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Estudio histologico e histoquimico de la organogenesis del tubo digestivo de Rhamdia quelen en condiciones de larvicultura intensiva.

Histological and histochemical study of Rhamdia quelen digestive tract organogenesis under intensive larviculture conditions

INTRODUCCION

En peces teleosteos, los mecanismos de desarrollo del sistema digestivo son similares a pesar que existen considerables variaciones interespecificas respecto al momento de la diferenciacion y la funcionalidad de los diferentes organos (Trevino et al, 2011), relacionadas principalmente con los procesos de digestion, absorcion y asimilacion de nutrientes (Dabrowski, 1984). Conocer los cambios que ocurren en el tracto digestivo durante el desarrollo ayuda a comprender la fisiologia de la nutricion en larvas y a elegir el momento optimo para iniciar la alimentacion con raciones balanceadas, evitando altas mortalidades que ocurren cuando se suministran alimentos artificiales a ejemplares que no pueden asimilarlos (Person-Le Ruyet et al., 1993; Gisbert et al., 2004; Micale et al., 2006; Hamza et al., 2007).

En este sentido, los estudios histomorfologicos durante la ontogenia del sistema digestivo son una herramienta fundamental para evaluar la potencial utilidad de diferentes dietas para larvas, asi como para dilucidar relaciones funcionales entre los diferentes organos envueltos en los procesos digestivos (Hamza et al, 2007; Onal et al, 2008; Gisbert et al, 2009; Trevino et al., 2011).

A pesar de los progresos recientes en nutricion de larvas de peces, en la mayoria de las especies la primera alimentacion sigue basandose en alimento vivo, ya que independientemente de su valor nutritivo, es facilmente detectado, capturado y altamente digestible (Concei?ao et al, 2009). Si bien, numerosos trabajos fueron orientados a reemplazar el alimento vivo por dietas formuladas desde el inicio de la alimentacion exogena, en muchas ocasiones no se obtuvieron buenos desempenos, principalmente en peces marinos (Cahu & Zambonino-Infante, 2001). Tales fracasos fueron atribuidos a un sistema digestivo inmaduro, rapido transito intestinal, baja capacidad enzimatica, o a la inhabilidad de las larvas para reconocer el alimento, localizarlo e ingerirlo (Kolkovski, 2001; Kowalska et al, 2006).

Estudios actuales buscan identificar la presencia y actividad de las enzimas digestivas desde el momento de apertura de la boca (Hamza et al, 2007; Ribeiro et al, 2008; Gisbert et al, 2009) asi como la diferenciacion celular en celulas absortivas (enterocitos), mucosas y endocrinas a nivel intestinal, las que cumplen importantes funciones, como absorcion y digestion citosolica, defensa, osmoregulacion e integracion neuroendocrina, modulando los procesos digestivos y la toma de alimentos, entre otros (Mola et al., 2004; Mangetti, 2006; Micale et al, 2006; Onal et al, 2008; Yang et al, 2010).

En Rhamdia quelen se realizaron estudios del desarrollo embrionario y larvario, centrando su atencion en las etapas tempranas de desarrollo (Cussac et al., 1985; Matkovic et al., 1985; Boiani et al, 2003; De Amorim et al, 2009). La propuesta de este trabajo es la descripcion de los cambios histologicos e histoquimicos y ultraestructurales del tracto digestivo en larvas de R. quelen hasta los 20 dias posteriores a la eclosion (dpe) bajo larvicultura intensiva y la discusion de los resultados en vista a una alimentacion practica.

MATERIALES Y METODOS

Este trabajo se realizo en un sistema de larvicultura intensiva bajo condiciones controladas de laboratorio en las instalaciones de piscicultura experimental del Instituto de Ictiologia del Nordeste (INICNE) de la Facultad de Ciencias Veterinarias-UNNE (Corrientes, Argentina). Las larvas de R. quelen se obtuvieron mediante cruzamientos entre ejemplares adultos (peso corporal 450-500 g), por induccion artificial con extracto de hipofisis de Prochilodus lineatus. La incubacion duro 24 ha 22[grados]C. Posteriormente a la eclosion (longitud = 4,87 mm, peso = 0,66 mg), se colocaron 700 larvas en acuarios de 23 L, utilizados como unidades experimentales, abastecidos con agua de perforacion y aireacion forzada, con sustitucion de agua continua a una tasa de 0,4 l [min.sup.-1] durante 12 h al dia para la eliminacion de residuos. Durante el periodo experimental, las larvas se alimentaron cuatro veces al dia (8, 12, 16 y 20 h) con nauplios de Artemia no enriquecidos hasta saciedad aparente. La experiencia tuvo una duracion de 20 dias, con temperatura promedio de 26,5[grados]C, pH 7,0; oxigeno disuelto 6,0 mg [L.sup.-1] y conductividad de 129,43 mS [cm.sup.-1]. Con el registro diario de la temperatura del agua se calcularon las unidades termicas acumuladas (UTA o [grados]C [dia.sup.-1]) transcurridas desde la eclosion.

Histologia e histoquimica

Se colectaron diariamente 10 larvas hasta 20 dpe. El material obtenido fue fijado en formol 10%, deshidratado e incluido en bloques de parafina. Posteriormente, se realizaron cortes seriados de 3 [micron]m de espesor. Los cortes se colorearon en forma rutinaria con la tecnica de hematoxilina y eosina (HE), ademas de otras tecnicas especiales de coloracion, como: acido peryodico de Schiff (PAS), azul alcian (AA pH 2,5) y PAS/AA pH 2,5, para la observacion de las mucosustancias (Culling, 1974).

Las microfotografias de las larvas se obtuvieron con camara digital asociada a lupa binocular y microscopio.

Microscopia electronica de barrido (MEB)

Los segmentos del tracto digestivo destinados para MEB se fijaron en formol al 10%, realizandose un corte longitudinal para exponer la mucosa. Los mismos, se observaron por el metodo del punto critico y se metalizaron con oro-paladio en un vaporizador en frio (Goldstein et al, 2003). Las muestras se montaron y observaron en un microscopio electronico de barrido JEOL 5800LV del Servicio de Microscopia Electronica de la Secretaria de Ciencia y Tecnica (UNNE).

RESULTADOS

Al nacimiento, el tracto digestivo fue identificado como un tubo recto, histologicamente indiferenciado, ubicado sobre el saco vitelino. Dentro de los dos primeros dias de vida (53 UTA) se produjeron rapidos procesos de diferenciacion del mismo, identificandose tres segmentos: i) Intestino cefalico (cavidad bucofaringea), ii) Intestino medio (esofago y primordio del estomago), e iii) Intestino posterior (tubo digestivo posterior o intestino propiamente dicho) (Fig. 1a). A 6 dpe (159 UTA), el tubo digestivo posterior se diferencio en un intestino anterior y otro posterior (Fig. 1d), mientras que a 15 dpe (397,5 UTA), se plego dentro de la cavidad permitiendo diferenciar intestino anterior, medio y posterior (Fig. 1e). Posteriormente a esta edad, el tubo digestivo adquirio caracteristicas de adulto (Fig. 2).

Cavidad bucofaringea

Luego de la eclosion, la cavidad bucal estaba revestida por un epitelio cubico simple rodeado por una delgada capa de tejido conectivo: cambiando a epitelio estratificado de manera paulatina. Corpusculos gustativos y celulas mucosas globosas fueron evidentes a partir de 4 dpe (106 UTA) en los barbillones y entre las celulas epiteliales de la cavidad bucofaringea, respectivamente (Figs. 3a, 3c). La cantidad y tamano de ambas estructuras aumentaron, a medida que las larvas avanzaron en edad.

Entre 3 y 4 dpe (79,5 y 106 UTA), coincidiendo con la finalizacion del periodo de alimentacion endogena, se observaron dientes que emergian desde el tejido subyacente entre el epitelio de la cavidad bucal y faringea. Estos aumentaron en numero con la edad, especialmente hasta 12 dpe (318 UTA), donde ya estaban completamente constituidos como dientes faringeos (Fig. 3d).

Esofago

A partir de 2 dpe (53 UTA) un corto y rudimentario esofago comunico la cavidad bucofaringea con la porcion anterior del tubo digestivo posterior (primordio de estomago) a traves de un lumen estrecho. La mucosa del esofago presento un epitelio estratificado con escasa cantidad de celulas mucosas, las que fueron mas abundantes a partir de 4 dpe (106 UTA). Las celulas mucosas del tercio proximal fueron escasas y de morfologia globosa, mientras que las del tercio distal fueron prismaticas y mas abundantes. Al final del periodo evaluado (20 dpe), se observo un tercer tipo celular constituido por celulas eosinofilas grandes ubicadas en la porcion media del epitelio. Entre 8 y 10 dpe (212 a 265 UTA), se observaron importantes cambios en el esofago, que se alarga y expande con pliegues complejos y ramificados con proyecciones hacia la luz del organo.

Al tercer dia, una capa de tejido conectivo laxo separo al epitelio de una tunica muscular escasamente formada. De 3-4 dpe (79,5-106 UTA) se aprecio una tunica muscular de musculo estriado esqueletico de disposicion circular. Luego la tunica muscular se constituyo como una delgada capa de tejido muscular estriado esqueletico de disposicion circular interna y longitudinal externa (Fig. 5d) y la tunica adventicia rodeo al organo con una fina capa de tejido conectivo laxo.

Estomago

Entre 2 y 3 dpe (53 y 79,5 UTA), el estomago consistio en un tubo corto y sacular, de paredes delgadas y pliegues mucosos cortos, haciendose visible como una dilatacion en la porcion posterior del esofago y revestida por epitelio cubico simple (Figs. 1b-1c). Posteriormente, el epitelio consistio en celulas cilindricas mucosecretoras asentadas sobre un escaso tejido conectivo sub-epitelial (propia-submucosa), al tiempo que la tunica muscular presento una delgada capa de fibras musculares lisas, que se hizo mas espesa en la region pilorica acompanando el crecimiento de la larva. A partir de 10 dpe (265 UTA) el estomago adquirio forma de "J" ocupando gran parte de la region central de la cavidad abdominal. En este momento, el estomago estaba separado hacia la region proximal del esofago mediante una escasa constriccion de la mucosa, mientras que en distal se separo del intestino a traves de una espesa capa muscular a modo de esfinter pilorico (Fig. 1f). La tunica serosa formada por tejido conectivo laxo y mesotelio, rodea al organo y lo separa del higado y pancreas (Figs. 1e-1f). Entre 8 y 10 dpe (212 a 265 UTA) se identificaron algunas glandulas gastricas en la lamina propia (Fig. 4a), mientras que a 20 dpe presentaron un desarrollo completo (Fig. 4b). Las mismas consistieron en glandulas tubulares rectas donde las celulas oxintopepticas fueron el unico tipo celular identificado.

[FIGURA 1 OMITIR]

[FIGURA 2 OMITIR]

[FIGURA 3 OMITIR]

[FIGURA 4 OMITIR]

Intestino

En el primer dia de vida, las larvas presentaron un intestino primordial de aspecto tubular aparentemente cerrado en toda su longitud con excepcion de la porcion posterior al saco vitelino, donde se observo una luz estrecha. Entre 5 y 6 dpe (132,5 y 159 UTA), se diferencio una valvula intestinal, manifestando una separacion en un intestino anterior (pre-valvular) y otro posterior (post-valvular) (Fig. 1d). A 10 dpe (265 UTA), el intestino experimento una inclinacion de 180[grados] curvandose hacia craneal y adquiriendo una posicion antero-derecha dentro de la cavidad abdominal desplazando el estomago hacia medial de la cavidad. Asimismo, se aprecio que el intestino tambien se pliega por detras del estomago, diferenciandose en intestino medio. De esta manera, a 15 dpe (397,5 UTA) el intestino se encontro dividido en tres porciones morfologicas distintas, intestino anterior, medio y posterior (Fig. 1e).

Una vez que se inicio la alimentacion exogena (2-3 dpe) (53 a 79,5 UTA), el epitelio intestinal consistio en una capa simple de celulas prismaticas de superficie regular, y a 4 dpe (106 UTA) se constato la formacion de microvellosidades en la frontera absortiva (Figs. 3e3g). Ademas, se identificaron vacuolas translucidas intracitoplasmicas supra e infranucleares en los enterocitos del intestino anterior (Figs. 4c-4d), mientras que en los enterocitos del intestino posterior se observaron solamente vacuolas eosinofilicas supranucleares (Fig. 4e). Estas vacuolas intracelulares eosinofilicas se presentaron durante todo el periodo larval, siendo prominentes desde 8 dpe (212 UTA) hasta la aparicion de las glandulas gastricas, donde disminuyeron paulatinamente del dia 12 al 15 (318 a 397,5 UTA), para casi no ser identificadas a 20 dpe (Fig. 4f).

Entre 3 y 10 dpe (79,5 y 265 UTA), se observaron celulas mucosas entre los enterocitos, aumentando en numero con la edad y adquiriendo una forma de caliz con acumulo de vesiculas de secrecion en la parte central y apical. A partir de 12 dpe (318 UTA), algunos pliegues mucosos, con un delgado eje de tejido conectivo laxo, se extendieron a corta distancia de la luz intestinal. Posteriormente, los pliegues comenzaron a hacerse mas numerosos y, a su vez, mas largos y ramificados, principalmente en el intestino anterior.

Histoquimica

Las celulas mucosas del sistema digestivo de las larvas mostraron distintas mucosustancias durante los primeros 20 dpe (neutras, acidas o mixtas), siendo las neutras el tipo mas comun (Fig. 5). Las celulas mucosas epiteliales del tracto digestivo fueron fuertemente PASpositivas, especialmente en esofago y estomago, las que presentaron mucinas neutras dando una reaccion de color rojo. Por su parte, las celulas mucosas que manifestaron color azul con AA pH 2,5 indicando la presencia de mucinas acidas. Las secciones del tracto digestivo tenidas con AA pH 2,5 fueron esofago, estomago e intestino, siendo en el primer y segundo caso, fuertemente acidas dentro de la primera semana de vida. En esofago, se identificaron tres tipos de celulas mucosas: de formas alargadas, redondeadas o de copa secretoras de mucinas neutras, acidas y mixtas. Con base en las observaciones, se determino que entre los 8-10 dpe (212-265 UTA) las celulas mucosas del tercio anterior del esofago permanecen fuertemente acidas y negativas hacia el tercio posterior. Este cambio comenzo a ocurrir en el momento en que aparecieron las glandulas gastricas (Figs. 5e-5h).

En el estomago se detecto un gran numero de celulas mucosas de forma columnar secretoras de mucinas neutras y acidas, mientras que durante el periodo de diferenciacion de las glandulas gastricas (8-15 dpe) (212-397,5 UTA), las mucinas acidas fueron menos frecuentes hasta ser negativas a los 15 dias de vida (Fig. 5f).

A lo largo del intestino, las celulas mucosas presentaron forma columnar o de copa, siendo de secrecion neutra, acida o mixta, que incrementaron en numero desde 12 dpe (318 UTA) hasta el final del periodo en estudio. Sin embargo, la primera porcion del intestino presento menor numero de celulas mucosas con mucosustancias neutras y acidas respecto a la porcion posterior.

DISCUSION

Durante el primer dia de vida, el tracto digestivo en larvas de R. quelen es un tubo recto indiferenciado en toda su longitud, ubicado en la parte dorsal del saco vitelino similar a lo descrito en otras especies (Gisbert et al, 2004; Micale et al, 2006; Onal et al, 2008). Al inicio de la alimentacion exogena se diferenciaron cuatro zonas histologicamente distintas: cavidad bucofaringea, esofago, estomago incipiente e intestino, mientras que luego de los 20 dpe presenta un tubo digestivo morfologicamente similar al del adulto (Hernandez et al, 2009).

De manera diferente, las larvas de salmonidos nacen con los organos del tracto digestivo altamente diferenciados (Takahashi et al, 1978), como ocurre en otros peces de ontogenia directa (Green & McCormick, 2001), teniendo, al inicio de la alimentacion exogena, un estomago funcional. En la mayoria de las especies con ontogenia indirecta y escaso vitelo, el inicio de la alimentacion exogena se realiza sin tener un desarrollo importante del sistema digestivo y posiblemente ineficiente como para digerir dietas complejas (Boiani et al, 2003; Civera-Cerecedo et al, 2004), observandose altas mortalidades en larvas de muchas especies, alimentadas exclusivamente con dietas formuladas (Dabrowski, 1984).

La presencia de barbillones y corpusculos gustativos en larvas de R. quelen, presentes antes de la alimentacion exogena, les permitiria evaluar la palatabilidad del alimento al momento de ingerir la dieta (Boglione et al, 2003). Micale et al. (2006) observaron que los corpusculos gustativos en larvas de Pagellus erythrinus aparecen recien a 17 dpe, momento en que ellas son capaces de decidir si aceptar o rechazar el alimento. Asimismo, Baskerville-Bridges & Kling (2000) evaluaron la palatabilidad en larvas de Gadus morhua con seis alimentos (cuatro dietas experimentales, una comercial y un control con alimento vivo) y observaron que las dietas experimentales mostraron menor palatabilidad. Estos autores comprobaron que como resultado de ello, el desarrollo de las larvas llevo mas tiempo y verificaron una mayor mortalidad en estos grupos.

En este estudio, se distinguieron diferencias morfologicas de las celulas mucosas distribuidas en dos zonas del esofago, que presento celulas globosas en el tercio proximal y celulas alargadas en la porcion distal. Diferenciaciones similares fueron halladas en otras especies (Baglole et al., 1997; Mangetti, 2006; Jaroszewska & Dabrowski, 2008). En el epitelio del esofago de otras especies se observaron celulas mucosas conteniendo mucinas neutras, acidas y mixtas (Sarasquete et al, 1995; Ostaszewska, 2005; Yang et al., 2010). En R. quelen, las celulas mucosas mostraron una reaccion fuertemente neutra y acida en la porcion anterior del organo, siendo leve en la porcion posterior. Pasando 10 dpe, solo las mucinas neutras se encontraron en la porcion posterior, siendo el tipo de mucina mas abundante en toda la longitud. De manera contraria, Ostaszewska (2005) observo que las celulas mucosas en el esofago de larvas de Sander lucioperca producen mas mucinas acidas que neutras, principalmente en la porcion posterior. Estas celulas juegan un importante rol en la lubricacion y proteccion del ataque de microorganismos (Zimmer et al, 1992; Gisbert et al, 2004), asi como una posible participacion en la digestion pregastrica (Baglole et al, 1997).

[FIGURA 5 OMITIR]

El desarrollo de las glandulas gastricas y de un estomago funcional sugiere una transicion de la etapa larval a juvenil (Kolkovski, 2001; Lo & Weng, 2006). La presencia de las glandulas gastricas permite la digestion de una mayor variedad de alimentos, pudiendo pasar de un alimento vivo a una dieta formulada, reduciendo los costos de produccion (Onal et al., 2008). Boiani et al. (2003) evaluaron el desarrollo histologico del tubo digestivo en larvas de R. quelen alimentadas con racion balanceada y nauplios de Artemia, y observaron que a 15 dpe (aproximadamente 310 UTA) las glandulas gastricas aun no se encontraban desarrolladas, mientras que en el presente estudio, la diferenciacion de las glandulas gastricas se registro entre 8 y 10 dpe (212 a 265 UTA), diferencia que podria relacionarse con la temperatura de cultivo en que se realizaron ambos estudios. En este sentido, cabe mencionar que Boiani et al. (2003) criaron las larvas entre 19[grados] y 22[grados]C, mientras que en el presente estudio se trabajo con temperaturas promedio de 26,5[grados]C, valor muy proximo al optimo sugerido para la cria de esta especie (27[grados]C, Forgati et al, 2007), lo que permite suponer que el desarrollo de los peces pudo verse favorecido. Tal apreciacion coincide con los resultados obtenidos por Elbal et al. (2004), quienes mencionan que las condiciones de cria (temperatura o fotoperiodo), pueden afectar mas el desarrollo de los peces que el tipo de alimentacion.

En Amphiprion percula se observo que las glandulas gastricas aparecen en diferentes momentos, a 5 dpe (Gordon & Hecht, 2002) 11 dpe (Onal et al, 2008), diferencias que tambien serian atribuibles a la temperatura y fotoperiodo. Ostaszewska et al. (2005a) no encontraron diferencias en el desarrollo del estomago y en la presencia de las glandulas gastricas en larvas de S. lucioperca alimentadas con Artemia y cuatro raciones formuladas hasta 21 dpe, aunque al final de la experiencia solamente las larvas alimentadas con Artemia y dos iniciadores comerciales mostraron un desarrollo glandular normal. Esto indica que la aparicion de las glandulas gastricas se debe a una condicion genetica y ambiental mas que a la respuesta a un factor nutricional, aunque este ultimo influenciaria una rapida diferenciacion y un desarrollo completo a temprana edad.

Las mucinas neutras en el estomago podrian ejercer una funcion de cooperacion en la digestion enzimatica de los alimentos y su transformacion en quimo, asi como un efecto amortiguador sobre el contenido acido del estomago y podrian promover el transporte y absorcion de macromoleculas en la membrana plasmatica (Petrinec et al, 2005; Cao & Wang, 2009). Por lo tanto, la presencia de mucinas neutras en larvas de R. quelen desde el inicio de la alimentacion exogena y su permanencia junto al completo desarrollo de las glandulas gastricas sugiere que poseen la capacidad de proteger y a la vez facilitar la digestion y absorcion de los alimentos ingeridos, tal como fue senalado en otras especies (Gisbert & Doroshov, 2003; Gisbert et al, 2004). De la misma manera, las mucinas acidas observadas en el estomago en el presente trabajo, podrian tener un efecto en la neutralizacion de microorganismos (Gisbert et al, 2004) o la participacion en algun tipo de digestion acida hasta la formacion de las glandulas gastricas (Baglole et al, 1997), momento en que desaparecen. Mangetti (2006) observo cambios similares en la secrecion de las mucinas acidas en el epitelio del estomago en larvas de Pseudoplatystoma coruscans. Asimismo, el desarrollo del esfinter pilorico durante este periodo prolongaria el tiempo de retencion del alimento en el estomago, que posible-mente mejoraria la digestion y asimilacion de los nutrientes conforme a lo propuesto para larvas de Pelteobagrus fulvidraco por Cao & Wang (2009).

En este estudio, entre 4 y 6 dpe se observaron los primeros signos de absorcion intestinal identificados como vacuolas lipidicas en los enterocitos del intestino anterior y granulos eosinofilos en intestino posterior. Similares observaciones fueron efectuadas por diferentes investigadores en otras especies (Mangetti, 2006; Micale et al, 2006; Onal et al, 2008; Yang et al, 2010). En coincidencia con De Amorim et al. (2009), en el presente estudio no se observaron vesiculas de absorcion en los enterocitos durante el periodo de alimentacion endogena.

A 8 dpe se comprobo una diferenciacion del segmento intestinal en dos porciones, intestino anterior y posterior. El intestino anterior esta implicado en la absorcion de lipidos y se caracteriza por la presencia de inclusiones lipidicas en los enterocitos, considerado como lugar de almacenamiento temporal (Elbal et al, 2004; Kowalska et al, 2006). Varios investigadores indican que dietas con alto contenido lipidico, ya sea de origen animal o vegetal, pueden alterar la funcionalidad de los enterocitos por la acumulacion de lipidos en la region supranuclear, principalmente del segmento intestinal anterior (Caballero et al, 2003; Ostaszewska et al., 2005b; Morais et al., 2006, 2007). Esto se manifiesta por el aumento en el tamano del enterocito acompanado por una vacuolizacion excesiva como consecuencia del almacenaje de lipidos y/o de la inhibicion de la nueva esterificacion de los acidos grasos. Asi, la menor cantidad de estas vesiculas podria sugerir una correcta absorcion, sintesis y transporte de lipoproteinas a la circulacion general (Ostaszewska et al, 2005a). Similares observaciones fueron senaladas por Baskerville-Bridges & Kling (2000) en larvas de Gadus morhua alimentadas con rotiferos. Tambien, Ostaszewska et al. (2005b) indican que en los enterocitos de larvas de Chondrostoma nasus alimentadas con nauplios de Artemia se observa una acumulacion de vacuolas lipidicas, estimando que esto pueda deberse a un desequilibrio en los acidos grasos presentes en este tipo de alimento, el cual no es el alimento natural de estos peces.

La absorcion de proteinas fue evidenciada como vesiculas supranucleares eosinofilicas presentes en las celulas epiteliales del intestino posterior en larvas de R. quelen, mostrando una disminucion paulatina de las mismas a medida que ocurrio la diferenciacion de las glandulas gastricas. Observaciones similares fueron descritas en larvas de otras especies de peces (Luizi et al, 1999; Mai et al, 2005; Onal et al, 2008). La captacion de macromoleculas por pinocitosis y su posterior digestion intracelular en el intestino posterior fue propuesta como el principal mecanismo de absorcion de proteinas en ausencia de un estomago funcional (Govoni et al, 1986). Ademas, este evento es marcado por la eficiencia en la digestion citosolica, manifestado por la abundancia de enzimas en el citoplasma del enterocito que, posteriormente, disminuyen en cantidad al ir diferenciandose y al aumentar la cantidad de enzimas en las microvellosidades, hecho considerado como una transicion hacia la digestion de adulto (Zambonino-Infante & Cahu, 2001). Este acontecimiento es apreciado despues del desarrollo de las glandulas gastricas (inicio de la digestion acida y enzimatica de las proteinas en estomago) manifestado por una disminucion paulatina de la ocurrencia de las vesiculas eosinofilicas en intestino posterior (Halver & Hardy, 2002).

En larvas de R. quelen, dentro del periodo estudiado, se observo un incremento gradual en la longitud de los pliegues intestinales hasta 15 dpe. Sin embargo, posteriormente se produjo un rapido incremento en la longitud de los mismos. Kowalska et al. (2006) efectuaron un ensayo de co-alimentacion en larvas de S. lucioperca con nauplios de Artemia y racion comercial y observaron pliegues intestinales superiores en larvas que recibieron solamente Artemia por una semana, comparado con las que fueron co-alimentadas por dos o tres semanas. Los autores opinan que un aumento en el tamano de los pliegues intestinales provoco un aumento en el tamano de la superficie del aparato digestivo y, en consecuencia, mayor exposicion y absorcion de nutrientes.

Se sugiere que las mucosustancias presentes en intestino poseen un rol en los mecanismos de digestion y asimilacion de los nutrientes, ademas de proteger a la mucosa intestinal (Grau et al, 1992; Domeneghini et al, 1998). Ostaszewska (2005) reporta un aumento considerable en el numero de celulas mucosas en el intestino de S. lucioperca luego de 20 dpe, las que fueron mas numerosas en intestino posterior que en anterior. Concordando con este autor, en el presente trabajo el numero de celulas mucosas en intestino de larvas de R. quelen se incremento hacia el final de la experiencia, siendo mayor en intestino posterior que en anterior. Baglole et al. (1997) y Yang et al. (2010) obtuvieron resultados similares en larvas de Pleuronectes ferruginea y P. fulvidraco, respectivamente. Segun Domeneghini et al. (1998) y Shi et al. (2007) las mucinas en el intestino posterior, principalmente las acidas, facilitarian la defecacion. Kowalska et al. (2006) observaron que en larvas de S. lucioperca co-alimentadas con Artemia por una semana y dieta comercial durante todo el periodo experimental, el crecimiento fue menor y el numero de celulas mucosas fue el mas alto al compararlas con los grupos que recibieron un mayor periodo de co-alimentacion. Los autores sugieren que el aumento de las mucinas en estos individuos es un esfuerzo fisiologico para mejorar la digestibilidad y absorcion del alimento.

En el presente estudio se pudo constatar que el desarrollo del sistema digestivo de larvas de R. quelen alcanza la caracteristicas de juveniles entre 12 y 15 dpe. Las observaciones histologicas demostraron que los patrones de desarrollo fueron similares a otros teleosteos.

DOI:10.3856/vol42-issue5-fulltext-17

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Received: 4 October 2013; Accepted: 29 September 2014

David R. Hernandez (1), Juan J. Santinon (1), Sebastian Sanchez (1) & Hugo A. Domitrovic (1)

(1) Instituto de Ictiologia del Nordeste, Facultad de Ciencias Veterinarias Universidad Nacional del Nordeste, Sargento Cabral 2139 (3400), Corrientes, Argentina
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Author:Hernandez, David R.; Santinon, Juan J.; Sanchez, Sebastian; Domitrovic, Hugo A.
Publication:Latin American Journal of Aquatic Research
Date:Nov 1, 2014
Words:6421
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