Printer Friendly

ELISA for the diagnosis of autoimmune bullous disorders/Otoimmun bulloz hastaliklarin tanisinda ELISA.

Summary

ELISA has been phrased as Enzyme Linked Immunosorbent Assay. The ELISA provide to detect autoantigens in autoimmune bullous disorders. Therefore, it is assited understanding of the immunopathogenesis of these diseases. Recently, commercial test systems has been developed for the diagnosis and course. The aim of this paper is to review applying investigation of the ELISA for autoimmune bullous disorders.

Key Words: Autoimmune bullous disorders, ELISA, diagnosis, course, immunopathogenesis

Ozet

Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA), enzime bagli immunosorbent test olarak ifade edilmektedir. ELISA, otoimmun bulloz hastaliklarin otoantijenlerinin saptanmasini saglamaktadir. Boylece, bu hastaliklarin immunopatogenezinin anlasilmasinda yardimci olmaktadir. Son yillarda, tani ve takipte kullanilmak uzere ticari test sistemleri gelistirilmistir. Bu yazinin amaci otoimmun bulloz hastaliklarda ELISA incelemesinin kullanimini gozden gecirmektir.

Anahtar Kelimeler: Otoimmun bulloz hastaliklar, ELISA, tani, takip, immunopatogenez

Giris

Otoimmun bulloz hastaliklarda tani hastalardan alinan deri ve serum orneklerinde otoantikorlarin saptanmasina dayanmaktadir. Simdiye kadar olan patogenezde-ki ve taniya yonelik gelismelere ragmen tanida altin standart, direkt immunofloresan test ile dokudaki otoantikorlarin saptanmasidir. Dolasan otoantikorlarin tipleri, indirekt immunofloresan test ile gosterilebil-mektedir (1) Bu otoantikorlarin tiplerinin yanisira spesifik olarak hangi antijenik yapilara karsi gelistigi ise "immunoblot", ELISA veya "immunopresipitasyon" gibi rutin olarak uygulanmasi zor incelemeler ile saptanmaktadir (2). Son yillarda, tani ve takipte kullanilmak uzere (ornegin desmoglein 1, desmoglein 3, BP180, NC 16A, epidermal transglutaminaz gibi) ELISA ticari test sistemleri gelistirilmistir. Boylece spesifik otoantikor-larlarin titrasyonunun hastaligin tanisi ve takibinde kullanimi gundeme gelmistir (3-6).

ELISA Uygulamasi

Klasik olarak ELISA sirasiyla; antijen-antikor kompleksinin olusturulmasi, yikama islemi, enzim ile isaretli antikor eklenmesi, yikama islemi, enzimin etkiledigi substrain eklenmesi ve enzim reaksiyonunu durdurma basamaklarindan olusmaktadir.

Kullanilan malzeme: Otoimmun bulloz hastaliklarin tanisi icin ticari olarak hazirlanmis kitlerin icerisinde; 1. "Assay diluent" (Serumu dilue edici), 2. "Wash concentrate" (Konsantre yikama solusyonu, 3. "Calibrator 1" (Saglikli insan serumu), 4. "Calibrator 2" (Pozitif serum), 5. "Conjugate diluent" (Konjugat dilue edici), 6. "Conjugate reagent" (Enzim ile isaretli antikorlar), 7. Substrat, 8. Durdurma solusyonu, 9. Antijenle kapli kuyucuklar (Or: Desmoglein 3, vb.) yer almaktadir.

Uygulama sirasi: 1. Kalibrator inkubasyonu, 2. Serum veya tukruk dilusyonu (7), 3. Hasta ornegi inkubasyonu, 4. Inkubasyon icin bekleme, 5. Yikama, 6. Konjugat dilusyonu, 7. Konjugat inkubasyonu, 8. Inkubasyon icin bekleme, 9. Yikama, 10. Substrat inkubasyonu, 11. Durdurma solusyonu eklenmesi Sonuclarin degerlendirilmesi: Renk degisiminin fotometrik olcumu ile elde edilen veriler asagidaki formulde uygun yerlere yerlestirilerek sonuclar hesaplanir (8-9).

(A450<Ornek>-A450<Kalibrator 1>)/(A450<Kalibrator 2>-A450<Kalibrator 1>)x100=...U/ml

ELISA'nin Uygulandigi Alanlar

Genel bilgilerde bahsedildigi gibi otoimmun bulloz hastaliklarin immunopatogenezinin arastirilmasi amaciyla (ornegin envoplakin, periplakin, kollajen VII, laminin 5, vb.) ELISA yapilmaktadir (10-12). Boylece antijenik epitoplara spesifik otoantikorlar ve bu antikorlarin alt tip iliskisi sonucunda ornegin pemfigus vulgaris' de saptanan desmoglein 3 spesifik otoreaktif Th2 hucreleri veya IgE'nin bu yolagi hedef alan yeni tedavi uygulamalarinin gelistirilmesinde yardimcidir (13). Ayrica tani, takip ve tedaviye alinan yanitin degerlendirilmesinde arastirma amaciyla kullanilmaktadir. Tablo 1'de Schmidt ve Zillikens (9), Rose (6) ve arkadaslari tarafindan bildirilmis olan ELISA testinde simdiye kadar kullanilan antijenik yapilar, ticari firmalar ve kullanildigi otoimmun bulloz hastaliklar ozetlenmistir.

Tanidaki Yeri

Oyku ve klinik degerlendirmenin ardindan direkt ve indirekt immunofloresan inceleme ile yapilan tanisal degerlendirme, ELISA ile dogrulanabilir. Hastaligin seyri sirasinda taninin degerlendirilmesi yapilabilir. Sekil 1'de Eming ve Hertl (3) tarafindan onerilen tanisal yaklasim ozetlenmistir.

ELISA uygulamasinin tanidaki sorunlari: Kullanima hazir ELISA kitlerinin hastalikla iliskili tum antijenik epitoplari ve aktivite ile iliskili otoantikor alt tiplerini icermedigi unutulmamalidir. Bunun yani sira yalanci pozitif sonuclarin olabilecegi bilinmelidir (14).

Takipteki Yeri

Hastaligin seyri sirasinda ELISA isteminin klinik degerlendirmeye gore belirlenmesi onerilmektedir. Hastaligin aktif oldugu donemde 4 haftada bir, stabil oldugu donemde ise 4 ayda bir inceleme yapilabilir (3). Ozellikle pemfigus ve pemfigoid grubu icin klinik aktivite ile ELISA sonuclari arasinda pozitif bir korelasyon gosterilmistir (15,16). Ancak pemfigus hasta grubunda yaptigimiz bir calismada, klinik aktivite ile uyumlu olsa da ELISA sonuclarinin prediktif degerinin istatistiksel olarak anlamli olmadigi saptanmistir (17). Indirekt immunofloresan titrasyonlari ile desmoglein 1 ve desmoglein 3'e karsi spesifik otoantikorlarin ELISA degerleri karsilastirildiginda; indirekt immunofloresanin titrelerinde artis olmasina karsin ELISA sonuclarinin belli bir degerden sonra ayni duzeyde kaldigi gozlenmistir (18). Bu nedenle, takipte ELISA kullanilacaksa gercek indeks degeri icin, sonuc >150 lU/ml ise dilusyon yapilmasi onerilebilir (19).

[ILLUSTRATION OMITTED]

Son Soz

--ELISA, otoimmun bulloz hastaliklarin immunopatogenezini ve olasi yeni tedavi yaklasimlarini arastirma amaciyla kullanilmaktadir.

--ELISA'da pozitif sonuc, hastanin o sirada var olan yakinimlarindan sorumlu olmayabilir.

--Sonuclar, klinik ve histopatolojik olarak iliskilendirilerek dogrulanabilir.

DOI: 10.4274/turkderm.45.s7

Kaynaklar

(1.) Uzun S, Memisoglu HR: Bullu hastaliklarda immunofloresan bulgular. TURKDERM 1999;33:108-18.

(2.) Zillikens D. Diagnosis of autoimmune bullous skin diseases. Clin Lab 2008;54:491-503.

(3.) Eming R, Hertl M; Autoimmune Diagnostics Working Group: Autoimmune bullous disorders. Clin Chem Lab Med 2006;44:144-9.

(4.) Schmidt E, Dahnrich C, Rosemann A, Probst C, Komorowski L, Saschenbrecker S, et al.: Novel ELISA systems for antibodies to desmoglein 1 and 3: correlation of disease activity with serum autoantibody levels in individual pemphigus patients. Exp Dermatol 2010;19:458-63.

(5.) Sardy M, Karpati S, Merkl B, Paulsson M, Smyth N: Epidermal transglutaminase (TGase 3) is the autoantigen of dermatitis herpetiformis. J Exp Med 2002;195:747-57.

(6.) Rose C, Armbruster FP, Ruppert J, Igl BW, Zillikens D, Shimanovich I: Autoantibodies against epidermal transglutaminase are a sensitive diagnostic marker in patients with dermatitis herpetiformis on a normal or gluten-free diet. J Am Acad Dermatol 2009;61:39-43.

(7.) Andreadis D, Lorenzini G, Drakoulakos D, Belazi M, Mihailidou E, Velkos G, et al.: Detection of pemphigus desmoglein 1 and desmoglein 3 autoantibodies and pemphigoid BP180 autoantibodies in saliva and comparison with serum values. Eur J Oral Sci 2006;114:374-80.

(8.) Ishii K, Amagai M, Hall RP, Hashimoto T, Takayanagi A, Gamou S, et al.: Characterization of autoantibodies in pemphigus using antigen-specific ELISAs with baculovirus expressed recombinant desmogleins. J Immunol 1997;159:2010-7.

(9.) Schmidt E, Zillikens D: Modern diagnosis of autoimmune blistering skin diseases. Autoimmun Rev 2010;10:84-9.

(10.) Probst C, Schlumberger W, Stocker W, Recke A, Schmidt E, Hashimoto T, et al.: Development of ELISA for the specific determination of autoantibodies against envoplakin and periplakin in paraneoplastic pemphigus. Clin Chi m Acta 2009;410:13-8.

(11.) Remington J, Chen M, Burnett J, Woodley DT: Autoimmunity to type VII collagen: epidermolysis bullosa acquisita. Curr Dir Autoimmun 2008;10:195-205.

(12.) Bekou V, Thoma-Uszynski S, Wendler O, Uter W, Schwietzke S, Hunziker T, et al.: Detection of laminin 5-specific auto-antibodies in mucous membrane and bullous pemphigoid sera by ELISA. J Invest Dermatol 2005;124:732-40.

(13.) Nagel A, Lang A, Engel D, Podstawa E, Hunzelmann N, de Pita O, et al.: Clinical activity of pemphigus vulgaris relates to IgE autoantibodies against desmoglein 3. Clin Immunol 2010;134:320-30.

(14.) Wieland CN, Comfere Nl, Gibson LE, Weaver AL, Krause PK, Murray JA: Antibullous pemphigoid 180 and 230 antibodies in a sample of unaffected subjects. Arch Dermatol 2010;146:21-5.

(15.) Amagai M, Komai A, Hashimoto T, Shirakata Y, Hashimoto K, Yamada T, et al.: Usefulness of enzyme-linked immunosorbent assay using recombinant desmogleins 1 and 3 for serodiagnosis of pemphigus. Br J Dermatol 1999;140:351-7.

(16.) Sitaru C, Dahnrich C, Probst C, Komorowski L, Blocker I, Schmidt E, et al.: Enzyme-linked immunosorbent assay using multimers of the 16th non-collagenous domain of the BP180 antigen for sensitive and specific detection of pemphigoid autoantibodies. Exp Dermatol 2007;16:770-7.

(17.) Akman A, Uzun S, Alpsoy E: ImmunopathologIc features of pemphigus in the east Mediterranean region of Turkey: a prospective study. Skinmed 2010;8:12-6.

(18.) Bystryn JC, Akman A, Jiao D: Limitations in enzyme-linked immunosorbent assays for antibodies against desmogleins 1 and 3 in patients with pemphigus. Arch Dermatol 2002;138:1252-3.

(19.) Cheng SW, Kobayashi M, Tanikawa A, Kinoshita-Kuroda K, Amagai M, Nishikawa T: Monitoring disease activity in pemphigus with enzyme-linked immunosorbent assay using recombinant desmogleins 1 and 3. Br J Dermatol 2002;147:261-5.

Ayse Akman Karakas

Akdeniz Universitesi Tip Fakultesi, Deri ve Zuhrevi Hastaliklar Anabilim Dali, Antalya, Turkiye

Yazisma Adresi/Address for Correspondence: Dr. Ayse Akman Karakas, Akdeniz Universitesi Tip Fakultesi, Deri ve Zuhrevi Hastaliklar Anabilim Dali, Antalya, Turkiye, Tel: +90 242 249 67 08 E-posta: aakman@akdeniz.edu.tr
Tablo 1. Schmidt ve Zillikens (9), Rose (6) ve arkadaslari
tarafindan bildirilmis olan ELISA testinde  simdiye kadar
kullanilan antijenik yapilar, ticari firmalar ve
kullanildigi otoimmun bulloz hastaliklar

Antijen                Hastalik                    Ticari firma

Bocek hucrelerinden    Pemfigus foliaseus         MBL
elde edilmis
Desmoglein 1'in
ectodomain' i

Insan HEK 293          Pemfigus foliaseus         Euroimmun
hucrelerinden
elde edilmis
Desmoglein 1'in
ectodomain 'i

Bocek hucrelerinden    Pemfigus vulgaris          MBL
elde edilmi i
Desmoglein 3'un
ectodomain' i

Insan HEK 293          Pemfigus vulgaris          Euroimmun
hucrelerinden
elde edilmis
Desmoglein 3'un
ectodomain' i

BP180 NC16A            Bulloz pemfigoid           MBL

BP180 NC16A            Pemfigoid gestasyones      Euroimmun
tetramer               Liken planus pemfigoides
                       Mukoz membran pemfigoidi
                       Lineer IgA dermatozu

BP230'un N-ve          Bulloz pemfigoid           MBL
C-terminal
parcalari

BP230' un              Bulloz pemfigoid           Euroimmun
C-terminal parcasi

Envoplakin' in         Paraneoplastik pemfigus    Euroimmun
N-terminal parcasi

Epidermal              Dermatitis herpetiformis   Immundiagnostik
transglutaminaz                                   AG
ve doku
transglutaminazi
COPYRIGHT 2011 Galenos Yayinevi Tic. Ltd.
No portion of this article can be reproduced without the express written permission from the copyright holder.
Copyright 2011 Gale, Cengage Learning. All rights reserved.

Article Details
Printer friendly Cite/link Email Feedback
Title Annotation:Continuing Medical Education/Surekli Egitim
Author:Karakas, Ayse Akman
Publication:Archives of the Turkish Dermatology and Venerology
Date:Mar 1, 2011
Words:1467
Previous Article:Immunofluoresecence findings in the diagnosis of autoimmune bullous diseases/Otoimmun bulloz hastaliklarin tanisinda immunofloresan bulgular.
Next Article:Tzanck cytology in diagnosis of autoimmune bullous diseases/Otoimmun bulloz hastaliklarin tanisinda tzanck sitoloji.
Topics:

Terms of use | Copyright © 2018 Farlex, Inc. | Feedback | For webmasters