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COMPARACION DE LOS NIVELES SERICOS DE TSH Y T4 LIBRE EN BOVINOS.

TSH AND FREE T4 SERUM LEVELS COMPARISON IN CATTLE

INTRODUCCION

La glandula tiroides consta de unidades estructurales y funcionales llamadas foliculos. En ellos se producen y sintetizan las hormonas tiroideas mediante yodacion de residuos de tirosina en la molecula de tiroglobulina (glicoproteina yodada); su mecanismo de accion ha sido informado por varias observaciones clinicas, asi como en modelos animales (Brent 2012). Dicha hormona es esencial para el desarrollo normal, el crecimiento, la diferenciacion neuronal, la maduracion y la regulacion metabolica en los mamiferos (Brent 2012; diez-Monforte et al. 1993). su papel fundamental en la regulacion de la termogenesis y el metabolismo basal, es dado por su accion sobre los genes de proteinas involucradas en los procesos de oxido-reduccion mitocondrial y de disipacion de calor (Cunningham y Klein 2009; venditti 1997; Zaninovich 2001), ya que juega un rol importante, tanto en la termogenesis obligatoria (estimula varios procesos biologicos implicados en la transduccion de energia dentro de los tejidos), como en la termogenesis facultativa (se altera la produccion de calor del cuerpo por la existencia de ciertas manifestaciones clinicas asociadas tales como hipotiroidismo, hipertiroidismo y tirotoxicosis) (silvestri et al. 2005); ademas, regula la accion de la calcitonina que, junto con la paratohormona, mantienen la homeostasis del calcio y controlan su deposito y absorcion a nivel del hueso, asi como su excrecion a nivel renal y su absorcion en el tracto digestivo (schenck 2007). Igualmente, se requiere para la metamorfosis de los anfibios (Furlow y Neff 2006; Tata 2011). Las secreciones de la glandula tiroides tambien estimulan el consumo de oxigeno y la sintesis de proteinas por la glandula mamaria, concomitantemente con el aumento de la produccion de leche (Cabell y Esbenshade 1990).

En el ganado lechero las hormonas tiroideas resultan de particular importancia en la fisiologia de la reproduccion y la lactancia (Morales y Rodriguez 2005), existiendo correlaciones significativas entre los niveles de hormonas tiroideas y algunos parametros reproductivos como el indice de fecundidad, el intervalo partoconcepcion y el intervalo interpartos; asi, se constatan niveles de triyodotironina (T3) y tiroxina (T4) inferiores en vacas con baja eficiencia reproductiva, siendo T4 la hormona que presenta una correlacion negativa y significativa (Diez-Monforte et al. 1993). Por otro lado, la actividad tiroidea tambien puede afectar la ganancia de peso corporal a traves de la alteracion de la tasa metabolica basal en los bovinos (Thrift et al. 1999).

El principal estimulo de la funcion tiroidea es la hormona tirotropa (TSH), la cual es sintetizada y segregada por la hipofisis anterior, regulando las concentraciones sericas de las hormonas tiroideas mediante un sistema clasico de retroalimentacion negativa (Chiamolera y Wondisford 2009; Gonzales-Vicente 2000; Ramos-Rivero 1999), ya que un aumento en los niveles de dichas hormonas disminuye la secrecion de TSH y el deficit de las mismas aumenta su secrecion (Gonzales-Vicente 2000; Ramos-Rivero 1999); tambien regula la captacion de yoduro mediada por el cotransportador de sodio/yoduro (Brent 2012).

La secrecion insuficiente de T4 y T3 puede provocar un estado de hipotiroidismo, el cual es el trastorno tiroideo mas comun encontrado en los rumiantes (Gupta et al. 2010), siendo el pastoreo de forrajes con bajas concentracionesde yodo, la deficiencia de selenio y la ingestion de plantas bociogenicas, las tres causas mas comunes de hipotiroidismo clinico en esta especie (Osorio y Correa 2013). Los signos clinicos varian de acuerdo con los diversos efectos de las hormonas tiroideas sobre el metabolismo celular, haciendo que los rumiantes sean menos resistentes a las infecciones (Gupta et al. 2010). Por lo general, y como se menciono anteriormente, se presentan trastornos reproductivos como: partos con crias muertas, crias debiles, abortos, mortalidad neonatal aumentada, gestacion prolongada, alteracion de los ciclos estrales e infertilidad. Tambien ocasiona crecimiento deficiente y alteraciones en el desarrollo neurologico de los animales jovenes (Matamoros et al. 2003; Osorio y Correa 2013), con consecuencias negativas para la salud, la produccion y la reproduccion animal.

Finalmente, las concentraciones sanguineas de las hormonas tiroideas se ven influidas por diversos factores como el sexo, la edad, algunas enfermedades, balance energetico, yodo, selenio, estado fisiologico (gestacion, lactancia), estres y farmacos (Matamoros et al. 2003). Asi mismo, se ha senalado que existe un efecto racial para las concentraciones de las hormonas tiroideas en bovinos (Campos et al. 2004; Campos-Gaona y Giraldo 2008). Aunque se ha reportado que dichas concentraciones se ven influidas por la ingesta de energia (Kuhne et al. 2000), Martinez et al. (2001) indican que la dieta no altera los niveles sericos de T3 y T4.

El objetivo del presente trabajo fue determinar los niveles de TSH y T4L en bovinos diferenciados por genero y edad, y conocer su comportamiento frente a dichas variables, teniendo en cuenta que las hormonas tiroideas son el principal mecanismo de regulacion del consumo de oxigeno y modulador del crecimiento en bovinos.

MATERIALES Y METODOS

se obtuvieron 133 muestras de sangre de bovinos mestizos F1 (Bos indicus por Bos taurus) en algunos predios de las localidades de santagueda y supia (Caldas, Colombia), Quinchia (Risaralda, Colombia) y Cartago (Valle del Cauca, Colombia). Los animales seleccionados en el estudio presentaban un adecuado plan sanitario (desparasitados y con vacunas al dia) y una condicion corporal entre 3 y 4 (escala de 1 a 5); no se incluyeron hembras prenadas. Fueron conformados cuatro grupos, discriminados segun genero y edad (36 machos y 20 hembras menores de 18 meses, y 47 machos y 30 hembras mayores de 24 meses).

La toma de las muestras se realizo en horas de la manana mediante venopuncion en la yugular, fueron recolectadas en tubos Vacutainer[R] sin anticoagulante. Se centrifugaron a 3.500 rpm en una centrifuga Thermo Multispeed[R] durante 15 minutos y, posteriormente, fue extraido el suero. Para cada muestra se determinaron las concentraciones circulantes de TSH y T4 libre.

En la determinacion de T4L se utilizo la prueba de inmunoensayo enzimatico competitivo (Free T4 AccuBind ELISA Kits: Monobind Accubind ELISA Microwells Free Thyroxine (FT4) Test System Product Code: 1225-300). Siguiendo las indicaciones del fabricante, el rango de los analitos empleados en las curvas estandares fue de 0; 0,45; 1,10; 2,00; 5,00 y 7,40 ng/dL (Monobind Inc., 2015); los sueros fueron colocados en contacto con una fase solida que contenia anticuerpos contra la T4 a la cual se le agrego el conjugado compuesto por T4L unido a peroxidasa de rabano (HRP) para formar una reaccion de competicion por los sitios de union. La lectura se hizo en un equipo lector de micro ELISA (Titertek Multiscan[TM]) a una absorbancia de 450 nm. Las absorbancias de los estandares se usaron para obtener la curva de calibracion y determinar las concentraciones de T4L de las muestras.

Para la determinacion de los niveles de TSH se utilizo una prueba de inmunoensayo enzimatico colorimetrico tipo sandwich, utilizada para la cuantificacion del TSH de origen humano (TSH AccuBind ELISA Kits: Monobind Accubind ELISA Microwells Thyrotropin (TSH) Test System Product Code: 325-300); siguiendo las indicaciones del fabricante el rango de los analitos empleados en las curvas estandares fue 0, 0,5, 2,5, 5, 10, 20, 40 [micron]UI/ml (Monobind Inc, 2015). Asi, a una placa de 96 pozos que tenia unidos anticuerpos monoclonales contra la TSH, en una interaccion estreptavidina-biotina, se le agrego una alicuota de suero obtenido de caninos adultos y una alicuota de conjugado compuesta de un anticuerpo policlonal contra la TSH unido a la peroxidasa de rabano; con ello se indujo una reaccion entre antigeno y anticuerpo en forma de un complejo tipo sandwich. La lectura en se hizo en un fotometro lector de micro ELISA (Titertek Multiscan[TM]) a una longitud de onda de 450 nm.

Los kit para T4L y TSH fueron validados para su uso en muestras de bovinos en nuestro laboratorio, utilizando sueros y plasma sanguineo, y obteniendo curvas de paralelismo apropiadas. En la validacion se trabajo con 50 muestras por triplicado en mediciones intradia e interdia, obteniendose un coeficiente de variacion de 8% y 9%, respectivamente.

Las comparaciones se realizaron estableciendo cuatro grupos de acuerdo con el genero y la edad, de la siguiente manera: 1) hembras jovenes vs. hembras adultas; 2) machos jovenes vs. machos adultos; 3) hembras jovenes vs. machos jovenes y, 4) hembras adultas vs. machos adultos.

Los resultados fueron analizados a traves del programa Stat Graphics[R] Plus 5.1.; mediante el modulo Stat Advisor, se realizo un analisis de varianza ANOVA simple, obteniendo el promedio, la varianza, la desviacion estandar y el rango minimo y maximo para cada variable (TSH y T4L) en cada uno de los cuatro grupos citados, en los cuales se acepto diferencia estadisticamente significativa cuando P valor es <0,05. La probabilidad fiducial, se evaluo por intervalos de confianza (IC [+ o -] 95%).

RESULTADOS Y DISCUSION

El analisis estadistico muestra que los niveles de TSH no difieren entre los cuatro grupos analizados. Se hallaron valores (en [micron]UI/ml) para las hembras jovenes de 1,86; 1,13; 2,77 y 0,48 para promedio, minimo, maximo y desviacion estandar, respectivamente. En el mismo orden, los valores de TSH para las hembras adultas fueron de 1,86; 0,25; 3,92 y 0,75. En los machos jovenes fueron de 1,88; 1,18; 3,5 y 0,60, y para machos adultos 1,99; 1,24; 3,97 y 0,56 (Tabla 1). El valor P del test F fue mayor o igual a 0,05 en todos los grupos (Tabla 2); por lo tanto, no hay diferencia estadisticamente significativa segun genero y edad, analizado con un nivel de confiabilidad del 95% y confirmando lo reportado por Paulikova-Iveta et al. (2011) quienes desarrollaron estudios dependientes de la edad que indican que las concentraciones medias de TSH no presentan cambios significativos.

Los valores de T4L (ng/dl) en las hembras jovenes fueron de 0,84; 0,53; 1,53 y 0,25, respectivamente para promedio, minimo, maximo y desviacion estandar; en el mismo orden, los valores de T4L para las hembras adultas fueron de 0,62; 0,17; 0,97 y 0,19. Para los machos jovenes de 0,67 0,19; 1,1 y 0,23 y para machos adultos 0,85; 0,23; 1,82 y 0,44 (Tabla 3). El valor P del test F fue menor a 0,05 en todos los grupos (Tabla 2), lo que indica diferencia estadisticamente significativa, con una confiabilidad del 95%.

Se han evidenciado efectos de la edad sobre los valores de T3 y T4 en bovinos influidas por la ingesta de energia en el ganado vacuno adulto y en terneros de al menos 1 semana de edad (Kuhne et al. 2000). Igualmente, se ha reportado que las concentraciones de las hormonas tiroideas aumentan con la edad gestacional (Cassar-Malek et al. 2007). Sin embargo, Campos et al (1993) indican que dichas concentraciones no presentan diferencias durante los tres periodos de gestacion en las madres, y contrario a ello, en los fetos, estas aumentan a medida que avanza la gestacion, siendo significativamente mayores en el ultimo trimestre, lo que podria confirmar su participacion en el crecimiento y desarrollo animal.

Por su parte, varios estudios han demostrado que los valores de las hormonas tiroideas descienden gradualmente y se estabilizan a medida que la edad aumenta (Colmenarez et al. 2001; Campos-Gaona y Giraldo 2008; Rowntree et al. 2004), siendo las concentraciones mayores en el dia 0 despues del parto (Rowntree et al. 2004; Rijnberk y Kooistra 2010) y mostrando concentraciones mas altas en novillas que en vacas (Campos et al. 2004), lo cual concuerda con los resultados encontrados en el presente trabajo, ya que los valores de T4L fueron mayores en las hembras jovenes comparadas con las hembras adultas. Contrario a ello, los machos adultos presentaron concentraciones mas altas al compararlos con los machos jovenes. Segun Rijnberk y Kooistra (2010), las hembras presentan mayores concentraciones de T4 frente a los machos, en el presente estudio dicho reporte coincide solo con en el grupo de los jovenes, ya que entre los adultos, las concentraciones de esta hormona es superior en los machos.

CONCLUSION

Respecto de las concentraciones de TSH no se encontraron efectos de sexo y edad. Contrario a ello, los niveles de T4L muestran una diferencia estadisticamente significativa, pues en los bovinos jovenes las hembras tienen niveles mas elevados, mientras que en los adultos son los machos quienes presentan valores superiores.

Dado que en bovinos es escasa la literatura que reporte los niveles sericos de TSH, se deben realizar investigaciones adicionales que incluyan este parametro con el fin de referenciar y establecer dichas concentraciones en esta especie.

HTTP://DX.DOI.ORG/10.15446/RFMVZ.V63N2.59356

REFERENCIAS

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J. H. Osorio (1,2) *, J. Vinasco (1)

Articulo recibido: 27 de noviembre de 2013 * Aprobado: 10 de octubre de 2015

(1) Laboratorio de Investigacion en Bioquimica Clinica y Patologia Molecular, Departamento de Ciencias Basicas de la Salud, Universidad de Caldas. Calle 65 nro. 26-10, Manizales (Colombia).

(2) Laboratorio de Investigacion en Metabolismo, Universidad de Manizales. Cr. 9a nro. 19-03, Manizales (Colombia).

* Autor para correspondencia: jose.osorio_o@ucaldas.edu.co
TABLA 1. Valores de TSH en bovinos ([micron]UI/ml).

                   Hembras                 Hembras
           [menor que o igual a]   [mayor que o igual a]
                  18 meses                 18 meses

Promedio            1,86                   1,86
Minimo              1,13                   0,25
Maximo              2,77                   3,92
De                  0,48                   0,75
Varianza            0,23                   0,56

                   Machos                  Machos
           [menor que o igual a]   [mayor que o igual a]
                  18 meses                 18 meses

Promedio            1,88                   1,99
Minimo              1,18                   1,24
Maximo               3,5                   3,97
De                  0,60                   0,56
Varianza            0,36                   0,31

De: Desviacion estandar.

TABLA 2. Valores de P (significancia estadistica) para TSH
([micron]UI/ml) y T4L (ng/dl) en bovinos segun genero y edad.

             TSH       T4L

HA vs. HJ   0,9722   0,0020 *
MA vs. MJ   0,3640   0,0238 *
HJ vs. MJ   0,9063   0,0111 *
HA vs. MA   0,3481   0,0097 *

HA: hembras adultas. HJ: hembras jovenes. MA: machos adultos. MJ:
machos jovenes.

* Indica diferencia estadisticamente significativa.

Tabla 3. Valores de T4L en bovinos (ng/dl).

                  Hembras                 Hembras
           [menor que o igual a]   [mayor que o igual a]
                 18 meses                 18 meses

Promedio           0,84                   0,62
Minimo             0,53                   0,17
Maximo             1,53                   0,97
De                 0,25                   0,19
Varianza           0,06                   0,04

                  Machos                  Machos
           [menor que o igual a]   [mayor que o igual a]
                 18 meses                18 meses

Promedio           0,67                    0,85
Minimo             0,19                    0,23
Maximo              1,1                    1,82
De                 0,23                    0,44
Varianza           0,05                    0,19

De: Desviacion estandar.
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Title Annotation:Investigacion
Author:Osorio, J.H.; Vinasco, J.
Publication:Revista Facultad de Medicina Veterinaria y de Zootecnia
Article Type:Report
Date:May 1, 2016
Words:3377
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