el metodo de avidina-biotina. En la deteccion y amplificacion de las uniones producidas se utilizo el sistema estreptavidina peroxidasa, Horseradish peroxidase Streptavidine-RTU de Vector laboratorios (Burlingame, CA, EEUU) y para el revelado se utilizo el cromogeno 3'3 diaminobenzidina de Vector Laboratories (Burlingame, CA, EEUU). Como control positivo de cada lectina se utilizaron muestras de intestino de raton y de alpaca, muestras en las cuales se estandarizo la tecnica.

Lectura de Laminas

Las laminas trabajadas mediante histoquimica y lectinhistoquimica se leyeron en un microscopio trinocular de luz incorporada (modelo Primo Star) para examenes en campo claro en luz transmitida con un ocular WF 10x/20, objetivos de 4x, 10x y 40x, y con una camara digital Canon Powershot G9 de 12 megapixels montada sobre el microscopio y conectada a una computadora.

Las laminas de PAS (acido periodicoSchiff) y de azul alcian fueron descritas mediante su reaccion positiva o negativa. En las muestras procesadas mediante lectinhistoquimica se determino la positividad ante una lectina por la coloracion marron dorado causada por el cromogeno DAB. Asimismo, en cada porcion estudiada y en cada area se determino la intensidad de marcacion como: Ausencia de marcacion (-), Marcacion leve (+), Marcacion moderada (++), Marcacion fuerte (+++). En casos donde la intensidad de marcacion vario dentro de una misma estructura se asignaron los grados extremos (por ejemplo, -/+++, indicando que la intensidad de marcacion vario entre negativo a fuerte). Los resultados fueron colocados en tablas de resumen explicando lo encontrado para cada lectina en cada porcion y estructura.

RESULTADOS

El epitelio que recubre el lumen endometrial era de tipo cilindrico simple con nucleo circular basal con zonas de invaginacion que forman las nuevas glandulas endometriales, las cuales fueron mas numerosas en el grupo SO. Las glandulas que se ubican en las zonas mas superficiales se encuentran mas separadas entre si y presentan lumen glandular de mayor diametro. El epitelio glandular es de tipo cilindrico simple alto con nucleo circular que por lo general se presenta en posicion basal. A lo largo del estroma se encuentran vasos sanguineos mas abundantes en el grupo SO.

[FIGURA 1 OMITIR]

Estudio Histoquimico

PAS

En ambos grupos se observo que todas las estructuras del endometrio fueron PAS+, existiendo mayor intensidad en el glicocaliz del epitelio luminal endometrial y en las zonas mas profundas y cercanas al tejido conjuntivo del grupo SO. Tambien se observaron en este grupo celulas aisladas de algunas glandulas intermedias fuertemente positivas, principalmente en el cuerno izquierdo (Fig. 1).

Azul Alcion (AB)

La marcacion con esta coloracion fue similar a la observada con la tecnica PAS, marcando todas las estructuras del endometrio en ambos grupos con una intensidad entre debil a moderada, resaltando la marcacion en el glicocaliz del epitelio luminal y de algunas zonas del estroma, siendo mayor en intensidad en los tejidos del grupo SO (Fig. 1).

Estudio Lectinhistoquimico

Los resultados obtenidos para cada lectina se presentan en los Cuadros 2 a 4 y en la Fig. 2. Las observaciones mas notables fueron:

PNA

En el cuerpo uterino del grupo SO, el glicocaliz del epitelio luminal endometrial presento una marcacion mas intensa que el grupo NSO, mientras que en los cuernos uterinos la marcacion fue similar a la observada en el grupo NSO.

[FIGURA 2 OMITIR]

SBA

La marcacion a nivel de citoplasma es muy similar a la lectina PNA, siendo mayormente de tipo moderada. En las glandulas superficiales los granulos predominan en la zona apical del citoplasma, mientras que las intermedias y profundas comienzan a disminuir, al igual que en la zona glandular, disminuyendo la marcacion hacia las glandulas profundas.

RCA-I

El glicocaliz del epitelio luminal del cuerpo uterino tuvo una marcacion debil a moderada en NSO y moderada en SO; mientras que el glicocaliz a nivel de glandulas es de debil a moderado en ambos grupos. El citoplasma presenta una marcacion debil en todos los epitelios y con un patron difuso; reaccionando mayormente en la zona apical del citoplasma. En NSO hay celulas de las glandulas superficiales e intermedias sin marcacion. La marcacion es mayor en NSO que en SO en el glicocaliz del epitelio luminal y en el citoplasma del cuerno izquierdo; sin embargo, la marcacion a nivel de glandulas no varia entre ambos grupos. En el cuerno derecho la marcacion en citoplasma es mas evidenteF e intensa en el grupo NSO pero a nivel glandular es similar a la observada en el cuerno izquierdo.

Con A

La marcacion es mas intensa en el cuerpo uterino en NSO. El glicocaliz presenta marcacion fuerte en epitelio luminal y de moderado a debil en las glandulas, mientras que en SO la marcacion del glicocaliz del epitelio luminal es moderada y en glandulas es debil, desapareciendo conforme las glandulas se van haciendo mas profundas. En el citoplasma de las glandulas la marcacion es escasa y debil en NSO, mientras solo ocurre en algunas celulas en SO. El patron de union a esta lectina es similar para ambos grupos en el cuerno izquierdo, mientras que a nivel del epitelio luminal del cuerno derecho es mas intensa en SO.

UEA-I

No se detectaron sitios de union a esta lectina.

DBA

El patron de marcacion de esta lectina se repite en cuerpo y cuernos uterinos de ambos grupos, aunque en mayor numero en NSO. No se observaron sitios de union en glandulas profundas e intermedias, mientras que en el epitelio luminal y en glandulas superficiales pocas celulas reaccionan con esta lectina.

WGA

El estroma del cuerpo uterino reacciona debilmente con esta lectina, mientras que en los cuernos uterinos marca debilmente en NSO y entre debil a moderado en SO. El glicocaliz se une de manera debil a moderada en epitelio luminal y glandulas superficiales, tornandose negativa conforme las glandulas se profundizan. La marcacion en epitelio luminal es similar en ambos grupos. En el cuerno derecho, la marcacion es moderada en ambos grupos a nivel de epitelio luminal, mientras que es mayor en NSO a nivel de glandulas. En el cuerno izquierdo la marcacion es mas intensa a nivel del epitelio luminal en NSO, mientras que en NSO la union del glicocaliz del epitelio glandular a esta lectina es debil y el citoplasma presenta algunas zonas que marcan debilmente; asimismo, el glicocaliz de las celulas glandulares en SO presenta una marcacion entre debil y moderada, mientras que el citoplasma se presenta negativo en las glandulas superficiales y en algunas celulas de las glandulas profundas.

sWGA

Esta lectina presenta un patron de union singular, pues hay alternancia de celulas marcadas y no marcadas en glandulas; asimismo, el glicocaliz se presenta como una capa muy fina. En NSO, el glicocaliz varia de negativo a moderada o fuerte en glandulas, mientras que el citoplasma varia de negativo a moderado, siendo esta marcacion similar a lo observado en SO. Los cuernos uterinos de NSO no presentan marcacion en epitelio luminal pero es de moderada a fuerte en glandulas.

GS-1

El patron de marcacion en ambos grupos fue muy similar. En los tres tejidos de ambos grupos se observo una marcacion moderada con granulos en todo el citoplasma, tanto a nivel de celulas glandulares como del epitelio luminal del endometrio; mientras que a nivel del estroma, esta lectina reacciona debilmente, observandose zonas negativas. En el caso de las glandulas, el citoplasma se une de manera moderada a esta lectina; y en el caso del glicocaliz, la intensidad es mayor en el cuerpo uterino del NSO y menor en los cuernos uterinos en comparacion con SO.

LCA

En el caso de NSO, la union de esta lectina al glicocaliz del epitelio luminal es moderada, asi como en el citoplasma a nivel de la zona apical donde se logran distinguir mayor cantidad de granulos. En el caso de SO, el epitelio luminal del endometrio del cuerpo uterino y cuerno derecho presenta un glicocaliz y citoplasma con marcacion fuerte y moderada, respectivamente.

PSA

La marcacion es moderada en los tres tejidos de ambos grupos a nivel de epitelio luminal, aunque la marcacion es mas intensa en SO. A nivel del citoplasma, la marcacion es moderada en cuerno derecho y cuerpo uterino, perdiendose la intensidad en el cuerno izquierdo de ambos grupos. La marcacion es de moderada en glicocaliz y debil en citoplasma en las glandulas del cuerpo uterino de ambos grupos. La marcacion tiende a ser mas intensa en las estructuras que componen las glandulas del cuerno derecho y del cuerpo uterino en NSO, mientras que el epitelio glandular presenta marcacion de menor intensidad en el cuerno izquierdo.

SJA

El citoplasma de las celulas del epitelio luminal y glandular del tejido endometrial no se unio a esta lectina, a excepcion de algunas glandulas superficiales e intermedias donde hubo marcacion debil. En los tres tejidos de NSO, el glicocaliz presenta marcacion debil pero no uniforme a nivel de las glandulas superficiales e intermedias, y negativo a nivel de glicocaliz de epitelio luminal endometrial y de glandulas profunda; en cambio, en el cuerno derecho y cuerpo uterino de SO, se observa marcacion mas intensa en el glicocaliz de glandulas superficiales e intermedias, aunque sigue siendo negativo en glandulas profundas.

PHA-E

El estroma se marca fuertemente en todos los casos y es similar entre ambos grupos. La union a esta lectina en el cuerpo uterino es entre moderada y fuerte, mientras que en las glandulas, la marcacion en glicocaliz es moderada y en citoplasma es debil. Este patron se repite en el cuerno derecho, siendo mas intensa la marcacion en algunas estructuras de SO. En el cuerno izquierdo, el patron es similar entre ambos grupos, aunque a nivel del epitelio luminal y glandular la intensidad se pierde ligeramente en SO.

PHA-L

El patron de marcacion de esta lectina es similar en el cuerno derecho y cuerpo uterino, presentando marcacion moderada a fuerte en glicocaliz de epitelio luminal endometrial y de epitelio glandular. En el cuerno derecho de SO hay una disminucion en la marcacion a nivel del glicocaliz de las glandulas intermedias y profundas y del epitelio luminal; mientras que a nivel del citoplasma la marcacion es moderada y de manera granular en todos los casos. Asimismo, en este grupo hay una disminucion en la intensidad de la marcacion a nivel del glicocaliz del epitelio de glandulas intermedias y profundas del cuerno izquierdo; siendo lo contrario a nivel del glicocaliz del epitelio luminal endometrial y de las glandulas superficiales y del citoplasma. La marcacion en estroma es debil y en algunas zonas del endometrio en los tres tejidos de ambos grupos.

DISCUSION

La reaccion PAS positiva encontrada en todos los tejidos de ambos grupos indica la presencia de glicopolisacaridos neutros, y el azul alcian positivo de pH acido 2.5 indica la presencia de mucinas sulfatadas acidas debiles (mayor parte de mucinas), coincidiendo con resultados de otros estudios (Walter y Bavdek, 1997; Schencke et al, 2004; Sanchis et al, 2009). La mayor intensidad de marcacion mostrada en ambas tecnicas en tejidos del grupo SO podria evidenciar una mayor actividad secretora del tejido endometrial, producto de las hormonas utilizadas en la superovulacion.

La marcacion con la lectina PNA en cuerpo uterino y cuerno derecho a nivel de epitelio luminal endometrial en NSO es similar a la encontrada por Munson et al. (1989) en tejido uterino de vacas no prenadas en fase luteal; mientras que la union al epitelio luminal endometrial de los tres tejidos en SO y en cuerno izquierdo en NSO es similar a resultados en utero de mujeres sometidas a un tratamiento de superovulacion con FHS y hCG y en mujeres que no tuvieron ninguna terapia hormonal y que no estaban gestantes (Gheri et al., 1998).

La marcacion de la lectina SBA a nivel de glicocaliz del epitelio luminal y epitelio glandular de cuerno izquierdo y utero de ambos grupos de alpacas, asi como en el cuerno de SO es similar a la encontrada en utero de cerdas en estro y metaestro, de perras en anestro y de mujeres sometidas a un tratamiento de superovulacion (Zhou et al, 1994; Gheri et al., 1998; Leitner et al., 2003; Sant'Ana et al., 2009). Asimismo, la diferencia detectada en la marcacion a nivel del glicocaliz del epitelio luminal endometrial del cuerno derecho de NSO es igual a la detectada en utero de perras con piometra y en aquellas en fase tardia de metaestro (Leitner et al, 2003).

No hay mucha diferencia en la marcacion con la lectina RCA-1 entre ambos grupos de alpacas. Estos resultados se asemejan a aquellos en cerdas en fase luteal y fase folicular, e inclusive en utero de cerdas con hiperplasia endometrial quistica y con endometritis (Sant'Ana et al., 2009). En mujeres se puede observar un efecto del tratamiento de superovulacion en la union de la lectina ConA, ya que presentan granulos citoplasmaticos en el epitelio glandular y en epitelio luminal endometrial, mientras que en mujeres no tratadas no se observan en este ultimo tipo de celulas (Gheri et al, 1998).

Los hallazgos en la marcacion de la lectina UEA-1 son iguales a los encontrados por Munson et al. (1989) en vacas con mas de 80 dias de gestacion, por Gheri et al. (1998) en mujeres sin tratamiento hormonal previo, por Lee et al. (1983) en ratas no prenadas y por Leitner et al. (2003) en perras en metaestro temprano. Gheri et al. (1998) encontraron en 3 de 12 mujeres sometidas a un tratamiento de superovulacion una union debil a esta lectina a nivel de glicocaliz del epitelio luminal endometrial y union moderada a nivel del citoplasma celulas de algunas glandulas. Marcacion similar se presenta en conejas en estro y pseudoprenez, aunque con un patron no uniforme (Anderson et al., 1986).

En ninguna especie se encontro un patron de marcacion similar con la lectina DBA al de los tres tejidos de ambos grupos (Munson et al, 1989; Gheri et al, 1998; Sant'Ana et al, 2009), aunque se presento a nivel de celulas linfoides en estroma uterino de vaca (Munson et al, 1989). Se sabe que el glicoconjugado de union a la lectina DBA (a-D-GalNac) posee propiedades de antiadhesividad, de alli que se le encuentre en muy escasa cantidad en el cuerpo y cuernos uterinos de la alpaca (Hoffman et al., 1998), y que, asimismo, las hormonas utilizadas en la superovulacion disminuyen la expresion de este azucar en estas estructuras, dado que los sitios de union a esta lectina fueron mas escasos en SO comparados con NSO.

La lectina WGA tiene afinidad por N-acetil-glucosamina y acido sialico, mientras que su derivado succinilado sWGA se une especificamente a N-acetilglucosamina y a sus oligomeros (Monsigny et al., 1979). En este estudio, la falta de union de sWGA en las zonas donde se presento marcacion a la lectina WGA sostiene la presencia de acido sialico a ese nivel (Anderson et al, 1986), el cual se cree esta presente como parte estructural. La N-acetil-glucosamina esta relacionada con el acido hialuronico, el cual participa en la migracion celular, y que podria actuar en las celulas epiteliales que pasaran a formar las nuevas glandulas uterinas (Alberts et al, 1989).

Munson et al. (1989) encontraron que la marcacion con la lectina LCA en vacas en fase luteal es debil a nivel del glicocaliz del epitelio luminal endometrial y del glandular, pero moderada a nivel del citoplasma del epitelio luminal endometrial. Asimismo, en utero de ratas virgenes de 6-8 semanas de edad no hubo union con esta lectina a nivel de ningun epitelio y solo a nivel del estroma (Lee et al, 1983) como en el presente estudio. Jones et al. (2002) presentan resultados similares en muestras de placenta de alpacas en gestacion temprana y avanzada.

El patron de union de PHA-E encontrado en alpacas difiere del que se presenta en vacas en fase luteal donde la marcacion es debil a nivel epitelio luminal endometrial y glandular (Munson et al, 1989), asi como en ratas de 6-8 semanas de edad no gestantes que presentan union debil en algunas zonas del glicocaliz, tanto del epitelio luminal endometrial como del glandular (Lee et al., 1983).

La lectina PHA-L se une debilmente a nivel de todo el endometrio en ratas no gestantes y en ratas con 12 dias de gestacion (Lee et al., 1983). La marcacion es muy debil en la gestacion temprana de la alpaca y se hace negativa en la gestacion tardia (Jones et al., 2002).

Si bien no se conoce el rol que ejercen los glicoconjugados que se unen a las lectinas, la determinacion de patrones de glicosilacion para las lectinas PNA, RCA-I, Con A, DBA, WGA, sWGA, GS, LCA, SJA y PHA-L, donde se observaron diferencias entre grupos, sugiere que el tratamiento hormonal influencio en la expresion de los glicoconjugados que se unen a estas lectinas; a traves del efecto de la FSH, GnRH y hCG asi como el del estrogeno proveniente de los foliculos generados por el tratamiento de superovulacion sobre la proliferacion del tejido endometrial; como se ha comprobado en estudios previos en mamiferos (Anderson et al., 1986; Pentecost y Teng, 1987; Gheri et al, 1998; Leitner et al, 2003).

Las lectinas SBA, RCA-I, UEA, DBA, WGA, sWGA, GS, PHA-E y PHA-L presentan patrones de marcacion similares para ambos cuernos y entre ambos grupos. Las diferencias en el patron de marcacion de la lectina PNA y SJA entre el cuerno derecho y el izquierdo serian como resultado del cambio hormonal generado por el tratamiento de superovulacion; mientras que las diferencias por la lectina Con A entre ambos cuernos ocurren solamente en NSO. Las lectinas LCA, PSA presentan un patron de marcacion diferente entre el cuerno derecho y el cuerno izquierdo en ambos grupos, lo que podria sugerir algun rol en el porcentaje mayoritario de gestaciones en el cuerno izquierdo.

La marcacion de celulas linfoides con las lectinas SJA, GS, y DBA en cuerpo uterino y cuernos uterinos de la alpaca es un hallazgo normalmente presente en el tejido uterino de otras especies y ocurre porque la mucosa del tracto reproductor femenino esta normalmente expuesta a microorganismos patogenos (Munson et al, 1989; Del Rey, 1992). En el presente trabajo se observo mayor cantidad de celulas inmunologicas en el endometrio de cuerpo y cuernos uterinos de alpacas SO, lo cual concuerda con otras observaciones en utero de ratones, donde se comprobo la influencia de las hormonas sexuales en el aumento de la poblacion de celulas inmunologicas a nivel del endometrio uterino (Wira y Stern, 1992).

CONCLUSIONES

* El patron de glicosilacion en el endometrio del cuerpo y cuernos uterinos es diferente, especialmente a nivel de cuerno izquierdo, lo que podria determinar que la implantacion en la alpaca ocurra mayormente a este nivel.

* El tratamiento hormonal utilizado en el proceso de superovulacion al que fueron sometidas las alpacas altero el patron de glicosilacion tanto en el cuerpo como en los cuernos uterinos.

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25. Richa J, Damsky C, Buck C, Knowless B, Solter D. 1985. Cell surface glicoproteins mediate compaction, trophoblast attachment, and endoderm formation during early mouse development. Dev Biol 108: 513-521.

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Veronica Lopez C. (1), Maria Vasquez C. (1, 5), Wilfredo Huanca L. (2), Alexei Santiani A. (2), Claudio Barbeito (3, 4), Carolina Canuzzi A. (3), Boris Lira M. (1), Jose Rodriguez G. (1)

(1) Laboratorio de Fisiologia Animal,

(2) Laboratorio de Reproduccion Animal, Facultad de Medicina Veterinaria, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Peru

(3) Instituto de Patologia,

(4) Catedra de Histologia y Embriologia, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Plata, Argentina

(5) E-mail: evasquezc@gmail.com

Recibido: 1 de febrero de 2012

Aceptado para publicacion: 12 de octubre de 2013
Cuadro 1. Distribucion de areas de estudio en el cuerpo y cuernos
derecho e izquierdo del utero de alpacas

Epitelio         Epitelio glandular                    Tejido
luminal          Superficial   Intermedio   Profundo   conjuntivo

C (1)   GC (2)   C   GC        C   GC       C   GC

(1) Citoplasma

(2) Glicocaliz

Cuadro 2. Estudio lectinhistoquimico del epitelio del cuerpo
uterino de alpacas no superovuladas (NSO) y bajo tratamiento
superovulatorio (SO)

Lecitina   G (1)   Epitelio         Epitelio glandular
                   luminal          Superficial     Intermedio
                   GA (2)   C (3)   GA       C      GA       C

PNA        NSO     -/+      -       ++/+++   -/+    ++       +/++
           SO      ++/+++   +/++    ++/+++   +/++   ++       +/++
SBA        NSO     ++/+++   +/++    +++      +/++   ++/+++   +/++
           SO      ++/+++   ++      ++/+++   +/++   ++/+++   +/++
RCA-1      NSO     +/++     +       +/++     -/+    +/++     -/+
           SO      ++       +       ++       +      +/++     +
Con A      NSO     ++/+++   ++      ++       +      +        +
           SO      ++       +/++    +        -/+    -/+      -/+
UEA-I      NSO     -        -       -        -      -        -
           SO      -        -       -        -      -        -
DBA        NSO     -/+++    -/++    -/+++    -/++   -        -
           SO      -/++     -/++    -/++     -/++   -        -
WGA        NSO     +/++     +       ++       +      -/+      -/+
           SO      ++       +       -/+      -      -/+      -/+
sWGA       NSO     -/++     -       -/++     -/+    -/+++    -/++
           SO      ++/+++   -       -/++     -/+    -/+++    -
GS         NSO     +++      ++      +++      ++     +++      ++
           SO      +++      ++      ++       ++     ++       ++
LCA        NSO     ++       ++      ++       +      ++       +
           SO      +++      ++      +++      ++     +        +
PSA        NSO     ++       ++      ++       +      ++       +
           SO      ++/+++   +/++    ++       +      ++       +
SJA        NSO     -        -       +        -/+    +        -
           SO      -/+++    -       -/+++    -      -/+++    -
PHA-E      NSO     ++/+++   +       ++       +      ++       +
           SO      ++/+++   +/++    ++       +      ++       +
PHA-L      NSO     ++/+++   ++      +++      +      +++      ++
           SO      +++      ++      +++      +/++   +++      ++

Lecitina   G (1)   Epitelio glandular   Tejido
                   Profundo             conjuntivo
                   GA     C

PNA        NSO     +      -/+           -
           SO      +      -/++          -/+
SBA        NSO     ++     +/++          -
           SO      -      -             -
RCA-1      NSO     +/++   +             +
           SO      +/++   +             +
Con A      NSO     +      -/+           +
           SO      -      -/+           +
UEA-I      NSO     -      -             -
           SO      -      -             -
DBA        NSO     -      -             -
           SO      -      -             -
WGA        NSO     -/+    +             +
           SO      -/+    -             +
sWGA       NSO     -/+    -             -/+
           SO      -/+    -             -/+
GS         NSO     +++    ++            -/+
           SO      ++     ++            +
LCA        NSO     ++     +             ++
           SO      +      +             ++
PSA        NSO     ++     +             ++/+++
           SO      +      -/+           ++/+++
SJA        NSO     -      -             -/+
           SO      -      -             -/+
PHA-E      NSO     +      -/+           +++
           SO      ++     +             +++
PHA-L      NSO     +++    ++            -/+
           SO      +++    ++            -/+

(1) Grupo

(2) Glicocaliz apical

(3) Citoplasma

Cuadro 3. Estudio lectinhistoquimico del epitelio del cuerno
uterino derecho de alpacas no superovulada

Lecitina   G (1)   Epitelio         Epitelio glandular
                   luminal          Superficial     Intermedio
                   GA (2)   C (3)   GA       C      GA       C

PNA        NSO     -/+      -/++    ++/+++   -/+    ++/+++   +/++
           SO      -/++     +/++    ++/+++   +/++   ++/+++   +/++
SBA        NSO     -/++     +/++    ++/+++   +/++   ++/+++   +/++
           SO      +++      -/+     ++/+++   ++     ++       ++
RCA-1      NSO     ++/+++   +/++    ++       -/+    +        -/+
           SO      ++/+++   -/+     +/++     -/+    +        -/+
Con A      NSO     ++       +/++    -/+      -/+    -/+      +
           SO      ++/+++   ++      +        +      +        -/+
UEA-I      NSO     -        -       -        -      -        -
           SO      -        -       -        -      -        -
DBA        NSO     -/++     -/++    -/++     -/++   -        -
           SO      -/++     -/++    -/++     -/++   -        -
WGA        NSO     ++/+++   ++      ++       +      +/++     -/+
           SO      ++       +/++    +/++     -/+    +        -
sWGA       NSO     -        -       ++/+++   -/+    ++/+++   -/+
           SO      +/++     -       -/++     -      -/++     -
GS         NSO     +++      ++      ++       ++     ++       ++
           SO      +++      ++      +++      ++     +++      ++
LCA        NSO     ++       ++      ++       +      ++       ++
           SO      +++      ++      ++       ++     ++       +
PSA        NSO     ++/+++   ++      ++       ++     ++       ++
           SO      ++/+++   ++      ++       ++     ++       +
SJA        NSO     -        -       -/+      -      -/+      -
           SO      ++/+++   -       ++/+++   -      -/+      -
PHA-E      NSO     +++      +       ++       -/+    ++       +
           SO      +++      +/++    ++       +      ++       +
PHA-L      NSO     +++      ++      +++      ++     +++      ++
           SO      ++/+++   ++      +++      +/++   ++       ++

Lecitina   G (1)   Epitelio glandular   Tejido
                   Profundo             conjuntivo
                   GA     C

PNA        NSO     +      -/++          -/+
           SO      +      -/+           -/+
SBA        NSO     ++     -/++          -
           SO      ++     -/+           -/+
RCA-1      NSO     +/++   -/+           +/++
           SO      +      -             +
Con A      NSO     -/+    -/+           +
           SO      -/+    -/+           +
UEA-I      NSO     -      -             -
           SO      -      -             -
DBA        NSO     -      -             -
           SO      -      -             -
WGA        NSO     +/++   -/+           ++
           SO      +      -/+           +/++
sWGA       NSO     -      -             -
           SO      -      -             -
GS         NSO     ++     +             +
           SO      +++    ++            +
LCA        NSO     ++     ++            ++
           SO      ++     +             ++
PSA        NSO     ++     ++            ++
           SO      ++     +             ++
SJA        NSO     -      -             -
           SO      -      -             -
PHA-E      NSO     ++     +             +++
           SO      +      +             +++
PHA-L      NSO     +++    ++            -/+
           SO      ++     ++            -/+

(1) Grupo

(2) Glicocaliz apical

(3) Citoplasma

Cuadro 4. Estudio lectinhistoquimico del epitelio del cuerno
izquierdo de alpacas no superovuladas (NSO) y bajo tratamiento
superovulatorio (SO)

Lecitina   G (1)   Epitelio         Epitelio glandular
                   luminal          Superficial     Intermedio
                   GA (2)   C (3)   GA       C      GA       C

PNA        NSO     -/++     -/+     +++      -/+    ++/+++   +/++
           SO      ++       +/++    ++       +/++   +/++     +/++
SBA        NSO     ++/+++   +/++    +++      ++     ++/+++   +/++
           SO      ++/+++   ++      ++/+++   ++     ++/+++   ++
RCA-1      NSO     +++      +/++    +/++     -/+    +        -/+
           SO      ++       -/++    +/++     +      +        -/+
Con A      NSO     +++      ++      +        +      +        +
           SO      ++       ++      +        +      +        +
UEA-I      NSO     -        -       -        -      -        -
           SO      -        -       -        -      -        -
DBA        NSO     -/++     -/+     -/+++    -/++   -        -
           SO      -/++     -/++    -/++     -/+    -        -
WGA        NSO     ++/+++   +/++    +/++     +      +        -/+
           SO      ++       +       +/++     -      +        +
sWGA       NSO     -        -       -/++     -      -/+++    -
           SO      -/+++    -       -/++     -      -/+++    -
GS         NSO     +++      ++      ++       ++     ++       ++
           SO      +++      ++      +++      ++     +++      ++
LCA        NSO     ++       ++      ++       ++     ++       +
           SO      ++       +       ++       +      +        +
PSA        NSO     ++       +       ++       +/++   +        +
           SO      ++/+++   +       +/++     ++     +        +
SJA        NSO     -        -       -/+      -      -/+      -
           SO      -        -       -/+      -      -/+      -
PHA-E      NSO     +++      +       ++       +      +/++     +
           SO      ++       +       +/++     +      ++       +
PHA-L      NSO     ++       +/++    ++/+++   +/++   ++/+++   +/++
           SO      +++      ++      +++      ++     ++       ++

Lecitina   G (1)   Epitelio glandular   Tejido
                   Profundo             conjuntivo
                   GA       C

PNA        NSO     +/++     -/++        -/+
           SO      +/++     +           -/++
SBA        NSO     +/++     +           -
           SO      +        +           -
RCA-1      NSO     +        -           +/++
           SO      +/++     -/+         +/++
Con A      NSO     +        -/+         +
           SO      +        +           +
UEA-I      NSO     -        -           -
           SO      -        -           -
DBA        NSO     -        -           -
           SO      -        -           -
WGA        NSO     +        -/+         +
           SO      +/++     -/+         +/++
sWGA       NSO     -        -           -/+
           SO      -/+      -           -/+
GS         NSO     ++       ++          +
           SO      ++       ++          +
LCA        NSO     ++       +           ++
           SO      +        +           +
PSA        NSO     +        -/+         -
           SO      +        -           ++
SJA        NSO     -        -           -
           SO      -        -           -
PHA-E      NSO     +        -/+         ++/+++
           SO      +        +           +++
PHA-L      NSO     ++/+++   -/+         -/+
           SO      ++       ++          +/++

(1) Grupo

(2) Glicocaliz apical

(3) Citoplasma
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Author:Lopez C., Veronica; Vasquez C., Maria; Huanca L., Wilfredo; Santiani A., Alexei; Barbeito, Claudio;
Publication:Revista de Investigaciones Veterinarias del Peru (RIVEP)
Date:Jan 1, 2014
Words:6077
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