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Efecto de la copulacion durante el celo post-ovulatorio en la mortalidad embrionaria en alpacas.

INTRODUCCION

La perdida embrionaria en alpacas, que mayormente ocurre dentro de las primeros 30 dias de gestacion, ha sido estimada en un 50% (Fernandez-Baca et al., 1970c); sin embargo, se desconocen las causas o factores predisponentes.

Usualmente la alpaca despues de la copula continua presentando celo hasta 4 dias despues de la ovulacion (Leyva y Garcia, 1999a) o 4 a 5 dias postservicio (FernandezBaca y Novoa, 1968). Este hecho asociado a la serie de montas efectivas diarias (5-6 servicios) que recibe la hembra mientras muestra receptividad sexual en el empadre a campo libre (Fernandez-Baca y Novoa, 1968) y a la ocurrencia de la copulacion uterina (Franco et al., 1981), explicaria las alteraciones de la estructura endometrial observadas despues de la copula (Apaza et al., 1999) y podrian constituir parte del mecanismo de la ocurrencia de diferentes grados de endometritis reportadas en alpacas vacias (60% por Vilca, 1975; 50% por Ludena y Leyva, 1977) despues del empadre.

Por otro lado, estudios iniciales en transferencia de embriones (Novoa y Sumar, 1968; Sumar y Leyva, comunicacion personal) muestran la mayor recuperacion de oocitos fertilizados del oviducto en el dia 3 postservicio (dia 2 postovulacion) en alpacas superovuladas, lo que sugiere la llegada del embrion al utero entre los dias 3 y 4 postovulacion.

El analisis de todas estas informaciones sugiere que la actividad y la caracteristica sexual en la copula en estadio postovulatorio avanzado podria representar parte de una posible interferencia en la viabilidad del embrion, lo cual requiere ser confirmado. Por consiguiente, el presente trabajo tiene como objetivo determinar si la frecuencia de copulacion en alpacas durante el celo postovulatorio es un factor que contribuye a la mortalidad embrionaria.

MATERIALES Y METODOS

Lugar de estudio y animales

El presente estudio se llevo a cabo durante los meses de febrero a abril del 2000, en el Fundo San Luis, ubicado en el distrito de Nunoa, provincia de Melgar, departamento de Puno, ubicado a 4,200 msnm, y a 15[grados] Latitud Sur y 70[grados] Longitud Oeste.

Se utilizaron alpacas en celo y con descanso sexual postparto >20 dias, donde se selecciono a 44 hembras con foliculo preovulatorio [mayor que o igual a]7 mm de diametro. Para este efecto se empleo la ecografia ovarica transrectal. Los animales pertenecian al nucleo reproductor de la Estacion Experimental de Camelidos del Centro de Investigacion IVITA-Marangani (FMV-UNMSM).

[FIGURA 1 OMITIR]

Procedimiento experimental

Las 44 hembras fueron cubiertas (tiempo de copula [mayor que o igual a]15 minutos) con machos de fertilidad comprobada (15 dias antes del empadre se hizo el examen clinico de los organos genitales y se evaluo el comportamiento sexual). Cada animal recibio 6 []g de buserelina o 500 UI hCG via i.m. al termino de la copula para asegurar la ovulacion (Fernandez-Baca et al., 1970b; Leyva y Garcia, 1999b).

Diseno experimental

Las hembras fueron distribuidas al azar despues del servicio en 3 grupos experimentales (Fig.1).

El primer grupo ([S.sub.1], n = 14) recibio un solo servicio y fue el grupo control. El segundo grupo ([S.sub.2], n = 15) recibio un segundo servicio el dia 3 postovulacion (4to dia postservicio); y el tercer grupo ([S.sub.3], n = 15) recibio un segundo y tercer servicio los dias 3 y 4 postovulacion, respectivamente (4to y 5to dia postservicio). El tiempo de copula en cada servicio fue [mayor que o igual a]15 minutos.

Deteccion de ovulacion y viabilidad del embrion

La ovulacion fue observada a las 42 horas postservicio, mediante ecografia, a traves de la desaparicion del foliculo preovulatorio y confirmada a los 6 dias postservicio con la presencia del cuerpo luteo. A los 13 y 19 dias postservicio se hizo el seguimiento de la presencia, caracteristicas y tamano del cuerpo luteo, asi como del cuerno uterino y embrion, a fin de verificar la posible continuidad de la gestacion temprana (Fig. 1). En forma complementaria, se registro la receptividad sexual de la hembra al macho, en los mismos periodos de tiempo que se hicieron las observaciones ecograficas, y a los 26-27 dias postservicio.

Recuperacion de oocitos fertilizados

Se realizo un estudio complementario dirigido a determinar la localizacion del oocito fertilizado o embrion en el oviducto o utero, y la presencia de alteraciones macroscopicas en el endometrio en los dias 2, 3 y 4 postovulacion (3, 4 y 5 postservicio, respectivamente), con el proposito de complementar la interpretacion de los resultados de la copulacion postovulatoria en la supervivencia embrionaria.

Para este estudio se administro 400 UI de PMSG a 4 alpacas adultas de descarte para inducir la maduracion de por lo menos 2 foliculos preovulatorios (detectados por ecografia). Estos animales fueron servidos con machos 24 horas despues (tiempo de copula [mayor que o igual a]15 minutos), complementado con 10 []g de buserelina o 1000 UI de hCG para asegurar la ovulacion. La ocurrencia de la ovulacion se determino por la desaparicion del foliculo preovulatorio y la presencia posterior del cuerpo luteo, a traves de la imagen ecografica.

Un animal fue sacrificado en el dia 2 postovulacion, dos animales en el dia 3 y uno en el dia 4 (3, 4, y 5 postservicio, respectivamente). El aparato reproductivo se retiro despues del sacrificio y los ovarios fueron expuestos para la determinacion de la presencia del cuerpo luteo y los foliculos.

El oviducto fue seccionado a nivel de la union utero-tubal, y se disecciono el ligamento de suspension (mesosalpinx) para eliminar su anatomia tortuosa y asi facilitar el lavado (flushing). Para el lavado, se paso una aguja roma a traves de la fimbria y se inyecto entre 5 a 10 ml de una solucion de ClNa al 9%. El liquido se recupero por el extremo opuesto sobre lunas de reloj. Los oocitos fertilizados se observaron con ayuda de un esteroscopio, registrandose el estadio de division de las celulas blastomericas.

Los cuernos uterinos se bloquearon con una pinza hemostatica a la altura de la union utero-tubal. Seguidamente se realizo una incision a nivel del cuerpo del utero para introducir la bombilla de un cateter de dos vias. Por una de las vias se insuflo aire y se fijo la bombilla al inicio del cuerno ipsilateral al cuerpo luteo ovarico para bloquear internamente la via de salida de este compartimento uterino. Por la otra via del cateter se inyecto 10 a 20 ml de una solucion de ClNa al 9%, cerrandose la via con una pinza hemostatica para permitir realizar suaves masajes en el cuerno, y asi asegurar la presencia del oocito en la solucion. La solucion se recupero en lunas de reloj al retirar la pinza hemostatica. La presencia del oocito o blastocisto se observo con un esteroscopio.

Analisis estadisticos

La tasa de supervivencia embrionaria y gestacion entre los grupos experimentales fue evaluada con la prueba de chi cuadrado. La diferencia entre el tamano del cuerpo luteo de gestacion y de no gestacion (mortalidad embrionaria) fue evaluada con la prueba de analisis de varianza (ANOVA). A fin de establecer la diferencia en la receptividad sexual (aceptacion y rechazo) en funcion a la presencia del cuerpo luteo se utilizo la prueba de chi cuadrado.

RESULTADOS

Se logro inducir la ovulacion en 91% de las alpacas con formacion de cuerpo luteo y posible fertilizacion y gestacion (Cuadro 1). No obstante la ausencia de diferencia significativa entre tratamientos (p>0.05), hubo una tendencia porcentual mayor de supervivencia embrionaria y de concepcion en alpacas que recibieron servicios adicionales en los dias 3 y 4 postovulacion.

Resultados sobre el comportamiento sexual de hembras gestantes con cuerpo luteo en diferentes estadios de desarrollo en la gestacion temprana se muestra en el Cuadro 2. La asociacion entre la presencia del cuerpo luteo y la no receptividad sexual (rechazo del macho) fue mas marcada despues del dia 6 postovulacion (p<0.05).

En el Cuadro 3 se observa que el cuerpo luteo de alpacas que exhibieron mortalidad embrionaria fue de menor tamano a partir del dia 13 postservicio (p<0.01) y se encuentran en proceso regresivo que el cuerpo luteo de hembras gestantes. En aquellas que no hubo mortalidad embrionaria se observo un incremento hasta alcanzar el tamano maximo de un cuerpo luteo de prenez.

En el Cuadro 4 se muestra los resultados del estudio complementario de la ubicacion del oocito fertilizado en relacion a la copula en los dias 2, 3 y 4 postovulacion. Se recuperaron del oviducto oocitos fertilizados hasta el dia 3 postovulacion. No se llego a recuperar del oviducto ni del utero en el dia 4 postovulacion. El numero de oocitos recuperados guardo relacion con el numero de cuerpos luteos presentes. Zonas hiperemicas y petequias fueron las caracteristicas mas relevantes observadas al examen macroscopico de la mucosa endometrial del utero despues del servicio.

DISCUSION

En las hembras servidas que ovularon, con formacion de cuerpo luteo como expresion de la viabilidad de la fertilizacion y gestacion temprana, no hubo disminucion en la tasa de supervivencia embrionaria en aquellas que recibieron servicios adicionales con copula efectiva despues de la ovulacion. Por el contrario, hubo tendencia a un incremento, sobretodo en el grupo de alpacas que recibieron mayor numero de servicios adicionales entre los dias 3 y 4 postovulacion.

La copula estimula en alpacas en celo la produccion del pico preovulatorio de LH para inducir la ovulacion, pero la alpaca continua presentando celo hasta 4 dias despues de la ovulacion (Leyva y Garcia, 1999a), y a nivel de empadre a campo se ha observado que las hembras reciben mas de una monta efectiva hasta los 5 dias despues del primer servicio (Fernandez-Baca y Novoa, 1968). Este comportamiento es debido a que los niveles de progesterona secretada por el cuerpo luteo en desarrollo son todavia insuficientes para inhibir el celo (Leyva y Garcia, 1999a).

La LH es tambien necesaria para el crecimiento de los foliculos (efecto estrogenico) en sinergismo con la FSH (Webb y England, citado por Peters, 1985) y para el establecimiento y mantenimiento del cuerpo luteo (efecto luteotropico) (Farin et al., 1987); por consiguiente, se esperaria que la copula postovulatoria estimule la secrecion de LH, sin llegar al establecimiento del pico preovulatorio, pero suficiente para ejercer el efecto estrogenico y/o luteotropico. La ocurrencia de cualquiera de estos efectos dependeria del grado de desarrollo del cuerpo luteo despues de la ovulacion. El efecto estrogenico explicaria la presencia de foliculos >6 mm detectados entre los dias 2 y 4 postovulacion (Leyva y Garcia, 2000), mientras que el efecto luteotropico explicaria la secrecion de progesterona con niveles [mayor que o igual a]1 ng/ml en plasma sanguineo (niveles inhibitorios) por el cuerpo luteo (Aba et al., 1995) despues del dia 3 en la mayoria de alpacas, y el establecimiento y desarrollo de un cuerpo luteo completamente funcional (Leyva y Garcia, 1999a) necesario para la supervivencia embrionaria en alpacas.

La ausencia de diferencias estadisticas en el incremento de la tasa de supervivencia embrionaria conforme se incrementa la frecuencia de copula (entre los dias 3 y 4 postovulacion) puede ser el resultado del reducido numero de animales utilizados en los grupos experimentales y de la necesidad de iniciar el estudio con el 100% de hembras ovuladas y con fertilizacion viable, a traves del uso de la tecnica "empadre hormonal" (servicio con macho fertil + 500 UI hCG). Es probable que una mayor diferencia en mortalidad embrionaria entre hembras que recibieron un solo servicio ([S.sub.1] = 25%) y aquellas que recibieron mayor numero de servicios ([S.sub.3] = 15%) con la tecnica del "empadre hormonal" se pueda obtener con un mayor numero de animales.

La copula en la alpaca es intracornual (Franco et al., 1981) y su efecto dinamico y prolongado resulta en alteraciones de la mucosa endometrial detectados dentro de las 4 horas despues del servicio (Apaza et al., 1999; Velasquez et al., 1999), observandose con frecuencia secreciones vulvares sanguinolentas inmediatamente despues del servicio (Leyva V., Comunicacion Personal). En el presente estudio se observo areas eritematosas, petequias y una ligera inflamacion de la mucosa del utero, probablemente debido a que la observacion se realizo en alpacas sacrificadas a los 3, 4 y 5 dias despues del servicio. Por este hecho, se esperaba en el presente estudio un efecto negativo marcado de la copula en la supervivencia embrionaria, sobretodo en estadios avanzados (dias 3 y 4 postovulacion);

Los oocitos fertilizados fueron recuperados del oviducto hasta el dia 3 post-ovulacion (4 postservicio). No hubo recuperacion en el oviducto ni en el utero, probablemente debido a fallas tecnicas. Se esperaria que desde el dia 4 el oocito fertilizado se encuentre en su fase de transporte de la union utero-tubal hacia el utero como ocurre en la mayoria de los animales de granja (Hafez, 1989).

El analisis del comportamiento sexual de la hembra frente al macho, despues del servicio para el monitoreo de la supervivencia embrionaria en la gestacion temprana, muestra la necesidad de una interpretacion cuidadosa, sobretodo alrededor del dia 6 postservicio (dia 5 postovulacion). Es aqui donde el 30% de las hembras supuestamente gestantes con presencia de cuerpo luteo exhibieron receptividad sexual en lugar de rechazo al macho. Se espera que alrededor del dia 5 post-ovulacion en hembras gestantes los niveles de progesterona sean mayores a 1 ng/ml (Aba et al.,1995), niveles suficientes para ejercer un efecto inhibitorio del celo (Leyva y Garcia, 1999a). Es probable que la respuesta de receptividad sexual de las alpacas con cuerpo luteo manifiesto sea el resultado de un acondicionamiento como consecuencia del manejo reproductivo establecido en el Centro Experimental donde se realizo el presente estudio (Leyva, V., Comunicacion Personal).

El tamano similar del cuerpo luteo a los 6 dias postservicio, entre alpacas con supervivencia embrionaria y con mortalidad embrionaria, es explicable porque en este periodo la glandula se encuentra en su estado de desarrollo y la regresion en ausencia de fertilizacion ocurre a los 9 dias despues de la ovulacion (Fernandez-Baca et al., 1970a; Leyva y Garcia, 1999a). Similar observacion fue reportada por Leyva y Garcia (2000).

CONCLUSIONES

Las copulaciones que recibieron las alpacas en los dias 3 y 4 postovulacion no afectaron la supervivencia embrionaria.

LITERATURA CITADA

(1.) Aba, M.A.; M. Forsberg; H. Kindhal; J. Sumar; L.E. Edqvist. 1995. Endocrine changes after mating pregnant and non-pregnant llamas and alpacas. Acta Vet. Scand. 36: 489-498.

(2.) Apaza, M.; J.L. Malaga; P.W Bravo. 1999. El endometrio uterino de la alpaca al empadre y en el periodo post-parto. Res. II Cong. Mun. sobre Camelidos. Cuzco, Peru. p 85.

(3.) Farin, C.E., T.M. Nett; G.D. Niswender. 1987. Role of LH in the cellular development of corpora lutea in hypophysectomized ewes. Biol. Reprod. 36 (Suppl 1): 169.

(4.) Fernandez-Baca, S.; C. Novoa. 1968. Conducta sexual de la alpaca en empadre a campo. Mem. Asoc. Latinoamer. Prod. Anim. 3: 7-20.

(5.) Fernandez-Baca, S.; W. Hansel; C. Novoa. 1970a. Corpus luteum function in the alpaca. Biol. Reprod. 3: 252-261.

(6.) Fernandez-Baca, S.; D.H.L. Madden; C. Novoa. 1970b. Effect of different mating stimuli on induction of ovulation in the alpaca. J. Reprod. Fert. 22: 261-267.

(7.) Fernandez-Baca, S.; C. Novoa; J. Sumar. 1970c. Embryonic mortality in the alpaca. Biol. Reprod. 3: 243-251.

(8.) Franco, E.; J. Sumar; M. Varela. 1981. Eyaculacion de la alpaca. Res. IV Conv. Int. sobre Camelid. Sudamer. Punta Arenas, Chile. p 4.

(9.) Hafez, E.S.E. 1989. Transporte y sobrevivencia de los gametos. En: Reproduccion e Inseminacion Artificial en Animales. 5ta ed. p 182-204. Ed. Interamericana McGraw-Hill. Mexico.

(10.) Leyva, V.; W. Garcia. 1999a. Efecto de la progesterona exogena sobre la funcion del cuerpo luteo de alpacas. Res. II Cong. Mun. sobre Camelidos. Cuzco, Peru. p 87.

(11.) Leyva, V.; W. Garcia. 1999b. Efecto de la GnRH sobre la fertilizacion y sobrevivencia embrionaria en alpacas. Res. II Cong. Mun. sobre Camelidos. Cuzco, Peru. p 90.

(12.) Leyva, V.; W. Garcia. 2000. Efecto del estradiol (E2) en la fertilizacion y sobrevivencia embrionaria en alpacas. Res. XV Cong. Nac. de Ciencias Veterinarias. Cuzco, Peru. p 22-23.

(13.) Ludena, H.; V. Leyva. 1977. Estudio de tratamientos en alpacas afectadas con metritis. Compendiado en Resumenes de Proyectos de Investigacion (1980-1981), UNMSM. Tomo III: 242.

(14.) Novoa, C.; J. Sumar. 1968. Coleccion de huevos in vivo y ensayos de transferencia en alpacas. Bol. Ext. IVITA (Peru) 3: 31-34.

(15.) Peters, A.R. 1985. Hormonal control of the bovine oestrous cycle. Br. Vet. J. 141: 564-574.

(16.) Velasquez, F.; J.L. Malaga; P.W. Bravo. 1999. Citologia exfoliativa del utero de la alpaca. Res. II Cong. Mun. sobre Camelidos. Cuzco, Peru. p 84.

(17.) Vilca, M. 1975. Alteraciones endometriales en alpacas (Lama pacos) en el primer mes post-servicio y su relacion con la funcionalidad del cuerpo luteo. Tesis Bachillerato. Fac. Medicina Veterinaria, Univ. Nacional Mayor de San Marcos, Lima. 52 p.

Maria Aparicio M. [1], Victor Leyva V. [2], Cesar Novoa M. [3]* y Wilber Garcia V. [4]

[1] Practica privada

[2] Laboratorio de Reproduccion Animal, FMV-UNMSM. E-mail:vleyva@vet.unmsm.edu.pe

[3] Profesor Emerito, UNMSM-FMV

[4] Estacion Experimental del Centro de Investigacion IVITA-Marangani, FMV-UNMSM
Cuadro 1. Numero de alpacas que ovularon y porcentaje de supervivencia
embrionaria en alpacas que no recibieron ([S.sub.1]) o que recibieron
servicios adicionales en el dia 3 (S2) y 3 y 4 (S3) postovulacion

                                                           Supervi-
                                                           vencia
                                       Alpacas             embrionaria
                                                           (%)

Tratamientos                    Total (n)   Ovuladas (n)   Dia 6 (1)

[S.sub.1]- Sin servicios           14            12        100.0 (a)
[S.sub.2]- Servicio dia 3          15            15        100.0 (a)
[S.sub.3]- Servicio dia 3 y 4      15            13        100.0 (a)

                                Supervivencia embrionaria (%)
Tratamientos                    Dia 13-14 (1)  Dia 19-20 (2)

[S.sub.1]- Sin servicios          92.0 (a)       75.0 (a0
[S.sub.2]- Servicio dia 3         87.0 (a)       80.0 (a)
[S.sub.3]- Servicio dia 3 y 4     92.0 (a)       85.0 (a)

(1) Con cuerpo luteo

(2) Con presencia de embrion

(a) Valores con letras desiguales son significativamente diferentes
(p<0.05)

Cuadro 2. Receptividad sexual (aceptacion o rechazo) en animales
gestantes (supervivencia embrionaria) a diferentes periodos de
desarrollo del cuerpo luteo

Presencia de cuerpo   Animales   Acepta    Rechaza

luteo post servicio     (n)       (%)       (%)
6 dias                   40      30 (a)    70 (ab)
13-14 dias               36      17 (ac)   83 (bd)
19-20 dias               32       6 (C)    94 (d)

(a,b,c) Valores que contengan por lo menos una misma letra en la
comparacion dentro de columnas y filas no son significativamente
diferentes (p>0.05)

Cuadro 3. Composicion del tamano del cuerpo luteo (mm; promedio
[+ o -] d.e.) entre animales donde hubo supervivencia y mortalidad
embrionaria

Presencia de cuerpo      Supervivencia           Mortalidad
luteo post servicio        embrionaria           embrionaria

6 dias                11.3 [+ o -] 0.8 (a)    10.6 [+ o -] 1.2 (ab)
13-14 dias            13.0 [+ o -] 1.5 (ac)    9.3 [+ o -] 1.3 (bd)
19-20 dias            13.2 [+ o -] 1.6 (c)     8.4 [+ o -] 1.4 (d)

(a,b,c) Valores que contengan por lo menos una misma letra en la
comparacion dentro de columnas y filas no son significativamente
diferentes (p>0.01)

Cuadro 4. Estado de desarrollo de oocitos fertilizados y alteracion de
la mucosa endometrial a diferentes estadios despues del servicio

Animal     Dias        No de    No de huevos
        postservicio   CL (1)   o embrion (2)

A            3           1            1
B            4           2            2
C            4           1            1
D            5           1            *

Animal  Estadio                         Alteracion de
                                     la mucosa endometrial

A       Morula (8-16 blastometros)   Hiperemia, petequias
B       Morula (16-32 blastometros)  Hiperemia, petequias
C       Morula (16 blastometros)     Hiperemia, petequias
D       --                           Hiperemia, petequias

(1) Cuerpo luteo

(2) Recuperados en oviducto

* No se recupero
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Author:Aparicio M., Maria; Leyva V., Victor; Novoa M., Cesar; Garcia V., Wilber
Publication:Revista de Investigaciones Veterinarias del Peru (RIVEP)
Date:Jan 1, 2003
Words:3623
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