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Diversidad genetica de tres poblaciones de Physalis peruviana a partir del fraccionamiento y patron electroforetico de proteinas de reserva seminal.

Genetic diversity in three populations of Physalis peruviana using fractionation and electrophoretic patterns of seed storage protein

Introduccion

Physalisperuaviana L. conocida en el Peru como aguaymanto, uchuva en Colombia, uvilla en Ecuador y golden berry en ingles, es una planta herbacea nativa de los Andes, que ha ganado importancia economica en los ultimos anos debido a los componentes bioactivos presentes en su fruto, por lo cual ha sido considerada como un alimento funcional (Puente et al. 2011). El fruto es una baya esferica amarillo-naranja que contiene entre 150300 semillas pequenas (Fischer et al. 2014). La demanda local, nacional y extranjera de este fruto se encuentra en estado creciente, tanto en su forma fresca como producto transformado (INDECOPI 2015), por lo que el conocimiento de su variabilidad genetica permitiria adecuados programas de mejora genetica y conservacion de este cultivo. Es asi que, Morillo et al (2011) senalan que, debido a que es un cultivo con gran demanda de exportacion, es necesario el conocimiento de su variabilidad genetica para las actividades de seleccion y premejoramiento; asi mismo refieren que la utilizacion plena del potencial de cualquier cultivo depende de un conocimiento genetico amplio, por lo que seria de suma importancia conocer, conservar y manejar la diversidad de fitorecursos con gran potencial como es el caso de P. peruviana.

Se entiende como ecotipo a aquella poblacion que manifiesta una expresion fenotipica particular frente a un ambiente determinado; asi, segun la Biblioteca Nacional de Agricultura de los EE.UU. (NAL 2017) un ecotipo es un grupo subespecifico que se adapta geneticamente a un habitat particular. En Physalis peruviana se ha determinado ecotipos diferenciados por caracteres morfologicos, tres ecotipos procedentes de Colombia, Kenia y Sudafrica son lo que comunmente se cultivan en todo el mundo; sin embargo, existen referenciados mas de 80 ecotipos (Puente et al. 2011). En el Peru, el departamento de Cajamarca tiene la mayor area cultivada de aguaymanto. Los agricultores y las empresas agroindustriales, dedicadas a la produccion de aguaymanto, hacen esfuerzos para tratar de identificar, seleccionar y cultivar distintos ecotipos, sin embargo, no se ha profundizado en conocimiento genetico que sustente la seleccion de estos ecotipos.

Aunque, tradicionalmente la diversidad genetica fue evaluada usando caracteres morfologicos, estos han sido superados por marcadores moleculares, como los bioquimicos y los basados en ADN (Schlotterer 2004). Uno de estos marcadores bioquimicos lo conforman las proteinas de reserva de semillas, que constituyen la fuente de aminoacidos para los procesos de sintesis que tienen lugar durante la germinacion (Martin et al. 2010). Las proteinas de reserva de semillas (SSPs, por sus siglas en ingles) se clasifican en base a su solubilidad, asi las albuminas son solubles en agua, las globulinas son solubles en soluciones salinas, las prolaminas son solubles en alcohol y las glutelinas son solubles en acidos o alcalis (Osborne 1909). El analisis de SSPs ha sido utilizado para detectar diferencias entre especies y cultivares de Solanaceas (Vladova et al. 2000, Vladova et al. 2004), obteniendo perfiles electroforeticos distintos mediante electroforesis en gel de poliacrilamida desnaturante (SDS-PAGE). Tambien, las SSPs han permitido la diferenciacion entre ecotipos de tomates y frejoles (Mennella et al. 2001, Mennella et al. 2003). Ademas, se ha senalado que los perfiles electroforeticos de proteinas seminales tienen una alta estabilidad e independencia de las condiciones ecologicas (Florina 2012; Samah et al. 2015), por lo que tambien se le ha utilizado para diferenciar y caracterizar poblaciones (Ramirez et al 2016). Aunque los marcadores basados en ADN son reconocidos por proporcionar resultados mas especificos, los marcadores bioquimicos que utilizan la SDS-PAGE tienen la ventaja de ser tecnicas simples y de bajos requerimientos, adecuados para estudios iniciales a gran escala en los programas de mejoramiento genetico de plantas (Gao et al. 2010). Al respecto, Galussi et al (2006) sostienen que el conocimiento del perfil de proteinas seminales de cada cultivar permitiria reconocer las posibles diferencias entre ellos; mientras que, Moscoso et al (2017) senalan que los estudios de fraccionamiento y caracterizacion de proteinas de semilla permiten identificar variedades con valor nutricional, lo que conlleva a estudios que permitirian desarrollar nutraceuticos ricos en peptidos bioactivos. Por otro lado, Gardiner y Forde (1992) demostraron que la SDS-PAGE de 200 semillas como minimo produce un patron electroforetico representativo y reproducible para la poblacion analizada.

En el presente trabajo se analiza la diversidad genetica de tres poblaciones de aguaymanto, designados por sus productores como ecotipos Agroandino, Celendino y Cajabamba, procedentes del departamento de Cajamarca.

Material y metodos

Material biologico.--Frutos maduros de treinta plantas de P. peruviana fueron colectados durante el ano 2015, en tres poblaciones cultivadas de las provincias de San Pablo, Celendin y Cajabamba, en la region de Cajamarca (Fig. 1; Tabla 1). Las muestras fueron colectadas de los campos de cultivo de la empresa Agroandino-Peru (San Pablo), AZ Ingenieros EIRL (Celendin) y las proporcionadas por el Ing. Lenin Abanto (Cajabamba) quienes designan a sus poblaciones como ecotipos Agroandino, Celendino y Cajabamba respectivamente. Estos ecotipos son caracterizados por diferencias morfologicas, como la forma y color del fruto. Se colectaron diez frutos maduros de planta, cada fruto contiene aproximadamente 200 semillas, lo que hace un total de 100 frutos y 20000 semillas por poblacion. El estado de madurez de los frutos fue catalogado de acuerdo a la norma tecnica colombiana NTC 4580 para P. peruviana. Se enviaron muestras herborizadas al Museo de Historia Natural de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos para su identificacion taxonomica (Codigos: 222-USM-2015, 223-USM-2015, 224-USM-2015).

Extraccion de las fracciones proteicas.--La extraccion proteica se realizo por planta, asi las semillas de los diez frutos de cada planta fueron mezcladas y se extrajo una muestra de 0.2 g, lo que equivale aproximadamente 250 semillas. Estas semillas fueron trituradas hasta obtener una harina fina con un mortero, a partir de la cual se obtuvo las cuatro fracciones de proteinas de almacenamiento seminal sucesivamente en base a la tecnica de fraccionamiento por solubilidad segun Osborne (1909). De esta manera, se extrajo primero la albumina, para lo cual se mezclo la harina con agua destilada (1:5 p/v) durante 60 minutos y se centrifugo a 14500 rpm durante 20 minutos. El sobrenadante, fraccion albumina, se extrajo y almaceno a -20 2C. El sedimento se lavo dos veces con agua destilada y se anadio la solucion de extraccion de globulinas (NaCl 0.5 M, Tris HCl 50 mM pH 8), y se continuo con el mismo protocolo utilizado para la fraccion anterior. De forma similar, se extrajeron la fraccion glutelina (NaOH 0.1 M, SDS al 2%, 2-mercaptoetanol al 5%) y prolamina (etanol al 70%). Ademas, cada fraccion (1:4 v/v) se desgraso con acetona /metanol (8:1 v/v) durante 2 horas a -20[grados]C, se centrifugo a 14500 rpm durante 15 minutos y se resuspendio el sedimento en SDS al 0.1%. La cuantificacion de proteinas se realizo utilizando absorbancia a 280 nm en NanoDrop Lite (Thermo Scientific). La cuantificacion fue corregida de acuerdo con la formula de Waddell (Aitken & Learmonth 2002) y el rendimiento proteico ([g.sub.proteina]/100 [g.sub.harina de semilla]) se calculo utilizando los datos de cuantificacion y volumen de extraccion.

Electroforesis de proteinas.--La electroforesis se realizo usando un equipo de electroforesis vertical (Mini-PROTEAN, Bio-Rad Laboratories) utilizando un sistema discontinuo-denaturante (SDS-PAGE) segun Laemmli (1970). Se prepararon geles de resolucion (14%, pH 8.8) y empaquetamiento (4%, pH 8.6) utilizando una solucion de acrilamida-bisacrilamida, tampon Tris-HCl, sodio dodecilsulfato (SDS), persulfato de amonio y tetrametil-etilendiamina (TEMED). Se analizaron condiciones reductoras y no reductoras utilizando tampon de carga 4X (Tris HCl 250 mM pH 6.8, glicerol al 25%, azul de bromofenol al 0.02%, SDS al 8% y mercaptoetanol al 8%) segun Grabski et al (2001) con ligeras modificaciones. Para las condiciones no reductoras, solo se evito el uso de 2-mercaptoetanol. La mezcla fue calentada en bano maria (90[grados]C) durante 5 minutos, se centrifugo y se uso inmediatamente para la separacion electroforetica. Los geles se tineron con Coomassie Blue R-250 de acuerdo con Lawrence et al. (2009).

Analisis de los datos.--Se evaluo la distribucion normal (prueba de Shapiro-Wilk, P <0.05) y homogeneidad de varianzas (prueba de Levene, P <0.05) para la cuantificacion de proteinas. La comparacion de las medias entre los ecotipos se evaluo mediante ANOVA (parametrica) o Kruskal-wallis (no parametrica). Todas las pruebas estadisticas se realizaron utilizando el programa Rstudio v3.1.2 (R Core Team 2014).

Las comparaciones de patrones de proteinas fueron cualitativas, basadas en la movilidad de bandas en condiciones reductoras. Se elaboro una matriz binaria de presencia/ausencia de proteina. Las bandas debiles se asignaron como datos perdidos y se descartaron del analisis aquellas bandas con un porcentaje de datos perdidos superior al 10% de las treinta plantas analizadas. El indice de Shannon (H) se utilizo para analizar la diversidad genetica (Lewontin 1972), el cual se calculo en dos niveles usando el programa Popgene v1.32 (Yeh et al. 1999), asi [H.sub.pop] es la diversidad dentro de las poblaciones, y [H.sub.sp] es la diversidad de la especie, con estos parametros se determino la proporcion de diversidad dentro de las poblaciones ([H.sub.pop]/[H.sub.sp]), y la proporcion de diversidad entre poblaciones ([H.sub.sp]-[H.sub.pop]/[H.sub.sp]) (King & Schaal 1989). Las masas moleculares de las proteinas se estimaron mediante comparacion con el marcador de proteina de 6,5 a 200 kDa (SERVA Electrophoresis GmbH), y se realizo el analisis densitometrico usando el programa Gelanalyzer 2010a.

Resultados

Fraccionamiento proteico.--La extraccion sucesiva de harina de semilla de P. peruviana con diferentes disolventes produjo albumina, globulina, prolamina y glutelina en proporciones variables (Tabla 2). La globulina fue la mayor fraccion proteica (82.4%), presentando el 1.08, 1.15, 1.12 g/100g en la poblacion de San Pablo, Celendin y Cajabamba respectivamente. La albumina aporto 13.9%, seguida de la glutelina (3.7%) y la prolamina (0.7%) que presento niveles insignificantes. No hubo diferencias significativas en el contenido proteico de las fracciones entre las poblaciones (P < 0.05) (Tabla 2).

SDS-PAGE.--El SDS-PAGE de la fraccion albumina en condiciones reductoras mostro proteinas entre 6.5 a 45 kDa (Fig. 2 (a), carril 1). Bajo condiciones no reductoras se encontro un patron similar (Fig. 2 (a), carril 2), pero variando solo en la banda de bajo peso molecular 6.5 kD lo que indicaria la presencia de enlaces disulfuro. El analisis densitometrico revelo tres regiones principales, siendo la proteina de bajo peso molecular (banda z) la mayoritaria seguida por las bandas m y n. La fraccion globulina en condiciones reductoras mostro 6 proteinas, que se visualizaron en tres grupos compuestos por dos proteinas cada uno (Fig. 2 (b), carril 1). Asi, en el Grupo 1, las bandas a y b mostraron un peso molecular de aproximadamente 45 kDa; las bandas c y d de ~34 y 32 kDa respectivamente en el grupo 2; y las bandas e y f presentaron ~24 y 22 kDa en el grupo 3, siendo estas ultimas las bandas mayoritarias. Ademas, los grupos 2 y 3 en conjunto representaron el 83.4% de la fraccion globulina. Por otro lado, en condiciones no reductoras, se encontraron aproximadamente 12 proteinas en esta fraccion. Ademas, se identificaron subunidades de algunas bandas proteicas (cf, ef y ff en la Fig. 2 (b), carril 2) extrayendolas del gel y resolviendolas bajo condiciones reductoras. La fraccion prolamina se resolvio en una banda de bajo peso molecular (6.5 kDa), con una ligera variacion bajo condiciones no reductoras similares a la banda z en la fraccion albumina. Las glutelinas solo se lograron extraer bajo condiciones reductoras, mostrando 4 bandas de PM similar a la fraccion globulina (Fig. 3, carril 4).

Diversidad genetica.--Solo la fraccion albumina presento polimorfismo, observandose 21 bandas de las cuales, debido al porcentaje de datos perdidos, fueron analizadas 14; obteniendose tres perfiles proteicos diferentes (perfil A, B y C en Fig. 4). Todas las plantas de San Pablo presentaron un solo perfil, el perfil A, el cual fue compartido con las otras poblaciones. La poblacion de Celendin mostro dos perfiles (A y B), siendo el perfil A compartido con San Pablo y el perfil B con Cajabamba. La poblacion de Cajabamba presento los tres perfiles, siendo uno de ellos hallado solo en esta poblacion (perfil C), ademas no se incluyo en el analisis el perfil electroforetico de dos individuos pues presentaron un patron atipico. Los per files A, B y C se hallaron en 20, 7 y 1 individuo respectivamente (Tabla 3). Las fracciones globulina y glutelina se resolvieron en un unico perfil para todas las plantas analizadas. Debido a que solo la fraccion albumina presento polimorfismo, el indice de Shannon se calculo sobre la base de esta fraccion. La poblacion de San Pablo mostro diversidad nula (H = 0,00 [+ o -] 0,0), mientras Celendin y Cajabamba mostraron baja diversidad 0,1 [+ o -] 0,25 y 0.17 [+ o -] 0.29 respectivamente, siendo Cajabamba el mas diverso. Respecto a la estructuracion genetica, la diversidad se hallo distribuida principalmente dentro de las poblaciones (63%), mientras la diversidad entre estas fue 37%.

Discusion

Sogi et al. (2002) estudiando semillas de tomate (Solanaceae) encontraron una tendencia similar a nuestros resultados en aguaymanto, asi, la globulina fue la fraccion mayoritaria (61%), seguida de albumina (23.4%), glutelina (8.6%) y prolamina (7.1%). Ademas, Sheoram et al. (2005) utilizando electroforesis 2D y espectrometria de masas, tambien indican a las globulinas como las proteinas mayoritarias, pues identificaron una alta frecuencia de estas (46%), seguidas por las albuminas (2%) a partir de la identificacion de 47 proteinas de una extraccion total de proteinas. Sin embargo, en la sandia, una cucurbitacea, la composicion proteica varia un poco, siendo la fraccion mayoritaria la globulina seguida de glutelinas, albuminas y prolaminas (Wani et al., 2011). Estos resultados apoyan los hallazgos que especies de diferentes familias presentan distintas composiciones en sus fracciones de proteina seminal.

En Peru no han sido reportados estudios de perfiles electroforeticos de proteinas seminales de aguaymanto, por lo que el presente trabajo seria un primer reporte. No hubo diferencias en la concentracion de las fracciones proteicas entre las poblaciones, lo cual indica su alta similitud. Wani et al. (2011) estudiando fracciones proteicas en dos variedades certificadas de sandia, hallaron diferencias significativas en la concentracion de las fracciones. Resultados similares fueron obtenidos por Tchiagam et al. (2011) en 10 variedades de frijoles. Teniendo en cuenta lo anterior, nuestros resultados indicarian que las tres poblaciones serian similares.

Varios autores mencionan a la albumina 2S, como la proteina mayoritaria en la fraccion albumina (Salmanowicz & Przybylska 1994). La albumina 2S es una proteina heterodimerica compuesta de una subunidad grande y una pequena unidas por enlaces disulfuro (SS) (Shewry et al. 1995). Oguri et al. (2003) encontraron la subunidad grande y pequena con pesos moleculares (PM) de alrededor de 8 y 4 kDa respectivamente en tomate, usando un sistema Tricina-SDS-PAGE. Por lo tanto, la banda de 6,5 kDa (Fig. 2 (a), banda z en el carril 1) corresponderia a la albumina 2S. Sin embargo, no fue posible distinguir las dos subunidades porque el sistema utilizado Glicine-SDS-PAGE no permite la resolucion de proteinas de bajo peso molecular (Schagger 2006).

La fraccion de globulina se compone de dos grupos en base a su coeficiente de sedimentacion: 7s y 11s, llamados vicilinas y leguminas, respectivamente (Tai et al. 2001). Sheoram et al. (2005) encontro que las vicillinas poseen mayor PM que las leguminas en tomate. Ademas, Tai et al. (2001) identificaron una vicilina de 45 kDa en esta misma especie, por lo cual las bandas a y b (grupo 1) (Fig. 2 (b), carril 1) podrian considerarse vicilinas. Las leguminas estan compuestas por dos polipeptidos llamados [alfa] y [beta] que estan unidos por enlaces S-S (Fukushima, 1991). Ademas, los [alfa]-polipeptidos usualmente tienen PM entre 30-40 kDa mientras que los [beta] entre 20-25 kDa, asi los [alfa]-polipeptidos poseen mayor PM que los [beta] (Alche et al. 2006). Por lo tanto, el grupo 2 (34 y 32 kDa) y 3 (24 y 22 kDa) serian los a y [beta]-polipeptidos respectivamente. La separacion de los dimeros ef, cf y ff (figura 2 (b), carril 2) tambien confirmarian esta designacion. Ademas, Chileh et al. (2010) indicaron a las leguminas como las globulinas mayoritarias, lo que estaria de acuerdo con nuestros resultados densitometricos.

Las prolaminas presentaron un PM similar a la banda z (~ 6,5 kDa) de la fraccion albumina, la cual ha sido designada como la albumina 2s de aguaymanto. Actualmente, la albumina 2S se ha clasificado como miembro de la superfamilia prolamina basandose en relaciones estructurales (Sherry et al. 2002). Por lo tanto, las prolaminas de P. peruviana podrian ser isoformas solubles en alcohol de la albumina 2S. Esto podria deberse a que la albumina 2S esta codificada para familias multigenicas que generan varias isoformas (Oguri et al., 2003). La glutelina solo se extrajo bajo condiciones reductoras como tambien mencionan Smith y Desborough (1987) en Solanaceaes. El perfil de esta fraccion proteica fue similar al de las legumininas, lo que indicaria que las glutelinas de P. peruviana podria ser isoformas de este grupo de proteinas.

Las tres poblaciones mostraron baja diversidad genetica, incluso San Pablo presento nula. Los valores bajos de diversidad genetica se generan por la presencia de una poblacion estructurada, que puede ser generada en poblaciones cultivadas por dos razones principales: (1) el tipo de reproduccion vegetal, principalmente en autogamas, lo cual no es el caso pues aguaymanto es principalmente alogama (Cely et al. 2015) y (2) la presencia de un programa de mejora genetica; esto ultimo fue mencionado por los representantes de las empresas que cultivan los denominados ecotipos Agroandino y Celendino, quienes aplican el metodo de seleccion de masal. Por lo tanto, esta seria la razon de la baja diversidad genetica encontrada. Aunque no se encontro variacion en globulinas y glutelinas, su existencia no se descarta pues se ha reportado que la tecnica SDS-PAGE oculta variabilidad que es posible revelar con otras tecnicas como HPLC (Menella et al. 2001; Menella et al. 2003; Menella et al. 2005).

El analisis electroforetico es una valiosa herramienta que permite separar y aislar proteinas, y los perfiles o patrones electroforeticos que se obtienen permiten detectar variabilidad en cuanto a tipos y concentraciones de proteinas en muestras de diferente origen (Abarca et al. 2002). Ademas, se ha demostrado que es posible distinguir variedades tradicionales, variedades certificadas y ecotipos basandose en un perfil electroforetico especifico (Driedger et al. 1993). Asi, los tres perfiles encontrados en la fraccion albumina indicarian la existencia de tres posibles ecotipos, dos de ellos, perfil A y B, (Fig. 4) hallados en varios individuos (20 y 7 respectivamente) y por tanto se sugeriria su existencia, sin embargo, el tercero (perfil C, Fig. 4) solo fue hallado en un individuo de Cajabamba y, por tanto, no se podria confirmar su presencia. En trabajos previos se ha empleado a las glutelinas como un marcador proteico en la diferenciacion de variedades en la familia solanacea (Smith & Desborough 1987; Menella et al. 2001), sin embargo, nuestros hallazgos indicarian que la fraccion albumina tambien deberia ser considerada como un marcador a tener en cuenta para el analisis de variedades en aguaymanto. La presencia de variedades o ecotipos debe ser corroborada empleando tecnicas de identificacion morfologica, agronomica y ADN.

En resumen, se reporta por primera vez un analisis de los perfiles electroforeticos de proteinas seminales de tres poblaciones de aguaymanto provenientes del departamento de Cajamarca, los perfiles electroforeticos son compartidos y no muestran diferencia en la concentracion proteica de semillas, lo que seria consecuencia de la baja diferenciacion genetica entre las poblaciones de San Pablo, Celendin y Cajabamba. Esto indicaria que aun no se han diferenciado como ecotipos. Por otro lado, la mayor homogeneidad de la poblacion de San Pablo se deberia a una mejor eficiencia en el programa de seleccion y mejora genetica implementado por la empresa.

doi: http://dx.doi.org/10.15381/rpb.v26i2.16370

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Agradecimientos:

Los autores agradecen a las empresas Agroandino y AZingenieros, y al Ing. Lenin Abanto por las facilidades durante la colecta y suministro de frutos de sus campos de cultivos de Physalis peruviana. Asi tambien al Vice Rectorado de Investigacion de la UNMSM por la subvencion a los proyectos No 151001017 y 161001311.

Conflicto de intereses:

Los autores no incurren en conflictos de intereses.

Rol de los autores:

HB diseno el estudio; HB y YC recoleccion de las muestras; HB, YC y AL analizaron e interpretaron los datos; HB, YC, MS, y AL redactaron; HB, YC, MS, y AL intervinieron para la aprobacion de la version final; todos contribuyeron para la revision critica.

Fuentes de financiamiento:

El presente trabajo se realizo gracias al financiamiento de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Vicerrectorado de Investigacion, Proyectos No 151001017 y 161001311.

Aspectos eticos / legales:

Los materiales proceden de fuentes comerciales por lo que no se requieren permisos especificos.

Henry Bonilla, Yajahaira Carbajal, Maria Siles y Alberto Lopez *

Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Facultad de Ciencias Biologicas, Grupo de Investigacion en Recursos Geneticos (RecGen), Lima, Peru.

Presentado: 23/07/2018

Aceptado: 15/08/2018

Publicado online: 06/07/2019

Correspondencia:

* Autor para correspondencia

Henry Bonilla: hnrb109@gmail.com

Yajahaira Carbajal: nevenka.cg36@gmail.com

Maria Siles: msiles@unmsm.edu.pe

Alberto Lopez: alopezs@unmsm.edu.pe

Otros datos de los autores / biografia:

ORCID Alberto Lopez: 0000-0001-6070-5836

ORCID Maria Siles: 0000-0003-4956-8310

Leyenda: Figura 1.--A: Lugares de colecta (circulos negros) 1: San Pablo, 2: Celendin y 3: Cajabamba. B: Campo de cultivo de la empresa Agroandino (San Pablo). C: Semilla de aguaymanto.

Leyenda: Figura 2.--SDS-PAGE de las fracciones proteicas bajo condiciones reductoras (R) y no reductoras (NR). (A) Fraccion albumina: carril 1 y carril 2 bajo condiciones R y NR respectivamente; las bandas m, n y z fueron las proteinas mayoritarias en la fraccion albumina. (B) Fraccion globulina: carril 1 y carril 2 bajo condiciones R y NR respectivamente; las bandas a y b son las vicilinas, las bandas c, d son los [alfa]-polipeptidos y e, f son los [beta]-polipeptidos de las leguminas. (L) marcador de peso molecular (6.5-200 kDa).

Leyenda: Figura 3.--SDS-PAGE comparativa de las cuatro fracciones proteicas en condiciones reductoras. Carril 1: Albumina. 2: Globulina. 3: Prolamina. 4: Glutelina. L: marcador de peso molecular (6.5-200 kDa).

Leyenda: Figura 4.--Los tres perfiles electroforeticos (A, B y C) encontrados en la fraccion albumina y sus respectivos esquemas (Ae, Be, Ce). En el carril P se muestran con flechas las 21 bandas encontradas, de las cuales, las flechas con asterico (*) indican las 7 bandas que fueron excluidas del analisis; y las bandas con cruz (+) indican las 4 bandas polimorficas.
Tabla 1.--Datos de los sitios de colecta. msnm: metros sobre el nivel
del mar

Ecotipo      Provincia   Coordenadas

Agroandino   San Pablo   7[grados]5'43.9"S, 78[grados]49'13.9"W
Celendino    Celendin    6[grados]52'35.9"S, 78[grados]07'49"W
Cajabamba    Cajabamba   7[grados]29'55.1"S, 78[grados]07'55.2"W

Ecotipo      Altitud (m)   No plantas

Agroandino      2662           10
Celendino       2620           10
Cajabamba       2058           10

Tabla 2.--Rendimiento ([g.sub.proteina]/100 [g.sub.harina de semilla])
de la extraccion de las fracciones de proteina seminal de San Pablo
(n=10), Celendin (n=10), y Cajabamba (n=10). Los valores son
expresados como media [+ o -] desviacion estandar. Valores en
parentesis indican porcentaje de proteina extraida. NS: media con
diferencia no significativa entre ecotipos (P < 0.05).

Fracciones proteicas       San Pablo           Celendin

Albumina (NS)          0.18 [+ o -] 0.0     0.2 [+ o -] 0.0
Globulina (NS)         1.08 [+ o -] 0.2    1.15 [+ o -] 0.2
Glutelina (NS)         0.05 [+ o -] 0.05   0.04 [+ o -] 0.0
Total (NS)             1.31 [+ o -] 0.18   1.38 [+ o -] 0.21

Fracciones proteicas       Cajabamba       Promedio (%)

Albumina (NS)           0.2 [+ o -] 0.0    0.19 (13.9)
Globulina (NS)         1.12 [+ o -] 0.2    1.12 (82.4)
Glutelina (NS)         0.07 [+ o -] 0.06    0.05 (3.7)
Total (NS)             1.39 [+ o -] 0.18    1.36 (100)

Tabla 3.--Distribucion de los tres perfiles electroforeticos (A, B
y C) de la fraccion albumina en las poblaciones estudiadas. n:
numero de plantas.

                      Perfiles

Poblaciones   A (n)   B (n)   C (n)

San Pablo      10      --      --
Celendin        7       3      --
Cajabamba       3       4       1
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Title Annotation:TRABAJOS ORIGINALES
Author:Bonilla, Henry; Carbajal, Yajahaira; Siles, Maria; Lopez, Alberto
Publication:Revista peruana de biologia
Date:Jul 1, 2019
Words:6020
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