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Deteccion de anticuerpos IgG frente a Fasciola hepatica en un rebano bovino Criollo Limonero del municipio Mara, estado Zulia, Venezuela.

IgG Antibodies Detection Against Fasciola hepatica in a Criollo Limonero Cattle Herd from Mara Municipality, Zulia State, Venezuela

INTRODUCCION

Fasciola hepatica es un trematodo que lesiona el higado de mamiferos, incluyendo al hombre [7]. En el ganado bovino (Sos taurus, B. indicus) genera grandes perdidas economicas por causar de manera directa disminucion de la produccion carnica y lactea, ademas de presentar un cierto grado de mortalidad [1, 2, 26] y a nivel de frigorificos, el decomiso del organo parasitado [6, 18]. De manera indirecta se ha descrito que puede llegar a causar problemas hepaticos [24, 25] y reproductivos como infertilidad y abortos [5]. En la zona donde se ha desarrollado el ganado Criollo Limonero ha sido descrita como endemica a esta helmintosis, reportando en diferentes investigaciones altas prevalencias con elevadas abundancias e intensidades medias, ademas de evidenciar un efecto significativo de las epocas y los meses del ano sobre estas variables [1, 2, 8, 9, 14, 16].

El diagnostico de los animales parasitados se realiza de manera habitual a traves de tecnicas coprologicas, como la sedimentacion o centrifugacion [2], las cuales son muy laboriosas y presentan una baja sensibilidad, mostrando un elevado porcentaje de animales falsos negativos [13]. Ademas, las tecnicas coprologicas son incapaces de detectar infecciones tempranas, debido a que el periodo prepatente de esta parasitosis en bovinos se encuentra entre 10 y 12 semanas [19]. Para solventar estas desventajas, se han desarrollado diferentes metodos serologicos, entre ellos el ELISA, que detecta los anticuerpos especificos frente a F. hepatica a partir de los 14 dias postinfeccion (dpi) [4, 11, 23].

Se han desarrollado pruebas de ELISA para el diagnostico serologico de fasciolosis, las cuales presentan disponibilidad comercial. La sensibilidad del ELISA es alta, siendo capaz de detectar a los animales parasitados entre un 98 y 100% en suero sanguineo y entre 91 y 99% en muestras de leche [3, 13, 20, 21], observandose altas y significativas correlaciones entre los niveles detectados en suero, con los detectados en leche [21]. La habilidad de detectar infecciones tempranas es una gran ventaja, para minimizar el dano hepatico causado por los fasciolomulos en su migracion y reducir la eliminacion fecal de huevos que contribuye a disminuir la tasa de infeccion [3, 13]. La desventaja del ELISA es que no discrimina infecciones activas o pasadas, como pudiera ser la persistencia de anticuerpos luego de un tratamiento fasciolicida eficaz [20].

En esta investigacion se propuso detectar la seroprevalencia y el grado de infeccion de F. hepatica existente, a traves de anticuerpos IgG con la version de ELISA comercial del Instituto Pourquier, en suero de un rebano de ganado Criollo Limonero y en tanques de leche de explotaciones en el municipio Mara del estado Zulia, Venezuela.

MATERIALES Y METODOS

La investigacion fue desarrollada en la Estacion Experimental El Laral del Instituto Nacional de Investigaciones Agricolas (INIA) y en 20 explotaciones ganaderas del sector Playa Bonita del municipio Mara, ubicado al noroeste del estado Zulia, Venezuela, durante el mes de abril del ano 2008. La region presenta un clima seco tropical con una temperatura y precipitacion media anual de 29[grados]C y 600 mm, respectivamente. La zona se encuentra irrigada por el rio Socuy, perteneciente a la cuenca hidrografica del lago de Maracaibo [10].

Los animales utilizados, hembras adultas, pertenecian a un rebano bovino de raza Criollo Limonero puro y su alimentacion se baso en pastos cultivados (Echinochloa polystachia), en potreros irrigados por inundacion. El numero de animales utilizados fue calculado utilizando la formula para la determinacion del tamano de la muestra [12], con una prevalencia esperada del 23%, un nivel de confianza de 95% y una precision del 5%. En un lapso de dos dias (d) se tomaron 205 muestras de sangre mediante puncion de la vena coccigea, con aguja de calibre 20 G en tubos Vacutainer[R] sin anticoagulante. Los tubos con las muestras de sangre completa se dejaron reposar a temperatura ambiente hasta la formacion del coagulo para posteriormente separar el suero mediante centrifugacion a 252 g. durante 20 minutos. El suero se coloco en viales plasticos esteriles para su congelacion (Samsung, Serie Twin RZ80FHIS, Korea) a -20[grados]C, luego de ser transportado en cava refrigerada hasta el laboratorio de Enfermedades Parasitarias de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad del Zulia. Las muestras fueron debidamente identificadas al momento de su obtencion. Adicionalmente, se tomaron muestras al azar de 20 tanques de almacenamiento de leche en igual numero de explotaciones ganaderas del sector, mediante el uso de tubos de ensayo esteriles con capacidad de 10 mL, almacenandolas de manera similar al suero. Para la valoracion de los anticuerpos se siguio las instrucciones del kit Porquier[R] ELISA de verificacion de fasciolosis bovina en suero y leche, version P05120/04 [17]. Los resultados se clasificaron en negativos y positivos, estos ultimos en infeccion leve, moderada y fuerte. El calculo de la seroprevalencia se realizo a traves de la formula epidemiologica respectiva [12].

RESULTADOS Y DISCUSION

Los resultados observados en esta investigacion para detectar el grado de infeccion existente, a traves de anticuerpos IgG frente a F. hepatica en suero y leche del ganado mostraron que, la seroprevalencia en el rebano estudiado fue de 7,31% y en los tanques de leche de las unidades de produccion 30%. Dentro de las muestras sericas positivas, el 73,33% mostraron infeccion leve, 20% moderada y 6,66% fuerte. Las muestras de leche que resultaron positivas en las fincas muestreadas, el 83,33% mostro infeccion leve y el 16,66% moderada (TABLA I).

La seroprevalencia de 7,31% en el rebano detectada en sueros sanguineos individuales, se diferencia de los resultados reportados por otros autores quienes observaron seroprevalencias desde 67% [22], hasta 81,41% [20], indicando una baja seroprevalencia en el rebano estudiado. Lo anterior podria deberse al regimen de dosificaciones estrategicas a las cuales se encontraba sujeto el rebano utilizado en la presente investigacion, donde las posibilidades de transmision se reducen por menor eliminacion de huevos y contaminacion de los mismos al medio ambiente, lo cual disminuye la incidencia de infecciones por F. hepatica [15]. Adicionalmente, la eficacia de los tratamientos fasciolicidas eliminan la poblacion de parasitos adultos a nivel de los canaliculos biliares, reducen el intercambio y reconocimiento antigenico, por lo que los niveles de anticuerpos especificos frente a F. hepatica disminuyen hasta niveles indetectables por ELISA, como lo reportan Guobadia y Fagbeni [11], quienes estudiando los niveles de anticuerpos previo y posterior al tratamiento antihelmintico, observaron una reduccion de los mismos a niveles basales a los 14 d posteriores al tratamiento.

El grado de infeccion detectado por la tecnica de ELISA en el rebano, concuerda con la distribucion habitual de las helmintosis en los mismos, la cual se clasifica como una distribucion binomial negativa, donde un pequeno porcentaje de animales son los mayores responsables del mantenimiento de la infeccion, por servir de hospedadores a mayor cantidad de parasitos [2].

En el caso de la deteccion de anticuerpos especificos frente a F. hepatica en los tanques de leche de las fincas estudiadas, se observo un porcentaje de positividad leve. Sanchis y col. [22] reportaron un 92% de positividad en la evaluacion de anticuerpos en leche a traves de ELISA en las fincas estudiadas. Este valor, mayor a los resultados observados en esta investigacion podria ser debido a las diferencias existentes entre las zonas evaluadas, como puede ser un clima templado y otro tropical. Respecto al grado de infeccion detectado en los tanques de leche, los resultados son esperables, tomando en cuenta la distribucion binomial negativa, donde la leche de los animales negativos o levemente infectados, diluyen los niveles de anticuerpos detectables en la leche de los hospedadores con un grado de infeccion fuerte. Respecto a lo anterior, Reichel y col. [20] reportan que, los analisis de ELISA en tanques de leche solo son capaces de detectar rebanos con prevalencias entre moderadas a altas, lo que podria explicar el leve porcentaje de fincas positivas observada en este estudio, en una zona endemica a F. hepatica.

CONCLUSIONES

La medicion de la seroprevalencia y el grado de infeccion por F. hepatica en ganado Criollo Limonero muestra que, la seroprevalencia es baja en el rebano estudiado y en los tanques de leche de las fincas muestreadas, y el grado de infeccion predominante es el leve.

La tecnica de ELISA es una herramienta favorable para la deteccion de animales infectados, en muestras de suero o leche, para su utilizacion en la vigilancia epidemiologica de infecciones por F. hepatica en el municipio Mara del estado Zulia, Venezuela.

AGRADECIMIENTO

Al Instituto Nacional de Investigaciones Agricolas y a la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad del Zulia, por financiar el desarrollo de la investigacion.

Recibido: 06/02/2012. Aceptado: 12/06/2013.

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Francisco Angulo-Cubillan (1) *, Everts Chacin (1), Alfredo Sanchez (2), Marcos Calle (3), Sunny Zambrano (3), Merilio Montero (3), Mario Perez (1) y Roger Ramirez (1)

(1) Unidad de Investigaciones Parasitologicas, Laboratorio de Investigacion en Enfermedades Parasitarias, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad del Zulia. (2) Unidad de Investigaciones Clinicas, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad del Zulia. (3) Estacion Experimental El Laral, Instituto Nacional de Investigaciones Agricolas.

* francisco.angulo@fcv.luz.edu.ve
TABLA I
SEROPREVALENCIA Y GRADO DE INFECCION (%)
POR Fasciola hepatica, SEGUN LA CORRELACION DEL
RESULTADO DEL ELISA, CON EL NIVEL DE INFECCION
EN SUEROS INDIVIDUALES Y CON LA PROPORCION
DE LA INFECCION DENTRO DEL REBANO
EN TANQUES DE LECHE.

Seroprevalencia                Tipo de
y Grado de Infeccion   Suero   Muestra
                               Tanques
                               de Leche

No. de muestras         205       20
Seroprevalencia        7,31       30
Leve                   73,33    83,33
Moderado                20      16,66
Fuerte                 6,66       0
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Author:Angulo-Cubillan, Francisco; Chacin, Everts; Sanchez, Alfredo; Calle, Marcos; Zambrano, Sunny; Monter
Publication:Revista Cientifica de la Facultad de Ciencias Veterinarias
Date:Nov 1, 2013
Words:2686
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