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Analysis of somatic cell count of Staphylococcus spp. associated with virulence factors isolated from bovine subclinical mastitis/Analise da contagem de celulas somaticas de Staphylococcus spp. associados aos fatores de virulencia isolados de mastite subclinica bovina.

Introdujo: A contagem de celulas somaticas (CCS) e o principal indicador de mastite subclinica e o aumento da mesma indica ma qualidade do leite. Com o surgimento de metodos eletronicos para a contagem de celulas somaticas, tal medida se tornou "padrao-ouro" na mensuracao da qualidade do leite e e muito utilizada pela maioria dos paises. O aumento da contagem de celulas, em geral, esta relacionado a presenga de bacterias. Apos a entrada desses patogenos na glandula mamaria, ocorre um rapido aumento do numero de celulas somaticas no quarto infectado, uma vez que, ocorre a adesao dos micro-organismos ao tecido mamario, seja devido a expressao de genes codificadores de adesinas e/ou biofilme. O objetivo do estudo foi avaliar a relacao entre a presenga dos genes codificadores de adesinas e biofilme com a mediana da contagem de celulas somaticas. Os genes estudados foram: proteina ligadora de colageno (cna), proteina ligadora de laminina (eno), proteina ligadora de elastina (ebp), proteina ligadora de fibrinogenio (fib), proteina A ligadora de fibronectina (fnbA), proteina B ligadora de fibronectina (fnbB) e proteina associada a formacao de biofilme (bap).

Material e metodos: Foram coletadas 313 amostras de leite de bovinos leiteiros negativos ao teste de Tamis e reagentes ao CMT (California Mastitis Test), portanto portadores de mastite subclinica. Para o diagnostico microbiologico, as amostras foram coletadas em frascos estereis e enviadas sob condicoes de refrigeracao ao laboratorio de Bacteriologia e Micologia --FMVZ/USP. Para a realizacao da contagem de celulas somaticas por citometria de fluxo, as amostras foram coletadas em frascos contendo bronopol e enviadas a ESALQ - USP. A pesquisa de genes pela reacao em cadeia da polimerase (PCR) foi realizada de acordo com a metodologia de Tristan et al. (1) e Vancraeynest et al. (2). Por fim,foi verificado qual gene apresentou maior mediana da CCS isoladamente ou combinado a outros genes.

Resultados e discussao: Foram isoladas 106 estirpes de Staphylococcus spp. Os resultados referentes aos genes encontrados estao apresentados na Tabela 1.. Analisando as CCS, os maiores valores das medianas verificados foram para os genes bap e fib com 780.500 e 738.000 cels./ml, seguidos por ebp com 695.000 cels./ml, eno com 690.000 cels./ml, cna e fnbB com 440.500 e 337.500 cels./ml, respectivamente, verificados na Tabela 1. Ao pesquisar a principal combinacao de genes encontrada, verificou-se que a frequencia dos genes "eno/fib/bap" associados foi maior que todas as outras combinacoes de genes, em 49 (46,2%) das amostras contra 45 (42,5%) para as demais combinacoes.. Com relacao as CCS para os genes associados, verificou-se para a combinacao "eno/fib/bap" o valor de 813.000 cels./ml ( Tabela 2) Pq isso? Discutir e nao apenas repetir os resultados presentes nas tabelas.

Conclusoes: Somente o gene fnbA nao foi encontrado nos isolados de Staphylococcus spp. estudados, sendo que os mais verificados foram os genes eno e fib. Na presenga de um unico gene pesquisado a CCS se apresentou baixa. Assim, a associacao dos genes "eno/fib/bap" demonstrou maior contagem de celulas somaticas, mesmo quando comparada com as demais combinacoes de genes. Futuramente, sera interessante descrever previamente o papel dos componentes da superficie bacteriana envolvida na aderencia e internalizacao no epitelio da glandula mamaria, enfatizando sua relacao com a CCS para producao de leite dequalidade.

Referencias:

(1.) TRISTAN, A.; YING, L.; BES, M.; ETIENNE, J.; VANDENESCH, F.; LINA, G. Use of multiplex PCR to identify Staphylococcus aureus adhesins involved in human hematogenous infections. Journal of Clinical Microbiology, v. 41, n. 9, p. 4465-4467, 2003.

(2.) VANCRAEYNEST, V.; HERMANS, K.; HAESEBROUCK, F. Genotypic and phenotypic screening of high and low virulence Staphylococcus aureus isolates from rabbits for biofilm formation and MSCRAMMs. Veterinary Microbiology, v. 103, p. 241-247, 2004.

Eveline Zuniga [2] *

Andre Becker Simoes Saidenberg [2]

Patricia Braconaro [2]

Sandra Renata Sampaio Salaberry [2]

Priscilla Anne Melville [3]

Marco Antonio Laes [4]

Nilson Roberti Benites [5]

[1] Auxilio pesquisa FAPESP

[2] Pos-graduandos em Epidemiologia experimental aplicada as zoonoses da Faculdade de Medicina Veterinaria e Zootecnia da Universidade de Sao Paulo (FMVZ/USP). *E-mail: eveline.zuniga@usp.br

[3] Tecnica do laboratorio de Bacteriologia e Micologia do Departamento de Medicina Veterinaria Preventiva e Saude Animal (FMVZ/USP)

[4] Msc. em Economia FEA/USP. E-mail: marco_laes@hotmail.com

[5] Professor pelo Departamento de Medicina Veterinaria Preventiva e Saude Animal (FMVZ/USP)
Tabela 1--Valores absolutos, porcentagens e Medianas, Numeros
Minimos e Maximos das CCS de cada gene codificador de adesina
e produtor de biofilme (cna, eno, ebp, fnbB, fib, bap) e de
isolados que nao apresentaram nenhum dos genes estudados em
Staphylococcus spp. Sao Paulo--2012.

Fatores de       N     %     Valor Minimo   Valor da     Valor
virulencia de                   (cels)      Mediana     Maximo
Staphylococcus                               (cels)     (cels)
spp.

cna              18   17,0      58,000      440,500    1,743,000
eno              87   82,1      58,000      690,000    7,130,000
ebp              19   17,9      75,000      695,000    4,855,000
fnbB             6    5,7      106,000      337,500    2,639,000
fib              76   71,7      94,000      738,000    7,130,000
bap              60   56,6      94,000      780,500    7,130,000
negativos        12   11,3      12,000      180,000    1,916,000

Tabela 2--Valores absolutos, porcentagens e Medianas, Numeros
Minimos e Maximos das CCS das combinagoes de genes "eno/fib/bap",
demais combinagoes e ausencia dos genes pesquisados. Sao Paulo--2012.

Staphylococcus spp.   N     %     Minimo    Mediana    Maximo
                                  (cels.)   (cels.)    (cels.)

ebp, fib e bap        49   46,2   94.000    813.000   7.130.000
demais combinagoes    57   42,5   12.000    466.000   4.855.000
  de genes
ausencia dos genes    12   11,3   12.000    180.000   1.916.000
  pesquisados
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Author:Zuniga, Eveline; Saidenberg, Andre Becker Simoes; Braconaro, Patricia; Salaberry, Sandra Renata Samp
Publication:Veterinaria e Zootecnia
Date:Jun 1, 2013
Words:941
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