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Ecotoxicidad acuatica de dos colorantes y de tres antiparasitarios de importancia en acuicultura en Daphnia magna.

Resumen

La presencia y la evaluacion ecotoxicologica de productos farmaceuticos en el ambiente acuatico es un area de investigacion emergente a nivel global. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto toxicologico acuatico de dos colorantes de importancia en la acuicultura, el azul de metileno y el verde de malaquita, y de tres antiparasitarios antihelminticos, dos productos naturales Parasin[R], leche de oje[R] y el quimico sintetico albendazol-praziquantel sobre Daphnia magna Strauss 1820 (Crustacea: Daphniidae). En D. magna ([CL.sub.50] a 96 h de exposicion), los mayores efectos se encontraron con el azul de metileno ([CL.sub.50]= 0.38 mg x [L.sup.-1]) en comparacion al verde de malaquita ([CL.sub.50]= 2.97 mg x [L.sup.-1]). Con relacion a los productos antiparasitarios en D. magna ([CL.sub.50] a 48 h), los mayores efectos se encontraron con la leche de oje ([CL.sub.50]= 0.07 %) en comparacion al Parasin ([CL.sub.50]= 0.99 %). Se observo que el praziquantel ([CL.sub.50]= 30.07 mg x [L.sup.-1]) y el albendazol ([CL.sub.50]= 180.4 mg x [L.sup.-1]) produjeron efectos sobre D. magna a 48 h de exposicion. Los dos colorantes produjeron altos efectos en terminos de [CL.sub.50] sobre D. magna en relacion a las concentraciones requeridas para su uso en acuicultura. Los dos productos naturales antiparasitarios ocasionaron riesgos en el ambiente acuatico a concentraciones menores al 1%. La tecnica del cociente de riesgo indico que el praziquantel y el albendazol no ocasionaron riesgo al ambiente acuatico.

Palabras claves: albendazol, azul de metileno, ecotoxicologia, praziquantel, pulga de agua, verde de malaquita

Aquatic ecotoxicity of two dyes and three antiparasitics of importance in aquaculture on employing Daphnia magna

Abstract

Ecotoxicological assessment of pharmaceutical products in aquatic environments is an area of emerging research at global level. The aims of the current research were to evaluate aquatic toxicological effects of two aquaculture important dyes: methylene blue and malachite green, of three anthelminthic antiparasitic products, of two natural products Parasin[R] and leche de oje[R], and of the synthetic chemical albendazole-praziquantel on Daphnia magna Strauss 1820 (Crustacea: Daphniidae). On D. magna ([LC.sub.50] at 96 h exposure), the highest effects were found with methylene blue ([LC.sub.50]= 0.38 mg x [L.sup.-1]) in comparison to malachite green ([LC.sub.50]= 2.97 mg x [L.sup.-1]). In relation to antiparasitic products on D. magna ([LC.sub.50] at 48 h), the highest effects were found with leche de oje ([LC.sub.50]= 0.07 %) in comparison to Parasin ([LC.sub.50]= 0.99 %). Praziquantel ([LC.sub.50]= 30.07 mg x [L.sup.-1]) and albendazole ([LC.sub.50]= 180.4 mg x [L.sup.-1]) were observe to produce effects on D. magna at 48 h of exposure. Both dyes produced high effects in terms of [LC.sub.50] on D. magna in relation to concentrations required for their use in aquaculture. Both antiparasitic natural products produced risks in aquatic environments at concentrations less than 1%. The quotient risk technique indicated that praziquantel and albendazole did not produce risks on an aquatic environment.

Key words: albendazole, methylene blue, ecotoxicology, praziquantel, water flea, malaquite green

Introduccion

En la actualidad muchos productos quimicos farmaceuticos son producidos y usados en grandes volumenes a nivel mundial. Por ende, la presencia y la evaluacion de los productos farmaceuticos en el ambiente acuatico es un area de investigacion emergente a nivel global (Halling-Sorensen et al., 1998; Daughton & Ternes, 1999; Chapman, 2006; Jjemba, 2006). En Europa, aproximadamente 13 500 tn de antibioticos son consumidos por ano, de los cuales 65% son usados en medicina humana y 35% en medicina veterinaria. Una cantidad desconocida de estos componentes son evacuados al ambiente via las aguas residuales o cuando las heces son usadas con residuos farmaceticos para la fertilizacion de tierras agricolas (Lutzhoft et al., 1999; Backhaus et al., 2000; Lalumera et al., 2004; Woodward, 2006). Los productos veterinarios y humanos aplicados con propositos medicinales o como aditivos pueden llegar al ambiente acuatico por rutas directas o indirectas (Boxall et al., 2003a b; Boxall & Long, 2005).

Muchos productos antihelminticos como el praziquantel y el albendazol son usados en grandes cantidades y tienen alta potencialidad de ingresar al ambiente (Oh et al., 2006). Sin embargo, no se encuentran bien caracterizadas las consecuencias ecologicas de su ingreso al ambiente acuatico, a pesar de su extremadamente baja constante de Henry, que indica la particion de equilibrio entre el aire y el agua, y su razonable solubilidad en agua que sugieren que estos compuestos pueden causar problemas en la columna de agua (Boxall et al., 2003a).

El praziquantel es una de las drogas mas usadas para el tratamiento de schistosomiasis producido por Schistosoma mansoni Sambon 1907. El mecanismo exacto de accion del praziquantel no esta exactamente entendido en este parasito, pero parece que permite que el parasito sea mas susceptible a su eliminacion por el sistema inmunologico del hospedero (Karanja et al., 1998). El praziquantel es un tenicida y tiene accion sobre Dipylidium caninum (Linnaeus 1758), larvas de Taenia solium Linnaeus 1758 y Taenia pisiformis Bloch 1780, provocando la perdida del calcio intracelular y por contracciones masivas, vacuolizacion y desintegracion del helminto (Pareja et al., 2002; Sibat & Ibanez, 2003; Holm-Martin et al., 2005). El praziquantel es un antihelmintico de amplio rango en mamiferos, incluyendo al ser humano, que modula la permeabilidad de la membrana celular de los cestodes y trematodes, permitiendo la desintegracion del tegumento (Hempel et al., 2006). Tambien, quimioterapias con praziquantel se han usado para el control de monogeneos en peces (Kim et al., 2001).

Belkind-Valdovinos et al. (2004) indican que el albendazol es empleado para el control de diversas enteroparasitosis humana causada por nematodos en areas endemicas del Peru. El tratamiento con albendazol es tambien eficiente para el control de nematodos intestinales de animales domesticos (Leathwick et al., 2006). Alvarez-Sanchez et al. (2006) senalan que el albendazol es eficiente para el control de Fasciola hepatica Linnaeus 1758 en animales de importancia pecuaria.

En el Peru, existen muchas plantas con propiedades antiparasitarias individuales y en mezclas de importancia etnobotanica que no han sido evaluadas con relacion a su impacto en el ambiente acuatico (Maguina & Iannacone, 2000).

El oje (Ficus insipida Willd; Moaceae) produce un latex con propiedades antihelminticas y es aun usado en la medicina tradicional por la gente local e indigena de las regiones amazonicas (Hansson et al., 2005). Varias sustancias estan ligadas con su efectividad: ficina, filoxantina, b-amirina, lepeol, lavandulol, phyllantel, eloxantina, filantelol y doxantina. Sin embargo, este vermifugo debido a su alta toxicidad aguda ha producido varios casos de intoxicacion por sobredosis en el ser humano (De Amorin et al., 1999).

La semilla del zapallo (Cucurbita maxima Dutch; Cucurbitaceae) es usada en el Peru en medicina tradicional ya que presenta propiedades antiparasitarias sobre cestodos (Guarrera, 1999; Diaz et al., 2004) y sobre protozoos causantes de la malaria (Amorim et al., 1991). Se han descrito varias sustancias quimicas relacionadas con su efecto antihelmintico como cucurbitina, peporesina, lecitina, guanosina, titosterina y el acido citrulico.

Las hojas de la hierba buena (Mentha spicata (Briq.) Harley; Labiatae) es una planta aromatica y medicinal usada por el hombre moderno (Lagarto et al., 1999). Estudios etnobotanicos informan de su empleo como antiseptico debido a sus aceites esenciales (Imai et al., 2001). Se le usa, ademas, como toxico y repelente del vector de malaria Anopheles stephensi Liston 1901 (Tripathi et al., 2004). Se ha evaluado su accion antimutagenica (Yu et al., 2004) y sus efectos en la biologia reproductiva humana (Akdogan et al., 2007).

Varias medicinas veterinarias pueden ser usadas como antisepticos en la acuicultura, como es el caso del verde de malaquita y del azul de metileno, y por ende muchos organismos acuaticos no destinatarios del control son expuestos a estas sustancias quimicas (Wollenberg et al., 2000; Christensen et al., 2006; Hernando et al., 2007).

El colorante verde de malaquita es usado globalmente como un antifungico y un antiparasitario en crustaceos y peces de importancia en acuicultura (Rintamaki et al., 2005; Zilberg & Tamar, 2006). Se le ha empleado para el control del protozoo Ichthyopthirius multifiliis Bouquet 1876 (Ichthyoptariasis), y del monogeneo Dactylogyrus vastator Nybelin 1924 (Schmahl et al., 1992; Molnar, 1995; Rintamaki et al., 2005). Su uso no esta permitido en los Estados Unidos, la Union Europea y en algunos paises del sudeste Asiatico como Tailandia, debido a que se considera que tiene un rol altamente toxico sobre las enzimas respiratorias. En adicion, es esencial tener periodos largos de carencia despues de la aplicacion del verde de malaquita debido a los residuos persistentes en los alimentos de origen acuatico (GESAMP, 1997; Grant et al., 2001; Andersen et al., 2006). Tambien el verde de malaquita es empleado en salud, en la industria de alimentos y textil; asi como para el control de helmintiasis en peces y otros organismos acuaticos (Van de Riet et al., 2005; Hernando et al., 2007). Se le ha reportado que causa variacion de los parametros hematologicos, carcinogenesis, mutagenesis, fracturas cromosomicas, teratogenicidad y toxicidad respiratoria (Silveira et al., 2004; Srivastava et al., 2004).

El azul de metileno es ocasionalmente usado como antiseptico tipo antifungico e infecciones por protozoos en cultivo de peces. Puede proveer proteccion contra la intoxicacion por nitrilos (GESAMP, 1997). El azul de metileno es usado como un fijador y colorante basico para el diagnostico de protozoos parasitos, celulas sanguineas y otras preparaciones microscopicas (Iannacone et al., 1999; Costamagna et al., 2004). Stockert & Herkovits (2003) han evaluado la toxicidad del azul de metileno sobre embriones de Bufo arenarum (Hensel 1867).

Rifici et al. (1996) han determinado la toxicidad sobre el pez Pimephales promelas Rafinesque 1820. En Salud Publica al azul de metileno se le usa para el tratamiento de una enfermedad denominada metahemoglobinemia (Clifton & Leikin, 2003; Stocche et al., 2004) y para casos de intoxicacion por herbicidas (Watt et al., 2005). Tambien se ha evaluado al carbon activado y a la planta acuatica Spirodela polyrrhiza (L.) Schleid como agentes de remocion del azul de metileno en el agua (Waranusantigui et al., 2003; Moreno et al., 2006).

Daphnia magna Strauss 1820 (Crustacea: Daphniidae) es una especie partenogenetica usada extensivamente en pruebas de toxicidad para evaluar sustancias quimicas puras, aguas residuales domesticas e industriales, aguas superficiales o subterraneas, agua potable, y lixiviados entre otros. Esto es debido a: 1) amplia distribucion geografica, 2) importante papel en la comunidad zooplanctonica, 3) facilidad de cultivo, 4) corto ciclo de vida con la produccion de un alto numero de crias (Castillo, 2004; Kallqvist et al., 2006; Reynaldi et al., 2006).

Muchos productos farmaceutico aplicados con propositos medicinales o como aditivos pueden llegar finalmente al ambiente dulceacuicola por rutas directas o indirectas. Entre dichos compuestos tenemos a productos antihelminticos como antiparasitarios naturales a base de plantas y a varias medicinas veterinarias que pueden ser usadas como antifungicos y antiparasitarios en la acuicultura. Sin embargo, no se conocen las consecuencias ecologicas del ingreso de estas sustancias a la columna de agua. Por ende, la evaluacion del efecto de estos compuestos en organismos acuaticos no destinatarios, como el cladocero D. magna, a traves de una evaluacion del riesgo ecologico permitira tomar las medidas de mitigacion necesarias para la proteccion de los ambientes acuaticos por productos farmaceuticos.

Por ende, el objetivo del presente trabajo fue evaluar la ecotoxicidad acuatica de dos antifungicos usados en acuicultura y de tres antiparasitarios empleando D. magna como un organismo de ensayo.

Materiales y metodos

Los bioensayos ecotoxicologicos acuaticos se realizaron en el Laboratorio de Invertebrados, Facultad de Ciencias Biologicas, Universidad Ricardo Palma, Santiago de Surco, Lima, Peru.

Productos quimicos

Colorantes

Verde de malaquita: ([C.sub.48][H.sub.50][N.sub.4][O.sub.4] x [2HC.sub.2][O.sub.4]), CAS = 569-64-2 y una solubilidad en agua de 20 g [L.sup.-1]. Se preparo una solucion madre a una concentracion de 40 mg [L.sup.-1]. A partir de estas soluciones se realizaron las diluciones respectivas empleando el medio de cultivo artificial de Daphnia (Medio ADaM) (Iannacone et al., 2007). Se utilizaron botellas plasticas de un litro para la preparacion de cada una de las cinco concentraciones. Para el verde de malaquita se utilizo las siguientes cinco concentraciones en orden creciente: 2,5, 5, 10, 20 y 40 mg [L.sup.-1].

Azul de metileno: ([C.sub.16][H.sub.18][C.sub.1][N.sub.3]S x 3[H.sub.2]O). CAS = 61-73-4 y una solubilidad en agua de 40 g [L.sup.-1]. Se siguio el mismo procedimiento que para el verde de malaquita, pero se preparo la solucion madre a 20 mg [L.sup.-1]. Se emplearon las siguientes cinco concentraciones en orden creciente: 0.156, 0.312, 0.625, 1.25 y 2.5 mg [L.sup.-1].

Antiparasitarios

Parasin[R]: El producto es elaborado por el laboratorio Bionaturista[R]. Este producto es un macerado natural. El antiparasitario esta compuesto por semillas de zapallo C. maxima, semillas de papaya Carica papaya L., hierba buena (M. spicata), propoleo, ceras, polen y aceites aromaticos, entre otros elementos. Este producto tiene accion antihelmintica y produce alteraciones en la motilidad del helminto, proteolisis y muerte del mismo, y microscopicamente provoca alteracion del tegumento, de la membrana basal, estructuras internas y ruptura de la cascara de los huevos en los proglotidos maduros y gravidos de los cestodos. El screening fitoquimico fue realizado en el Laboratorio de analisis quimico de la Pontificia Universidad Catolica del Peru (PUCP). Los procedimientos estandares para la marcha fitoquimica mostraron para saponinas (produccion de espuma) = -; taninos (Gelatina/Fe[Cl.sub.3]) = +; flavonoides (Shinoda) = -; esteroides (Libermann B) = -; quinonas (Borntrager) = -; fenoles (Rosenheim) = -; alcaloides (Dragendorff/Mayer) = + y aminoacidos (Ninhidrina) = +. Siendo - = reaccion negativa y + = reaccion positiva.

Leche de Oje[R]: Este antiparasitario es elaborado por el laboratorio Santa Natura[R]. Este producto es un macerado compuesto por Leche de Oje F. insipida, hierba buena y miel. En su mecanismo de accion disuelve las proteinas de la cuticula que recubre el cuerpo de los parasitos intestinales, permitiendo su mortalidad y digestion por los mecanismos bioquimicos gastrointestinales normales (Giraldo et al., 2006). El screening fitoquimico fue realizado en el Laboratorio de analisis quimico de la Pontificia Universidad Catolica del Peru (PUCP). Los procedimientos estandares para la marcha fitoquimica mostraron para saponinas (produccion de espuma) = -; taninos (Gelatina/Fe[Cl.sub.3]) = -; flavonoides (Shinoda)= -; esteroides (Libermann B) = -; quinonas (Borntrager) = -; fenoles (Rosenheim) = -; alcaloides (Dragendorff/Mayer) = + y aminoacidos (Ninhidrina) = +.

Tanto para el Parasin y para la Leche de oje, se emplearon las siguientes cinco concentraciones a partir del producto comercial, los cuales se diluyeron en el medio ADaM: 0.156 %, 0.313%, 0.625%, 1.25% y 2.5 %.

Quantel-Plus[R]: Producto elaborado por los laboratorios Farmindustria[R]. Es un comprimido compuesto por dos ingredientes activos (ia): praziquantel (50 mg) y albendazol (300 mg). El praziquantel tiene un CAS de 55268-74-1 y su solubilidad en agua es de 400 mg [L.sup.-1]. El albendazol tiene un CAS 54965-21-8 y una solubilidad en agua de 0.42 g [L.sup.-1]. Ambos actuan como antihelminticos, causando la disrupcion del metabolismo del helminto, incluyendo la disminucion de energia, que inmoviliza y posteriormente mata el helminto sensible. Para el praziquantel se utilizo las siguientes cinco concentraciones en orden creciente: 15.63, 31.25, 62.5, 125 y 250 mg [L.sup.-1]. En cambio, para el albendazol se uso las siguientes cinco concentraciones en orden creciente: 93.75, 187.5, 375, 750 y 1500 mg [L.sup.-1], los cuales se diluyeron en el medio ADaM.

Organismo prueba

Daphnia magna

Hembras adultas de esta especie se obtuvieron del acuario "Cleo" procedente del distrito de Lince, Lima, Peru, y se llevaron al laboratorio en recipientes plasticos de 2 L de capacidad. Hembras partenogeneticas se colocaron en el medio nutritivo ADaM. La preparacion del medio se realizo de la siguiente forma: 9.9 g de sales obtenidas por evaporacion del agua de mar se adicionaron a 60 L de agua de grifo declorinada, reposada y hiperoxigenada durante 24 h. Luego se agrego 138 mL de una solucion de cloruro de calcio (117.6 g x [L.sup.-1]), 132 mL de una solucion de bicarbonato de sodio (25.2 g x [L.sup.-1]) y 6 mL de una solucion de Oxido de Selenio (0.07 g [L.sup.-1]) (Kluttgen et al., 1994). Los cultivos parciales se mantuvieron a una temperatura de 21 [+ o -] 2[grados]C y a un fotoperiodo aproximadamente de 12:12. El oxigeno disuelto tuvo una concentracion sobre 6 mg x [L.sup.-1] (Castillo, 2004). Para el desarrollo de la prueba de toxicidad aguda con D. magna se empleo cohortes de neonatos (< 24 h de nacidos). La duracion total de la prueba fue de 48 h de exposicion para los antiparasitarios y para los dos colorantes. En adicion, para los dos colorantes se dieron lecturas a 96 h. Se empleo un factor de dilucion de 0.5. A cada envase circular de 250 mL se procedio a agregar 100 mL de cada una de las concentraciones de las sustancias quimicas empleadas, a los que se transfirieron diez neonatos de D. magna. Se uso como criterio de mortalidad la carencia de movilidad o la ausencia de ritmo cardiaco a 15 s de observacion al microscopio estereoscopio. Antes de efectuar las lecturas se agito los envases en forma circular para reactivar el movimiento de los organismos que se posaban inmoviles en el fondo (Castillo, 2004).

Analisis de datos

Las valores de [CL.sub.50] en mg x [L.sup.-1] para el verde malaquita y para el azul de metileno de otras especies de crustaceos acuaticos fue obtenido de una base de datos electronica (http://www.pesticideinfo.org/Detail_Chemical.jsp). Las pruebas de toxicidad de los antiparasitarios y de los colorantes de importancia en la acuicultura sobre D. magna se evaluaron en cinco concentraciones mas el control en el medio nutritivo ADaM, con cuatro repeticiones, en un diseno de Bloque Completo al Azar (DBCA): 6 x 4. La eficacia de los tratamientos y las repeticiones se evaluo a traves de un analisis de varianza (ANDEVA) de dos vias, previa transformacion de los datos a raiz cuadrada del arcoseno. En el caso de existir diferencias significativas entre los tratamientos y entre las repeticiones se realizo la prueba de Tukey. Los calculos de la mortalidad corregida se realizaron mediante la formula de Abbott en caso de muerte natural en el grupo testigo cuando fue menor al 20 % (Macedo et al., 1997). Las CL[(E).sub.50] se calcularon usando el programa computarizado Probit version 1.5. El modelo de regresion fue verificado usando el estadistico Chi-cuadrado. Los resultados para los estadisticos descriptivos e inferenciales se analizaron mediante el paquete estadistico SPSS version 15,0.

Resultados

Colorantes

Se observo un incremento en los valores de [CL.sub.50] en mg x [L.sup.-1] para el verde de malaquita y para el azul de metileno a 24 h, 48 h, 72 h y 96 h de exposicion sobre D. magna (Figura 1). Para el verde de malaquita, el valor de [CL.sub.50] a 24 h fue 9.27 mg x [L.sup.-1], estadisticamente diferente a los valores de 48 h ([CL.sub.50] = 4.65 mg x [L.sup.-1]), 72 h ([CL.sub.50] = 3,23 mg x [L.sup.-1]) y 96 h de exposicion ([CL.sub.50] = 2.97 mg x [L.sup.-1]) (F= 32.61; P = 0.000) (Figura 1). Para el azul de metileno, el valor de [CL.sub.50] a 24 h fue 2.37 mg x [L.sup.-1], estadisticamente diferente al valor de 48 h de exposicion ([CL.sub.50] = 1.20 mg x [L.sup.-1]), siendo a su vez este ultimo diferente al de 72 h ([CL.sub.50] = 0.54 mg x [L.sup.-1]) y 96 h de exposicion ([CL.sub.50] = 0,38 mg x [L.sup.-1]) sobre D. magna (F= 53.83; P = 0.000) (Figura 1). Para todos los periodos de exposicion, existieron diferencias estadisticamente significativas entre los valores de [CL.sub.50] para el verde de malaquita y para el azul de metileno a las 24 h (t= 7.12; P=0.000), a las 48 h (t= 10.09; P=0.000), a las 72 h (t= 12.61; P=0.000) y a las 96 h de exposicion sobre D. magna (t= 25.16; P=0.000).

Antiparasitarios

Los porcentajes de mortalidad de D. magna a las cinco concentraciones evaluadas para los productos antiparasitarios comerciales: Parasin y leche de oje son indicados en la Figura 2. Los valores de [CL.sub.50] y los limites de confianza superior e inferior fueron 1.34 % (0.81 % - 2.04 %) y 0.99 % (0.67 % - 1.20 %) para parasin, y 0.53 % (0.31 %- 0.79 %) y 0.07 % (0.01 % - 0.12 %) para leche de oje a 24 h y 48 h de exposicion, respectivamente. La leche de oje presento mayor toxicidad segun los valores de [CL.sub.50] a 24 h de exposicion y a 48 h de exposicion que el producto comercial Parasin. Las Figuras 3 y 4 nos muestran que existen diferencias en los valores de [CL.sub.50] para el praziquantel ([CL.sub.50-24h] =79.80 mg x [L.sup.-1]; [CL.sub.50-48h] = 30.07 mg x [L.sup.-1]) y para el albendazol ([CL.sub.50-24h] =478.6 mg x [L.sup.-1]; [CL.sub.50-48h] = 180.4 mg x [L.sup.-1]) a 24 h y a 48 h de exposicion, respectivamente.

[FIGURA 1 OMITIR]

[FIGURA 2 OMITIR]

[FIGURA 3 OMITIR]

Discusion

Colorantes

Para el caso del verde de malaquita, un analisis comparativo con 40 valores de [CL.sub.50] para 17 especies diferentes de crustaceos acuaticos, ubica a la pulga de agua D. magna en la posicion 25, siendo la decima especie mas sensible al verde de malaquita (Tabla 1). El valor de [CL.sub.50] de 96 h de D. magna es mas toxico que la [CL.sub.50] de 10 mg x [L.sup.-1] del protozoario parasito apicomplexa Perkinsus marinus (Mackin, Owen and Collier 1950) Levine 1978 de la ostra Crassostrea virginica Gmelin 1791 (http://www.pesticideinfo.org/Detail_Chemical.jsp) y del monogeneo D. vastator en Cyprinus carpio (Molnar, 1995). Sin embargo, recomendaciones de su uso como antiseptico en peces, lo recomiendan en banos de 0.10 a 0.15 mg x [L.sup.-1] de verde de malaquita, por lo que bajo estas condiciones no se estaria produciendo ningun riesgo para el ambiente. En adicion, se han observado en peces para el verde de malaquita valores de toxicidad que fluctuan entre 0.066 a 1 mg x [L.sup.-1], siendo Clarias macrocephalus Gunther 1864 la especie mas sensible y Heteropneustes fossilis (Bloch 1794) la menos sensible entre cinco especies de peces (http://www.pesticideinfo.org/Detail_Chemical.jsp). El verde de malaquita a 6 mg x [L.sup.-1] no produjo ningun efecto significativo sobre la bacteria Vibrio fischeri (Beijerinck 1889) (Hernando et al., 2007). El uso del verde de malaquita no esta permitido en varios paises del mundo, debido a que se considera que tiene un efecto altamente toxico, y debido a los residuos persistentes en el ambiente acuatico al emplearse en terapias de inmersion (GESAMP, 1997; Andersen et al., 2006). Por ende, Schmahl et al. (1992) recomiendan que, para reducir el riesgo de las terapias de inmersion por verde de malaquita en peces ornamentales como Paracheirodon axelrodi (Schultz 1956), la medicacion debe ser a traves de la alimentacion.

Para el caso del azul de metileno, el analisis comparativo con 6 valores de [CL.sub.50] para tres especies diferentes de crustaceos, ubica a la pulga de agua D. magna en la posicion primera en terminos de sensibilidad (Tabla 2). En adicion, se han observado en peces para el azul de metileno valores de toxicidad que fluctuan entre 1 a 188 mg x [L.sup.-1], siendo Morone saxatilis (Walbaum 1792) el pez mas sensible y H. fossilis el menos sensible entre 10 especies icticas (http://www.pesticideinfo.org/Detail_Chemical.jsp). Se ha registrado la presencia de serios problemas de contaminacion acuatica por el azul de metileno al reducir la penetracion de la luz y la fotosintesis (Waranusantigui et al., 2003).

[FIGURA 4 OMITIR]

Antiparasitarios

El producto leche de oje presento mayor toxicidad en D. magna segun los valores de [CL.sub.50] que el producto comercial Parasin. La diferente composicion de ambos antihleminticos naturales explicaria los resultados obtenidos. El producto comercial "Leche de oje" esta compuesto por dos plantas: leche de oje y hierba buena. En cambio el producto comercial Parasin tiene en su composicion tres plantas: semillas de zapallo, semillas de papaya y hierba buena. El latex leche de oje tiene mayor toxicidad que las semillas del zapallo y de la papaya (Diaz et al., 2004; Hansson et al., 2005).

La toxicidad del albendazol esta relacionada con su modo de accion como benzimidazolico, al actuar como un toxico mitotico en la division celular que desagrega los cromosomas en las celulas hijas, produciendo aneupliodia, y a su parametro de lipofilicidad (Oh et al., 2006). Se ha observado que el valor de [CL.sub.50] obtenido en el presente estudio en D. magna para el benzimidazolico, albendazol es significativamente mas alto que un estudio registrado para D. magna de 67.9 ug [L.sup.-1] a 48 h de exposicion (Oh et al., 2006). Sin embargo, las diferentes condiciones del ensayo como la preparacion de la solucion madre del albendazol (pureza 98% de Sigma-Aldrich), el empleo del acetato al 5% como solvente, y el punto final de observacion en las pulgas de agua, la inmobilidad condicionarian los resultados comparativos (Oh et al., 2006). Con el fin de determinar el riesgo en el ambiente acuatico del albendazol se uso el cociente de riesgo (CR) (Versteeg et al., 2005; Ankley et al., 2005), por ende se empleo el valor de PEC (Concentracion ambiental predicha) para este producto quimico para aguas superficiales, existente para los sistemas acuaticos de Alemania y Korea (Koschorreck et al., 2002; Oh et al., 2006) de 0.66 ug [L.sup.-1], mostrando luego de la aplicacion del CR, que divide el valor de PEC sobre el valor de [CL.sub.50] agudo de 180.4 mg [L.sup.-1] multiplicado por un valor de 1000 para estudios agudos (EC, 2003), lo cual determina la ausencia de riesgo del albendazol en el ambiente acuatico. Sin embargo, un refinamiento en la estimacion de los valores de PEC para el sistema de aguas superficiales del Peru es requerido para definir mas adecuadamente el riesgo del albendazol en estas aguas.

Para el praziquantel, se ha observado un valor de [CL.sub.50-48h] de 30.07 mg x [L.sup.-1], el cual es similar al obtenido para un estudio previo con D. magna ([CL.sub.50] = 31.6 mg x [L.sup.-1]) (http://www.pesticideinfo.org/Detail_Chemical.jsp). Se ha observado en peces valores de toxicidad para el praziquantel que fluctuan entre 13.4 a 13480 mg x [L.sup.-1], siendo Clarias gariepinus (Burchell 1822 y Pimephales promelas Rafinesque 1820, la especie ictica mas sensible y la menos sensible entre cuatro especies de peces, respectivamente (http://www.pesticideinfo.org/Detail_Chemical.jsp)
Apendice de tablas

Tabla 1. Valores comparativos de [CL.sub.50] con especies de
crustaceos acuaticos expuestos al verde de malaquita.

                                               Tiempo de
                               [CL.sub.50]     exposicion     Estadio
Especie de crustaceo         (mg [L.sup.-1])      (h)

Penaeus monodon Fabricius
  1798                            0.012            96          Zoea
Penaeus stylirostris
  Stimpson 1874                   0.016            24         Nauplio
Penaeus monodon Fabricius
  1798                            0.018            72          Zoea
Cancer magister Dana 1852         0.02             96          Zoea
Penaeus monodon Fabricius
  1798                            0.03             48          Zoea
Cancer magister Dana 1852         0.04             96          Zoea
Penaeus monodon Fabricius
  1798                            0.06             96        Postlarva
Penaeus monodon Fabricius
  1798                            0.07             72        Postlarva
Penaeus monodon Fabricius
  1798                            0.11             24          Zoea
Cancer magister Dana 1852         0.12             48          Zoea
Penaeus monodon Fabricius
  1798                            0.13             96          Mysis
Cancer magister Dana 1852         0.16             48          Zoea
Penaeus semisulcatus de
  Haan 1844                        0.2             24        Postlarva
Penaeus penicillatus
  Alcock 1905                      0.3             24          Zoea
Penaeus monodon Fabricius
  1798                            0.33             48        Postlarva
Penaeus monodon Fabricius
  1798                            0.61             72          Mysis
Penaeus duorarum
  Burkenroad 1939                 0.64             96           NI
Penaeus monodon Fabricius
  1798                              1              48          Mysis
Macrobrachium rosenbergii
  (de Man 1879)                   1.14             24          Zoea
Penaeus japonicus
  (Bate 1881)                     1.18             24          Zoea
Palaemonetes kadiakensis
  Rathbun 1902                     1.9             96          Zoea
Penaeus monodon Fabricius
  1798                             2.5             24          Mysis
Penaeus monodon Fabricius
  1798                            2.51             24        Postlarva
Penaeus monodon Fabricius
  1798                             2.9             24        Postlarva
Daphnia magna Straus
  1820 *                          2.97             96        Neonatos
Cypridiopsis sp.                  3.45             96           NI
Metapenaeus ensis (De Haan
  1844)                           3.73             24          Zoea
Argulus sp.                         5              NI           NI
Cypridiopsis sp.                  5.86             6            NI
Cypridiopsis sp.                  5.86             24           NI
Palaemonetes kadiakensis
  Rathbun 1902                     9.1             24          Zoea
Penaeus schmitti
  Burkenroad 1936                  10              24        Postlarva
Penaeus japonicus
  (Bate 1881)                     10.13            24        Postlarva
Homarus americanus H.
  Milne Edwards 1837               20              1        4to juvenil
Homarus gammarus Linnaeus
  1758                             20              1        4to juvenil
Macrobrachium rosenbergii
  (de Man 1879)                    21              24        Postlarva
Penaeus schmitti
  Burkenroad 1936                  46              72          Zoea
Metapenaeus ensis (De Haan
  1844)                            61              24        Postlarva
Penaeus schmitti
  Burkenroad 1936                  77              48          Zoea
Penaeus schmitti
  Burkenroad 1936                  323             24          Zoea

NI = No indicado. * = presente estudio.

(1) Facultad de Ciencias Biologicas, Universidad Particular Ricardo
Palma. E-mail: joseiannacone@yahoo.es

(2) Laboratorio de Ecofisiologia Animal. Facultad de Ciencias
Naturales y Matematicas. Universidad Nacional Federico Villarreal.
Calle San Marcos 383, Pueblo Libre, Lima, Peru.


Presentado: 01/08/2007

Aceptado: 19/11/2007

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Jose Iannacone (1,2) y Lorena Alvarino (2)

(1) Facultad de Ciencias Biologicas, Universidad Particular Ricardo Palma. E-mail: joseiannacone@yahoo.es

(2) Laboratorio de Ecofisiologio Animal. Facultad de Ciencias Naturales y Matematicas. Universidad Nacional Federico Villareal. Calle San Marcos 383, Pueblo Libre, Lima, Peru.
Tabla 2. Valores comparativos de [CL.sub.50] con especies de
crustaceos acuaticos expuestos al azul de metileno.

                              [CL.sub.50]   Tiempo de
                                 (mg        exposicion
   Especie de crustaceo       [L.sup.-1])      (h)        Estadio

Daphnia magna Straus,1820 *      0.38           96        neonato
Daphnia magna Straus,1820        1.33           72        neonato
Daphnia magna Straus,1820        2.26           48        neonato
Daphnia magna Straus,1820        4.93           24        neonato
Homarus gammarus Linnaeus,
1758                              10            20       juveniles
Penaeus californiensis
(Holmes, 1900)                    75            1          zoea

* = presente estudio.
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Author:Iannacone, Jose; Alvarino, Lorena
Publication:Ecologia Aplicada
Date:Jan 1, 2007
Words:7438
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