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Comparacion de siete pruebas diagnosticas para detectar infeccion por Trypanosoma cruzi en pacientes en fase cronica de la enfermedad de Chagas.

Comparison of seven diagnostic tests to detect Trypanosoma cruzi infection in patients in chronic phase of Chagas disease

Introduccion

La enfermedad de Chagas (EC) es causada por la infeccion con el parasito protozoario intracelular Trypanosoma cruzi. La Organizacion Mundial de la Salud estima que aproximadamente 8 millones de personas en Latinoamerica estan infectadas (1). Sin embargo, debido a la creciente migracion de latinoamericanos a multiples paises en todo el mundo, esta patologia ahora debe ser considerada una enfermedad global (2). En Colombia, la prevalencia de infeccion por T. cruzi es de alrededor del 5%, correspondiente a 700,000 personas (3), y, en algunas areas del departamento de Santander, la seroprevalencia es de cerca del 50% (4). Las manifestaciones clinicas de la EC incluyen una fase aguda y una cronica, la cual se presenta con un amplio espectro de manifestaciones con formas cardiacas, digestivas y neurologicas. Sin embargo, solo aproximadamente entre un 20-30% de los individuos infectados desarrolla la cardiomiopatia chagasica cronica y/o el megaesofago/megacolon (2).

El diagnostico de infeccion con T. cruzi es complejo, especialmente durante la fase cronica, debido a la ausencia de sintomas y a la parasitemia baja o intermitente (2) que hace que los metodos parasitologicos directos tengan baja sensibilidad. Por esta razon, el diagnostico se basa en metodos serologicos, los cuales detectan la presencia de anticuerpos especificos dirigidos contra antigenos de T. cruzi combinados con hallazgos clinicos y epidemiologicos. Sin embargo, las pruebas serologicas presentan alta sensibilidad, pero poca especificidad por reacciones cruzadas con otros parasitos como Leishmania sp. y T. rangeli (5). En este escenario, la Organizacion Panamericana de Salud (OPS) sugirio que por lo menos dos ensayos basados en diferentes tecnicas deberian ser usados en paralelo para aumentar la precision diagnostica porque un solo ensayo no es considerado lo suficientemente sensible y especifico (6). Pero esta estrategia ha llevado a un aumento en el numero de resultados inconclusos que dificultan el manejo clinico de estos casos. Ademas, el diagnostico correcto no solo es una prioridad para identificar a los individuos que deben recibir un tratamiento adecuado, sino, tambien, para reducir y prevenir el riesgo de transmision a traves de trasfusiones de sangre y/o trasplante de organos.

Los metodos inmunologicos se basan en el ensayo inmunoenzimatico (Elisa), ensayo de hemaglutinacion indirecta (HAI), inmunofluorescencia indirecta (IFI), ensayo de inmunotransferencia (IB) y ensayo inmunocromatografico (IC). La mayoria de los ensayos usan como antigeno lisados crudos del parasito; sin embargo, se ha descrito el uso de proteinas recombinantes y/o peptidos sinteticos para aumentar la especificidad de las pruebas (7-9). A pesar de que los metodos inmunologicos se usan en el diagnostico de la infeccion por T. cruzi, los metodos moleculares proporcionan una alternativa, especialmente en casos de serologia dudosa (10,11). Estos metodos estan basados, principalmente, en la amplificacion por reaccion en cadena de la polimerasa (PCR). Sin embargo, el ensayo de PCR anidada (PCR-A) (10), el ensayo de PCR cuantitativa en tiempo real (PCR-RTQ) (11), y el ensayo de oligocromatografia (OligoC) (12) se han realizado para mejorar la deteccion de ADN de T cruzi. Dada la heterogeneidad de los resultados reportados de las pruebas disponibles para el diagnostico, el objetivo de este estudio fue comparar la precision de los metodos serologicos y moleculares para detectar la infeccion por T. cruzi en pacientes con enfermedad de Chagas cronica.

Materiales y Metodos

Poblacion y muestras del estudio

El estudio es analitico con diseno de casos y controles, que incluyo un total de 205 personas. En el estudio, los individuos fueron seleccionados de una base de datos de aproximadamente 2,000 pacientes que habian sido reclutados para un estudio de epidemiologia molecular de la EC, realizado por nuestro grupo de investigacion durante los ultimos 10 anos. La base de datos cuenta con datos epidemiologicos, clinicos, de laboratorio y la informacion de cada participante. La recoleccion de los datos epidemiologicos se llevo a cabo cara a cara por entrevistadores entrenados con independencia del personal medico que elaboro el cuestionario. El diagnostico clinico fue establecido por consenso por un panel independiente formado por dos medicos cardiologos. Con el fin de conocer el valor diagnostico de cada prueba serologica y molecular para la deteccion de T. cruzi y porque no existe una prueba estandar de oro para el diagnostico de la EC, la seleccion de los individuos se realizo mediante la combinacion de caracteristicas epidemiologicas y clinicas. Por lo tanto, los criterios de inclusion para el grupo de los pacientes con miocardiopatia chagasica (n= 100) fueron personas de zonas rurales en las que el nivel de endemicidad es elevado, con cardiomiopatia claramente compatible con EC por electrocardiograma, ecocardiograma y Holter de 24 h; mientras que las personas sin signos y sintomas cardiacos y provenientes de una zona urbana no endemica conformaron el grupo control (n= 105). Ademas, todas las personas vivieron en estas areas por 10 o mas anos. La recoleccion de las muestras fue asi: a cada persona se le tomaron tres muestras de sangre; una de estas (6 mL) se utilizo para obtener suero y las otras dos (4 mL cada una y con anticoagulante EDTA) para aislar el ADN genomico a partir de la capa leucocitaria. El tiempo y temperatura de almacenamiento entre la recoleccion de la sangre y la extraccion de ADN fue de 48 h a 4[grados]C. Las muestras de suero y de ADN se almacenaron por congelacion a -70 y -20[grados]C, respectivamente, hasta la realizacion del ensayo. Estas muestras se utilizaron para evaluar el rendimiento diagnostico de los metodos serologicos y moleculares para detectar la infeccion por T. cruzi. Las pruebas de laboratorio fueron realizadas por dos profesionales expertos en Microbiologia, quienes no conocian la informacion de los individuos. Dos investigadores, que tampoco conocian la informacion de los individuos, revisaron los resultados de las pruebas de laboratorio. Los miembros del panel revisaron individualmente cada prueba de laboratorio antes de reunirse para acordar un resultado final. Todas las pruebas de laboratorio fueron asignadas correctamente, con 100% de concordancia entre los miembros del panel.

Metodos serologicos

Los anticuerpos anti-T cruzi en suero fueron determinados mediante Elisa casero y recombinante, HAI y las pruebas de IC.

El Elisa casero se realizo en placas de microtitulacion de 96 pocillos (Dynatech sistema micro Elisa; Alemania) con extracto soluble de epimastigotes de una cepa autoctona de T. cruzi I (MHOM/CO/06/338). Las placas se recubrieron con 100 [micron]L de 2.0 [micron]g [mL.sup.-1] de antigeno diluido en tampon de carbonato-bicarbonato, pH 9.6, por pocillo y se incubaron durante la noche a 4[grados]C. Despues las placas se lavaron con Tween 20 (0.05%) en solucion salina tamponada con fosfato (137 mM de NaCl, 2.68 mM de KCl, 1.47 mM de [Na.sub.2]HP[O.sub.4], y 9.03 mM de K[H.sub.2]P[O.sub.4] x 2[H.sub.2]O), pH 7.4 (PBS-T20). Las placas se bloquearon con 2% de leche descremada en PBS-T20. Cada muestra fue probada en duplicado con 100 [micron]L de suero diluido 1:800 en PBS-T20. Las placas se incubaron durante 1 h a temperatura ambiente y se lavaron de nuevo. Posteriormente, se anadieron 100 [micron]L de conjugado de anti-inmunoglobulina humana polivalente ([alfa], [gamma] y [my] especifica) marcada con fosfatasa alcalina: Cat. no. A3313 (Sigma-Aldrich, Inc.; EE.UU.), diluido 1:6,000 en PBS-T20. Las placas se incubaron durante 1 h a 37[grados]C y nuevamente fueron lavadas. Despues de la incubacion y el lavado, se anadieron 100 pL de 1 mg [mL.sup.-1] de p-nitrofenil fosfato (Sigma-Aldrich, Inc.; EE.UU.) preparado en tampon de dietanolamina al 10%, pH 9.7. Las placas se incubaron durante 25 min a temperatura ambiente. Finalmente, se detuvo la reaccion con 50 [micron]L de 3 M de NaOH. La densidad optica (DO) a 410 nm se midio en un lector de microplacas modelo MR550 (Bio-Rad Laboratories, Inc.; EE.UU.). Una muestra se considero positiva si la DO fue igual o superior a 0.37. Este punto de corte se estimo con base en el analisis de la curva ROC. El punto de corte optimo se definio como el valor que maximiza el area bajo la curva ROC (Fig. 1A).

Todas las muestras se ensayaron tambien por BioELISA Chagas (Biokit; Espana), que utilizo como antigeno peptidos sinteticos TcD, TcE, PEP2 y TCLi1-2 y por Chagatest ELISA recombinante V.3.0 (Winer laboratorio; Argentina), que utilizo como antigeno las proteinas recombinantes Ag1, Ag2, Ag13, Ag30, Ag36, y SAPA. Otras pruebas usadas fueron: Chagatest HAI (Winer Lab; Argentina.), que utilizo como antigeno eritrocitos de oveja sensibilizados con lisado de parasitos y la prueba de IC, que incluyo, como antigeno, los antigenos recombinantes H49 y 1F8 (Chagas AB rapid, Standard Diagnostics; Corea). Todas las determinaciones de los kits comerciales se realizaron siguiendo las instrucciones del fabricante.

Metodos moleculares

El ADN genomico se aislo mediante el metodo de "salting-out" a partir de la capa de leucocitos tomados de los 4 mL de sangre anticoagulada con EDTA (13). El ADN nuclear y del kinetoplasto de T. cruzi fueron amplificados mediante el metodo de PCR con el termociclador PTC200 [R] Thermal Cycler (Bio-Rad Laboratories, Inc.; EE.UU.). El limite de deteccion del ADN de T. cruzi para los protocolos de PCR optimizados se estimo en 10 parasitos por 100 [micron]g [micron][L.sup.-1] de ADN total aislado. Esta concentracion se determino mediante la mezcla de muestras de sangre anticoagulada con EDTA de una persona sana (no infectada por T. cruzi) con 1 mL de epimastigotes de T. cruzi I. Las mezclas ensayadas fueron: 1,000, 100, 10, 1, 0.1, 0.01 y 0.001 parasitos en 4 mL de sangre total. El ADN genomico se aislo de la capa leucocitaria, como se menciono anteriormente y diferentes concentraciones de ADN se probaron en cada ensayo de PCR. Los experimentos se realizaron por triplicado en tres ocasiones independientes.

La secuencia de ADN nuclear (ADNn) de T. cruzi repetida en "tandem" fue amplificada utilizando los cebadores Tcz1 (5'-CGA GCT CTT GCC CAC ACG GGT GCT-3 ') y Tcz2 (5'-CCT CCA AGC AGC GGA TTC TAG AGG-3 ') que amplificaron un fragmento de 188 pb ~ durante 30 ciclos (94[grados]C por 30 s, 55[grados]C por 30 s, 72[grados]C por 30 s). Cada PCR contenia 0.5 M de cada cebador, 2 mM de Mg[Cl.sub.2], 200 mM de dNTPs, 1X tampon de Taq y 1 U de Taq ADN polimerasa (Invitrogen Brasil Ltda., Brasil). La region variable del ADN del minicirculo del kinetoplasto (kDNA) fue amplificada por los cebadores 121 (5'-AAA TAA TGT ACG GGK GAG ATG CAT GA-3 ') y 122 (5'-GGT TCG ATT GGG GTT GGT GTA ATA TA-3 ') que amplificaron un fragmento de 330 pb ~ durante 35 ciclos (94[grados] C por 1 min, 63.5[grados]C por 1 min, 72[grados]C por 1 min). Cada reaccion contenia 0.5 M de cada cebador, 4.5 mM de Mg[Cl.sub.2], 200 mM de dNTPs, 1X tampon de Taq y 1.25 U de Taq ADN polimerasa (Invitrogen Brasil Ltda., Brasil). Las condiciones de amplificacion de las PCR se llevaron a cabo con 800 ng de ADN molde en un volumen total de 20 [micron]L. Los productos de la PCR se analizaron por electroforesis en gel de agarosa al 2% tenido con bromuro de etidio en tampon TAE 1X. Cada amplicon fue reconocido de acuerdo con su tamano, comparado con el marcador de peso molecular XIV (Roche Applied Science; EE.UU.). Todas las etapas de extraccion de ADN y las mezclas de reaccion usadas para los ensayos de PCR se controlaron y se compararon con controles positivos y negativos; los controles positivos incluyeron ADN aislado de la cepa de T cruzi Silvio X-10 y el ADN aislado de la sangre infectada con dos cepas de T. cruzi I (MHOM/CO/07/REM y MHOM/CO/07/338); mientras que los controles negativos incluyeron ADN aislado de T rangeli, Leishmania panamensis, Toxoplasma gondii, Crithidia lucillae y ADN aislado de la sangre no infectada con T cruzi.

[FIGURA 1 OMITIR]

Consideraciones eticas

Este estudio cumplio con las leyes colombianas actuales y con los criterios exigidos por el Codigo de Etica Medica y la declaracion de Helsinki. El Comite de Etica de la Universidad Industrial de Santander aprobo este estudio y todos los participantes firmaron el consentimiento informado.

Analisis de datos

Para todos los kits comerciales, cada valor de sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo (VPP) y valor predictivo negativo (VPN) y ROC, asi como los intervalos de confianza se calcularon con los valores de corte recomendados por los fabricantes. Del mismo modo, se estimaron los LR + y LR-, asi como la calidad de la sensibilidad ([kappa](1,0)), especificidad ([kappa](0,0)), y eficiencia ([kappa](0.5, 0))14-15. Los analisis estadisticos se llevaron a cabo mediante el uso de la version de software Stata 10 (Stata Corp, College Station, Texas, EE.UU.).

Resultados

Este estudio se realizo entre junio de 2010 y julio de 2011. La encuesta epidemiologica, diagnostico clinico y recoleccion de muestras, fueron adelantadas desde 2001. La estandarizacion de las pruebas de laboratorio utilizadas en el estudio se realizo entre agosto de 2010 a noviembre de 2010 y las pruebas de laboratorio se llevaron a cabo entre diciembre de 2010 a marzo de 2011. Las caracteristicas clinicas y demograficas de la poblacion de estudio son: el grupo de casos estuvo compuesto por 100 pacientes con miocardiopatia chagasica, 47 mujeres y 53 hombres, con promedio de edad de 50.6 [+ o -] 6.4 anos; el grupo de control estuvo compuesto por 105 sujetos sanos, 63 mujeres y 42 hombres, con promedio de edad de 23.7 [+ o -] 3.3 anos. Todos los participantes seleccionados cumplieron los criterios de inclusion en el estudio.

Las probabilidades condicionales y no condicionales de cada prueba serologica y molecular, asi como el analisis de calidad se listan en la Tabla 1. De todas las pruebas realizadas en este estudio, BioELISA Chagas mostro los valores mas altos de sensibilidad, especificidad, VPP, VPN y capacidad discriminatoria (Tabla 1 y Fig. 1B). Por el contrario, los ensayos de PCR para detectar el ADN de T. cruzi en muestras de sangre mostraron bajos valores de sensibilidad, pero altos valores de especificidad; sin embargo, mostraron de moderada a baja capacidad discriminatoria (Tabla 1 y Fig. 1B). Ademas, el analisis de correlacion entre los metodos serologicos fue mayor que el de los metodos moleculares, que fue de moderado a bajo (Tabla 2).

Ademas, el analisis de LR + y LR- mostraron que el BioELISA Chagas y Chagatest ELISA recombinante V.3.0 pueden confirmar y excluir el diagnostico de EC; mientras que, Chagatest HAI, Chagas AB rapid y el ELISA casero, asi como los ensayos de PCR realizados con el cebador Tcz1/Tcz2 y 121/122, solo pueden confirmar el diagnostico de EC (Fig. 1C).

Discusion

En la fase cronica de la EC el diagnostico se basa en la presencia de anticuerpos contra T. cruzi debido a la ausencia o baja parasitemia; por lo tanto, comunmente se utilizan pruebas serologicas como ELISA, IFI y HAI. Con el fin de resolver los inconvenientes de resultados falsos negativos y falsos positivos con las pruebas serologicas convencionales, se han desarrollado ensayos serologicos no convencionales con proteinas recombinantes de T. cruzi, las cuales tienen valores de sensibilidad y especificidad cercanos al 100% (7-9,16). A pesar de estos avances, y dado que actualmente no hay disponible ninguna prueba de referencia, la OPS recomienda el uso de dos pruebas basadas en diferentes principios para detectar antigenos (6). Sin embargo, esta recomendacion ha incrementado los resultados discordantes y las dificultades en el diagnostico. Ademas, existen numerosas pruebas disponibles en el mercado, pero con una significativa heterogeneidad relacionada con su exactitud, lo cual dificulta la seleccion de la mas adecuada para garantizar el diagnostico en zonas endemicas.

La evidencia experimental de este estudio muestra que BioELISA Chagas y Chagatest ELISA recombinante V 3.0 presentaron los valores mas altos de sensibilidad y especificidad, asi como VPP y VPN. Ademas, tienen una buena capacidad discriminatoria y alta calidad de la sensibilidad y la especificidad; ademas de la capacidad para confirmar y excluir el diagnostico de la infeccion por T. cruzi en pacientes en fase cronica de la EC (Tabla 1 y Figs. 1B y C). Sin embargo, a pesar de que el nivel de correlacion es alto (Tabla 2), los resultados obtenidos mediante el uso de BioELISA Chagas fueron mejores que con Chagatest ELISA recombinante v. 3.0, como ha sido reportado en estudios previos en Colombia en los que este ultimo mostro 95% de sensibilidad (17). Esto podria ser explicado por diferencias en la composicion y mezcla de peptidos sinteticos o proteinas recombinantes de T. cruzi. Asi, el BioELISA Chagas incluye los peptidos sinteticos TcD, TcE, PEP2 y TCLi1-2 (www.biokit.com), con el modelo de epitopes antigenicos inmuno dominantes de T. cruzi (18); mientras que, Chagatest ELISA recombinante v.3.0 incluye las proteinas recombinantes Ag1, Ag2, Ag13, Ag30, Ag36, y SAPA (www.wiener-lab.com.ar). Las caracteristicas de sensibilidad y especificidad de cada peptido/proteina y sus mezclas fueron revisados previamente por Jose Franco da Silveira (9). Sin embargo, es importante senalar que ambas pruebas muestran altos niveles de correlacion entre si; por otra parte, exhiben antigenos reconocidos principalmente por anticuerpos de la clase de IgM, tales como TCLi1-2 y SAPA. Sin embargo, en la reaccion antigeno-anticuerpo en la prueba Bioelisa Chagas se identifican anticuerpos de la clase de IgG e IgM humana, mientras que el Chagatest ELISA recombinante v.3.0 solo identifica IgG humana. Por el contrario, el ensayo inmunocromatografico de Chagas AB rapid es una prueba diagnostica rapida que utiliza los antigenos recombinantes H49 y 1F8 que han demostrado valores de sensibilidad y especificidad de 97-100% (16-19). Esta evidencia puede explicar los buenos resultados obtenidos en sensibilidad, especificidad, VPP, VPN, calidad de la sensibilidad, calidad de la especificidad y la capacidad discriminatoria (Tabla 1). Ademas, su simplicidad y facilidad de interpretacion hacen que sea muy util en el diagnostico rapido de infeccion por T. cruzi en estudios de campo. Sin embargo, para los sujetos con resultados negativos seria necesario el uso de cualquiera de las otras pruebas para realizar el diagnostico de infeccion por T. cruzi (Tabla 2). Por otro lado, el ELISA casero y la HAI exhiben altos valores de sensibilidad, especificidad, VPP y VPN. Sin embargo, el ELISA casero tiene mejores valores de sensibilidad y VPN que el Chagatest HAI, mientras Chagatest HAI tiene mejores valores de especificidad y VPP que el ELISA casero (Tabla 1); ademas, el ELISA casero presento mayor capacidad discriminatoria y capacidad para confirmar y descartar el diagnostico de la infeccion por T. cruzi (Tabla 1 y Figs. 1B y C). Estas pruebas mostraron falsos positivos y negativos, lo cual podria ser resuelto o mejorarse con el uso de las preparaciones antigenicas de tripomastigotes y/o amastigotes de cepas autoctonas de T cruzi.

La deteccion de T. cruzi en muestras de sangre humana mediante amplificacion de ADN con metodos basados en PCR ha sido aplicado para diagnosticar EC en pacientes, quienes han progresado a la fase cronica. Pero, dado que durante esta fase el numero de parasitos que circula en sangre periferica es bajo o intermitente, los metodos basados en la PCR tienen sensibilidades del orden de 45-65%, mientras que la especificidad se mantiene cerca del 100% (5, 20,21). Aunque las secuencias diana utilizadas en este estudio tienen un alto numero de copias en el genoma de T. cruzi (5,000 a 10,000 copias de ADNk y ~ 10% de ADNn por parasito) (22-23), los resultados mostraron moderados a bajos valores de sensibilidad y calidad de sensibilidad para ensayos de PCR realizadas con los cebadores 121/122 y Tcz1/Tcz2 (Tabla 1 y Fig. 1B). Estos resultados se podrian explicar, al menos en parte, por la disponibilidad de ADN molde en la mezcla de reaccion, que podria estar relacionada con el tipo de cepa de T. cruzi. Asi, se observan diferencias en el numero de copias de ADN satelite blanco, entre las cepas de T. cruzi que son mas abundantes en T. cruzi II que en T. cruzi I (24), asi como hay diferencias en el nivel de parasitemia, que es mayor en infeccion por T. cruzi I comparada con T. cruzi II (20). Estos resultados son relevantes porque en Colombia T. cruzi I es el grupo predominante, tanto en el ciclo domestico como selvatico, pero hay evidencia de infeccion por T. cruzi II en pacientes con cardiopatia chagasica (25). Estos resultados muestran que pacientes con un resultado positivo de PCR pueden ser diagnosticados como infectados por T. cruzi, pero para los pacientes con un resultado PCR negativo sera necesario el uso de cualquiera de las otras pruebas para realizar el diagnostico de infeccion por T. cruzi. Esto indica que las pruebas moleculares pueden confirmar el diagnostico, pero no excluirlo (Fig. 1C). De hecho, estas pruebas moleculares mostraron de moderada a baja correlacion con las demas pruebas (Tabla 2).

En conclusion, nuestra evidencia experimental sugiere que la estrategia de diagnostico de la infeccion por T cruzi en pacientes que han progresado a la fase cronica de EC se puede hacer mediante el uso de BioELISA Chagas o Chagatest ELISA recombinante v.3.0, que no solo mostraron un mejor rendimiento diagnostico, sino que tambien pueden confirmar y excluir el diagnostico de la infeccion por T. cruzi. Por otra parte, Chagas AB Rapid podria ser utilizado en los casos en que sea necesario un diagnostico rapido. Por ultimo, los ensayos moleculares se pueden usar para confirmar el diagnostico; sin embargo, debido a la baja sensibilidad, especificidad y capacidad discriminatoria es importante la utilizacion de cualquiera de las otras pruebas para realizar el diagnostico de la infeccion por T. cruzi.

Historia:

Recibido: 18 junio 2013

Revisado: 23 junio 2014

Aceptado: 26 junio 2014

Conflicto de intereses

Ninguno de los autores tiene un conflicto de intereses con la Institucion financiadora y la Institucion donde se realizo la investigacion.

Agradecimientos

Agradecemos a nuestros pacientes y a la Fundacion Cardiovascular de Colombia por la evaluacion clinica. Este trabajo fue apoyado por el proyecto 5661 de la Universidad Industrial de Santander, Bucaramanga, Colombia.

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Luisa Fernanda Duarte [1], Oscar Florez [1], Giovanna Rincon [1], Clara Isabel Gonzalez * [1]

[1] Molecular Immunology and Epidemiology Group, GIEM, Facultad de Salud, Universidad Industrial de Santander, Bucaramanga, Colombia.

Luisa Fernanda Duarte, Oscar Florez, Giovanna Rincon, Clara Isabel Gonzalez.Comparison of seven diagnostic tests to detect Trypanosoma cruzi infection in patients in chronic phase of Chagas disease. Colomb Med. 2014; 45(2): 61-66.

* Autor de correspondencia:

Clara Isabel Gonzalez Rugeles, PhD Escuela de Bacteriologia, Facultad de Salud Carrera 32 # 29-31, Oficina 419 Bucaramanga, Colombia

Tel: +57 7 6322429 Fax: +57 7 6322429. E-mail: oc.ude.siu@gic
Tabla 1. Resultados diagnosticos y rendimiento de las pruebas
serologicas y moleculares

                                  Nivel de la   Sensibilidad
Prueba            Prevalencia *     prueba
                                   ([cruz])       (95% IC)

Serologicas

ELISA casero                                        0.93
                      0.49           0.43       (0.86-0.97)

BioELISA Chagas                                     0.98
                      0.49           0.48       (0.93-0.99)

Chagatest ELISA                                     0.99
                      0.49           0.44       (0.82-0.95)

Chagatest HAI                                       0.73
                      0.49           0.36       (0.63-0.81)

Chagas AB rapid                                     0.88
                      0.49           0.43       (0.80-0.94)

Moleculares

RCP ADNk                                            0.51
                      0.49           0.25       (0.41-0.61)

RCP ADNn                                            0.22
                      0.49           0.11       (0.14-0.31)

                  Specificidad       VPP           VPN
Prueba
                    (95% IC)      (95% IC)      (95% IC)

Serologicas

ELISA casero          1.00          1.00          0.94
                  (0.97-1.00)    (0.96-1.00)   (0.88-0.98)

BioELISA Chagas       1.00          1.00          0.98
                  (0.97-1.00)    (0.96-1.00)   (0.93-1.00)

Chagatest ELISA       1.00          1.00          0.91
                  (0.97-1.00)    (0.96-1.00)   (0.85-0.96)

Chagatest HAI         1.00          1.00          0.80
                  (0.97-1.00)    (0.95-1.00)   (0.72-0.86)

Chagas AB rapid       1.00          1.00          0.90
                  (0.97-1.00)    (0.96-1.00)   (0.83-0.95)

Moleculares

RCP ADNk              1.00          1.00          0.68
                  (0.97-1.00)    (0.93-1.00)   (0.60-0.75)

RCP ADNn              1.00          1.00          0.57
                  (0.97-1.00)    (0.85-1.00)   (0.50-0.65)

                   Area ROC
Prueba                          k(1,0)       k(0,0)      k(0.5,0)
                   (95% IC)

Serologicas

ELISA casero         0.96        0.79           1          0.88
                  (0.93-0.99)

BioELISA Chagas      0.99        0.96           1          0.98
                  (0.98-1.00)

Chagatest ELISA      0.95        0.82           1          0.90
                  (0.92-0.98)

Chagatest HAI        0.87        0.58           1          0.74
                  (0.82-0.91)

Chagas AB rapid      0.94        0.79           1          0.88
                  (0.91-0.97)

Moleculares

RCP ADNk             0.75        0.35           1          0.52
                  (0.71-0.80)

RCP ADNn             0.61        0.13         0.99         0.22
                  (0.57-0.65)

Prueba              LR+     LR-

Serologicas

ELISA casero      9240.9    0.12

BioELISA Chagas   10291.0   0.02

Chagatest ELISA   9450.9    0.10

Chagatest HAI     7665.7    0.27

Chagas AB rapid   9240.9    0.12

Moleculares

RCP ADNk          5355.5    0.49

RCP ADNn          2310.2    0.78

* Prevalencia: total de diagnosticos positivos por muestra. ([cruz])
Nivel de la prueba: total de pruebas positivas por muestra. Los
valores calculados con los resultados de cada prueba serologica y
molecular de acuerdo con la clinica (electrocardiograma,
ecocardiograma y Holter de 24 h) y la evaluacion epidemiologica. VPP:
valor predictivo positivo, VPN: valor predictivo negativo, LR +:
razon de probabilidad positivo, LR-: razon de probabilidad negativa,
[kappa](1.0): calidad de la sensibilidad, [kappa] (0.0): calidad de la
especificidad, [kappa] (0.5, 0): calidad de la eficiencia, area ROC:
caracteristica operativa del receptor e IC del 95%: intervalo de
confianza del 95%.*

Tabla 2. Correlacion del diagnostico de las pruebas serologicas y
moleculares

Prueba            Elisa    BioELISA   Chagatest   Chagatest    Chagas
                  Casero    Chagas      ELISA        HAI      AB rapid

Serologicas
Elisa casero        1
BioELISA Chagas    0.91       1
Chagatest Elisa    0.96      0.92         1
Chagatest HAI      0.82      0.78       0.84          1
Chagas AB rapid    0.94      0.91       0.98        0.84         1

Moleculares
RCP ADNk           0.48      0.58       0.49        0.42        0.48
RCP ADNn           0.21      0.33       0.20        0.20        0.17

Prueba            CRP    RCP
                  kADN   ADNn

Serologicas
Elisa casero
BioELISA Chagas
Chagatest Elisa
Chagatest HAI
Chagas AB rapid

Moleculares
RCP ADNk           1
RCP ADNn          0.60    1

Valores calculados con los resultados de cada prueba serologica y
molecular.
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Author:Duarte, Luisa Fernanda; Florez, Oscar; Rincon, Giovanna; Gonzalez, Clara Isabel
Publication:Colombia Medica
Date:Apr 1, 2014
Words:5594
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