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Efecto de las Bajas Concentraciones de Nitratos y Fosfatos sobre la Acumulacion de Astaxantina en Haematococcus pluvialis UTEX 2505.

Effect of the Low Concentration of Nitrates and Phosphates on the Accumulation of Astaxantin in Haematococcus pluvialis UTEX 2505

INTRODUCCION

En la actualidad la salud de los seres humanos se ha visto afectada por diferentes tipos de enfermedades, entre las que se encuentran las llamadas cronico-degenerativas (diabetes, cancer, patologias cardiovasculares cardiopatias). Un proceso que lleva consigo la formacion de estas enfermedades es la produccion de radicales libres, (Justo y Gutierrez, 2002) estos pueden ser producto de factores como la exposicion a radiaciones ionizantes, aditivos quimicos en alimentos, herbicidas, contaminacion ambiental, mala alimentacion, entre otros. (Maldonado et al., 2010).

El cuerpo humano posee mecanismos de defensa contra el estres oxidativo (antioxidantes endogenos) inducido por los radicales libres (Valko et al., 2017), donde la funcion es prevenir o retardar el proceso de oxidacion que deterioran la celula; estas moleculas son conocidas como antioxidantes. Sin embargo, debido al aumento de los factores externos que originan la formacion de estas especies reactivas se ha generado un desequilibrio, llevando a la necesidad de incluir en la dieta suplementos alimenticios que contengan antioxidantes para prevenir diversos cambios fisiologicos que puedan provocar destruccion celular (San Miguel y Gil, 2009). En la naturaleza existen diversas moleculas con alto poder antioxioxidante entre las que se encuentran la vitamina E, vitamina C, flavonoides, resveratrol, acido ascorbico, compuestos fenolicos, tocoferol, carotenoides entre otros (Yamashita, 2013; Comert y Gokmen, 2018). Entre estos existe el pigmento astaxantina que es considerado como uno de los mas importantes en la salud humana debido a que presenta propiedades farmacologicas, antiinflamatorias, alto poder antioxidante actividad anticancerigena, efecto antimicrobiano contra el Helicobacter pylori. (Hernandez et al., 2015; Galarza et al., 2018).

La Astaxantina es un carotenoide que pertenece al grupo de las xantofilas, posee 40 carbonos en su estructura molecular ([C.sub.40][H.sub.52][O.sub.4]), su nombre cientifico es 3,3'-dihidroxi-[beta], [beta]'-caroteno-4,4'-diona. Posee una cadena polienica compuesta por 13 enlaces dobles conjugados alternados con enlaces simples que le proporcionan a la molecula una alta capacidad antioxidante y le brindan el caracteristico color de rojo intenso (Camacho et al., 2013; Zuluaga et al., 2018). Este carotenoide se puede obtener a partir de sintesis quimica (Higuera et al., 2006) o de forma natural mediante la biosintesis--mevalonica de diversos microorganismos como las levaduras Xanthophyllomyces dendrorhous (Zheng et al., 2006), Phaffia rhodozyma (Colabella y Libkind, 2016), microalgas como Dunaliella salina (Anila et al., 2016), Chlorella zofingiensis (Jin et al., 2014) y Haematococcus pluvialis (Camacho et al., 2013), siendo esta ultima el microorganismo que produce mayor cantidad del antioxidante.

Haematococcus pluvialis es una microalga verde unicelular Chlorophyceae de agua dulce perteneciente al orden Volvocales y familia Haematococcaceae. H. pluvialis es conocida como productora de Astaxantina al ser sometida a diferentes condiciones de estres (alta intensidad luminica, deficiencia de nutrientes, altas concentraciones de sal entre otros) (Orosa et al., 2005). La sintesis de novo de la Astaxantina tiene lugar en el citosol, acumulandose como pequenas gotas en el citoplasma (cuerpos lipidicos citosolicos) (Galarza et al., 2018). La sintesis se lleva a cabo a partir de la ruta de los terpenoides o isoprenoides (producto de la via mevalonica) por intermedio del acetato proveniente de la respiracion y fotosintesis, la cual generalmente incluye cinco pasos: (i) formacion del isopentenil difosfato, (ii) condensacion por etapas de isopreno hasta llegar a la formacion del fitoeno, (iii) serie de reacciones de desaturacion para llegar a la formacion del licopeno, (iv) reacciones de ciclacion que generan el p-caroteno y finalmente (v) la hidroxilacion que da como origen la Astaxantina (Shah et al., 2016; Chen et al., 2015).

Para aumentar la sintesis de Astaxantina en la microalga se han realizado varios estudios donde se evalua el efecto de diferentes factores sobre la acumulacion de este metabolito secundario. Orosa et al. (2005), cultivaron a H. pluvialis en diferentes concentraciones de NaN[O.sub.3] para determinar el efecto sobre el crecimiento celular y la acumulacion de Astaxantina, indicando que la concentracion optima de nitrato para obtener Astaxantina y para evitar el cese de la division celular es de 0.15 g/L de NaN[O.sub.3]. De igual manera Choi et al. (2011), luego de realizar estudios donde variaron la intensidad luminica, reporto que la maxima concentracion de Astaxantina (26 mg/L) se obtiene a 500 [micron]mol/[m.sup.2]s. Del mismo modo, Giannelli et al. (2015) evaluaron la influencia de la temperatura en la produccion de Astaxantina estableciendo a una temperatura de alrededor los 30[grados]C se inhibe la division celular y se induce la sintesis de Astaxantina, aumentando asi el contenido de 10 a 15 veces comparado con el cultivo a condiciones optimas.

Debido a la diversidad de industrias basadas en microalgas (suplementos dieteticos, cosmeticos, productos farmaceuticos y biocombustibles) y en busca de mejorar la obtencion de estos productos, se han realizado estudios de propiedades mecanicas como resistencia a la traccion, fuerza adhesiva, viscoelasticidad o modulo de Young (propiedad importante para la lisis celular) (Warren et al., 2014), mediante el uso de equipos que permiten alta resolucion en imagenes y medidas de fuerza como lo es el microscopio de fuerza atomica (AFM). El AFM puede trabajar con muestras biologias tanto en ambientes secos como acuosos, facilita el calculo del modulo de Young y permite una caracterizacion mecanica de las celulas. En la actualidad no se han reportado estudios cientificos acerca del efecto de diferentes factores sobre de la resistencia de la celula de H. pluvialis y la relacion que esta presenta con otros productos de interes que sintetiza la microalga. El objetivo de este trabajo consistio en evaluar el efecto de la concentracion de nitrogeno y fosforo sobre el crecimiento celular, produccion de Astaxantina, acumulacion de lipidos y modulo de Young en H. pluvialis UTEX 2505 cultivada en fotobiorreactores (FBR) tubulares de 20 litros bajo condiciones naturales de temperatura, iluminacion y suministro de dioxido de carbono.

METODOLOGIA

Haematococcus pluvialis UTEX 2505 fue obtenida de la UTEX (The Culture Collection of Algae), y es perteneciente al cepario del laboratorio de biotecnologia del centro de Argos para la innovacion (CAPI) ubicado dentro de la universidad EAFIT sede Medellin--Colombia. Para definir el medio de cultivo de la microalga en FBR de 20 L se utilizo como base el medio Basal Bold modificado (BBM-Modificado) (Cifuentes et al., 2003). Para este trabajo se dejaron constantes las siguientes composicion del medio: 20.0 g/L de Ca[Cl.sub.2] x 2[H.sub.2]O, 7.5 g/L de MgS[O.sub.4] x 7[H.sub.2]O, 2.5 g/L de NaCl, 10.0 g/L EDTA [Na.sub.2], 4.9 g/L FeS[O.sub.4], 11.5 g/L [H.sub.3]B[O.sub.4], 8.8 g/L ZnS[O.sub.4], 1.4 g/L Mn[Cl.sub.2] x 4[H.sub.2]O, 0.7 g/L Mo[O.sub.3], 1.5 g/L CuS[O.sub.4] x 5[H.sub.2]O, 0.5 g/L (N[O.sub.3])2Co x 6[H.sub.2]O (Cifuentes et al., 2003). Ensayos preliminares mostraron muy baja concentracion celular en tratamientos con 0.15 g/L de nitratos en el medio de cultivo, razon por la cual para los diferentes tratamientos se modifico la concentracion de las fuentes de nitrogeno (NaN[O.sub.3]) y de fosforo (K[H.sub.2]P[O.sub.4] y [K.sub.2]HP[O.sub.4]) entre los niveles 1.0-0.6-0.2 g/L para NaN[O.sub.3] (Orosa et al., 2005; Zhang et al., 2014) y 1.0-0.6-0.2 g/L para [K.sub.2]HP[O.sub.4] y K[H.sub.2]P[O.sub.4] (Borowitzka et al., 1991).

Propagacion de celulas.

La cepa H. pluvialis UTEX 2505 perteneciente al cepario del laboratorio de Biotecnologia del centro de Argos para la Innovacion, se encontraba crioconservada a -80[grados]C utilizando como preservante el glicerol, esta fue descongelada en bano serologico de agua (Memmert, WNB 7-45 Alemania) a 35[grados]C durante 90 segundos. La cepa fue repicada en Agar-BBM entre pH 6.4-6.6 y se conservo a temperatura ambiente. Posteriormente a volumenes de 50 mL de medio de cultivo esteril BBM-liquido (cultivo de activacion) se adiciono toda la biomasa microalgal presente en las cajas de Petri, seguido con la etapa del preinoculo que contenia 860 mL de medio de cultivo esteril BBM-liquido con 100 mL de suspension algal proveniente del cultivo de activacion. Las condiciones empleadas fueron: temperatura 25 [+ o -] 5[grados]C, fotoperiodo 12:12, intensidad de luz 52 [micron]mol/[m.sup.2]s y burbujeo de aire enriquecido con 3% de C[O.sub.2]. La preparacion del inoculo se desarrollo en FBR cilindricos de 20 L, elaborados en acrilico transparente, la dispersion de los gases en el medio se realizo mediante una membrana difusora ubicada en la parte inferior del FBR y las condiciones de crecimiento fueron temperatura ambiente, fotoperiodos naturales, flujo de aire de 2.5 Lpm, burbujeo de aire enriquecido con 3% de C[O.sub.2], medio de cultivo BBM-liquido no esterilizado y concentracion celular inicial 0.2 g/L. El sistema experimental esta conformado por 30 FBR (incluyendo los FBR empleados en la preparacion del inoculo), distribuidos en 5 grupos de 6 FBR de 20 L cada uno. Todos los ensayos se realizaron bajo condiciones naturales de luz y temperatura, con una inyeccion de aire enriquecido con 3 % de C[O.sub.2] y concentracion celular inicial de 0.2 g/L. La determinacion de Astaxantina y colecta del cultivo se realizo al final de la fase exponencial.

Cinetica de crecimiento celular y determinacion de parametros.

El crecimiento celular fue cuantificado mediante el metodo de peso seco cada 48 horas, hasta alcanzar la fase estacionaria, utilizando filtros esteriles de ester de celulosa (Advantec MFS, Inc) con poro de 0.45 [micro]m, diametro de 47 mm y balanzas de humedad Sartorius Mark-3. Para determinar los parametros cineticos no estructurados y no segregados (Exponencial) se utilizaron valores promedio de los resultados experimentales obtenidos de la fermentacion en batch. La ecuacion (1) describe el modelo exponencial, en el cual [[my].sub.max] representa la tasa maxima de crecimiento especifico de celulas de microalga ([dias.sup.-1]), y X es la concentracion celular.

dX/dt = [[my].sub.max] X (1)

Cuantificacion de metabolitos.

La cuantificacion de Astaxantina se realizo por triplicado usando el metodo sugerido por Zhang et al. (2009) con DMSO para la extraccion. En la cuantificacion se utilizo un espectrofotometro ultravioleta visible con longitud de onda de 492 nm. El contenido de Astaxantina se obtuvo mediante la ecuacion (2), para la cual Ast es la cantidad de Astaxantina en [micron]g/mL, [A.sub.492] es la absorbancia medida a 492 nm, 106 el factor para expresar los carotenoides en [micron]g, V el volumen del solvente utilizado en mL, [E.sup.1%.sub.1cm] representa el coeficiente de extincion especifico para la Astaxantina en [micron]g/mL y 100 el coeficiente para eliminar el factor de porcentaje.

Ast = [A.sb.472] * [10.sup.6] * V/[E.sup.1%.sub.1cm] * 100 (2)

En cuanto la cuantificacion de esteres metilicos de acidos grasos extraidos de H. pluvialis UTEX 2505, se empleo un cromatografo de gases marca Shimadzu modelo GC 2014, con columna RT-2560 con espesor de la pelicula de 0.20 [micron]m, longitud de la columna de 100 m con diametro interno de 0.25 mm, el modo de inyeccion fue split, y la cantidad de volumen inyectado fue de 1 [micron]L.

Determinacion del modulo de Young.

El AFM permite medir la fuerza generada entre el material a ser evaluado y una punta afilada sujeta a un cantilever, el cual sondea la superficie de la muestra mientras se registran los datos (Howland y Benatar, 2000). Para la cuantificacion del modulo de Young de H. pluvialis UTEX 2505, se utilizo un microscopio de fuerza atomica marca Park Systems, Modelo XE7, con cantilever B50-NCHR y fuerza aplicada de 28N/m.

Diseno de experimentos.

Para determinar el efecto de bajas concentraciones de la fuente de nitrogeno (NaN[O.sub.3]) y fosforo (K[H.sub.2]P[O.sub.4] - [K.sub.2]HP[O.sub.4]) en el crecimiento celular, produccion de Astaxantina, acumulacion de lipidos y modulo de Young de H. pluvialis UTEX 2505, se utilizo un diseno factorial 32 evaluando tres niveles (1.0 - 0.6 - 0.2 g/L) y dos factores (fuente de nitrogeno y fosforo), realizando tres replicas por tratamiento dando un total de 27 tratamientos experimentales.

El analisis estadistico de los resultados se realizo por medio de un analisis de varianza (ANOVA) con el 95% de confiabilidad, usando el Software estadistico STATGRAPHICS Centurion version XVI, en el cual se comprobaron los supuestos del ANOVA mediante test cuantitativos de: Shapiro- Wilk, Kolmogorv, Levene y Durbin--Watson. Se utilizo el test de Tukey para establecer que tratamientos presentaron efecto sobre las variables de respuestas, las barras de error presentadas en las graficas corresponden al error, para cada uno de los tratamientos.

RESULTADOS Y DISCUSION

H. pluvialis UTEX 2505 crecio en los diferentes tratamientos del medio de cultivo BBM- modificado a diferentes concentraciones de la fuente de nitrogeno (NaN[O.sub.3]) y fosforo (K[H.sub.2]P[O.sub.4] y [K.sub.2]HP[O.sub.4]), presentando un dia de fase de adaptacion, seguido de la fase exponencial la cual termino entre el octavo y decimo primer dia de cultivo. La mayor concentracion celular obtenida fue para los tratamientos que contenian niveles de las fuentes de nitrogeno y fosforo mas alto (1.0 g/L), mostrando valores entre 1.5 - 1.9 g/L; a diferencia con los tratamientos donde la concentracion de los factores era menor (0.2 g/L), los cuales arrojaron valores de concentracion celular de 0.85 - 1.0 g/L. Los parametros cineticos calculados [t.sub.d] y [my] ([t.sub.d]: tiempo de duplicacion y [[my].sub.x]: velocidad especifica de crecimiento) para el modelo exponencial son presentados en la tabla 1. Los resultados obtenidos en cuanto a la velocidad especifica de crecimiento maxima son comparables con los reportados por Orosa et al. (2005), los cuales oscilaron entre (0.12 - 0.46) [dias.sup.-1], sugiriendo que la concentracion de nitrogeno en el medio de cultivo juega un papel importante en la tasa de division celular.

Al evaluar de manera independiente el efecto causado de los factores sobre las variables dependientes, concentracion celular final (x) y velocidad especifica de crecimiento ([[my].sub.max]), mediante un analisis de varianza (ANOVA) no se encontraron diferencias significativas entre los tratamientos (P>0.05) para ambas variables, lo que indica que no hay incidencia en el cambio de los niveles sobre las dos variables dependientes. Li et al. (2015) afirman que el nitrogeno es un componente principal de las proteinas y los acidos nucleicos favoreciendo el crecimiento celular. Aunque el nitrogeno y el fosforo participan de la misma forma en la constitucion de las moleculas organicas fundamentales, los resultados no evidencian efecto positivo como podria esperarse, lo que puede ser ocasionado por el orden de magnitud de las variables de respuesta y el error propio de los ensayos.

Los resultados de productividad presentados en la figura 1, se analizaron mediante un analisis de varianza (ANOVA), donde se encontraron diferencias significativas (p<0.05) entre los tratamientos con un nivel de confianza del 95%. Para establecer las diferencias entre los tratamientos respecto a la productividad, se utilizo el test de rangos multiples Tukey. Los tratamientos donde la fuente de nitrogeno (NaN[O.sub.3]) fue de 1.0 g/L presentaron mayor productividad, lo que sugiere que la productividad es mayor cuando la fuente de nitrogeno aumenta. Este comportamiento posiblemente pueda explicarse por la mayor disponibilidad de nitrogeno para la formacion de biomoleculas utilizadas en la multiplicacion celular. Resultados similares reporto (Zhang et al., 2014; Hernandez et al., 2015), afirmando que el incremento en la concentracion de nitrogeno en el medio de cultivo, genera un aumento en la productividad de biomasa.

Los resultados obtenidos en cuanto a la interaccion causada por los factores sobre la acumulacion de Astaxantina en H. pluvialis UTEX 2505 se presentan en la figura 2, determinando que la interaccion fue positiva a niveles bajos de nitrogeno (0.2 g/L). Este resultado sugiere que a bajas concentraciones en la fuente de nitrogeno se estimula la sintesis del carotenoide, a diferencia del efecto causado de las bajas concentraciones de fosforo, el cual ejerce un efecto negativo en la sintesis de Astaxantina, es decir, bajas concentraciones de la fuente de fosforo generan una disminucion en la acumulacion de Astaxantina en la microalga.

El efecto de la interaccion de la fuente de nitrogeno y la fuente de fosforo sobre la concentracion de Astaxantina se observa en la figura 3, con una maxima acumulacion (168.4 [micron]g/mL) del carotenoide en el tratamiento N-1P0, en contraste con el tratamiento N1P1, el cual presento el valor mas bajo (41.9 [micron]g/mL). Lo anterior indica que para aumentar la acumulacion de Astaxantina en la microalga es recomendable bajas concentraciones en la fuente de nitrogeno y altas concentraciones de fosforo, resaltando que la inanicion de nitrogeno estimula la sintesis de Astaxantina, originando que la celula se encuentre en el estado aplanospora. Investigaciones realizadas por Suh et al. (2006) encontraron que para obtener altas producciones de Astaxantina (357 mg/L), es necesario generar estres a la celula por medio de la inanicion de nitrogeno (Zhang et al., 2015).

Los acidos grasos palmitico, nervonico, linolenico, araquidonico y linoleico se constituyen como los principales componentes del perfil lipidico, siendo los tres ultimos de gran importancia en la nutricion humana. Ademas se debe considerar la importancia antioxidante del acido linolenico. Cabe destacar que los principales acidos grasos encontrados en la microalga son los reportados por diferentes autores como (Sanchez et al., 2012; Damiani et al., 2010; Miao et al., 2006), los cuales son usados por H.pluvialis en la esterificacion de la Astaxantina ya sea en monoester o diester; brindandole a la celula una fuente de reserva energetica. En condiciones de estres (limitacion de nitrogeno y fosforo) H.pluvialis UTEX 2505 presenta la capacidad de acumular acidos grasos ya que se favorece la ruta metabolica del isoprenoide utilizada para la biosintesis de Astaxantina (Chen et al., 2015). El acido linoleico se presento en mayor proporcion en los diferentes tratamientos, como se observa en la figura 4. Por otra parte se determino que en condiciones de limitacion de nutrientes (NaN[O.sub.3], K[H.sub.2]P[O.sub.4] y [K.sub.2]HP[O.sub.4]) el perfil lipidico de H.pluvialis UTEX 2505 es similar en cuanto a su composicion en los diferentes tratamientos realizados, en el mismo grafico se denota el comportamiento de los lipidos totales, mostrando un maximo en el tratamiento de N0P0.

Por medio del coeficiente de correlacion de Pearson se identifico la relacion positiva moderada entre las variables dependientes Astaxantina y acumulacion de lipidos, con un valor de 0.586, lo que sugiere que las variables tienen una relacion directa. Estudios anteriores reportan que aproximadamente el 95% de moleculas de Astaxantina se esterifican con acidos grasos y se almacenan en cuerpos citosolicos ricos en triacilglicerol (Chen et al., 2015).

La interaccion causada por los factores sobre el modulo de Young en H. pluvialis UTEX 2505 se presentan en la figura 5, estableciendo que la interaccion es negativa a niveles bajos de nitrogeno (0.2 g/L). Posiblemente la baja concentracion en la fuente de nitrogeno disminuye la rigidez en la pared celular de la microalga, y aumenta a niveles altos de nitrogeno (1.0 g/L). Los modulos de Young para los diferentes tratamientos se muestran en la figura 6, donde a partir del analisis de varianza (ANOVA) se determino que existe un efecto significativo sobre el modulo de Young por parte de la fuente de nitrogeno y la interaccion de los factores en estudio, (P<0.05) con un nivel de confianza del 95%.

El tratamiento [N.sub.0][P.sub.1] presento el mayor modulo de Young de 469.81 MPa y menor acumulacion de Astaxantina (45 [micron]g/mL), a diferencia del tratamiento [N.sub.-1][P.sub.0] que mostro menor valor (2.92 MPa) de modulo de Young y mayor concentracion de Astaxantina (168 [micron]g/mL).Por lo tanto es posible asociar la rigidez que presenta H. pluvialis UTEX 2505 con la acumulacion del carotenoide (Guerin et al., 2003), es decir, al generar estres a la microalga por limitacion de nutrientes (fuente de nitrogeno y fosforo) la rigidez de la celula disminuye debido a la presencia de Astaxantina en la membrana celular. Urnau et al. (2018) sugiere que la rigidez de la pared celular hace dificil la extraccion de carotenoides. En lo que concierne a la acumulacion de lipidos, se tiene que, a mayor concentracion de acidos grasos saturados, la rigidez es menor por lo que tanto los lipidos como la Astaxantina afectan el modulo de Young de H. pluvialis UTEX 2505.

CONCLUSIONES

De acuerdo a los resultados, analisis y discusion es posible extraer las siguientes conclusiones: 1) no se obtuvo efecto positivo por parte de la fuente de nitrogeno y fosforo en cuanto al crecimiento celular; 2) se encontro que las bajas concentraciones en la fuente de nitrogeno afecta positivamente la acumulacion de Astaxantina en H.pluvialis UTEX 2505; 3) fue posible determinar el efecto positivo de la fuente de nitrogeno y fosforo en el perfil lipidico de la microalga. 4) se logro establecer que la rigidez de la membrana celular de la microalga es afectada negativamente por la acumulacion de la Astaxantina.

http://dx.doi.org/10.4067/S0718-07642019000100023

AGRADECIMIENTOS

Agradecimientos a la universidad EAFIT--Colombia y al Centro de Argos para la Innovacion por financiar la investigacion.

NOTACION

Abreviaciones
AFM=    Microscopio de fuerza atomica
CAPI=   Centro de Argos para la Innovacion
FBR=    Fotobiorreactores
BBM=    Medio Basal Bold


REFERENCIAS

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Alejandra M. Miranda (1), Edgar A. Ossa (1), Gabriel J. Vargas (2) y Alex A. Saez (1) *

(1) Escuela de Ingenieria, Univ. EAFIT, Cra. 49, Medellin-Colombia. (e-mail: ammirandap@eafit.edu.co; eossa@eafit.edu.co; asaez@eafit.edu.co

(2) I&D Cementos Argos S.A, Centro de Argos para la Innovacion, Cra. 49, Medellin-Colombia. (e-mail: eossa@eafit.edu.co)

* Autor a quien va dirigido la correspondencia

Recibido May. 14, 2018; Aceptado Jul. 17, 2018; Version final Ago. 17, 2018, Publicado Feb. 2019

Leyenda: Fig. 1: Productividad de biomasa obtenida de H. pluvialis UTEX 2505 en diferentes concentraciones de la fuente de nitrogeno y fosforo. Las letras iguales, corresponden a grupos estadisticamente homogeneos segun el test de Tukey, con un nivel de confianza del 95%

Leyenda: Fig. 2: Efecto de las interacciones entre el nitrogeno y fosforo sobre la produccion de Astaxantina.

Leyenda: Fig. 3: Concentracion de Astaxantina en pg/mL obtenida de H. pluvialis UTEX 2505 en diferentes concentraciones de la fuente de nitrogeno y fosforo. Las letras iguales, corresponden a grupos estadisticamente homogeneos segun el test de Tukey, con un nivel de confianza del 95%.

Leyenda: Fig. 4: Porcentaje de acidos grasos en la fraccion lipidica obtenida de H. pluvialis UTEX 2505 para cada tratamiento.

Leyenda: Fig. 5: Efecto de las interacciones entre el nitrogeno y fosforo sobre el modulo de elasticidad obtenido de H. pluvialis UTEX 2505.

Leyenda: Fig. 6: Modulo de elasticidad obtenido de H. pluvialis UTEX 2505 en diferentes concentraciones de nitratos y fosfatos. Las letras iguales, corresponden a grupos estadisticamente homogeneos segun el test de Tukey, con un nivel de confianza del 95%.
Tabla 1 : Parametros cineticos de H. pluvialis UTEX 2505 en
diferentes concentraciones de la fuente de nitrogeno y fosforo.

                       Nitrogeno   Fosforo   Modelo exponencial
                       (g/L)       (g/L)
Nomenclatura                                        [my]
                                                ([d.sup.-1])

[N.sub.1][P.sub.1]     1.0         1.0       0.196 [+ o -] 0.021
[N.sub.1][P.sub.0]     1.0         0.6       0.179 [+ o -] 0.031
[N.sub.1][P.sub.-1]    1.0         0.2       0.171 [+ o -] 0.010
[N.sub.0][P.sub.1]     0.6         1.0       0.143 [+ o -] 0.015
[N.sub.0][P.sub.0]     0.6         0.6       0.153 [+ o -] 0.017
[N.sub.0][P.sub.-1]    0.6         0.2       0.200 [+ o -] 0.004
[N.sub.-1][P.sub.1]    0.2         1.0       0.194 [+ o -] 0.039
[N.sub.-1][P.sub.0]    0.2         0.6       0.214 [+ o -] 0.015
[N.sub.-1][P.sub.-1]   0.2         0.2       0.176 [+ o -] 0.090

                       Modelo exponencial

Nomenclatura                   td                 [X.sub.0]
                             (dias)                 (g/L)

[N.sub.1][P.sub.1]     3.525 [+ o -] 0.357   0.226 [+ o -] 0.028
[N.sub.1][P.sub.0]     3.855 [+ o -] 0.053   0.262 [+ o -] 0.013
[N.sub.1][P.sub.-1]    4.034 [+ o -] 0.249   0.259 [+ o -] 0.088
[N.sub.0][P.sub.1]     4.840 [+ o -] 0.441   0.246 [+ o -] 0.091
[N.sub.0][P.sub.0]     4.506 [+ o -] 0.495   0.240 [+ o -] 0.059
[N.sub.0][P.sub.-1]    3.455 [+ o -] 0.079   0.243 [+ o -] 0.066
[N.sub.-1][P.sub.1]    3.565 [+ o -] 0.899   0.200 [+ o -] 0.081
[N.sub.-1][P.sub.0]    3.237 [+ o -] 0.226   0.193 [+ o -] 0.096
[N.sub.-1][P.sub.-1]   3.936 [+ o -] 0.102   0.250 [+ o -] 0.077

                       Modelo exponencial

Nomenclatura                [R.sup.2]

[N.sub.1][P.sub.1]     0.979 [+ o -] 0.075
[N.sub.1][P.sub.0]     0.974 [+ o -] 0.095
[N.sub.1][P.sub.-1]    0.970 [+ o -] 0.045
[N.sub.0][P.sub.1]     0.972 [+ o -] 0.091
[N.sub.0][P.sub.0]     0.977 [+ o -] 0.030
[N.sub.0][P.sub.-1]    0.953 [+ o -] 0.125
[N.sub.-1][P.sub.1]    0.929 [+ o -] 0.116
[N.sub.-1][P.sub.0]    0.947 [+ o -] 0.082
[N.sub.-1][P.sub.-1]   0.933 [+ o -] 0.042
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Author:Miranda, Alejandra M.; Ossa, Edgar A.; Vargas, Gabriel J.; Saez, Alex A.
Publication:Informacion Tecnologica
Date:Feb 1, 2019
Words:5672
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