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Efecto de los acidos grasos poliinsaturados sobre poblacion folicular y calidad ovocitaria en ovejas pelibuey.

Effect of polyunsaturated fatty acids on follicular population and oocyte quality in Pelibuey sheep

INTRODUCCION

La calidad de los ovocitos y un desarrollo embrionario temprano optimo son importantes para el establecimiento de la prenez, ya que aseguran un mayor nacimiento de crias, tanto en los procesos de gestacion natural, como en biotecnologicos aplicados a la reproduccion animal.

En todos los casos, el nivel y la composicion de la dieta alimenticia puede tener efectos sobre el ovocito y en el desarrollo embrionario temprano (Ashworth et al. 2009). Componentes especificos de la dieta, como la energia pueden influenciar positivamente algunos aspectos reproductivos de la hembra (Fouladi-Nashta et al. 2009). En este sentido, se ha demostrado que dietas ricas en acidos grasos poliinsaturados tienen efectos especificos en diferentes tejidos, con beneficios potenciales sobre la fertilidad, los cuales, parecen ser independientes de la disposicion de calorias y cambios en el estado energetico del animal (Santos et al. 2008). Se han reportado diferentes efectos de los acidos grasos poliinsaturados en el aspecto reproductivo in vitro e in vivo en la esteroidogenesis (Hughes et al. 2011), metabolismo de las celulas endometriales (Kirkup et al. 2010), calidad ovocitaria y desarrollo de embriones (Sturmey et al. 2009). Sin embargo, en el contexto de las investigaciones actuales, los resultados sobre acidos grasos y su papel como proveedores de energia de los ovocitos y embriones (Sturmey et al. 2009) son contradictorios, ya que la composicion de acidos grasos de diferentes fuentes varia en su perfil, por lo que resulta interesante esclarecer como estos cambios ejercen su efecto sobre la calidad de los ovocitos y su repercusion sobre la fertilidad de los animales (Waleed et al. 2010; Bender et al. 2010). Aunado a lo anterior, en ovinos de pelo bajo condiciones tropicales se han realizado pocos estudios que evaluen el efecto de la suplementacion grasa de origen vegetal (Herrera-Camacho et al. 2008; Cancino-Arroyo et al. 2009).

Con base en lo anterior, el objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto de la adicion de diferentes niveles de acidos grasos poliinsaturados omega 6 en la dieta, sobre el numero de foliculos y la calidad de los ovocitos en ovejas Pelibuey.

MATERIALES Y METODOS

Ubicacion

El estudio se realizo en la posta zootecnica de la Universidad del Papaloapan Campus Loma Bonita, Oaxaca. Latitud Norte 95[grados] 53', longitud Oeste 18[grados] 06', altura de 30 msnm y Clima "Am" (INEGI 2010)

Animales, manejo y alimentacion

Se utilizaron 30 ovejas adultas multiparas, de la raza Pelibuey, con una condicion corporal (CC) al inicio del experimento 2.60 [+ o -] 0.30 en la escala uno a cinco (Russel et al. 1969) y un peso vivo (PV) de 32.70 [+ o -] 1.87 kg. Las ovejas se mantuvieron en estabulacion completa por un periodo de 28 d; se distribuyeron al azar en tres tratamientos: tratamiento testigo (TA0, n = 10), 600 g de pasto Pangola + 400 g de maiz molido; tratamiento aceite de maiz al 3% (TA3, n = 10), 700 g de pasto Pangola + 250 g de maiz molido + 30 g de aceite de maiz; tratamiento aceite de maiz al 6% (TA6, n = 10) 820 g de pasto Pangola + 120 g de maiz molido + 60 g de aceite de maiz. Las dietas se balancearon de acuerdo al AFCR (1993), procurando que fueran isoenergeticas y que permitiera que los animales ganaran entre 60 y 80 [gd.sup.-1]. La cantidad de aceite correspondiente a cada tratamiento se suministro via oral con una jeringa, para asegurar que cada animal consumiera la cantidad exacta diariamente. Los animales se pesaron cada siete dias, durante la manana previo a la administracion de la dieta, asi mismo se registro la condicion corporal (CC) inicial y final. El cambio diario de peso (GDP [gd.sup.-1]) se estimo por medio de regresion, considerando la pendiente de la ecuacion de regresion como la tasa de cambio de peso de los animales.

Sincronizacion de celos

Los ciclos estrales se sincronizaron con PGF2[alfa] (Lutalyse, Pfizer[R]) en el dia cero (dia del inicio del inicio del experimento), la segunda aplicacion fue el dia siete, en los dias ocho y nueve, se detecto celo y a partir de esto el dia 14 se aplico una tercera dosis de prostaglandina acompanada por la insercion de esponjas vaginales impregnadas de FGA (Chronogest CR Intervet) por 12 dias.

Determinacion de la poblacion folicular y obtencion de ovocitos

Para determinar la poblacion folicular y obtencion de ovocitos, se detecto la presencia de celo a intervalo de 4 h a partir de las 24 h del retiro de la esponja hasta las 48 h, cada hembra fue expuesta a un macho con mandil, conforme manifestaban celo se sacrificaron. Los ovarios fueron recuperados y se colocaron en una bolsa de sellado hermetico con 200 mi de suero fisiologico (Solucion Hartmann, Pisa) y transportados al laboratorio quimico-biologico de la Universidad del Papaloapan en un recipiente isotermico para su evaluacion. La determinacion del tamano de foliculos se realizo con un vernier digital (TRUPER, digital estandar y milimetrico Mod. 14388) y se clasificaron en pequenos (2.00-2.99 mm) medianos (3.00 - 4.99 mm) y grandes (> 5.00 mm). Los complejos ovocito-cumulos (COC) fueron aspirados mediante puncion a partir de foliculos [mayor que o igual a] 2.00 mm con una jeringa de 5 cc y aguja de 18 x 1 1/2.X. El contenido folicular colectado fue vertido en una caja de Petri de 100 mm y diluido con solucion fisiologica para facilitar su evaluacion y clasificacion, la cual se realizo con un microscopio de contraste de fase (Leica Mod. DM300) Clasificandose en cuatro categorias: excelente: cumulos compacto (> 4 a 5 capas) con un ooplasma homogeneo; buena: cumulo compacto de una o dos capas con ooplasma homogenea que tiene una apariencia gruesa; regular: menos cumulo compacto (ligeramente ampliado cumulos) con ooplasma irregulares que contienen grupos obscuros; mala: ovocitos desnudos y ooplasmas irregulares (Patricio et al. 2003).

Analisis estadistico

Las variables peso vivo final (PVF), condicion corporal final (CCF), ganancia diaria de peso (GDP), el tamano y total de foliculos se analizaron mediante un analisis de varianza (ANOVA). La calidad de los ovocitos, se analizo mediante una prueba de Chi-cuadrada con el programa estadistico Statistix (1996).

RESULTADOS

El peso de las ovejas al principio y al final del experimento no vario debido al nivel de aceite de maiz en la dieta (P > 0.05) entre los tratamientos ya que las dietas se balancearon de manera isoenergetica e isoproteica y fueron calculadas para un equilibrio nutricional positivo, lo que permitio a las ovejas expresar una ganancia media diaria de peso positiva.

Los datos de poblacion folicular se muestran en la Tabla 1, en la cual se observa que el tamano promedio de la poblacion total de foliculos y foliculos grandes es mayor en el grupo TA6 (P < 0.05). A pesar presentar un promedio mayor de foliculos de tamano pequeno y mediano los tratamientos TA3 y TA6 no se observo diferencia (P > 0.05) con respecto al tratamiento TAO (Tabla 2).

El total de ovocitos obtenidos en el presente trabajo y clasificados en funcion de su calidad (Figura 1) se presentan en la Tabla 3. Los tratamientos TA3 y TA6 presentan un porcentaje de ovocitos de excelente y buena calidad del 77.5% contra un 46% del tratamiento TAO. Sin embargo, al contrastar unicamente los ovocitos de excelente calidad el TA6 presenta un mayor numero (56%) y una significancia estadistica del (P < 0.05) en comparacion con los tratamientos TA3 (43%) y TAO (26%). En cuanto a los ovocitos con calidad regular y mala los tratamientos no presentan diferencias (P > 0.05), pero es importante enfatizar que el TAO presenta un 54% en comparacion con un 26% y 19% de los tratamientos TA3 y TA6, lo que denota una disminucion de dichas categorias conforme el nivel de aceite aumenta en la dieta.

DISCUSION

La poblacion folicular, los foliculos de tamano pequeno (2.00-2.99 mm) y grande ([mayor que o igual a] 5.00 mm) en el presente estudio concuerdan con lo reportado por Herrera et al. (2003) quien al suplementar ovejas Pelibuey con aceite de maiz observaron un mayor numero de foliculos pequenos (7.50 [+ o -] 1.02 vs 6.13 [+ o -] 0.80) y grandes (2.28 [+ o -] 0.22 vs 1.00 [+ o -] 0.13) en ovejas que consumieron el aceite con respecto al testigo.

Los resultados del presente estudio son similares con otros trabajos donde se emplean distintas fuentes de suplementacion grasa, teniendo como resultado un aumento constante en el numero y tamano de los foliculos ovaricos (Oldick et al. 1997, Thomas et al. 1997, De Fries et al. 1998) pero difieren a lo reportado por Herrera-Corredor et al. (2010) al alimentar ovejas Pelibuey con aceite de soya encontraron una disminucion en el numero de foliculos pequenos (8.03 [+ o -] 0.26 vs10.15 [+ o -] 0.26) en comparacion a la dieta control, sin encontrar efecto significativo del aceite sobre foliculos grandes (1.36 [+ o -] 0.09 vs 1.24 [+ o -] 0.09). El incremento de tamano de foliculos preovulatorios puede deberse en parte al incremento de las concentraciones de LH en plasma, el cual estimula la etapa tardia del crecimiento folicular (Mattos et al. 2000). Los mecanismos por el cual la suplementacion grasa puede estimular la liberacion de LH aun no son del todo claros (Staples et al. 1998). Sin embargo, puede ejercer su efecto a traves de la concentracion plasmatica de insulina, tras el consumo de grasa se reduce la concentracion de insulina en sangre, esto provoca lipolisis y aumento del aporte de acidos grasos endogenos, el subsecuente ahorro de glucosa para sintesis de grasa aumenta la glucosa disponible para otros tejidos y estimula la produccion de insulina que actua como senal para la estimulacion de la liberacion de LH (Fuston 2004; Nicholas et al. 2005). En este sentido, se requiere mayor investigacion en ovinos de regiones tropicales, ya que el uso de acidos grasos poliinsaturados como suplementacion energetica no esta documentado de forma consistente en la reproduccion de ovejas (Herrera et al. 2003, HerreraCamacho et al. 2008, Cansino-Arroyo et al. 2009, Herrera-Corredor et al. 2010)

En el presente trabajo, se muestra evidencia del efecto estimulatorio de la suplementacion del aceite de maiz sobre la calidad ovocitaria, ya que los tratamientos suplementados con el 3 y 6% de este aceite presentaron un mayor porcentaje de ovocitos de excelente y buena calidad, lo cual concuerda con lo citado por Zeron et al. (2002), al suplementar ovejas con jabones calcicos de aceite de pescado reportan una mayor calidad ovocitaria, mejor integridad de las membranas del ovocito y un incremento de la proporcion de acidos grasos poliinsaturados en el plasma, liquido folicular y celulas del cumulus, pero no en los ovocitos, de igual manera McEvoy et al. (2012) informa que la inclusion del 3% de aceite pescado en la dieta de ovejas puede propiciar un efecto benefico para produccion de ovocitos y el desarrollo subsecuente del embrion in vivo, mientras que in vitro concentraciones altas pueden ser contraproducentes. Sin embargo, los datos del presente estudio difieren a lo reportado por Bilby et al. (2006) al evaluar diferentes fuentes de acidos grasos en vacas y su influencia en la calidad de los ovocitos y desarrollo folicular en la estacion de verano, encontrando que la fuente de suplementacion enriquecida con diferentes acidos grasos omega afecta el foliculo y el tamano del cuerpo luteo en vacas lecheras durante el verano, pero no altera la calidad del ovocito segun lo determinado por la subsecuente capacidad para formar un embrion en desarrollo despues de la fecundacion in vitro, de igual manera Wonnacott et al. (2010) no reportaron diferencia alguna en cuanto a calidad y composicion de acidos grasos de ovocitos provenientes de ovejas alimentadas con 4.5% de diversas fuentes de aceite (linasa, salmon, girasol) en la racion; sin embargo, la relacion de acidos grasos poliinsaturados n-3 / n-6 difiere significativamente entre dietas, la composicion lipidica de los ovocitos aun sigue siendo incierta (Sturney et al. 2009) y puede estar en funcion del aporte del tipo de acidos grasos provenientes de la dieta (Bilby et al. 2006). Vaquillas suplementadas con niveles altos de aceite de pescado, incrementaron significativamente el total de acidos grasos poliinsaturados omega 3 y la relacion en el liquido folicular de acidos grasos omega 3:6 (Childs et al. 2008), estos cambios se correlacionan fuertemente con el incremento de los niveles de n-3 en plasma, tales alteraciones del perfil de acidos grasos en liquido folicular demuestran su influencia en el desarrollo del ovocito (Webb et al. 2003; Waleed et al. 2010). Sin embargo, se ha sugerido la existencia de un proceso selectivo de proteccion, el cual se ha desarrollado para garantizar que la composicion de acidos grasos poliinsaturados del ovocito mantenga un nivel constante para evitar el riesgo de dano celular (Santos et al. 2008). Por otra parte, la excelente y buena calidad de los ovocitos, se ha correlacionado con aspectos morfologicos en las celulas del cumulus, correspondientes a los foliculos preovulatorios que tienen mayor capacidad de desarrollo a etapa de blastocisto, posiblemente debido al aumento de la maduracion citoplasmatica (Blondin & Sirrard 1995). Foliculos pequenos de novillonas alimentadas con dietas altas en energia han reducido significativamente los niveles de ARNm que codifica IGFP-2, IGFP-4, los cuales son potencialmente reguladores de la biodisponibilidad de los IGFs, (Insulin like growth factors) (Armstrong et al. 2001, Nicholas et al. 2005). La calidad del ovocito maduro in vivo resulta de especial interes, dado que en esta fase, practicamente se selecciona naturalmente por estos factores (Gonzales et al. 2007), los cuales pueden ser influenciados por la dieta y tienen la capacidad para interactuar con el ovocito a traves del receptor IGF-, este es probablemente un factor critico que controla la capacidad del ovocito para desarrollarse (Armstrong et al. 2002).

Los resultados en el presente estudio indican que la adicion de acidos grasos poliinsaturados en la dieta de ovejas Pelibuey, no modifica la talla y el numero de foliculos pequenos y medianos, pero si la poblacion de foliculos grandes, mejorando la calidad de los ovocitos recolectados

Articulo recibido: 06 de agosto de 2013 aceptado: 30 de octubre de 2013

AGREDECIMIENTO

A el CONACYT por la beca otorgada (98932) para la realizacion de los estudios doctorales del autor de correspondencia.

A el PROMEP por el otorgamiento de la beca convencional para estudios de posgrado.

LITERATURA CITADA

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Victor Meza-Villalvazo [correo], Hector Magana, Carlos Sandoval, Monserrat Morales, Alfonso Chay, Alfredo Trejo

(VMV) Universidad del Papaloapan. Instituto de Biotecnologia. Circuito Central No. 200, Col. Parque Industrial. CP. 68301. Tuxtepec, Oaxaca, Mexico

(HM) Instituto Tecnologico de Conkal. Km 16.3 Antigua Carretera Merida-Motul, Conkal Yucatan Mexico.

(CS) Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Autonoma de Yucatan. Apdo. 4-116 Itzimna, Merida, Yucatan, Mexico.

(MM) Centro de Bachillerato Tecnologico Forestal No 3, Colonia Obrera Tuxtepec Oaxaca Mexico.

(AC) Division Academica de Ciencias Agropecuarias, Universidad Juarez Autonoma de Tabasco. Carretera Villahermosa- Teapa, Km 25, R/a. La Huasteca 2a. Seccion, Villahermosa, Tabasco, Mexico

(AT) Universidad del Papaloapan, Avenida Ferrocarril S/N, ciudad universitaria, Loma Bonita Oaxaca.
Tabla 1. Peso vivo inicial y final (kg), cambios de peso
([gd.sup.-1]) y condicion corporal de ovejas Pelibuey suplementadas
con acidos grasos poliinsaturados.

Table 1. Initial and final live weight (kg), weight changes
([gd.sup.-1]) and body condition of Pelibuey sheep supplemented with
polyunsaturated fatty acids.

Variables                         Tratamientos    EEM      P

                             TAO    TA3    TA6

Pesos vivo inicial           32.2   32.7   32.2   0.85   0.508
Peso vivo final              33.8   34.2   34.6   0.84   0.661
Ganancia diaria de peso      60.2   53.5    50    6.88   0.558
Condicion corporal inicial   2.8    2.5    2.7    0.21   0.375
Condicion corporal final     3.2    3.2     3     0.2    0.509

EEM: Error estandar de la media.

a,b Medias con diferente literal entre columnas indican diferencia
significativa (P < 0.05)

TAO: tratamiento testigo 0% de aceite de maiz, TA3:
tratamiento adicionado con 3% de aceite de maiz, TA6:
tratamiento adicionado con 6% de aceite de maiz

Tabla 2. Poblacion folicular de ovejas Pelibuey suplementadas
con acidos grasos poliinsaturados.

Table 2. Follicular population in Pelibuey sheep supplemented
with polyunsaturated fatty acids.

Variables                    Tratamiento    EEM     P

                      TAO     TA3    TA6

Pequenos (2-2.9 mm)   2.2     2.5    3.2    0.059   0.122
Medianos (3-4.9 mm)   1.2     1.8    1.8    0.045   0.06
Grandes  (>= 5 mm)    1.3a   1.5ab   2.2b   0.051   0.029
Total                 4.7a   5.8ab   7.2b   0.038   0.001

EEM: Error estandar de la media.

a,b Medias con diferente literal entre columnas indican diferencia
significativa (P < 0.05)

TAO: tratamiento testigo 0% de aceite de maiz, TA3:
tratamiento adicionado con 3% de aceite de maiz, TA6:
tratamiento adicionado con 6% de aceite de maiz

Tabla 3. Calidad de ovocitos obtenidos de ovejas Pelibuey
suplementadas con acidos grasos poliinsaturados.

Table 3. Quality of oocytes obtained from Pelibuey sheep sup-
plemented with polyunsaturated fatty acids.

Calidad                    Tratamientos

                TAO          TA3          TA6

Excelente   9a    -26%   18b   -43%   27c   -56%
buena       7a    -20%   13b   -31%   12b   -25%
Regular     lia   -31%   6a    -14%   5a    -10%
Mala        8a    -23%   5a    -12%   4a    -9%

EEM: Error estandar de la media.

a,b Medias con diferente literal entre columnas indican diferencia
significativa (P < 0.05)

TAO: tratamiento testigo 0% de aceite de maiz, TA3:
tratamiento adicionado con 3% de aceite de maiz, TA6:
tratamiento adicionado con 6% de aceite de maiz
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Author:Meza-Villalvazo, Victor; Magana, Hector; Sandoval, Carlos; Morales, Monserrat; Chay, Alfonso; Trejo,
Publication:Universidad y Ciencia
Date:Dec 1, 2013
Words:4170
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