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Detection of geminivirus associated to alstroemeria (Alstroemeria L.) in Villa Guerrero, State of Mexico/Deteccion de geminivirus asociados a la alstroemeria (Alstroemeria L.) en Villa Guerrero, Estado de Mexico/Deteccao de geminivirus associados a alstroemeria (Alstroemeria L.) em Villa Guerrero, Estado do Mexico.

SUMMARY

In alstroemeria (Alstroemeria L.) plantations located in Villa Guerrero, Mexico State, plants with symptoms similar to those induced by geminivirus in other horticultural crops have been detected. In addition, the presence of whiteflies, which are considered the most efficient vectors of these viruses, has been observed in these plantations. The goal of this work was to detect the presence of this geminivirus species in alstroemeria plants. By means of PCR analysis using primers MotCP2118/ MotCP2123, a fragment of ~600pb similar to the amplicon obtained from PHYVV-infected positive control was amplified only from symptomatic plants. Nicotiana glutinosa, N. benthamiana, N. rustica, N. tabacum var. xanthi and Datura stramonium plants were inoculated by bombardment with total DNA obtained from symptomatic alstroemerias and positive to PHYVV by means of PCR. Inoculated plants showed mild mosaics and deformation of leaves, whereas in the leaves of Capsicum annum plants, mosaics, vein necrosis and blisters were observed. Using DNA from these plants as template in PCR, amplicons corresponded to PHYVV were also obtained; however, in bombarded monocotyledons, including alstroemeria, this fragment was not detected. The sequence of oligonucleotides from the PCR products showed 98% homology to PHYVV geminivirus. Even though symptoms presented by alstroemeria plants in the field were not reproduced, the presence of a geminivirus similar to PHYVV in tissue of symptomatic plants was evidenced through PCR.

RESUMEN

En plantaciones de alstroemeria (Alstroemeria L.) de Villa Guerrero, Estado de Mexico, se han detectado plantas con sintomas similares a los inducidos por geminivirus en otros cultivos horticolas. En dichas plantaciones tambien se ha observado la presencia de la mosquita blanca, considerada como el rector mas eficiente de estos virus. El objetivo del presente trabajo fue detectar la presencia de geminivirus en plantas de alstroemeria. Mediante PCR, usando los iniciadores MotCP2118/MotCP2123, se obtuvo un segmento de ~600pb, similar al del control positivo correspondiente a chile infectado con el begomovirus pepper huasteco yellow vein virus (PHYVV, antes pepper huasteco virus) en plantas sintomaticas, mientras que en las asintomaticas la deteccion fue negativa. Plantas de Nicotiana glutinosa, N. benthamiana, N. rustica, N. tabacum var. xanthi y Datura stramonium inoculadas por biobalistica con ADN total obtenido de alstroemerias con sintomas y positivas a PHYVV mediante PCR, mostraron mosaicos leves y deformacion de hojas, mientras que en plantas de Capsicum annuum se observaron mosaicos, necrosis en nervaduras y abultamientos en hojas. Con el ADN de estas plantas tambien se obtuvieron bandas correspondientes al PHYVE pero en las monocotiledoneas bombardeadas, incluyendo alstroemeria, no fue detectado el fragmento. La secuencia de oligonucleotidos de los productos de PCR mostro 98% de homologia con el begomovirus PHYVV.. Aunque no fue posible reproducir en alstroemeria los sintomas observados en campo, si se evidencio mediante PCR la presencia de un geminivirus similar al PHYVV en tejido de plantas sintomaticas.

RESUMO

Em plantacoes de alstroemeria (Alstroemeria L.) de Villa Guerrero, Estado do Mexico, se tem detectado plantas com sintomas similares aos induzidos por geminivirus em outros cultivos horticolas. Em ditas plantacoes tambem tem sido observada a presenca da mosquinha branca, considerada como o vetor mais eficiente destes virus. O objetivo do presente trabalho foi detectar a presenca de geminivirus em plantas de alstroemeria. Mediante PCR, usando os iniciadores MotCP2118/MotCP2123, obteve-se um segmento de ~600pb, similar ao do controle positivo correspondente a chile infectado com o begomovirus pepper huasteco yellow vein virus (PHYVV, antes pepper huasteco virus) em plantas sintomaticas, enquanto que nas assintomaticas a deteccao foi negativa. Plantas de Nicotiana glutinosa, N. benthamiana, N. rustica, N. tabacum var. xanthi e Datura stramonium inoculadas por biobalistica com DNA total obtido de alstroemerias com sintomas e positivas a PHYVV mediante PCR, mostraram mosaicos leves e deformacao de folhas, enquanto que em plantas de Capsicum annuum se observaram mosaicos, necrose em nervaduras e protuberancias em folhas. Com o DNA destas plantas tambem se obtiveram bandas correspondentes ao PHYVV, mas nas monocotiledoneas bombardeadas, incluindo alstroemeria, nao foi detectado o fragmento. A sequencia de oligonucleotideos dos produtos de PCR mostrou 98% de homologia com o begomovirus PHYVV. Embora nao foi possivel reproduzir em alstroemeria os sintomas observados em campo, sim foi evidenciada, mediante PCR, a presenca de um geminivirus similar ao PHYVV em tecido de plantas sintomaticas.

PALABRAS CLAVE / Alstroemeria / Biobalistica / Deteccion / Geminivirus / Ornamentales / PCR /

Introduccion

La alstroemeria (Alstroemeria L.), planta ornamental monocotiledonea, comenzo a ser cultivada en Mexico a principios de 1990 en Villa Guerrero, Estado de Mexico. Las enfermedades inducidas por virus constituyen los problemas fitopatologicos mas serios en la produccion de esta ornamental (Bellardi y Bertaccini, 1996; Spence et al., 2000). A la fecha en este cultivo se tienen consignados 13 virus pertenecientes a ocho generos taxonomicos, pero no geminivirus. Daughtrey et al. (1997) senalan que especies de virus pertenecientes al genero Tospovirus y la familia Geminiviridae (Damsteegt, 1999) han impactado de manera significativa a las principales especies floricolas desde la decada pasada. En especies ornamentales, se han reportado nueve geminivirus: abutilon mosaic virus (AbMV), acalypha yellow mosaic virus (AYMV), ageratum yellow vein virus (AYVV), croton yellow vein mosaic virus (CYVMV), eupatorium yellow vein virus (EpYVV), euphorbia mosatc virus (EuMV), honeysuckle yellow vein mosaic mosaic (HYVMV), tobacco leaf curl virus (TLCV) y tomato yellow leaf curl virus (TYLCV) (Albouy y Devergne, 2000). La familia Geminiviridae comprende cuatro generos (Curtovirus, Mastrevirus, Begomovirus y Topocovirus) que se diferencian en base a su genoma monopartita o bipartita, el tipo de hospedante (monocotiledonea o dicotiledonea) e insecto vector involucrado (de las familias Cicadellidae, Membracidae o Aleyrodidae) (Hanley et al., 1999; Pringle, 1999; Hull, 2002). Respecto a esto ultimo, la capside viral es de fundamental importancia porque participa en el reconocimiento que determina la especificidad y adquisicion del virus. La adquisicion de los geminivirus requiere del reconocimiento de las particulas viricas a nivel de diferentes dominios de la proteina de la capside, situados en la extremidad N-terminal, por receptores especificos localizados en las glandulas salivales accesorias presentes en la mosquita blanca (Liu et al., 1997a). La capside tambien participa en el movimiento intra e intercelular, y en consecuencia influye en la especificidad para que un geminivirus pueda infectar a monocotiledoneas o dicotiledoneas (Soto y Gilbertson, 2003); sin embargo, se ha documentado que el genero Mastrevirus infecta tanto monocotiledoneas como dicotiledoneas (Morris et al., 1992; Liu et al., 1997b).

Hasta 1992 no se habia detectado en America la presencia de geminivirus en monocotiledoneas (Brown y Bird, 1992), pero en 2002 se consigno a la monocotiledonea Sorghun halepense (zacate johnson), como un hospedante alterno de los geminivirus pepper huasteco yellow vein virus (PHYVV, antes conocido como pepper huasteco geminivirus) y texas pepper tamaulipas strain (texano del chile variante tamaulipas ahora denominado pepper golden mosaic virus) en la region centro de Mexico (Garzon et al., 2002).

Sintomas foliares como abultamientos, enchinamientos y enrollamientos, reduccion del area foliar, enanismo, epinastia, mosaico amarillo brillante, moteado clorotico y clorosis foliar interna o de los margenes, son sintomas frecuentemente asociados con la infeccion por geminivirus en diferentes plantas hospedantes (Brown y Bird, 1992; Torres et al., 1996). En Mexico, distintos geminivirus transmitidos por mosquita blanca (Bemisia tabaci Genn. o B. argentifolli Bellows y Perring) son reportados como agentes causales de estos sintomas en diferentes zonas productoras de chile, frijol, jitomate, okra, tomatillo, tabaco y calabaza (Torres et al., 1996; Anaya et al., 2003). Actualmente no se tienen registros de geminivirus infectando alstroemeria en Mexico y en el mundo; no obstante, no se descarta la posibilidad de que alguno de ellos este presente en plantas sintomaticas de alstroemeria en la region de Villa Guerrero, Estado de Mexico. Los sintomas observados desde 1999 en este cultivo consisten en deformacion (enrollamientos) y clorosis en los margenes o en la parte interna de las hojas y mosaicos amarillos brillantes. Asimismo, la presencia de mosca blanca, siendo las especies Bemisia tabaci y B. argentifolli consideradas como vectores eficientes de estos virus (Brown y Bird, 1992; Wisler et al., 1998), es comun en el cultivo. El objetivo del presente trabajo fue detectar la presencia de geminivirus en ejemplares de esta planta ornamental con los sintomas mencionados.

Materiales y Metodos

Material vegetal

Se recolectaron muestras de tejido (~100g de hojas y tallos obtenidos de los estratos inferior, medio y superior) de plantas de alstroemeria, tanto asintomaticas como con sintomas, en el municipio de Villa Guerrero, Estado de Mexico. Las recolecciones se realizaron en enero, marzo, abril, junio, septiembre, noviembre y diciembre de 2002 y mensualmente de enero a mayo 2003 y de enero a noviembre 2004. Las muestras fueron almacenadas a -20[degrees]C hasta su procesamiento.

Transmision por injerto

En los meses de marzo, abril y mayo de 2004, 15 plantulas de alstroemeria y chile (Capsicum annum L.), de dos meses de edad y provenientes de semilla, fueron injertadas con apices de tallos (3-5cm de longitud) de alstroemeria con sintomas. Las plantulas se mantuvieron aisladas dentro de una jaula entomologica en invernadero, a 27 [[+ or -]3[degrees]C. Como testigos negativos se tuvieron cinco plantas de cada especie sin injertar. Las plantas injertadas que mostraron sintomas de origen viral se utilizaron para injertar a un segundo grupo de 15 plantas de alstroemeria provenientes de semilla y de cuatro meses de edad. A los 45 dias despues de realizado este injerto las plantas fueron analizadas mediante PCR para confirmar la presencia de geminivirus.

Identificacion de mosquitas blancas y reproduccion de sintomas en invernadero

En los meses de marzo y agosto de 2002 a 2004 se colectaron hojas e inflorescencias de alstroemeria con sintomas y que tenian ninfas de mosquitas blancas. La identificacion de las especies de mosquita blanca se realizo con las claves de Martin (1987) y su identidad fue confirmada por Laura Delia Ortega Arenas, del Instituto de Fitosanidad, Colegio de Postgraduados, Mexico. Para las pruebas de transmision, en 15 plantas de alstroemeria y chile obtenidas a partir de semillas, se colocaron 10 adultos de mosquitas blancas de las colectadas en campo, y cada plantula se coloco individualmente en una jaula. Un total de 300 insectos, confinados en grupos de 10 por jaula, se alimentaron por siete dias sobre las plantulas sanas con el fin de transmitir a posibles geminivirus. Despues de este periodo, los insectos de cada planta fueron capturados y ~80% de ellos fueron analizados mediante PCR para detectar la presencia de geminivirus. El resto se utilizo para la identificacion de la especie. Las plantas se mantuvieron en observacion en invernadero (27 [+ or -]3[degrees]C) en una jaula entomologica y a las 12 semanas fueron analizados mediante PCR.

Transmision por biobalistica

Cinco plantas (con 6-8 hojas verdaderas) de 11 especies (Capsicum annuum, Nicotiana tabacum var. xanthi, N. rustica, N. glutinosa y N. benthamiana, Datura stramonium, Chenopodium quinoa, Ch. amaranticolor, Zea maiz, Allium sativum y Alstroemeria sp.) fueron inoculadas por biobalistica con un acelerador Du Pont (PDS-1000), usando 50[micro]l de microparticulas de tungsteno (Tungsten M-10, BIORAD) mezcladas con 5[micro]l de ADN total (l[micro]l x [1.sup.-1]), obtenido a partir de plantas de alstroemeria con sintomas y en las que mediante PCR se habia evidenciado la presencia de geminivirus. En cada planta el bombardeo se realizo en la parte apical, a una distancia de 2cm y 57kg x [cm.sup.-2] de presion (Garzon et al., 1993). Los controles consistieron de dos plantas de cada especie inoculadas con agua o con ADN extraido de plantas de alstroemerias asintomaticas en las que la amplificacion por PCR fue negativa. Las plantas bombardeadas, se mantuvieron en una camara bioclimatica a 28 [+ or -]1[degrees]C y luz blanca hasta observar la expresion de sintomas. El ensayo se realizo en los meses de agosto y noviembre de 2004 y enero de 2005. Las plantas que presentaron sintomas fueron analizadas mediante PCR para detectar la presencia de geminivirus.

Deteccion de TSWV y AlMV

Debido a que los virus tomato spotted wilt virus (TSWV) y alstroemeria mosaic virus (A1MV) fueron reportados previamente en Mexico en la planta ornamental motivo de este estudio (Gutierrez et al., 2000), de enero a noviembre 2004 se recolectaron mensualmente en campo muestras de tejido de alstroemeria con sintomas, para detectar su presencia mediante ELISA-DAS (Clark y Adams, 1977). Tambien se realizo la deteccion en plantas inoculadas por injerto y por biobalistica. Se emplearon antisueros obtenidos de Agdia Inc., para TSWV (Lote 1476) y A1MV (Lote 0008).

Extraccion del acido nucleico viral y deteccion de geminivirus mediante PCR

A partir de hojas y tallos de cada una de las muestras de alstroemeria recolectadas en el campo, asi como de las plantas sometidas a pruebas de transmision por injerto y por biobalistica, y de los testigos negativos, se llevo a cabo la extraccion de ADN segun la tecnica descrita por Dellaporta et al. (1983). La concentracion y calidad de ADN se determino con un espectrofotometro (Lambda Bio 10, Perkin Elmer) a 260nm y promedio de absorbancia a 260/280nm, respectivamente. Se utilizaron los iniciadores MotCP2118 (CC GAA TTC GAC TGG ACCTTA CAT GGN CCT TCA C) y MotCP2123 (GAG TCT AGA GGS TAN GTG/AAG/G AAA TAA/G TTC TTG GC) que amplifican un segmento de 0,65kb del componente A de geminivirus, y que incluye la region comun y parte del gen de la proteina de la capside (Ascencio et al., 2002). La mezcla de reaccion final para PCR consistio de 120ng del ADN molde, 250[micro]M de cada trifosfato de deoxinucleotido, lmM de cada iniciador, 10[micro]l de buffer de reaccion para PCR (10X), Mg[Cl.sub.2] 5mM y 2.5u/ml de ADN polimerasa (Amplificasa[R], Biotecnologias Universitarias). La PCR se realizo en un termociclador automatico (GeneAmp 2400, Perkin-Elmer). Como testigo negativo se utilizo ADN proveniente de plantas de alstroemeria asintomaticas y como testigo positivo ADN amplificado de plantas de chile infectadas con el pepper huasteco yellow vein virus (PHYVV), proporcionado por Rafael Rivera Bustamante, del CINVESTAV-IPN, Unidad Irapuato, Mexico.

Los productos de PCR (10[micro]l) fueron separados por electroforesis en gel de agarosa al 1,2%, se tino con bromuro de etidio (0,5[micro]g x [ml.sup.-1]) y se visualizo en un transiluminador UV (Gel-Doc 2000, BIORAD). La longitud de los fragmentos obtenidos se comparo con el marcador de peso molecular lkb ADN (GIBCO BRL).

Secuenciacion

El producto de PCR fue purificado (Qiagen Co., Hilden, Alemania) y la secuenciacion de nucleotidos se realizo en el laboratorio de Bioquimica Molecular, Unidad de Biologia y Prototipos, FES-Iztacala, de la Universidad Nacional Autonoma de Mexico. Las secuencias obtenidas se compararon con informacion disponible en la base de datos GenBank y con el paquete BLAST (http//:WWW.INCB. BLAST).

Resultados

Deteccion de geminivirus mediante PCR

Con los iniciadores MotCP2118/MotCP2123 se amplifico un segmento de ~600pb (Figura 1, carriles 2 y 3) similar al control positivo (Figura 1, carriles 14 y 15) correspondiente a chile infectado con PHYVV. La deteccion fue positiva tanto en plantas sintomaticas colectadas en campo como en las dicotiledoneas inoculadas por biobalistica (C. annuum, N. tabacum var. xanthi, N. rustica, N. glutinosa, N. benthamiana y D. stramonium; Figura l, carriles 4-9), pero no en las monocotiledoneas, incluyendo alstroemeria (carril 10). Cabe aclarar que no en todas las plantas con sintomas se logro amplificar el fragmento correspondiente (Tabla I) y que tampoco en las plantas injertadas se detecto el fragmento del geminivirus. Tambien se detecto una banda del mismo peso en solo un grupo (de 10 individuos) de mosquita blanca utilizado en las pruebas de transmision (Figura 1, carril 12), pero la planta que sirvio de hospedante no desarrollo sintomas ni presento reaccion positiva con PCR (carril 11).

[FIGURA 1 OMITIR]

Secuenciacion

El fragmento de ADN amplificado con los iniciadores MotCP2118/MotCP2123 (numero de acceso: AY044162.1) al ser comparados con las secuencias registradas en el GENBANK, mostraron 98% de homologia con parte de la region comun y del gen de la proteina de la capside del PHYVV. Tales resultados sugieren que el aislamiento de geminivirus detectado en alstroemeria se relaciona probablemente con el PHYVV. La secuencia de nucleotidos de un fragmento obtenido con los mismos iniciadores a partir de ADN de mosquitas blancas provenientes de campo y utilizadas en las pruebas de transmision, tambien mostro una homologia del 98% con el PHYVV.

Transmision

En el 60% (27/45) de las plantas de alstroemeria injertadas se observo mosaico y moteado amarillo a las cinco semanas de realizadas las pruebas. En chile, el 100% de las plantas presento mosaicos y deformacion de hojas a las cuatro semanas. Las plantas de ambas especies utilizadas como testigo no desarrollaron sintomas ni fueron positivas para los virus TSWV y A1MV (prueba de ELISA) y geminivirus (PCR). Los sintomas de enrollamiento, clorosis interna o en margenes de las hojas y mosaico amarillo brillante, presentes en los tallos enfermos que se injertaron como fuente de inoculo y que se mantuvieron vivos sobre el portainjerto durante cinco dias, no se presentaron en ninguna de las plantas injertadas. El 20% de las plantas de alstroemeria provenientes de semilla y que fueron injertadas con segmentos de plantas de alstroemeria o chile que expresaron sintomas en la primera prueba de transmision por injerto, desarrollaron mosaicos y ligera deformacion en hojas apicales, pero ninguna dio respuesta positiva por ELISA o PCR. Los resultados sugieren que los sintomas pudieron haber sido inducidos por otro patogeno.

La inoculacion por biobalistica no indujo sintomas en plantas de Ch. amaranticolor, Ch. quinoa, Alstroemeria sp., A. cepa y Z. maiz (Tabla I). En cambio, a las seis semanas de realizada la inoculacion, en D. stramonium, N. glutinosa, N. benthamiana, N. tabacum var. xanthi y N. rustica se observaron sintomas de mosaicos leves y deformacion ligera en las nuevas hojas emergentes (Figura 2, a y b), mientras que en las plantas de chile fue solo a las ocho semanas que se desarrollaron sintomas tipicos inducidos por geminivirus como mosaicos, aclaracion o necrosamiento de venas, abultamientos severos en hojas y acortamiento de entrenudos con deformacion de hojas (Figura 2c, d y e). Como se menciono antes, en estas plantas la deteccion de geminivirus por PCR fue positiva. En cambio, en las plantas testigo no se desarrollaron sintomas ni se detecto la presencia de los virus TSWV y A1MV con la tecnica de ELISA o geminivirus mediante PCR.

Identificacion de mosquitas blancas y transmision de sintomas en invernadero

En el cultivo de alstroemeria se encontro unicamente a la especie Trialeurodes vaporariorum (West), la cual hasta la fecha no ha sido consignada como vector del PHYVV. Los insectos utilizados para las pruebas de transmision en invernadero correspondieron a la misma especie. No obstante, no se descarta la posibilidad de que otras especies de mOSquita blanca puedan estar presentes en otras plantas ornamentales, arboles frutales o maleza no muestreadas, o en los meses en los que no se recolectaron insectos.

[FIGURA 2 OMITIR]

En ninguna de las plantas de alstroemeria y chile utilizadas para las pruebas de transmision con mosquita blanca se manifestaron sintomas, y tampoco se detecto mediante PCR la presencia de geminivirus a las 12 semanas de realizadas las pruebas. De los 30 grupos de mosquita blanca (10 por grupo) utilizados para las pruebas de transmision, solo en uno (3%) se obtuvieron por PCR fragmentos de ~600pb. identicos al control positivo.

Deteccion de TSWV v AlMV

La deteccion de ambos virus mediante DAS-ELISA en plantas de alstroemeria con sintomas fue negativa en todos los muestreos realizados de 2002 a 2004. Tampoco en las plantas hospedantes utilizadas en las pruebas de transmision por injerto y biobalistica se detecto la presencia de estos virus.

Discusion

A partir de ADN obtenido de plantas sintomaticas de alstroemeria recolectadas en campo se amplificaron segmentos de ADN que aparentemente corresponden al geminivirus PHYVV. El PHYVV ha sido reportado desde 1993 en Mexico (Garzon et al., 1993) y en la actualidad se encuentra distribuido ampliamente en distintos estados de Mexico (Torres et al., 1996; Guevara et al., 1999; Idris et al., 1999).

Los resultados negativos para geminivirus y los virus TSWV y A1MV obtenidos mediante PCR y ELISA, respectivamente, en plantas de alstroemeria inoculadas por injerto y que mostraron sintomas, sugieren que los sintomas observados podrian deberse a la presencia de otros virus de ARN previamente detectados en la misma zona de estudio (Gutierrez et al., 2000). Tambien De la Torre et al. (2002) al realizar, mediante injerto a distintos hospedantes, la caracterizacion de un geminivirus en plantas de tomate de cascara (Physallis ixocarpa B), solo detectaron la presencia de los virus mosaico del pepino (CMV), del tabaco (TMV), jaspeado del tabaco (TEV), marchitez manchado del tomate (TSWV) y mancha anular del tabaco (TRSV), pero no de geminivirus. Se menciona que la multiplicacion y distribucion de los virus de ARN es competitivamente mas exitosa que la de los que presentan genomas de ADN (Hull, 2002). Los virus con genoma de ARN se multiplican inicialmente en el citoplasma de las celulas del mesofilo de las hojas y despues en casi cualquier tipo de celula, al dispersarse por el resto de la planta; en cambio, los geminivirus se multiplican en el nucleo y despues se ubican solo en celulas del floema (Hanley et al., 1999; Rosell et al., 1999).

En ninguna de las plantas monocotiledoneas, incluyendo alstroemeria, inoculadas por biobalistica se observo el desarrollo de sintomas; estos fueron evidentes solamente en las plantas de chile y tabaco, aunque su expresion requirio de varias semanas, aun cuando ambas especies son las principales hospedantes naturales de este genero de virus (Anaya et al., 2003). El reducido numero de plantas inoculadas que desarrollaron sintomas y que por PCR resultaron positivas para el geminivirus, pudo deberse a que se utilizo ADN total procedente de plantas de alstroemerias infectadas, en lugar de ADN viral infectivo clonado en un plasmido; esto ultimo garantiza que se inoculan al mismo tiempo los componentes virales A y B para que se lleve a cabo el proceso infectivo. Garzon et al. (1993), reportan que plantas de chile bombardeadas con solo uno de los componentes (A o B) clonados del geminivirus PHYVV, no desarrollaron sintomas, ni tampoco pudieron detectar al virus en sus tejidos por metodos moleculares (PCR o hibridacion). Para el caso de geminivirus bipartitas, una parte de su genoma (componente B) codifica para proteinas involucradas en la traslocacion del virus a partir del sitio de inoculacion al resto de las celulas. En cambio en los geminivirus monopartitas, todos los genes involucrados en la infeccion (replicacion y traslocacion) se localizan en una sola molecula de ADN (Palmer y Rybicki, 1998; Hanley et al., 1999).

La amplificacion de partes de la region intergenica y del gen de la proteina de la capside de geminivirus con los iniciadores MotCP2118/MotCP2123, genero un fragmento de 600pb y la secuencia de nucleotidos de este fragmento indico un porcentaje de identidad del 98% con parte de la region comun y del gen de la proteina de la capside (AR1) del PHYVV. Estos resultados indican que el begomovirus PHYVV podria estar presente en las plantas de alstroemeria. Tal geminivirus ha sido frecuentemente reportado como el causante de infecciones en casi todas las zonas productoras de hortalizas en Mexico (Torres et al., 1996; Anaya et al., 2003).

La mosquita blanca que se colecto en los cultivos de alstroemeria correspondio a la especie T. vaporariorum, la cual no se ha reportado como vectora del PHYVV (Hull, 2002). Lo anterior podria explicar la ausencia de sintomas y el resultado negativo de las pruebas de PCR en las plantas utilizadas para las pruebas de transmision por insectos. Por otro lado, el hecho de haber amplificado un fragmento de 600pb a partir de un solo grupo (de 10 individuos) de mosquita blanca utilizado en las mismas pruebas, sugiere que T. vaporariorum podria adquirir el virus al alimentarse en alstroemeria, pero esto no garantiza que sea capaz de transmitirlo. Se ha reportado que la adquisicion de geminivirus por B. tabaci no es especifica y que otras especies de mosquitas blancas los pueden adquirir pero no transmitirlos (Cohen et al., 1989); en cambio, la inoculacion al hospedante si es una relacion virus-vector especifica (Hanley et al., 1999). Por otra parte, en ninguno de los muestreos se colectaron individuos de la especie B. tabaci, que es el principal vector del PHYVV. Se menciona que la presencia de esta especie se limita a altitudes no mayores de 1000msnm (Morales y Jones, 2004), mientras que la zona donde se realizo el presente estudio se ubica a 2095msnm.

Hasta 1992 no se habia consignado la presencia de geminivirus en monocotiledoneas en America o el Caribe (Brown y Bird, 1992). Una decada despues Garzon et al. (2002) consignaron a la monocotiledonea Sorghun halepense (zacate johnson) como un hospedante alterno de los geminivirus PHYVV y del pepper golden mosaic virus, en la region central de Mexico. Las especies de geminivirus del genero Mastrevirus generalmente infectan plantas monocotiledoneas (Palmer y Rybicki, 1998); sin embargo, los mastrevirus tabacco yelow dwarf virus en Australia (Morris et al., 1992) y el bean yellow dwarf virus en Surafrica (Liu et al., 1997a) infectan dicotiledoneas. Esto sugiere que el PHYVV, perteneciente al genero Begomovirus, generalmente asociado solo con plantas dicotiledoneas, tambien podria tener como hospedantes a monocotiledoneas.

Conclusion

Aunque no fue posible reproducir en alstroemeria los sintomas observados en campo, si se evidencio mediante PCR la presencia de un geminivirus similar al PHYVV en tejido de plantas con sintomas recolectadas en campo. Futuros estudios enfocados en completar la caracterizacion molecular de aislamientos de geminivirus detectados en alstreomeria son necesarios para conocer la relacion planta-patogeno, como hospedantes alternos para este genero de virus de importancia ecologica y economica.

AGRADECIMIENTOS

Los autores agradecen al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologia, CONACYT, por la beca de doctorado otorgada y al Instituto de Ciencias Agricolas de la Universidad Autonoma de Baja California por el tiempo destinado para la redaccion final del documento e institucion de trabajo del primer autor.

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TABLA I
DETECCION DE GEMINIVIRUS MEDIANTE PCR EN PLANTAS
INOCULADAS POR BIOBALISTICA CON ADN TOTAL EXTRAIDO
DE PLANTAS DE ALSTROEMERIA CON SINTOMAS Y QUE PRESENTARON
RESPUESTA POSITIVA A GEMINIVIRUS MEDIANTE PCR

Especie inoculada                No plantas   Resultados     Sintoma
                                    con        de PCR       observado
                                 sintomas/     ([pounds    ([section])
                                 No plantas   sterling])
                                 inoculadas

Capsicum annuum                     6/15         6/6       M, NN, ASH
Nicotiana tabacurn var. xanthi      3/l5         2/3         ML, DL
N. rustica                          3/15         1/3         ML. DL
N. glutinosa                        1/1S         1/1         ML, DL
N. benthmrtinnn                     1/15         1/1         ML, DL
Dntura strnmonhrrn                  1/15         1/1         ML, DL
Chenopodiurn quinoa                 0/15         0/1           SS
Ch. Amaranticolor                   0/15         0/1           SS
Zea mayz                            0/15         0/1           SS
Allium sativum                      0/15         0/1           SS
Alstroemeria sp.                    0/15         0/1           SS

([pounds sterling]) Plantas positivas a geminivirus con
iniciadores MotCP3118/ MotCP2123)/total de plantas procesadas.

([section] M: mosaico, NN: necrosamiento de nervaduras,
ASH: abultamiento severo en hojas. ML: mosaico leve.
DL: deformacion ligera. SS: sin sintomas.
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Title Annotation:REPORTS/COMUNICACIONES/COMUNICACOES
Author:Cervantes-Diaz, Lourdes; Zavaleta-Mejia, Emma; Rojas-Martinez, Reina Isabel; Alanis-Martinez, Iobana
Publication:Interciencia
Date:Dec 1, 2009
Words:5186
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