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Estudio de inocuidad de Salmonella enterica, subespecie enterica, serotipo enteritidis, var. danysz, lisina negativa en pollos parrilleros.

RESUMEN

Se realizo un estudio con la cepa Salmonella enterica, subespecie enterica, serotipo Enteritidis, var. Danysz, lisina negativa, principio activo de un producto comercial usado para el control biologico de roedores, a fin de evaluar su inocuidad en pollos parrilleros. Se usaron 120 aves de 1 dia de edad de ambos sexos de la linea Cobb Vantress divididas en 3 grupos. El grupo A recibio un alimento comercial que contenia 20% del producto raticida al 5, 6 y 7 dia de edad. El grupo B fue inoculado en el buche al 8 dia de edad con [10.sup.8] UFC de la bacteria (1ml) y el grupo C permanecio como control. Se registraron signos clinicos, mortalidad, peso corporal individual por semana, respuesta serologica y la recuperacion de la cepa experimental de Salmonella en higado y bazo. A partir del quinto dia del desafio y durante una semana, dos aves por grupo fueron necropsiadas. Adicionalmente, se tomaron muestras de sangre a todas las aves a los 21, 28 y 35 dias post desafio y en las aves sacrificadas, para la deteccion de anticuerpos contra Salmonella mediante la prueba de aglutinacion en placa. No se encontraron lesiones macroscopicas compatibles con infeccion por Salmonella. Los resultados del estudio bacteriologico y serologico fueron negativos a Salmonella sp; sin embargo, un ave a los 28 dias y 2 aves a los 35 dias post desafio (3/18) del grupo A dieron positivo a la prueba de aglutinacion para Salmonella sp. De estas, en una se aislo Salmonella sp. tipificada como lisina positiva. Los pesos corporales a la setima semana no mostraron diferencias significativas entre grupos.

Palabras clave: Salmonella, roedores, lisina, broiler

ABSTRACT

The Salmonella enterica, serotipe Enteritidis, var Danysz, negative lysine is used as a component in a product for biological control of rodents. The present study evaluated the innocuosness of the strain in 120 1-day old Cobb Vantress broiler chicks of both sexes. They were divided into 3 groups: Group A was fed at 5, 6 and 7 days of age with a commercial broiler feed containing 20% of the rat poison, Group B received 1 ml containing [10.sup.8] CFU of the bacteria in the crop at 8 days of age, and Group C was kept as a control group. Clinical signs, mortality, recovery of the experimental strain used from liver and spleen, body weight, and serological response were recorded. All birds were weighed every week. Two chicks were ramdomly selected and necropsied from each group on daily basis since the fifth day and for a week. Serum samples and selected tissues were collected for bacteriological culture. Additionally, serum samples were collected at day 21, 28, and 35 after challenge. The bacteriological and serological analysis were negative for Salmonella sp.; however, one bird on day 28 and 2 birds on day 35 after challenge from group A were positive in the agglutination test to Salmonella sp. In one of them, a Salmonella sp. positive lysine was isolated. Body weight differences among groups were not found by the seventh week.

Key words: Salmonella, rodents, lysine, broilers

INTRODUCCION

La salmonelosis en humanos es una de las enfermedades de transmision alimentaria de gran importancia en salud publica. La gastroenteritis causada por Salmonella en el hombre ha sido usualmente asociada al consumo de productos avicolas (Parimal et al., 2001). Desde el punto de vista de la salud publica, las diferencias de virulencia entre cepas de Salmonella enteritidis en pollos es de menor relevancia que las diferencias en su habilidad de propagacion en el lote y en su capacidad de contaminar los huevos de las aves infectadas (Gast y Benson, 1996). La S. enteritidis ocasiona una disminucion de la ganancia de peso en pollos jovenes y afecta la uniformidad de los lotes, resultando en considerables perdidas economicas para los productores (Dhillon et al., 1999).

La Samonella se encuentra en el agua, en el medio ambiente y en el alimento, por lo que los huevos de las reproductoras pueden ser contaminados a partir de diversas fuentes. El huevo, dependiendo del serotipo, la agresividad y la adaptacion de la Salmonella al huesped, puede tener cuatro rutas de contaminacion: ovarios, oviducto, cloaca y medio ambiente (Baxter-Jones, 1996). La diseminacion horizontal en la parvada puede ocurrir tambien a partir de diversas fuentes (Hamilton, 2003). Los pollitos recien nacidos son altamente susceptibles a la infeccion por Salmonella enteritidis (Gast y Holt, 1999).

La importancia de los roedores como diseminadores y reservorios de Salmonella es conocida (Henzler y Opitz, 1992). Se ha encontrado una relacion entre presencia de roedores y galpones de ponedoras con medio ambiente positivos a Salmonella, y donde, ademas, se observa una alta prevalencia de S. enterica, serotipo Enteritidis, en ratones de estos galpones (Garber et al., 2003).

Los roedores son transmisores de enfermedades que afectan al hombre y a los animales, como la peste bubonica, salmonelosis, brucelosis, leptospirosis, listeriosis, encefalitis y otras que llegan a traves de sus mordeduras, orina, heces, y de las pulgas que los parasitan (Collazos y Castro, 1997). En la industria avicola, los roedores, ademas, consumen y deterioran (rotura de sacos y alimento contaminado con orina) una importante cantidad de alimento destinado a las aves. Se estima que el alimento que consumen por dia equivale al 10% de su peso corporal. Ademas, ocasionan danos al material de empaque, destrozan las bandejas para huevos, se comen los huevos en los galpones y en bodegas de almacenamiento, atacan a las aves, matan a los pollitos y deterioran las instalaciones (Diaz, 1999).

En el control de roedores se emplean principalmente raticidas quimicos, tanto de accion rapida como de accion lenta o anticoagulantes. Los primeros presentan la desventaja de causar un sindrome de rechazo por parte de los roedores, ya que aprenden a asociar muerte con consumo (Collazos y Castro, 1997). Los segundos requieren mayor tiempo de exposicion y debido a que su antidoto especifico es la vitamina K, la cual se encuentra en la racion de las aves, se presentan problemas de ineficacia.

En algunos paises, incluyendo el Peru, se viene usando el control biologico a traves de la bacteria Salmonella enterica, sub especie enterica, serovar Enteritidis, var. Danysz, segun la nomenclatura mas reciente (Popoff, 2001). La cepa fue caracterizada por el Centro Colaborador de la OMS para Enteropatogenos, el Servicio de Laboratorios de Salud Publica en Colindale, Londres (PHLS, por las siglas en ingles), clasificandose como Salmonella enteritidis, e indicandose que la caracteristica bioquimica mas notoria, y que la diferencia de la mayoria de cepas de Salmonella sp., es ser lisina negativa (Threlfall, 1996).

Se considera que este metodo es mas eficaz que el quimico, porque produce una epizootia que puede causar la eliminacion de la poblacion de roedores sin que los pollos de carne se vean afectados con una infeccion clinica o subclinica por esta bacteria; sin embargo, hay otros riesgos para las aves que deben ser investigados.

MATERIALES Y METODOS

Lugar de estudio

La fase de campo se realizo en las instalaciones de la unidad experimental del Laboratorio de Patologia Aviar y el estudio bacteriologico se realizo en el Laboratorio de Microbiologia de la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos.

Animales y tamano de muestra

En el calculo del tamano muestral se considero informacion de experimentos previos donde se evaluo el peso corporal de aves inoculadas experimentalmente con Salmonella sp. y Salmonella enteritidis en diferentes rangos (13-19%). El numero de aves necesario para el experimento, segun el "Tamano de Muestra de Comparacion de Medias", fue de 15 como minimo. Sin embargo, para el estudio se utilizaron 120 pollos de carne de la linea Cobb Vantress de ambos sexos de un dia de edad, que fueron distribuidos en 3 grupos. Se sacrificaron 12 aves en el momento de la recepcion para la evaluacion bacteriologica y serologica con la finalidad de comprobar su estado libre de Salmonella. Se les suministro agua potable y alimento ad limitum, usandose un alimento comercial para pollos de carne.

Diseno experimental

Se usaron grupos de 36 aves cada uno. El grupo A fue alimentado con el producto raticida (Biorat[R]) para control biologico (20% de la racion) en el 5, 6 y 7 dia de edad, el grupo B fue inoculado directamente en el buche al 8 dia de edad con un cultivo de la bacteria Salmonella enterica, subespecie enterica, serotipo Enteritidis, var. Danysz, lisina negativa (1ml con [10.sup.8] UFC) y el grupo C fue el control negativo.

El periodo experimental fue de 7 semanas, donde se registraron signos clinicos y la mortalidad. Ademas, se registro semanalmente el peso de los pollitos.

Evaluacion patologica y serologica

Se sacrificaron 2 aves/dia/grupo al azar por 7 dias y a partir del 5 dia post inoculacion (13 dias de edad) o del termino de la suplementacion del raticida (12 dias de edad). Las aves del grupo control se sacrificaron a partir de los 12 dias de edad. Ademas, se sacrificaron 2 aves por grupo a los 35 dias de edad. Se registraron los cambios patologicos macroscopicos en las necropsias.

El estudio bacteriologico se realizo mediante cultivo indirecto (en caldo de enriquecimiento) y cultivo directo (en agar) de muestras de higado y bazo, y a traves de pruebas bioquimicas en las colonias resultantes. Se utilizaron los medios LIA, KIA, prueba de produccion de H2S, prueba de motilidad o SIM, urea y la prueba de API 20.

Se tomaron muestras de sangre a las aves sacrificadas y a la totalidad de aves los dias 21, 31 y 40 post inoculacion o al termino de la suplementacion. Los sueros se analizaron mediante la prueba de aglutinacion rapida en placa para Salmonella sp. (Antigeno Nobilis[R] Antigen Intervet).

Analisis estadisticos

Se evaluo la mortalidad, peso corporal, signos clinicos, lesiones y el porcentaje de recuperacion de Salmonella a partir de muestras de higado y bazo, asi como la respuesta serologica a la prueba de aglutinacion en placa.

La mortalidad y el peso corporal se correlaciono con los demas parametros mencionados. El peso corporal se analizo mediante ANOVA y la prueba de diferencias de medias de Duncan.

RESULTADOS Y DISCUSION

Los sueros iniciales y el estudio bacteriologico del ciego y del saco vitelino al primer dia de edad fueron negativos a anticuerpos contra Salmonella sp. y la presencia de Salmonella, respectivamente. Asimismo, los resultados de los examenes del alimento consumido por las aves indicaron que se encontraba libre de contaminacion con Salmonella sp. Sin embargo, en una prueba se encontro una cepa con imagen similar a Salmonella, que con la prueba API 20 se logro identificar como Citrobacter freundi.

Ninguna de las aves de los grupos tratados ni del grupo control mostraron depresion, diarrea, disminucion en el consumo de alimento o agua de bebida ni ningun otro signo clinico de enfermedad, que son caracteristicos de las afecciones producidas por Salmonella sp. (Dhillon et al., 1998). No obstante, se tuvo una mortalidad acumulada del 4.4%, cifra esperada en la crianza de pollos parrilleros en bateria. Las causas de mortalidad fueron colibacilosis y estres de calor. No se encontraron lesiones compatibles con infeccion por Salmonella enteritidis en las aves sacrificadas (Gorham et al., 1994).

La evaluacion serologica se hizo para determinar la capacidad del raticida en producir seroconversion positiva en las aves. Sin embargo, todas las muestras de los grupos B y C fueron negativas a anticuerpos contra Salmonella sp., con excepcion de una muestra colectada en el dia 28 y 2 muestras del dia 35, ambas del grupo A, que hacen un total de 3/18 aves positivas a la prueba de aglutinacion de placa para Salmonella sp.

Las aves serologicamente positivas no se vieron afectadas en el peso corporal, ni manifestaron signos clinicos o mostraron lesiones a la necropsia. Se presumio que la seroconversion de las tres aves se debio a la infeccion por la cepa de Salmonella usada en el experimento. En el examen bacteriologico se logro aislar una bacteria en una de las tres aves, y que mediante la prueba bioquimica se demostro que era Salmonella sp. lisina positiva.

Los analisis bacteriologicos realizados a partir de las muestras de higado y bazo colectadas en las aves sacrificadas con el fin de recuperar la cepa de desafio fueron negativos, indicando que la Salmonella enterica lisina negativa no produce una diseminacion sistemica, aun cuando el periodo de coleccion de muestras para el presente trabajo fue en la etapa de mayor probabilidad de recuperacion bacteriana (5 a 11 dia post inoculacion), tal como fue obtenido por otros investigadores, pero usando para el desafio una cepa de Salmonella lisina positiva (Gast y Benson, 1996; Gast y Holt, 1999; Parimal et al., 2001; Dhillon et al., 1999).

En base a la respuesta de la cepa de Salmonella enteritidis con relacion a la utilizacion de la lisina, se puede inferir que la Salmonella aislada fue diferente a la utilizada en el experimento. La S. enteritidis es una bacteria ampliamente distribuida, con multiples hospederos y puede llegar a una parvada por transmision vertical y horizontal, por contaminacion de otros animales como aves silvestres, roedores e insectos, alimento contaminado y polvo (Gast, 2003). Debido a que el experimento no fue realizado en unidades de estricto aislamiento, los roedores o aves silvestres podrian haber contaminando el alimento o el agua a bajos niveles llegando a afectar a uno de los pollos.

Existen reportes que demuestran una disminucion del peso corporal (13-19%) en las aves por infecciones con Salmonella sp. aunque no desarrollan la enfermedad ni se presentan casos de mortalidad (Dhillon et al., 1998; Parimal et al., 2001). Sin embargo, en el presente experimento no se afectaron los parametros productivos de las aves desafiadas con la cepa en estudio.

CONCLUSIONES

* La ausencia de signos clinicos, lesiones y mortalidad en las aves inoculadas o alimentadas con Salmonella enterica, sub especie enterica, serotipo enteritidis, var. Danysz, lisina negativa, evidencian que este germen no es patogenico, y por lo tanto se le puede considerar como inocua para las aves.

* La ocurrencia de serorreaccion de algunas aves contra esta bacteria no permite concluir que el raticida que contiene esta bacteria no ocasiona infecciones subclinicas.

LITERATURA CITADA

(1.) Baxter-Jones, C. 1996. Control de la transmision vertical de Salmonella. Avicultura Profesional 14: 18-19.

(2.) Collazos, R; J. Castro. 1997. Los roedores daninos: algunos aspectos del control quimico y bacteriologico. Rev. Inv. Pec. IVITA 8: 1-9.

(3.) Dhillon, A.S.; B. Alisantosa; H.L. Shivaprasad; O. Jack; D. Schaberg; D. Bandli. 1999. Pathogenicity of Salmonella enteritidis phage types 4, 8 and 23 in broiler chicks. Avian Dis. 43: 506-515.

(4.) Dhillon, A.S.; O.K. Jack; H.L. Shivaprasad; D.M. Schaberg; D.V. Bandli. 1998. Experimental infection of Salmonella enteritidis in broilers chicks. Proc. 50th Western Poultry Disease Conference. Davis, California, USA.

(5.) Diaz, F.J. 1999. Bioseguridad en el control de plagas. En: Bioseguridad en la industria avicola. p 115-130. Ed. Quebecor Impreandes. Santa Fe de Bogota, Colombia.

(6.) Garber, L.; M. Smeltzer; P. Fedorka-Cray; S. Ladely; K. Ferris. 2003. Salmonella enterica serotipe Enteritidis in table egg layer house enviroments and in mice in U.S. layer houses and associated risk factors. Avian Dis. 47: 134-142.

(7.) Gast, R.K. 2003. Paratyphoid infections. Diseases of Poultry. 11th ed. p 583-599. Iowa State Press. USA.

(8.) Gast, R.K.; P.S. Holt. 1999. Experimental horizontal transmission of Salmonella enteritidis strains (Phage types 4, 8 and 13A) in chicks. Avian Dis. 43: 774-778.

(9.) Gast, R.K.; S.T. Benson. 1996. Intestinal colonization and organ invasion in chicks experimentally infected with Salmonella enteritidis phage type 4 and other phage types isolated from poultry in the United States. Avian Dis. 40: 853-857.

(10.) Gorham, S.L.; K. Kadavil; E. Vaughan; H. Lambert; J. Abel; B. Pert. 1994. Gross and microscopic lesions in young chickens experimentally infected with Salmonella enteritidis. Avian Dis. 38: 816-821.

(11.) Hamilton, E. 2003. Salmonella enteritidis y Salmonella typhimurium. Poultry Industry Council, Canada. Disponible en: http://www.poultryindustry council.ca/Factsheets/Factsheets/ fact105.htm

(12.) Henzler, D.J.; H.M. Opitz. 1992. The role of mice in the epizootiology of Salmonella enteritidis infection on chicken layer chicks. Avian Dis. 36: 625-631.

(13.) Parimal, R.; A.S. Dhillon; H.L. Shivaprasad; D.M. Shaberg; D. Bandli; S. Johnson. 2001. Pathogenicity of different sero-groups of avian salmonellas in SPF chickens. Avian Dis. 45: 922-937.

(14.) Popoff, M.Y. 2001. Antigenic formulas of the Salmonella serovars. 8th ed. WHO Collaborating Centre for Reference and Research on Salmonella, Institut Pasteur. Paris France. 6 p.

(15.) Threlfall, E.J. 1996. Report on work carried out on Salmonella enteritidis var. Issatschenko. Laboratory of Enteric Pathogens, Central Public Health Laboratory. London, UK.

Natalia Rodriguez A. (1), Eliana Icochea D'A. (2), Sonia Calle E. (3) y Norma Noe M. (4)

(1) Practica privada. E-mail: nataliarodriguezayala@hotmail.com

(2) Laboratorio de Patologia Aviar, FMV-UNMSM

(3) Laboratorio de Microbiologia y Parasitologia Veterinaria, FMV-UNMSM

(4) Laboratorio de Medicina Veterinaria Preventiva, FMV-UNMSM
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Author:Rodriguez A., Natalia; Icochea D'A., Eliana; Calle E., Sonia; Noe M., Norma
Publication:Revista de Investigaciones Veterinarias del Peru (RIVEP)
Date:Jan 1, 2006
Words:3015
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