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Especies de Ciatostomas Resistentes al Albendazol en Equinos, Cuba.

SPECIES OF CYATHOSTOMIN RESISTANT TO ALBENDAZOLE IN EQUINES, CUBA

INTRODUCCION

Los programas tradicionales de control de parasitos incluyen el tratamiento periodico con antihelminticos. Esta practica y el empleo inadecuado de drogas antiparasitarias condujo a la aparicion de nematodos resistentes en ganaderias equinas en todo el mundo (Kaplan y Nielsen, 2010; Scott et al., 2015).

La gran mayoria de los helmintos gastrointestinales de los equinos estan representados por los miembros de la familia Strongylidae, con al menos 63 especies (Lichtenfels et al., 2008), de las cuales se reportan 24 en Cuba (Perez-Vigueras, 1936; Varus y Valle, 1966). Por otra parte, solo se dispone en el pais de tres publicaciones referidas a la eficacia antihelmintica de la ivermectina en el equino (Arece et al., 2002; Salas-Romero et al., 2014, 2017), mientras que un estudio reciente se refiere a la baja eficacia del albendazol (ABZ) en el control de los ciatostomas de los equinos de la ciudad de Camaguey y zonas aledanas (SalasRomero et al., 2017), sin indicar las especies resistentes.

La resistencia a los benzimidazoles (BZ) es la mas frecuente en diversos paises. El 95% de las poblaciones de ciatostomas de los rebanos equinos en el sudeste de EEUU son resistentes a los BZ (Kaplan, 2004). Se conoce que una mutacion del gen de la beta tubulina en nematodos de rumiantes y en varias especies comunes de ciatostomas les confiere la capacidad de resistencia a este grupo farmacologico (Garcia et al., 2013; Matthews, 2014). En Cuba, la falta de presentaciones comerciales de antiparasitarios de uso en equinos, ha obligado a veterinarios y propietarios a emplear las presentaciones indicadas en otras especies de hospederos para el control de las helmintiasis (Salas-Romero et al., 2017).

Los helmintos intestinales de los caballos son mayormente estudiados por medio de la necropsia helmintologica (Reinemeyer et al., 2015), lo que resulta considerablemente costoso. Por otro lado, el examen de la nematofauna posterior a la desparasitacion ha sido realizada de forma exitosa por investigadores de Ucrania (Kuzmina et al., 2016). Por estas razones, el objetivo de este estudio fue evaluar la eficacia de los antihelminticos empleados en el control de los estrongilos de los caballos del rancho Turiguano, en Cuba, y determinar las especies resistentes al albendazol.

MATERIALES Y METODOS

Ubicacion y Animales

El trabajo se llevo a cabo entre noviembre de 2015 y enero de 2016 en el rancho--Turiguano, el cual esta situado a 1 km de la costa norte del municipio Moron, actual provincia de Ciego de Avila, Cuba. El rancho cuenta con caballos de la raza Quarter Horse.

Los registros veterinarios del centro indicaban que en los ultimos tres anos se realizaron entre tres y cuatro desparasitaciones anuales a toda la masa equina. Ademas, el personal veterinario a traves de entrevistas refirio que dicha practica se realiza desde hace mas de 10 anos. En este periodo, salvo una vez en la cual se empleo Baymec (Bayer, Alemania), los equinos se desparasitaron con Labiomec (ivermectina), Albendazol (albendazol micronisado) o Labiozol (albendazol sulfoxido), producidos por Labiofam, Cuba. La posible alternancia o seleccion de los medicamentos siempre estuvo determinada por su disponibilidad en el mercado nacional.

Muestras de Heces

Todos los animales fueron desparasitados 86 dias antes del muestreo inicial, como parte del programa de control antihelmintico rutinario. Se recolectaron muestras de heces a 65 equinos, de los cuales se seleccionaron 33 yeguas vacias o con al menos cuatro meses de gestacion (debido al efecto teratogenico del albendazol al inicio de la gestacion), con edades entre 3 y 14 anos, que presentaron 675 huevos de estrongilos por gramo de heces (hpg) como minimo.

Se recolecto una segunda muestra de heces (20 g) del recto de las yeguas seleccionadas en el primer dia del estudio (dia 0, dia en que se administro el antihelmintico) y una tercera muestra 14 dias despues. Las muestras se transportaron en una nevera refrigerada hasta el Laboratorio de Parasitologia de la Universidad de Camaguey "Ignacio Agramonte Loynaz" y procesadas antes de las 72 h posteriores a su toma. El conteo fecal de huevos se realizo por la tecnica de McMaster con una sensibilidad de 25 hpg (Nielsen et al, 2013).

Tratamientos

Se evaluo la eficacia de los dos principios activos de uso frecuente en los equinos de Rancho Turiguano: albendazol en sus dos presentaciones comerciales, Albendazol (ABZ-M) (albendazol micronizado) y Labiozol (ABZ-S) (albendazol sulfoxido), ambos en dosis de 10 mg/kg de peso vivo (PV) y la ivermectina (IVM) al 1% (Labiomec(r)) a razon de 0.2 mg/kg PV.

Los antiparasitarios se administraron via oral, teniendose 6 yeguas para el ABZ-M, 12 yeguas para el ABZ-S y 15 yeguas para IVM. Los grupos de tratamientos fueron conformados a eleccion del propietario.

Analisis de los Datos

La eficacia del tratamiento se determino mediante el test de reduccion de conteo fecal de huevos de estrongilos (TRCFH), basado en la diferencia entre las medias aritmeticas del numero de hpg antes y despues del tratamiento, expresada en porcentaje.

Los resultados del TRCFH se clasificaron de acuerdo con lo recomendados para IVM (Nielsen et al, 2013) y en el caso del ABZ se emplearon los valores sugeridos para los BZ fenbendazol y oxibendazol (Nielsen et al., 2013), donde:

--IVM: (1) Presencia de resistencia, cuando la reduccion del conteo fecal de huevos (RCFH) es <95%; (2) Sospechoso de resistencia, cuando la RCFH es entre 95 y 98%; (3) Susceptible (ninguna evidencia de resistencia), cuando la RCFH es >98 y 99%; (4) Eficacia esperada, cuando la RCFH es >99.0%.

--ABZ : (1) Presencia de resistencia, cuando la RCFH es <90%; (2) Sospechoso de resistencia, cuando la RCFH es entre 90 y 95%; (3) Susceptible (ninguna evidencia de resistencia) cuando la RCFH es entre >95 y 98%; (4) Eficacia esperada, cuando la RCFH es >98%.

Identificacion de Helmintos Resistentes

Se seleccionaron cuatro equinos cuya reduccion del hpg mostro resistencia antihelmintica al ABZ (con valores entre 1075 y 1850 hpg). Estos animales se desparasitaron con IVM el dia 17 (tres jornadas despues de confirmado el hpg al dia 14) con el objetivo de colectar la nematofauna que sobrevivio al tratamiento con ABZ (Kuzmina et al., 2016).

La colecta de los nematodos expulsados se realizo en dos tomas entre las 24 y a las 48 h del tratamiento con IVM, siguiendo la variacion en la dinamica de expulsion (Kuzmina et al., 2005). Los helmintos se lavaron con NaCl 0.9% durante 2 h y posteriormente se almacenaron en alcohol al 70%.

Para la clasificacion de los helmintos, los parasitos se sumergieron en lactofenol por 30 min y luego se colocaron entre porta y cubre objeto para ser observados en un microscopio Leica DM 300. La identificacion de los especimenes se baso en las claves de clasificacion de Lichtenfels et al. (2008) y Tolliver (2001). Las fotos fueron tomadas con una camara digital Sony DSC-W800.

El material comprobatorio esta depositado en las Colecciones Zoologicas del Instituto de Ecologia y Sistematica del Ministerio de Ciencia, Tecnologia y Medio Ambiente de Cuba, La Habana (Numeros de deposito: 11.7044; 11.7045; 11.7046; 11.7048 y 11.7049).

RESULTADOS

El muestreo pretratamiento solo mostro dos equinos con valores inferiores a 500 hpg, pero ninguno con valor cero. La media de hpg fue de 2479, con un rango de 400 a 4200. En esta poblacion, el 40% de los equinos expulso al medio el 80% de los huevos de estrongilos contabilizados en el material fecal.

En el proceso de entrevista, el personal veterinario del rancho refirio que habian notado que los equinos expulsaban un mayor numero de parasitos en el material fecal asl desparasitar con ivermectina en comparacion con los tratados con albendazol, y que al tratar estos equinos con ivermectina pasadas una o dos semanas, volvian a expulsar nematodos en el material fecal.

El ABZ se evaluo en 18 caballos y mostro una eficacia del 35% (Cuadro 1), variando entre el 33 y el 38% de eficacia para sus dos presentaciones. En el caso de la IVM se observo una eficacia del 99.87% (Cuadro 1), donde solo se detectaron dos yeguas con valores postratamiento de 25 hpg.

Los estrongilos identificados pertenecen a los generos Cylicocyclus, Cyathostomum y Cylicostephanus. De un total de 1631 nematodos colectados se llego a identificar 493, pertenecientes a las especies Cylicocyclus nassatus (Looss, 1900), Cyathostomum catinatum (Looss, 1900), Cylicostephanus longibursatus (Yorke y Macfie, 1918), Cylicostephanus goldi (Boulenger, 1917) y Cylicostephanus minutus (Yorke y Macfie, 1918), las cuales representaron el 78.5, 7.7, 6.5, 3.9 y 3.4%, respectivamente. Es importante resaltar que Cylicostephanus minutus (Figura 1) no habia sido reportado con anterioridad en caballos en Cuba (Los nematodos no identificados se conservaron en alcohol al 70% a -20[grados]C para estudios posteriores de secuenciamiento del gen de la [beta] tubulina).

En Cylicostephanus minutus, las papilas submediales se encuentran en el medio entre el cuello de las fauces del extremo anterior de la boca y se asemejan a las antenas de un caracol (Fig. 1-a), la cuticula muestra estriaciones (Fig. 1-b) y presenta una ligera contraccion en el cuello (Fig. 1-c). Las paredes de la capsula bucal se observan simetricas y rectas hasta la salida en las fauces del extremo anterior de la boca (Fig. 1d). Es uno de los ciatostomas mas pequenos. La cola de las hembras es gruesa, en cuyo extremo presenta una pequena pua o espiga ligeramente inclinada (Fig. 1). Los machos presentan una pequena bolsa copulatoria que es aproximadamente tan larga como ancha (no se muestras imagenes por la baja calidad de la cola de los machos observados).

DISCUSION

El promedio de hpg encontrado en el presente estudio constituye el mayor valor reportado en equinos en Cuba, con valores de media previos que oscilaron entre 1445 (Salas-Romero et al., 2014) y 1630 (Salas-Romero, 2012). Por otra parte, la distribucion de la liberacion de huevos de estrongilos en el material fecal constituye uno de los elementos en los cuales es basada la desparasitacion selectiva en estos hospederos (Nielsen et al, 2014; Nielsen, 2015).

En paises de climas templados, el 80% de los huevos de estrongilos son expulsados por el 11-20% de los caballos del rebano (Kaplan y Nielsen, 2010; Wood et al., 2012; Lester et al., 2013; Relf et al., 2013), por lo que al desparasitar una pequena parte del hato se logra disminuir teoricamente la carga contaminante en las pasturas manteniendo una gran poblacion parasitaria en refugio (Nielsen et al., 2014; Nielsen, 2015). Sin embargo, en el presente estudio para estas condiciones, el 80% de la ovoposicion total se presento en cerca de la mitad de los equinos, y la otra parte presentaron conteos de hasta 1223 hpg, valor que supera las medias reportadas para la mayoria de las poblaciones equinas en el mundo (Kaplan y Nielsen, 2010; Wood et al., 2012; Lester et al., 2013; Relf et al., 2013).

Actualmente, los valores sugeridos por la literatura como punto de corte en la desparasitacion selectiva en equinos se encuentran entre 200 y 500 hpg (Nielsen et al., 2014; Nielsen, 2015). Solo dos animales presentaron valores inferiores en el momento del diagnostico inicial, lo que muestra la necesidad de determinar los posibles puntos de corte del hpg para la desparasitacion selectiva en equinos de paises tropicales.

La resistencia antihelmintica de los ciatostomas a los BZs se informo por primera vez en la decada de 1960, como consecuencia de las estrategias de control contra los grandes estrongilos (Peregrine et al., 2014). Actualmente la resistencia a los BZs resulta la mas prevalente en los ciatostomas (Traversa et al., 2012), reportandose en al menos 14 paises (Peregrine et al., 2014). Por su parte, la periodicidad de los tratamientos antihelminticos en el Rancho Turiguano imprime una alta presion de seleccion sobre la poblacion parasitaria (Scott et al., 2015).

Otras investigaciones reportan 100% de efectividad del ABZ en equinos en dosis de 5 y 10 mg/kg de peso vivo en Ucrania y Sudan, respectivamente (Kuzmina y Kharchenko, 2008; Imam et al., 2010). Esta situacion es similar a los resultados del TRCFH en San Vicente y Triangulo Tres, reportados en Camaguey (Salas-Romero et al., 2017) con eficacia de 99.9 y 99.7%, respectivamente, utilizando la presentacion local de ABZ-M, lo que demuestra que esta presentacion puede alcanzar una alta eficacia ante poblaciones de helmintos susceptibles. No obstante, la falta de presentaciones formuladas especificamente para caballos en Cuba, puede haber sido un elemento catalizador de resistencia antihelmintica en esta especie, similar a lo sugerido por Stratford et al. (2014), quienes refieren que el empleo de antihelminticos parenterales para bovinos pudo influir en el desarrollo de resistencia a las lactonas macrociclicas (LM) en el Reino Unido. Por otro lado, la alta eficacia de la IVM en el control de los nematodos de los equinos se informo con anterioridad en Cuba (Arece et al., 2002; Salas-Romero et al., 2014) y en el mundo (Fangama et al., 2013; Perez-Alvarez et al., 2013).

La situacion de la resistencia antihelmintica en los caballos de Cuba resulta mas compleja que en otras partes del mundo, ya que los criadores, cuidadores y veterinarios de equinos en el pais, solo tienen acceso a dos principios activos de antihelminticos, los cuales, por demas, no constituyen presentaciones fabricadas para su administracion a esta especie. Ademas, el traslado a ferias y eventos hipicos o de rodeo dentro del pais o su empleo como medio de transporte, hace que los equinos presenten un potencial diseminador de la resistencia, muy superior a otras especies animales.

Los ciatostomas estan representados por cerca de 51 especies (Matthews, 2014), donde 12 se identifican como las mas prevalentes, constituyendo el 99% del total de la poblacion de ciatostomas en el intestino de los equinos (Kaplan, 2002; Kuzmina y Kharchenko, 2008).

En Ukrania, las especies Cylicocyclus nassatus, Cyathostomum catinatum y Cylicostephanus longibursatus resultaron ser las especies resistentes al albendazol mas abundantes (5 mg/kg), representando el 68.6, 18.1 y 5.8% de los colectados pos-tratamiento con una LM, respectivamente (Kuzmina y Kharchenko, 2008), aunque tambien se detectaron ejemplares resistentes de C. goldi y C. minutus. Estas especies se encuentran entre las mas frecuentes en la necropsia en equinos tratados previamente con fenotiazina, pirantel, tiabendazol y febendazol y diagnosticados con resistencia a estos productos en equinos de Kentucky, EEUU (Lyons et al., 2007).

En Cuba, solo se dispone de dos estudios que identificaron la nematofauna equina local, el primero en 1936 (Perez-Vigueras, 1936) y el segundo en 1966 (Varus y Valle, 1966). Entre ambos se identificaron 24 especies de estrongilos.

El hallazgo de Cylicostephanus minutus por vez primera, unido a la deteccion en 2012 de Poteriostomum sp (Salas-Romero et al., 2014), confirma lo planteado por dichos autores sobre la probable presencia de un mayor numero de especies presentes en los equinos de Cuba, aun por identificar.

Este trabajo constituye el segundo informe de baja eficiencia antihelmintica en equinos en Cuba, luego de lo reportado en Camaguey por Salas-Romero et al. (2017). Los riesgos que implica el uso extendido de presentaciones parenterales de antihelminticos, desarrollados para su aplicacion en otras especies y otras vias de administracion, y la falta de presentaciones comerciales para equinos en Cuba, unido a los hallazgos del presente estudio, permiten suponer que la resistencia antihelmintica podria ser un fenomeno ampliamente difundido en los rebanos equinos del pais.

http://dx.doi.org/10.15381/rivep.v28i3.13347

Agradecimientos

Es preciso agradecer la colaboracion brindada por los investigadores ucranianos Tetiana A. Kuzmina y Vitaliy Kharchenko en la identificacion de algunos especimenes.

LITERATURA CITADA

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Josmel Salas-Romero (1,4) *, Karel Gomez (1,5) *, Yanise Chicoy (2), Jose C. Yero (1), Edel Valle (3), Anay Delgado-Martinez (2), Jorge E. Salas-Romero (1), Amilcar Arenal (2)

(1) Laboratorio de Parasitologia, (2) Laboratorio de Bioquimica, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad de Camaguey Ignacio Agramonte Loynaz, Camaguey, Cuba

(3) Empresa Nacional para la Proteccion de la Flora y la Fauna, La Habana, Cuba

(4) E-mail: josmel.salas@reduc.edu.cu

(5) E-mail: karel.gomez@reduc.edu.cu

* Josmel Salas y Karel Gomez aportaron por igual en la realizacion del estudio

Recibido: 20 de julio de 2016

Aceptado para publcacion: 18 de marzo de 2017

Leyenda: Figura 1. Especimen de Cylicostephanus minutus (Izquierda: cabeza; Derecha: cola de la hembra)
Cuadro 1. Test de reduccion del conteo fecal de huevos (hpg) de
estrongilos en equinos dosificados con albenzadol (ABZ) e
ivermectina (IVM) en yeguas del rancho Turiguano, Ciego de Avila
(Cuba)

Medicamento (1)   Yeguas     HPG Dia 0      HPG Dia 14     RCFH (2)
                           Media (rango)   Media (rango)     (%)

ABZ-M               6          2413            1496           38
                            (1025-3900)     (400-2675)
ABZ-S               12         2744            1811           33
                            (675-4200)      (325-3650)
Total ABZ           18         2633            1718           35
IVM                 15         2575              3          99.87

Medicamento (1)   LIIC (3)
                    (%)

ABZ-M                8

ABZ-S                4

Total ABZ            7
IVM                 99
                            (1125-3775)       (0-25)

(1) ABZ-M: albendazol micronizado; ABZ-S: albendazol sulfoxido

(2) Porcentaje de reduccion del conteo fecal de huevos (% RCFH)

(3) Limite inferior del intervalo de confianza 95%
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Author:Salas-Romero, Josmel; Gomez, Karel; Chicoy, Yanise; Yero, Jose C.; Valle, Edel; Delgado-Martinez, An
Publication:Revista de Investigaciones Veterinarias del Peru (RIVEP)
Date:Jul 1, 2017
Words:4059
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