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Efectos toxicologicos generados por la exposicion a triclorfon en un modelo inducido experimentalmente en cachama blanca (Piaractus brachvpomus).

Toxicity of trichlorfon exposure using an experimentally induced model with Silver Pacu (Piaractus brachypomus)

Efeitos toxicologicos no peixe Pirapitinga (Piaractus brachvpomus) gerado pela exposigao a triclorfon em um modelo induzido experimentalmente

Introduccion

Los sistemas de produccion agricola y pecuario emplean de manera rutinaria compuestos quimicos en diferentes procesos productivos, incluyendo control de plagas, maduracion de frutos, eliminacion de malezas, control de vectores, entre otros (8). La mayoria de xenobioticos finalmente terminan acumulandose en ecosistemas acuaticos por medio de diferentes procesos de escorrentia y lixiviacion (40), afectando asi organismos no blancos de su accion (41).

Dentro del grupo de los pesticidas sinteticos mas empleados se destacan los organofosforados (31), siendo el Triclorfon (TCF) uno de los organofosforados (OPs) mas utilizados en agricultura para el control de plagas en los diferentes cultivos y como ectoparasiticida en ganaderia (10) y acui cultura (22). Recientemente, el TCF ha sido empleado en medicina humana para el tratamiento de esquistosomiasis (17) y fue usado como alternativa terapeutica en enfermedades de tipo neurodegenerativo como el Alzheimer (15, 17).

El TCF conocido comercialmente como Neguvon, Clorofos, Dipteres o Metrifonato, es un potente inhibidor de la actividad Acetilcolinesterasa (AChE), e induce la produccion de radicales libres y danos del sistema anti oxidante (46), generando asi estres oxidativo y peroxidacion lipidica (42). Algunos autores han descrito que el TCF tambien puede inhibir la esterasa blanco de neuropatia (NET), produciendo asi el sindrome de neurotoxicidad retardada (35). Asimismo, se ha descrito que el uso inadecuado e indiscriminado de esta sustancia genera intoxicaciones agudas caracterizadas por sindrome colinergico y hemolisis (1, 25).

De la misma manera, se ha propuesto que la exposicion a este xenobiotico puede generar efectos teratogenicos y mutagenicos en diferentes modelos animales incluyendo al hombre (37, 39). Adicionalmente, se han reportado alteraciones en la respuesta inmune en animales domesticos sometidos a la exposicion aguda y cronica de forma experimental (12).

Asi, el presente trabajo tuvo como fin evaluar la toxicidad aguda a 96 horas del TCF en cachama blanca y determinar el efecto de la exposicion cronica subletal de este OP sobre la respuesta inmune innata (explosion respiratoria y actividad bactericida del plasma) de esta especie nativa durante un periodo de 30 dias; asi como evaluar las alteraciones histopatologicas pos-exposicion.

Materiales y metodos

El presente estudio se desarrollo en dos fases experimentales: exposicion aguda y exposicion cronica subletal a TCF en alevinos de cachama blanca.

Exposicion aguda a TCF

El objetivo durante esta primera fase experimental fue la determinacion de la Concentracion Letal 50 ([CL.sub.50]) de TCF a 96 horas en alevinos de cachama blanca.

Animales. Se utilizaron alevinos de cachama blanca (Piaractus brachypomus) (n=40) de 4,5 [+ o -] 0,5 g, clinicamente sanos, obtenidos de la estacion piscicola El Carmen, criados en estanques en tierra y provenientes de un mismo desove.

Condiciones experimentales. El trabajo fue realizado en el Laboratorio de Toxicologia y el Laboratorio de Diagnostico Veterinario, adscritos a la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad del Tolima, ubicada en la cuidad de Ibague (TolimaColombia) a una altitud de 1.248 m.s.n.m., con una temperatura promedio de 28[grados]C.

Los experimentos fueron realizados de acuerdo a los lineamientos descritos por la OECD28 y contaron con la aprobacion del Comite de Bioetica adscrito a la oficina de Investigaciones y desarrollo cientifico de la Universidad del Tolima (Acta No. 23-150 del proyecto N0 370111). Inicialmente los animales fueron sometidos a un bano con cloruro de sodio (NaCl) al 0,3% con el fin de eliminar ectoparasitos (11) y posteriormente, fueron distribuidos en acuarios de vidrio con una capacidad de 40 L, manejando una densidad [menor que o igual a]1 g/L. Se empleo agua madurada con una temperatura de 28 [+ o -] 0,5[grados]C y un pH de 7,1 [+ o -] 0,2, realizando diariamente el monitoreo de dichas variables. Durante el experimento se manejo un sistema semi-estatico (recambio diario del 25% del volumen de agua y la sustancia experimental) con calefaccion y aireacion constante sin filtro. Diariamente durante el periodo de aclimatacion correspondiente a 15 dias, los animales fueron alimentados con concentrado comercial (32% de proteina) a una racion correspondiente al 2% de la biomasa total de cada acuario. La alimentacion fue suspendida 24 horas antes del inicio del experimento asi como durante las 96 horas experimentales.

Sustancia experimental. Se empleo triclorfon en polvo con un 97% de pureza. Dada su caracteristica hidrosoluble se creo una solucion stock (9,7 mg/L) utilizando agua destilada, dicha solucion fue adicionada a cada unidad experimental de acuerdo a las concentraciones manejadas en cada tratamiento.

Concentracion Letal 50 ([CL.sub.50]) a 96 horas. Inicialmente se realizaron ensayos preliminares de toxicidad aguda del TCF para determinar las concentraciones a evaluar en la [CL.sub.50]. En el primer ensayo se evaluaron concentraciones de: 7,5, 15, 22,5 y 30 mg/L de TCF de acuerdo a los valores reportados en otras especies de peces como Danio rerio (6) y Cyprinus carpio (3) puesto que no se contaban con estudios de este OP en cachama blanca. A las 3 horas pos exposicion se presento una mortalidad del 100%, por lo cual, se planteo un segundo ensayo con concentraciones de: 0,75, 1,5, 3 y 6 mg/L en base a lo reportado para bagre de canal (Ictalurus punctatus), trucha arcoiris (Oncorhynchus mykiss) y trucha de arroyo (Salvelinus fontinalis) (3), registrandose una mortalidad del 100% siete horas despues de la exposicion. Finalmente, para la [CL.sub.50] se evaluaron cuatro concentraciones correspondientes a: 0,01, 0,1, 0,25 y 0,5 mg/L de TCF y un grupo control que no contenia la sustancia experimental, cada tratamiento consto de 8 animales. La mortalidad de los alevinos fue registrada a las 24, 48, 72 y 96 horas de exposicion.

Analisis estadistico. Para la determinacion de la [CL.sub.50] se utilizo el programa Trimmed Spearman Karber (TSK) version 4.1, analizando la mortalidad acumulada a las 96 horas, basado en el algoritmo descrito por Hamilton (16) con un nivel de confianza de p < 0,05. La grafica de mortalidad acumulada se realizo mediante el software SPSS Statistics version 20 para Windows (IBM, USA).

Exposicion cronica subletal a TCF

Durante esta segunda fase se determino el efecto de la exposicion cronica subletal a TCF sobre algunos parametros de respuesta inmune en alevinos de cachama blanca a traves del ensayo de explosion respiratoria y capacidad bactericida del plasma, adicionalmente se realizo evaluacion histopatologica. Las condiciones experimentales fueron similares a las descritas anteriormente en el ensayo toxicidad aguda.

Animales. Alevinos de cachama blanca (n=120), provenientes de un mismo desove, clinicamente sanos, de un peso promedio de 8 [+ o -] 0,5 g, previamente aclimatados.

Diseno experimental. Con base en los resultados obtenidos previamente de toxicidad aguda se empleo la decima parte del valor de [CL.sub.50] del TCF en cachama blanca a 96 horas (0,18 mg/L) para estimar las concentraciones subletales a utilizar en cada tratamiento, correspondientes a: 0,018 mg/L (T1), 0,029 mg/L (T2), 0,041 mg/L (T3), 0,050 mg/L de TCF (T4) y un grupo control. Se emplearon 20 animales por tratamiento. La exposicion al OP tuvo una duracion de 30 dias y se realizaron tres muestreos a los dias 10, 20 y 30; durante esta fase, los peces fueron alimentados dos veces al dia (29). En cada muestreo, se tomaron al azar cinco peces de cada tratamiento para la obtencion de muestras de sangre mediante venopuncion de la vena caudal (27), con el fin de evaluar explosion respiratoria y actividad bactericida del plasma y posteriormente se realizo necropsia de los peces y toma de tejido para estudio histopatologico.

Explosion respiratoria. El ensayo de explosion respiratoria se realizo mediante el metodo de reduccion del Nitroblue-tetrazolium (NBT) por espectrofotometria descrito por Mohanty y Sahoo (26). Brevemente, se depositaron 0,1 mL de sangre en una placa multipozos de ELISA (fondo en U) junto con 0,1 mL de solucion de NBT (Sigma[R] Chemicals, Germany) al 0,2%. La mezcla fue incubada a 25[grados]C por 30 minutos, posteriormente se tomaron 0,05 mL de la suspension y se adicionaron a un vial que contenia 1 mL de N,N dimetil formamida, esta solucion fue centrifugada (2000 g x 5 minutos) y transferida a una placa multipozos de ELISA para lectura de densidad optica a 620 nm en espectrofotometro (ELx800-Biotek[R] Instruments, Inc., USA). Los cambios en la densidad optica fueron relacionados con cambio en la actividad oxidativa de los fagocitos.

Ensayo de actividad bactericida del plasma frente a Aeromonas hydrophila. Se realizo en base al protocolo descrito por Rainger y Rowley (30). Brevemente, se formaron pools de plasma de los animales de cada tratamiento por muestreo. Adicionalmente y de forma separada, se realizo una suspension bacteriana de Aeromonas hydrophila en solucion salina ajustando dicha suspension al tubo cero de la escala de McFarland con una densidad optica de 0,075 a 560 nm. A continuacion, se incubaron 100 [micron]L de plasma (de cada tratamiento) + 100 [micron]L de dilucion bacteriana en una vial durante 1 hora a 37[grados]C. Posteriormente, la suspension fue centrifugada y lavada en tres ocasiones con agua destilada y el pellet fue resuspendido (200 [micron]L) en solucion salina esteril y sembrado de manera masiva en Agar Tripticasa Soya (TSA) e incubado a 37[grados]C por 24 horas. Finalmente, se realizo el conteo de unidades formadoras de colonias (UFC) en cada uno de los tratamientos para cada muestreo.

Histopatologia. Finalizado el periodo experimental se tomaron muestras de branquias, higado, rinon, bazo y cerebro, de acuerdo a los protocolos de necropsia descritos por Yanong (44) y Meyers (24); los animales, fueron previamente anestesiados con eugenol (40 mg/L). Los tejidos fueron fijados en formalina buferada al 3,7% y la tincion empleada fue hematoxilina & eosina (H&E). La evaluacion histopatologica fue realizada en microscopio optico Olympus CX 31 (Olympus, USA). Finalmente la captura de las imagenes se realizo mediante la camara Moticam[R] 580-5.0 M.P (Motic, China) y el software Motic Images Plus, version 2.0 (Motic, China).

Analisis estadistico. Se utilizo un diseno experimental completamente aleatorizado efecto fijo balanceado con la tecnica de ANOVA donde las variables respuesta correspondieron a: densidad optica (explosion respiratoria) y numero de colonias (actividad bactericida del plasma). El modelo se ajusto de acuerdo al siguiente diagrama:

YIJ = [my] + [tau]I + [epsilon]j (I)

Donde [my] es la media, [tau]I el efecto tratamiento, y [epsilon]j (I) el error experimental.

Se realizo un analisis de Kruskall-Wallis seguido del Test de comparacion multiple de Dunn. Se validaron los supuestos del modelo y se empleo un analisis descriptivo exploratorio unidimensional para hallar la media, desviacion estandar y coeficiente de variacion. Los datos obtenidos fueron analizados estadisticamente mediante el software GraphPad Prism version 5.01 para Windows (GraphPad Software, Inc. 2007 California, USA).

Resultados

Concentracion letal 50 ([CL.sub.50])

Durante la fase de aclimatacion no se presento mortalidad, ni se evidenciaron alteraciones clinicas compatibles con signos de enfermedad. Para las primeras 24 horas de exposicion se registro una mortalidad del 100% a la concentracion de 0,5 mg/L y del 25% para los grupos de 0,01 y 0,1 mg/L, mientras que a las 72 horas se reporto una mortalidad acumulada del 62,5% para la concentracion de 0,25 mg/L (Figura 1).

La [CL.sub.50] a las 96 h del TCF para alevinos de cachama blanca fue de 0,18 mg/L (p < 0,05) como se puede apreciar en la figura 2.

[FIGURA 1 OMITIR]

[FIGURA 2 OMITIR]

Exposicion cronica subletal

Explosion respiratoria. Para el primer muestreo realizado al dia diez de exposicion se evidencio un aumento estadisticamente significativo de la explosion respiratoria en el T2 (0,029 mg/L de TCF) con respecto al control como se aprecia en la Figura 3A. Sin embargo, para el segundo y tercer muestreo no se hallaron diferencias estadisticas significativas (Figura 3B y 3C).

Actividad bactericida del plasma.

Para el primer muestreo no se presentaron diferencias estadisticamente significativas en el conteo de UFC (Figura 4A), no obstante para el muestreo 2 y 3 se hallo una disminucion significativa de la actividad bactericida del plasma reflejada en un aumento del numero de UFC en el T1 (0,018 mg/L de TCF) con respecto al grupo control (Figura 4B y 4C).

[FIGURA 3 OMITIR]

Histopatologia

El analisis histopatologico de higado, cerebro, bazo y rinon no revelo ninguna alteracion significativa evidente (datos no mostrados), tan solo se observaron lesiones de leves a moderadas a nivel del epitelio branquial en los animales del T4 (0,05 mg/L) muestreados al dia 30 como se puede apreciar en la figura 5B.

Discusion

[FIGURA 4 OMITIR]

[FIGURA 5 OMITIR]

[Concentracion letal.sub.50]

Estudios de toxicidad aguda del TCF han sido realizados en diferentes especies de organismos acuaticos: vertebrados e invertebrados. En Lepomis macrochirus se ha descrito una [CL.sub.50] a 96 h del TCF de 0,26 mg/L y de 0,88 mg/L para Ictalurus punctatus (3), esto cercano al valor hallado en el presente trabajo para alevinos de cachama blanca (Piaractus brachypomus) con una [CL.sub.50] a 96 horas de 0,18 mg/L; mientras que para trucha arcoiris (Oncorhynchus mykiss) y trucha de arroyo (Salvelinus fontinalis) se reportan valores de 1,4 y 2,5 mg/L respectivamente (3). Sin embargo, mayores niveles de tolerancia se registran para el pez cebra (Danio rerio) con una [CL.sub.50] de 25,4 mg/L y 28,8 mg/L, en etapas juveniles y adultos, respectivamente (6) y para carpa comun (Cyprinus carpio) de 27,5 mg/L en adultos y 100 mg/L en jovenes (7, 20).

Pese a los diversos reportes de toxicidad del TCF en diferentes especies de organismos acuaticos, algunos autores recomiendan emplear concentraciones de TCF que van desde 0,1 a 1 mg/L para el tratamiento contra ectoparasitos en peces (5,19). Sin embargo estas concentraciones son cercanas a los valores letales reportados en algunos peces, de alli la importancia de evaluar la sensibilidad de las diferentes especies frente a estos OPs.

Explosion respiratoria

El sistema inmune es sensible a los compuestos xenobioticos y reacciona mas rapidamente que cualquier otro sistema, incluso a concentraciones mas bajas que las requeridas o necesarias para generar una respuesta toxica sistemica aguda (33), similar a lo observado en el presente estudio en los animales expuestos a concentraciones de 0,029 mg/L de TCF con cambios significativos en la explosion respiratoria, evento que no se registro en los animales expuestos a las mayores concentraciones, ni durante mayores tiempos de exposicion.

Estudios realizados en Oreochromis niloticus frente a exposiciones al OP diazinon, revelan un aumento en la explosion respiratoria (13), asi como fue evidente en el presente trabajo; sin embargo, esto contrasta con lo reportado con los ensayos realizados en C. carpio sometida a exposiciones de 0,5 mg/L de Malation, presentandose una disminucion en la explosion respiratoria (45). Otro tipo de organismos acuaticos muestran mayor sensibilidad ante exposiciones a TCF, asi como lo reportan Chang (5) para Macrobrachium rosembergi en el cual se evidencio un incremento significativo del indice de explosion respiratoria en hematocitos, a diferencia de lo encontrado en C. carpio expuesta a 20.000 ppm de TCF durante 15 minutos donde se presento una disminucion en la explosion respiratoria (7).

En el presente estudio, no se evidenciaron cambios significativos en la actividad oxidativa durante los ultimos 20 dias de exposicion al TCF, probablemente debido a una respuesta de tipo adaptativa ante la exposicion cronica subletal a dicho xenobiotico, similar a la respuesta adaptativa desarrollada por Leporinus obtusidens ante exposiciones cronicas a glifosato, lo cual fue evidenciado por cambios en los niveles de cortisol durante el tiempo de exposicion (34). Los niveles estables en los indices de explosion respiratoria para los ultimos 20 dias de exposicion (M2 y M3) tambien pueden estar asociados con una disminucion en la actividad de la NADPH oxidasa como lo ha sugerido Chang (4) de acuerdo a lo hallado en fagocitos de M. rosembergii expuestos a TCF, donde se sugieren efectos deletereos de especies reactivas de oxigeno (ROS) sobre el ensamblaje y funcionamiento enzimatico de la NADPH oxidasa, lo cual a su vez puede desencadenar supresion de la produccion de ROS y por lo tanto presentarse una disminucion en las actividad de explosion respiratoria.

Del mismo modo, otro de los mecanismos propuestos de inmunotoxicidad asociada al uso de inhibidores de la AChE corresponde al incremento en los niveles de ACh que de forma indirecta causan la inhibicion del Factor Nuclear kappa B (NF-kB) por medio del Receptor de acetilcolina nicotinico subunidad alfa 7 ([alfa]7nAChR), produciendo la inhibicion en la produccion de citoquinas (32).

Asimismo, se ha demostrado en peces teleosteos que los niveles de ROS producidos durante la exposicion a TCF alteran la capacidad de defensa de sistemas antioxidantes tales como SOD, CAT y GST38 generando asi estres oxidativo.

Actividad bactericida del plasma

Las alteraciones a nivel del sistema inmune inducidas por la exposicion a xenobioticos afectan la respuesta frente a procesos de enfermedad que a su vez pueden llevar a la extincion de una especie (2). Por este motivo en el presente estudio se llevo a cabo la evaluacion de la actividad bactericida del plasma de los peces expuestos a TCF ante Aeromonas hydrophila, un patogeno de tipo bacteriano que afecta comunmente a los peces. En este trabajo se evidencio un aumento significativo de numero de UFC a la concentracion de 0,018 mg/L durante el muestreo 2 y 3 con respecto al grupo control, indicandose asi una disminucion de la actividad bactericida del plasma a dicha concentracion y por ende un incremento en la susceptibilidad a patogenos bacterianos, posiblemente por alteraciones en el complemento o en la actividad de la lisozima y/o anticuerpos. Tambien se demostro en C. carpio expuesta a 20.000 ppm de TCF durante 15 minutos, una disminucion significativa en la actividad de la lisozima plasmatica (7). Una respuesta similar se presento cuando esta misma especie fue expuesta a 75 pg/L de clorpirifos, evidenciandose una marcada disminucion de la actividad de la lisozima serica del dia 3 al 7 postexposicion (21). Asi mismo, en C. carpio exposiciones de 30 mg/L de TCF durante un periodo de 30 minutos producen una leve disminucion en la actividad de lisozima serica siete dias post-exposicion (36).

La disminucion de la actividad bactericida del plasma en P brachypomus expuestos a TCF ademas de lo anteriormente mencionado, tambien podria estar asociado a una disminucion en los niveles de anticuerpos que actuan frente una infeccion por A. hydrophila, como se describe en C. carpio expuestas a clorpirifos con disminuciones en los niveles de inmunoglobulina M (IgM) (21).

Histopatologia

En el presente estudio se evidenciaron lesiones a nivel branquial correspondientes a hipertrofia de celulas epiteliales con citoplasma hialino, posiblemente atribuido a cambios hidropicos leves, asi como desprendimiento lamelar en los peces expuestos a 0,05 mg/L de TCF para el dia 30 de exposicion. Similares hallazgos han sido reportados en Piaractus mesopotamicus ante exposiciones de 0,05 mg/L de TCF con presencia de hiperplasia de lamelas primarias y secundarias; sin embargo, a concentraciones de 0,1 mg/L en esta misma especie se presento marcada tumefaccion de los sinusoides sanguineos (telangiectasia), edema subepitelial, fusion lamelar y algunos focos de congestion sanguinea (23). Estas alteraciones branquiales pueden estar asociadas al efecto directo de los xenobioticos sobre el sistema respiratorio y la regulacion acido-base ionica en el mantenimiento de la homeostasis, junto con la necesidad de disminuir la superficie de contacto branquial con los polutantes (9).

Fortaleciendo la hipotesis de que las lesiones histopatologicas y su gravedad pueden estar relacionadas con el tiempo de exposicion o con la concentracion del xenobiotico, aunado a la sensibilidad o resistencia intrinseca de los diferentes organismos acuaticos expuestos a este polutante, se ha demostrado en Oreochromis niloticus expuesto a 0,25 mg/L de TCF la presencia de edema, fusion lamelar y proliferacion celular a nivel branquial durante las primeras 8 horas de exposicion; a las 72 horas, tan solo se hallo edema y congestion, mientras que a las 96 horas no se observo ningun cambio inflamatorio (14). Tambien existen reportes en guppies (Poecilia reticulata) sometidos a exposiciones subagudas de TCF de 1,1 mg/L, en las cuales no se presento ninguna alteracion en el tejido branquial ni renal (18), similar a lo ocurrido en cachama blanca, pero esto difiere de lo hallado en P. mesopotamicus (23), Prochilodus lineatus (31) y Carassius auratus gibe lio (43) frente a exposiciones a TCF, en las cuales se observan multiples alteraciones renales y hepaticas. Sin embargo, debe tenerse bajo consideracion que las dosis evaluadas de TCF en el presente estudio son extremadamente bajas en contraste con las concentraciones ambientalmente esperadas.

Conclusiones

En el presente trabajo se determino una [CL.sub.50] a 96 horas del TCF en alevinos de cachama blanca de 0,18 mg/L, estableciendo asi el margen de seguridad de dicho OP para esta especie que presenta una alta sensibilidad. Asimismo, la exposicion cronica subletal a TCF bajo condiciones de laboratorio induce alteraciones de tipo oxidativo para el primer muestreo, sin embargo entre los dias 20 y 30 de exposicion se observa un comportamiento adaptativo sin cambios en la explosion respiratoria, adicionalmente se presentan leves cambios histopatologicos a nivel branquial y disminucion en la capacidad bactericida del plasma. Finalmente, a traves del este trabajo se demuestra que la cachama blanca se constituye en un biomarcador sensible de contaminacion asociado a este tipo de compuestos OPs, haciendose necesario evaluar el uso de estos xenobioticos y su posible impacto como contaminante de los cuerpos de agua y organismos acuaticos en exposiciones cronicas subletales ya que la mayoria de los ensayos de toxicidad son de caracter agudo y evaluan generalmente mortalidad y no efectos subletales.

Agradecimientos

A los integrantes del Grupo de Enfermedades Neurodegenerativas (END) y del Grupo de Inmunologia y Fisiopatologia Animal (IFA) por el apoyo en la ejecucion en la fase experimental de este trabajo, especialmente a Fabian Uribe, Julieth Vargas y Luisa Fernanda Vargas, al personal del Laboratorio de Toxicologia y del Laboratorio de Diagnostico Veterinario de la Universidad del Tolima por permitir el establecimiento del experimento y el apoyo constante de este. Al Comite Central de Investigaciones de la Universidad del Tolima por la financiacion del proyecto.

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Gira Alejandra Marin Mendez [1]*, MVZ; Roberto Andres Chacon Novoa [1], MVZ; Angel Enrique Cespedes Rubio [1], MVZ, MSc, PhD; Iang Schroniltgen Rondon Barragan [1], MVZ, MSc.

* Autor para correspondencia: Gira Alejandra Marin Mendez. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad del Tolima. Laboratorios de toxicologia, diagnostico veterinario y patologia, Barrio Santa Helena parte alta, Ibague, Colombia.

* Email: marinmendezgira@gmail.com

[1] Grupo de Enfermedades Neurodegenerativas--END, linea Inmunotoxicologia, Departamento de Sanidad Animal, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad del Tolima. Laboratorios de toxicologia, diagnostico veterinario y patologia, Barrio Santa Helena parte alta, Ibague, Colombia. * Email: marinmendezgira@gmail.com

(Recibido: 4 de octubre, 2014; aceptado: 28 de noviembre, 2014)

*** Para citar este articulo: Marin Mendez GA, Chacon Novoa RA, Cespedes Rubio AE, Rondon Barragan IS. Efectos toxicologicos generados por la exposicion a triclorfon en un modelo inducido experimentalmente en cachama blanca (Piaractus brachypomus). Rev CES Med Zootec. 2014; Vol 9(2): 190-202.
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Author:Marin Mendez, Gira Alejandra; Chacon Novoa, Roberto Andres; Cespedes Rubio, Angel Enrique; Rondon Ba
Publication:Revista CES Medicina Veterinaria y Zootecnia
Date:Jul 1, 2014
Words:5621
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