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Dinamica serologica del virus de bronquitis infecciosa en una granja de pollo de engorde del Departamento de Cundinamarca.

SEROLOGIC DYNAMIC OF INFECTIOUS BRONCHITIS VIRUS IN A BROILER FLOCK IN CUNDINAMARCA

INTRODUCCION

El virus de bronquitis infecciosa (IBV) es causante deuna enfermedad altamente contagiosa en las aves, que afecta con mayor frecuencia los sistemas respiratorio y urogenital de pollos de engorde durante todo el ciclo productivo. Los signos clinicos mas importantes son la presencia de estertores traqueales, tos, estornudos y dificultad respiratoria, los cuales causan alta morbilidad y baja mortalidad, grandes perdidas economicas debido a la pobre ganancia de peso y baja eficiencia alimenticia (1, 2, 3).

Los principales problemas originados por el IBV en el pollo de engorde son el sindrome de cabeza hinchada, la miopatia pectoral profunda y la contaminacion de los sacos aereos, lo que lleva al decomiso en plantas de beneficio. La mortalidad suele aparecer en aves jovenes, como consecuencia de los graves problemas respiratorios. Algunos factores predisponentes para el desarrollo de la enfermedad son la presencia de agentes inmunosupresores como el virus de la enfermedad de Gumboro (IBDv), el virus de la enfermedad de Marek, asi como las altas densidades poblacionales y las altas concentraciones de amoniaco. En forma cronica la enfermedad se encuentra asociada a otros agentes secundarios tanto virales como bacterianos, por ejemplo el virus de la enfermedad de Newcasttle, Mycoplasma gallisepticum, y Escherichia coli en la en fermedad respiratoria cronica complicada (2, 3, 4).

La enfermedad es causada por un virus RNA envuelto, de cadena sencilla, genoma no segmentado y polaridad positiva. Pertenece al orden Nidovirales, familia Coronaviridae, genero Coronavirus del grupo 3 (2, 3, 5). Posee 4 proteinas estructurales: la glicoproteina de espicula (S) la cual se subdivide en S1 y S2, la proteina de membrana (M), la proteina de la nucleocapside (N) y la proteina de envoltura (E). El virus se replica en el citoplasma, madura en el reticulo endoplasmico y el aparato de Golgi y sale de la celula mediante un proceso de gemacion (6, 7, 8).

Algunos de los serotipos reconocidos mundialmente son Massachusetts 41, Connecticut, Arkansas, entre otros. En Europa tambien se han aislado otros serotipos como D274, DI466, B1648, 793/B, 624/I (8). Las cepas variantes Holte, Gray y T australiana presentan gran tropismo por sistema renal, causando un sindrome de nefritis-nefrosis que suele generar mortalidades de hasta el 30% (9).

El diagnostico de la enfermedad generalmente incluye seguimiento de la historia clinica, deteccion del antigeno a traves de aislamiento viral, Elisa, aglutinacion rapida en placa, inmunofluorescencia e inmunoperoxidasa. La deteccion de anticuerpos se realiza a traves de neutralizacion viral, Elisa indirecto, inhibicion de hemaglutinacion, entre otros. La deteccion del genoma viral se realiza a traves de RT-PCR y qRT-PCR. El diagnostico especifico del serotipo actuante es de vital importancia para la prevencion y control de la enfermedad (10).

Elisa no presenta especificidad de cepa o de tipo, pero es adecuada para analizar respuestas de anticuerpos a la vacunacion en condiciones de campo (13).

Es importante tener en cuenta la glicoproteina de espicula S1 ya que posee regiones hipervariables que ocasionan el surgimiento de nuevas cepas virales a nivel de campo (1, 2, 11). Las pruebas de diagnostico basadas en tecnicas moleculares (RT-PCR y la secuenciacion de nucleotidos) se emplean para identificar y caracterizar las diferentes cepas del virus.

Para el control de la enfermedad se utilizan programas de inmunizacion con una vacuna al primer dia de edad con cepas vivas atenuadas "suaves", seguida de revacunacion con cepas "mas fuertes", las cuales pueden ser muy eficaces. Es de gran importancia tener en cuenta el (los) serotipo(s) predominantes en ciertas zonas y el rango de proteccion de las vacunas a utilizar (12).

Con el proposito de contribuir al conocimiento del estado inmunologico de los pollos de engorde, el presente estudio evaluo la respuesta inmune a una vacuna contra IBV (virus vivo modificado, cepa Massachusetts), administrada el primer dia de edad tanto en aves en condiciones de campo como en un grupo de aves en condiciones de aislamiento, procedentes del mismo lote de reproductoras, mediante el uso de una tecnica de deteccion de anticuerpos tipo Elisa indirecta (FlockChek[R] Infectious Bronchitis virus Antibody Test Kit (IDEXX Laboratory, Inc., Westbrook, ME)).

MATERIALES Y METODOS

POBLACION DE ESTUDIO Y ZONA DE MUESTREO

El estudio se realizo en una granja de pollo de engorde con antecedentes de presencia del virus por la tecnica de RT--PCR (13) y en una unidad de semiaislamiento. La granja esta situada en el municipio de Fusagasuga (Cundinamarca) y la unidad de semiaislamiento en el edificio de investigaciones avicolas de la Facultad de Medicina veterinaria y de Zootecnia de la Universidad Nacional de Colombia.

De manera aleatoria se distribuyeron 132 aves de 1 dia de edad, organizadas en 3 grupos de hembras y machos (44 aves por grupo), las cuales fueron alojadas en piso, bajo condiciones experimentales similares. El grupo 1 estuvo conformado por aves vacunadas contra IBV virus vivo atenuado, cepa Massachusetts H120 al primer dia de edad por aspersion, las cuales fueron alojadas en la explotacion avicola; grupo 2: aves centinelas sin vacunacion contra IBV alojadas en la explotacion avicola; grupo 3: aves vacunadas contra IBV virus vivo atenuado, cepa Massachusetts, mantenidas en condiciones de semiaislamiento con una temperatura promedio de 26 [grados]C.

PLAN VACUNAL

El plan vacunal utilizado en todas las aves se describe en la tabla 1.

TOMA Y PROCESAMIENTO DE LAS MUESTRAS

Se tomaron muestras de sangre cada cuatro dias hasta el dia 40. A cada una de las aves se le tomo una muestra de sangre por puncion de la vena braquial en tubos sin anticoagulante. Las muestras se transportaron al laboratorio a una temperatura entre 2 y 7 [grados]C, y se realizo una separacion completa del suero por coagulacion y centrifugacion a 3.000 rpm durante 3 minutos, congelandose a una temperatura de -20 [grados]C hasta su procesamiento.

ESTUDIO RETROSPECTIVO

Se realizo el analisis de los resultados de la prueba de Elisa para el virus de bronquitis infecciosa desde 2004 hasta 2006 en diferentes edades de la explotacion avicola (14).

PRUEBA DE ELISA INDIRECTA

La presencia de anticuerpos especificos contra IBV en las muestras se determino mediante la prueba de Elisa utilizando el estuche comercial FlockChek[R] Infectious Bronchitis virus Antibody Test Kit (IDEXX Laboratory, Inc., Westbrook, ME), segun recomendaciones del fabricante.

ANALISIS ESTADISTICO

La seropositividad para IBV se determino mediante el analisis del promedio geometrico (GMT por sus siglas en ingles) y el coeficiente de variacion. Asi mismo se determino la asociacion entre los grupos y los titulos de anticuerpos y la asociacion entre los diferentes dias de muestreo y los titulos de anticuerpos por medio del programa de analisis estadistico Statistix version 1.0 (Analytical Software, USA).

RESULTADOS

Se encontro que los titulos de anticuerpos contra IBV en los tres grupos experimentales disminuyeron progresivamente hasta el dia 20 de edad y posteriormente mostraron un leve incremento a partir del dia 28 hasta el dia 40 (figura 1).

[FIGURA 1 OMITIR]

[FIGURA 2 OMITIR]

Al primer dia de edad las aves presentaron GMT entre 2.566 y 5.650 y coeficiente de variacion (CV%) entre 37 y 67%. En todos los grupos experimentales se encontro una disminucion constante en los titulos de anticuerpos desde el primer dia de edad hasta el dia 20, alcanzando un GMT entre 204 y 417 y CV% entre 31 y 94%. Para el dia 24 se observo un leve incremento de GMT, la cual fue de 554 en el grupo 1 y 381 en el grupo 2, hasta el dia 40 en que se observo GMT de 1.653 en el grupo 1 y 323 en el grupo 2, con un CV% de 24,6% y 64,4% respectivamente. En el grupo tres, a partir del dia 20 se observo una seronegatividad constante hasta el dia 40. Se detecto diferencia estadistica significativa entre los tres grupos (p < 0,05) y entre los dias de muestreo (p < 0,05).

Por medio de un analisis retrospectivo se analizaron las serologias para IBV en lotes anteriores de pollo de engorde a final de ciclo; se observo un GMT entre 2.000 y 6.500 al final de ciclo (figura 2).

DISCUSION

Los resultados observados con la prueba de Elisa al primer dia de edad indican un adecuado paso de anticuerpos maternales de las reproductoras pesadas a los pollitos debido a que presentaron titulos homogeneos con un GMT mayor de 3.000. Se encontro en los tres grupos experimentales un descenso en la curva de produccion de anticuerpos del dia 2 al dia 16, lo cual se puede relacionar con el comportamiento normal del catabolismo de los anticuerpos maternos (15).

Los altos titulos de anticuerpos observados en los dos primeros muestreos (dias 1 y 4) se relacionan con la inmunidad pasiva de las aves, lo cual puede interferir con la respuesta inmune del antigeno vacunal, llevando al marcado descenso en los titulos de anticuerpos entre los dias 8 y 20 (12, 16, 17). Con relacion al grupo 3, los titulos de anticuerpos observados demuestran el comportamiento de la respuesta inmune en ausencia de una exposicion a agente viral de campo.

Desde el dia 24 hasta el 40 se comenzo a evidenciar un leve incremento en los titulos de anticuerpos en los grupos 1 y 2, lo cual se puede relacionar con el comportamiento historico de los anticuerpos en la granja al final del ciclo (40-45 dias) (14). Es importante hacer enfasis en el posible contacto de las aves en la granja con el agente viral de campo o en la recirculacion constante del antigeno vacunal (13, 18, 19, 20, 21), conllevando a la persistencia del agente en los animales y al aumento de los titulos de anticuerpos (22), como se observo despues del dia 24. Matthijs et al. demostraron la alta capacidad que posee la vacuna viva contra el IBV H120 para diseminarse en los pollos de engorde; esto induceel probable establecimiento de la vacuna en forma endemica en la granja avicola o la persistencia del virus en las aves (19).

Los resultados observados en este estudio contrastan con los altos titulos de anticuerpos para IBV observados en los lotes anteriores (figura 2), asi como con la identificacion del agente viral por medio RTPCR. Los hallazgos de esta investigacion se pueden relacionar con el reciente cambio en la vacunacion contra la enfermedad de Gumboro, en la cual se utilizaban tres vacunas a virus vivo atenuado, y se remplazo por una vacuna recombinante, modificando de forma positiva la proteccion contra dicha entidad y disminuyendo la susceptibilidad de las aves a la presentacion de IBV.

El inmunogeno recombinante es una vacuna viva contra la enfermedad de Gumboro y la enfermedad de Marek. La cepa de la vacuna es un Herpesvirus de pavo (HTV) recombinante, que expresa la proteina VP2 del virus de la enfermedad de Gumboro cepa Faragher 52/70 (23). Le Gross realizaron un estudio en campo, en el cual se confirmo la efectividad de la vacuna en aves de la estirpe Ross posterior a un desafio viral con una cepa del virus muy virulento del IBDV (24). Asi mismo se han observado hallazgos similares con el uso de otras vacunas recombinantes usando el virus HVT en aves SPF (25). Otro aspecto importante es la capacidad de replicacion que posee el vector HVT en presencia de anticuerpos maternos, la cual disminuye el impacto de estos contra la eficiencia de la vacuna (23).

El IBV se ha relacionado con inmunodeficiencia en las aves producida por la enfermedad de Gumboro y por la anemia infecciosa aviar. varios autores han evaluado los efectos de la inmunodeficiencia viral en la infeccion de IBV en pollos de engorde, y observaron que los signos clinicos y lesiones histopatologicas fueron mayores en las aves que se encontraban inmunosuprimidas por la enfermedad de Gumboro (26, 27).

La respuesta a la vacunacion evidenciada en los tres grupos experimentales fue la esperada de acuerdo con el tipo de vacuna utilizada (12); se presentaron GMT menores de 5.000, lo cual genero hasta el dia 12 altos titulos de anticuerpos de corta duracion. Es de vital importancia la proteccion vacunal contra esta entidad, teniendo en cuenta aspectos como el tipo de vacuna utilizado, la edad de las aves a vacunar y el procedimiento (12).

Con base en los resultados del presente estudio, se puede concluir que, en las condiciones de esta granja, es recomendable la revacunacion de las aves contra IBV al inicio del periodo de desproteccion evidenciado (dias 14-15), lo que puede generar una seroconversion media, incrementando los titulos de anticuerpos contra IBV y mejorando la proteccion contra la entidad hasta el final del ciclo.

Es importante verificar constantemente, a traves de seguimiento serologico de la granja, la eficacia de las vacunas aplicadas, en especial si estas se han cambiado recientemente.

AGRADECIMIENTOS

A la empresa Pollo Andino y al Dr. Gustavo Granados por la oportunidad de trabajar en sus granjas y contribuir al desarrollo del proyecto; a la Dra. Martha Pulido y a todo el personal del edificio de investigaciones avicolas y del laboratorio de patologia aviar de la Universidad Nacional de Colombia por prestar su colaboracion y facilitar las instalaciones para el desarrollo del experimento.

REFERENCIAS

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Alvarez DC [1], Usma JA [2], Jaime J [3], Vera VJ [4]

[1] Grupo de Microbiologia y Epidemiologia Veterinaria, Facultad de Medicina veterinaria y de Zootecnia, Universidad Nacional de Colombia.

[1] Alvarez DC: dcalvareze@unal.edu.co

[2] Usma JA: jausmaa@unal.edu.co

[3] Jaime J: jjjaimec@unal.edu.co

[4] Vera VJ.: vjveraa@unal.edu.co
Tabla 1. Plan vacunal aplicado a las aves.

Vacuna                      Dia            Cepa               Via

Enfermedad de Marek          1             HVT            Subcutanea
Enfermedad de Gumboro        1     Cepa Faragher 52/70    Subcutanea
Viruela aviar                1        Cepa FTP-ATCC       Subcutanea
Enfermedad de Newcastle      1                            Subcutanea
Bronquitis infecciosa        1      Massachusetts H120     Aspersion
Enfermedad de Newcastle    8-19           LaSota            Ocular
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Title Annotation:Investigacion
Author:Alvarez, D.C.; Usma, J.A.; Jaime, J.; Vera, V.J.
Publication:Revista Facultad de Medicina Veterinaria y de Zootecnia
Article Type:Report
Date:May 1, 2009
Words:3187
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