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Analisis genetico, mediante marcadores rapd, de microbulbos de ajo conservados e irradiados in vitro.

Genetic analysis using RAPD markers of in vitro conserved and irradiated garlic microbulbs

INTRODUCCION

El ajo (Allium sativum L.) especie diploide (2n=16) perteneciente a la familia Alliaceae, ha sido ampliamente cultivado y utilizado a nivel mundial desde tiempos antiguos, principalmente por sus cualidades culinarias y medicinales (Paredes et al., 2008; Alam et al., 2012). Debido a su condicion apomictica y por ende, escasa produccion de semilla botanica, esta especie se reproduce exclusivamente de manera vegetativa, estando su mejoramiento genetico limitado a la seleccion clonal y a la busqueda de variabilidad genetica a traves de la seleccion de mutantes espontaneos que expresen caracteristicas deseables, o bien a partir de nuevos genotipos generados por variacion somaclonal y/o la aplicacion de mutagenos (Buso et al., 2008; Hyun et al., 2012; Vatsyayan et al., 2013; Pardo et al., 2015). Asimismo, una vez obtenidos los genotipos o clones de alta calidad, se debe considerar su mantenimiento o preservacion, por lo que es frecuente que los clones comunmente cultivados a nivel mundial sean conservados en bancos de germoplasma. Para el mantenimiento de las colecciones en campo se requiere de tiempo y un gran esfuerzo humano para minimizar las perdidas por los efectos de factores climaticos adversos y/o el ataque de plagas y enfermedades que aumentan notablemente su costo (Volk et al., 2004; Ipek et al., 2008; Barboza et al., 2012). Al respecto, el cultivo de tejidos constituye una valiosa herramienta para el estudio o la investigacion de especies de reproduccion vegetativa, ya que facilita la regeneracion masiva de plantas fieles al tipo y con ello la produccion, conservacion in vitro y el mejoramiento de recursos fitogeneticos, asi como tambien la aplicacion de mutagenesis in vitro para la produccion de nuevas variantes o mutantes con caracteristicas de interes agricola (Sanchez y Jimenez, 2009; Bairu et al., 2011).

Cabe destacar, que los marcadores moleculares basados en el ADN, han sido utilizados bien sea para estimar la fidelidad o integridad genetica de los bancos de germoplasma (Ipek et al., 2003; Choi et al., 2005), o bien para detectar la presencia de variaciones geneticas en materiales sometidos a un tratamiento mutagenico (Afrasiab y Iqbal, 2012). Especificamente, los marcadores RAPD, han demostrado ser una tecnica sensible, economica y facil de usar, que permiten determinar las variaciones dentro o entre clones (Khar et al., 2008; Abdoli et al., 2009; Pardo et al., 2009).

Entre otras ventajas atribuidas a esta tecnica se senalan el gran numero de muestras que pueden ser analizadas en forma rapida y economica con pequenas cantidades de ADN, asi como que la amplificacion del ADN ocurre independientemente de las expresiones ontogeneticas o de las influencias ambientales (Figliuolo et al., 2001; Wilches, 2004; Buso et al., 2008; Alam et al., 2012). Por lo anteriormente senalado, en la presente investigacion se analizo la conservacion y estabilidad genetica en microbulbos de ajo clon 'Bocono', conservados in vitro y tratados con radiacion gamma, respectivamente, mediante la tecnica RAPD.

MATERIALES Y METODOS

Los experimentos se realizaron en el laboratorio de cultivo in vitro de la Unidad de Biotecnologia, del Postgrado de Horticultura del Decanato de Agronomia, de la Universidad Centroccidental "Lisandro Alvarado" (UCLA), en Tarabana, estado Lara, Venezuela. Se utilizaron brotes de ajo, clon 'Bocono', procedentes del cultivo de apices caulinares los cuales, para alcanzar la fase de bulbificacion, fueron cultivados en el medio de Murashige y Skoog (MS) con 90 g x [L.sup.-1] de sacarosa + 2 mg x [L.sup.-1] de 2ip y 8 g x [L.sup.-1] de agar segun lo establecido por Mujica y Mogollon (2004).

Se evaluo la estabilidad genetica de microbulbos que estuvieron conservados (almacenados) durante 210 dias o que fueron sometidos mutagenesis in vitro. Para esto, se seleccionaron microbulbos con un peso entre 0,6 y 0,8 g y diametro ecuatorial comprendido entre los 0,5 a 1 cm.

Conservacion in vitro. Los microbulbos fueron almacenados bajo los siguientes cinco medios de cultivo: [T.sub.1] = MS con 45 g x [L.sup.-1] de sacarosa; [T.sub.2]= 54 MS con 45 g x [L.sup.-1] de sacarosa; [T.sub.3]= 4 MS; [T.sub.4]= % MS con 45 g x [L.sup.-1] de sacarosa y [T.sub.5]= % MS, todos con 8 g L-1 de agar, y 30 repeticiones. Como tratamiento testigo se utilizo el [T.sub.1] (el cual incluyo solo la mitad de la sacarosa comunmente utilizada en la bulbificacion) para garantizar un crecimiento minimo del microbulbo. El protocolo empleado para la conservacion bajo condiciones de crecimiento minimo fue el utilizado por Pardo et al. (2014). El medio MS se preparo manteniendo la concentracion total de los componentes: tiamina-HCl (30 mg x [L.sup.-1]), glicina (2 mg x [L.sup.-1]), acido nicotinico (10 mg L-1), piridoxina (1 mg L-1) e inositol (100 mg x [L.sup.-1]); el pH se ajusto a 5,8 [+ o -] 0,1. Los microbulbos se cultivaron en tubos de ensayo de 25 x 150 mm con 10 mL-1 de medio y se mantuvieron durante 210 dias, sin subcultivos, en un ambiente controlado en cuarto de crecimiento con temperatura de 25 [+ o -] 2 [grados]C, iluminacion de 13,5 [micron]mol[m.sup.-2][s.sup.-1] y fotoperiodo de 16 horas de luz y 8 horas de oscuridad.

Mutagenesis in vitro. El estudio se realizo en la Planta de Esterilizacion por Rayos Gamma (PEGAMMA) del Instituto Venezolano de Investigaciones Cientificas (IVIC) ubicado en los Altos de Pipe, estado Miranda, Venezuela. Los microbulbos del clon 'Bocono', cultivados en tubos de ensayo contentivos de medio MS con 90 g x [L.sup.-1] de sacarosa + 2 mg x [L.sup.-1] de 2ip y 8 g x [L.sup.-1] de agar, fueron irradiados al colocarlos a 75 cm de distancia de la fuente de radiacion gamma ([sup.60]Co). El poder y la velocidad de la fuente fue de 9813 Curie y 195 krad x [h.sup.-1]. De acuerdo con estos valores, se determinaron tiempos de exposicion de 1 min 50 seg, 2 min 28 seg y 3 min 4 seg, para las dosis de radiacion de 6, 8 y 10 krad, respectivamente, mas el testigo o control (0 krad).

Una vez irradiados, los microbulbos se trasfirieron dos veces a medio fresco de bulbificacion (dos subcultivos). Se aplico un diseno completamente al azar con 4 tratamientos (0, 6, 8 y 10 krad), 20 repeticiones y un microbulbo por tubo de ensayo.

Analisis de la estabilidad genetica. El estudio se realizo en el laboratorio de Biologia Molecular del Postgrado de Agronomia de la UCLA. El Material experimental consistio en microbulbos de ajo, clon 'Bocono', provenientes de los ensayos de conservacion y mutagenesis in vitro arriba mencionados (Cuadro 1).

Se utilizo el protocolo para la obtencion de bandas RAPD en A. sativum previamente descrito por Pardo et al. (2009). De acuerdo a esto, se siguieron los pasos correspondientes a la extraccion de ADN, la amplificacion del ADN polimorfico y la visualizacion de las bandas generadas, tal como se describe a continuacion: Para la extraccion de ADN genomico se tomaron muestras de cinco microbulbos provenientes de cada uno de los tratamientos de conservacion y mutagenesis in vitro y se aplico el metodo de purificacion con bromuro de cetiltrimetilamonio (metodo CTAB) descrito por Doyle y Doyle (1999). Esta metodologia permitio obtener cantidades suficientes de ADN de buena calidad.

La amplificacion de los fragmentos al azar fue realizada con 12 iniciadores mostrados en el Cuadro 2. Se selecciono una muestra compuesta de tejido de cada uno de los materiales antes descrito y se aplico el protocolo para RAPD descrito por Williams et al. (1990). Las condiciones mas apropiadas para la amplificacion fueron: Tampon Promega 1X, 1,5 mM Mg[Cl.sub.2], 0,2 mM dNTP's, 0,001% gelatina, 0,25 pM iniciador, 1,5 U Taq Promega y 10 ng de ADN en un volumen final de 20 [micron]L.

La PCR fue realizada en un termociclador Thermo Px2, programado para un primer ciclo termico de 1 min a 93 [grados]C, seguido por 45 ciclos correspondientes a la desnaturalizacion (1 min a 93 [grados]C), alineacion del iniciador (36 [grados]C por 1 min) y elongacion (72 [grados]C por 1 min). Posteriormente, el producto se mantuvo constante a 72 [grados]C por 5 min y luego fue conservado a 4 [grados]C hasta la realizacion de la electroforesis. Se realizaron tres replicas de cada reaccion.

Se logro la visualizacion de los fragmentos amplificados en geles de agarosa al 2 %, tenidos con bromuro de etidio al 1%. Los productos de amplificacion polimorficos fueron registrados en matrices binarias de datos, asignando (0) para ausencia y (1) presencia de bandas amplificadas. Se construyo una matriz generada mediante el coeficiente de distancia Dice (1-S) y con esta, un analisis de agrupamiento por dendrograma y coordenadas principales. Ambos tipos de analisis permitieron visualizar las relaciones geneticas entre los materiales evaluados. Los analisis se realizaron utilizando el programa estadistico Infogen (Universidad Nacional de Cordoba, Argentina).

RESULTADOS Y DISCUSION

La microbulbificacion a partir de brotes cultivados en MS suplementado con 2 mg x [L.sup.-1] de 2ip y 90 mg x [L.sup.-1] de sacarosa, permitio el desarrollo de un solo microbulbo por tubo de ensayo, evidenciando la eficiencia del protocolo utilizado, tal como lo indicado por Mujica y Mogollon (2004). Dichos autores senalan que este medio es comunmente utilizado para la regeneracion de microbulbos a partir de apices caulinares, dado que con estas concentraciones se encuentran las condiciones apropiadas para el rapido crecimiento y/o desarrollo tanto de los microbulbos, como de las hojas y raices en un periodo de 2 meses. Conservacion in vitro. Los microbulbos almacenados bajo cinco tratamientos de conservacion in vitro se diferenciaron por patrones de bandas obtenidos por marcadores RAPD. De un total de 12 iniciadores de las series OPB, OPE, OPG, OPO Y OPP, solo 10 de ellos generaron un total de 102 bandas de las cuales 62 bandas fueron polimorficas (Cuadro 3). Entre estos, el iniciador OPB-10 genero el mayor numero de bandas polimorficas (9), seguido por OPE-14, OPO-18, OPE-06, OPG-02, OPG-10, OPG-18 y OPP-06 que formaron entre 7 a 6, asi como el OPG-12 y OPP-17 con 5 y 4 bandas polimorficas, respectivamente. Todas las bandas se mostraron claras, leibles y reproducibles, lo cual permitio detectar las variaciones geneticas entre los microbulbos conservados in vitro.

Estos resultados indican que la cantidad y calidad de los productos de amplificacion fueron suficientes para detectar variaciones geneticas entre los microbulbos de ajo cultivados en cinco tratamientos de conservacion, confirmando investigaciones previas realizadas por Buso et al. (2008), Khar et al. (2008) y Abdoli et al. (2009), donde se reporta a los marcadores RAPD como una herramienta util para detectar variaciones geneticas en diferentes clones o cultivares de ajo.

Con respecto a la reproducibilidad de los RAPD, los resultados fueron similares a los reportados en ajo por Al Zahim et al. (1997) y Paredes et al. (2008), dado que en las investigaciones realizadas por los autores mencionados, los iniciadores de la serie OPB, OPG y OPO amplificaron un promedio de 2 a 20 bandas polimorficas cada uno. Asimismo, de los iniciadores utilizados por Maas y Klass (1995), Choi et al. (2005) y Khar et al. (2008), solo 12 a 15 de estos revelaron bandas polimorficas, lo cual demuestra la optimizacion de esta tecnica durante la investigacion aqui desarrollada.

El dendograma obtenido mediante el coeficiente de distancia de Dice, conformo tres grupos (Figura 1). En el grupo I, se ubico el tratamiento MS con sacarosa ([T.sub.1]) a una distancia de 0,28, siendo el mas alejado de los restantes tratamientos. El grupo II se conformo por los medios 1/2 MS y 1/4 MS ambos con sacarosa ([T.sub.2] y [T.sub.4]) con una distancia de 0,23; mientras que el grupo III incluyo a los microbulbos conservados en 1/2 MS y 1/4 MS sin sacarosa ([T.sub.3] y [T.sub.5]), con una distancia de 0,18. Estos resultados indican que en el medio MS con sacarosa se observo la mayor variacion genetica, equivalente en este caso a mayor inestabilidad genetica, seguido por los medios 1/2 MS y 1/4 MS ambos con sacarosa con una variacion o estabilidad genetica intermedia. Por su parte, en los medios 1/2 MS y 1/4 MS sin sacarosa la menor variacion indica una mayor estabilidad genetica.

Lo anterior refleja que la presencia de sacarosa, mas que la fortaleza del medio fue el factor que mas influyo en la variacion genetica de los microbulbos durante su conservacion in vitro.

[FIGURA 1 OMITIR]

La representacion grafica de las coordenadas principales muestra dos coordenadas (Figura 2). La primera explica el 40,6% de la variacion total del analisis y esta relacionada con la concentracion del medio MS, observandose en orden lineal de izquierda a derecha valores crecientes de MS (1/4, 1/2 y 1). La segunda coordenada explica solo el 27% de la variacion detectada y se relaciona con la presencia de sacarosa, incluyendose en los cuadrantes positivos los medios sin sacarosa y en los negativos en presencia de este carbohidrato. En el cuadrante ++, se concentraron los materiales conservados en 4 MS ([T.sub.3]), en el cuadrante + -, los almacenados en MS con sacarosa ([T.sub.1]), mientras que en los cuadrantes - - y - +, los medios 1/4 MS y 1/2 MS con sacarosa ([T.sub.4] y [T.sub.2]) y 1/4 MS ([T.sub.5]), respectivamente.

En este experimento, los tres tipos de analisis utilizados (cuantitativo, dendograma y coordenadas principales) evidencian que la presencia o ausencia de sacarosa en el medio nutritivo constituye un factor determinante sobre el comportamiento de los microbulbos de ajo. Al respecto, Pardo et al. (2014) sugieren que solo en presencia de este carbohidrato los microbulbos como organos de reserva, pueden realizar una eficiente translocacion de agua y nutrientes hasta la parte aerea, garantizando con ello los procesos fotosinteticos asi como el balance carbohidratosales necesario para el buen funcionamiento de los tejidos. Contrariamente, en ausencia de este carbohidrato, los materiales manifiestan, ademas de bajos promedios para las caracteristicas vegetativas evaluadas, deficiencias fisiologicas manifestadas como poco vigor y colores blanquecinos.

[FIGURA 2 OMITIR]

Es importante destacar que durante el mantenimiento en los bancos de germoplasma y/o durante la conservacion in vitro se debe garantizar la uniformidad o estabilidad genetica de los materiales. En tal sentido, el analisis molecular reflejo que los microbulbos almacenados en los medios 1/2 MS y 1/4 MS, ambos con sacarosa ([T.sub.2] y [T.sub.4]), mostraron ademas de un crecimiento minimo pero progresivo, variacion o estabilidad genetica intermedia. Por lo que ambas condiciones, crecimiento minimo y estabilidad genetica intermedia, permitiran la conservacion de los microbulbos por un periodo de tiempo no mayor a los 210 dias. Contrariamente, en el medio MS con sacarosa ([T.sub.1]), ademas de presentar la mayor variacion genetica, en este caso equivalente a inestabilidad genetica, los microbulbos crecieron y se desarrollaron rapidamente, lo cual no es recomendable para su mantenimiento durante largos periodos de tiempo. Por su parte, los microbulbos almacenados en los medios 1/2 MS y 1/4 MS en ausencia de sacarosa ([T.sub.3] y [T.sub.5]), aun cuando mostraron la minima variacion genetica, a nivel morfologico presentaron poco vigor y bajo porcentaje de sobrevivencia, lo que resulta indeseable para la conservacion bajo condiciones de crecimiento minimo. Cabe destacar que aun cuando el analisis molecular detecto variaciones entre los microbulbos conservados, tales cambios geneticos no se evidenciaron como alteraciones morfologicas o a nivel fenotipico en los materiales evaluados.

Finalmente, los resultados obtenidos soportan investigaciones previas con marcadores RAPD en ajo por Buso et al. (2008), Paredes et al. (2008) y Afrasiab y Iqbal (2012), ya que se demostro que ademas de ser una tecnica rapida, facil y economica, los RAPD son utiles para evaluar la estabilidad genetica durante la micropropagacion, la conservacion o el mantenimiento de recursos fitogeneticos.

Mutagenesis in vitro. Los microbulbos irradiados se diferenciaron por patrones de bandas obtenidos de los marcadores RAPD. De los 12 iniciadores utilizados, solo 9 de ellos generaron un total de 95 bandas de las cuales 71 resultaron polimorficas (Cuadro 4). Dentro de estos, el iniciador OPB-10 genero el mayor numero de bandas polimorficas (15), seguido por OPE-14 con 11 y OPP-06 y OPP-08 con 9 bandas cada uno. Los restantes iniciadores generaron entre 8 y 2 bandas polimorficas.

Con respecto a los iniciadores utilizados y el numero de bandas obtenidas, 7 de estos (OPB-10, OPE-06, OPE-14, OPG-02, OPG-12, OPP-06, OPP-17), amplificaron tanto en microbulbos conservados como irradiados, mostrando en ambos experimentos el efecto de la radiacion gamma asi como de los tratamientos de conservacion utilizados. Tal como lo senalado por Luna

y Ponce (2001), estas variaciones, reflejadas como polimorfismo RAPD, pueden ser atribuidas bien sea a mutaciones puntuales en el ADN tales como sustitucion o insercion de bases, o bien a cambios en la estructura de los cromosomas como delecciones o translocaciones.

El dendograma obtenido mediante el coeficiente de distancia de Dice, conformo dos grupos (Figura 3). El grupo I, incluyo a los microbulbos irradiados con 8 y 10 krad, con una distancia de 0,38 entre ellos, mientras que el grupo II, a los materiales testigos o tratados con 6 krad, a una distancia comun de 0,28. Estos resultados indican que la aplicacion de 8 o 10 krad de radiacion gamma, determino la mayor variacion genetica en los microbulbos, mientras que con 6 krad o en el testigo dicha variacion fue menor.

[FIGURA 3 OMITIR]

El analisis de las coordenadas principales (Figura 4) explica en el CP1 el 46,1% de la variacion y se relaciona con el grado de radiacion que causa variacion. En este caso, la radiacion con 6 krad se asocia con el testigo no irradiado, ubicandose en los valores negativos del eje, mientras que las dosis mayores se ubican del lado positivo del eje. En general todos los tratamientos de mutagenesis, incluyendo al testigo, se ubicaron en planos opuestos del grafico, es decir en los cuadrantes I, II, III y IV, respectivamente.

En este estudio, el analisis molecular (dendograma y coordenadas principales), separo a los tratamientos con 8 y 10 krad de los testigos e irradiados con 6 krad. En efecto, con altas dosis de radiacion, los microbulbos mostraron mayor variacion genetica (distancia 0,38), lo cual pudo ser detectado a nivel molecular por los marcadores RAPD, mientras que con 0 y 6 krad se observaron los menores promedios para ambas variables y la menor distancia genetica (0,28) equivalente en este caso a menor variacion genetica. Lo anteriormente senalado, sugiere que los microbulbos pueden ser irradiados con las dosis mayores si el proposito es inducir cambios, alteraciones o variaciones en el ADN con fines de mejoramiento genetico.

[FIGURA 4 OMITIR]

En relacion a los factores o fuentes para incrementar la variabilidad en clones de ajo, destacan el empleo del medio MS con sacarosa (45 g x [L.sup.-1]) asi como de la aplicacion de radiacion gamma en dosis de 8 y 10 krad, ya que en ambos casos se observo la mayor variacion genetica en los experimentos de conservacion y mutagenesis, respectivamente. Por otra parte, si en ambos experimentos se consideran analogas las distancias obtenidas por el coeficiente de Dice, se observa que la irradiacion de los microbulbos con las dosis antes mencionadas indujo la mayor variacion genetica (0,38), seguido por el uso de MS con 45 g x [L.sup.-1] de sacarosa (0,28). En consecuencia, el empleo de estas dosis de irradiacion y del medio de cultivo senalado pueden propiciar la produccion de mutantes o variantes somaclones, respectivamente.

Los resultados aqui obtenidos demuestran la sensibilidad de los marcadores RAPD para detectar variaciones geneticas entre diferentes materiales de ajo, tal como lo reportado por Buso et al. (2008) y Afrasiab y Iqbal (2012), por lo que dicha tecnica resulta de gran utilidad para la deteccion temprana de mutantes o variantes somaclonales, ya que permite bien sea distinguir variaciones geneticas antes de que los materiales sean llevados al estado adulto o bien antes de que se exprese alguna alteracion a nivel morfologico o fenotipico.

CONCLUSIONES

Durante los experimentos de conservacion, los microbulbos cultivados en los medios % MS y 54 MS, ambos con sacarosa, mostraron estabilidad genetica por un periodo de tiempo de al menos 210 dias.

Los microbulbos irradiados con 8 y 10 krad, presentaron la mayor variacion genetica.

Recibido: Marzo 3, 2015 Aceptado: Septiembre 25, 2015

AGRADECIMIENTO

A Paul Azuaje Pardo. Al CDCHT-UCLA por el financiamiento otorgado. Al personal de los Laboratorios de Cultivo in vitro y Biologia Molecular del Decanato de Agronomia-UCLA

LITERATURA CITADA

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[3.] Alam, M., M. Rahim y P. Simon. 2012. Molecular characterization of garlic germplasms using RAPD. J. Agrofor. Environ. 6(1): 63-66.

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[26.] Williams, J., A. Kubelik, N. Livak, A. Rafanski, A. y S. Tingey. 1990. DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers. Nucl. Acids. Res. 18: 6531-6535.

Adriana Pardo (1), Alexander Hernandez (2), Naileth Mendez (2) y Geine Alvarado (2)

(1) Dpto. de Genetica, Decanato de Agronomia, Universidad Centroccidental "Lisandro Alvarado".

(2) Postgrados de Agronomia, Decanato de Agronomia, Universidad Centroccidental "Lisandro Alvarado".Apdo. 400. Barquisimeto. Venezuela. e-mail: apardo@ucla.edu. ve; ahernandez@ucla.edu. ve; naileth@gmail.com; geinealvarado@gmail.com
Cuadro 1. Identificacion de los microbulbos de
ajo utilizados para el analisis molecular.

Material       Identificacion   Tratamiento

Conservacion     [T.sub.1]      MS + sacarosa
                 [T.sub.2]      1/2 MS + sacarosa
                 [T.sub.3]      1/2 MS
                 [T.sub.4]      1/4 MS de sacarosa
                 [T.sub.5]      1/4 MS
Mutagenesis      [T.sub.1]      0 krad
                 [T.sub.2]      6 krad
                 [T.sub.3]      8 krad
                 [T.sub.4]      10 krad

Cuadro 2. Iniciadores (Operon Technologies)
utilizados para el analisis RAPD en microbulbos
de ajo conservados e irradiados

Iniciador   Secuencia    Iniciador   Secuencia

OPE-06      AAGACCCCTC    OPG-02     GGCACTGAGG
OPE-14      TGCGGCTGAG    OPG-12     CAGCTCACGA
OPP-06      GTGGGCTGAC    OPB-10     CTGCTGGGAC
OPP-08      ACATCGCCCA    OPO-16     TCGGCGGTTC
OPP-17      TGACCCGCCT    OPO-18     CTCGCTATCC
OPG-10      AGGGCCGTCT    OPG-18     GGCTCATGTG

Cuadro 3. Numeros y tipos de alelos detectados
por los iniciadores de RAPD utilizados para la
caracterizacion molecular de los microbulbos
de ajo_

Iniciador   BP   BM   BT    PIC     SD

OPB-10      9    3    12    0,29   0,010
OPE-06      6    3     9    0,32   0,020
OPE-14      7    3    10    0,36   0,003
OPG-02      6    7    13    0,27   0,000
OPG-10      6    6    12    0,35   0,020
OPG-12      5    3     8    0,33   0,020
OPG-18      6    3     9    0,30   0,010
OPO-18      7    2     9    0,32   0,010
OPP-06      6    4    10    0,33   0,020
OPP-17      4    6    10    0,34   0,010
Total       62   40   102

BP= bandas polimorficas, BM= bandas monomorficas,
BT= bandas totales, PIC= contenido de informacion
polimorfica, SD=desviacion estandar.

Cuadro 4. Numeros y tipos de alelos detectados
por los iniciadores de RAPD utilizados para la
caracterizacion molecular de los microbulbos
de ajo

Iniciador   BP   BM   BT   PIC     SD

OPB-10      15   2    17   0,33   0,01
OPE-06      8    6    14   0,34   0,01
OPE-14      11   0    11   0,30   0,00
OPG-02      7    4    11   0,32   0,01
OPG-12      7    3    10   0,32   0,01
OPO-16      2    5    7    0,30   0,01
OPP-06      9    2    11   0,32   0,01
OPP-08      9    1    10   0,34   0,01
OPP-17      3    1    4    0,33   0,02
Total       71   24   95

BP= Bandas polimorficas, BM= Bandas monomorficas,
BT= Bandas totales, PIC= Contenido de informacion
polimorfica, SD=Desviacion estandar.
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Author:Pardo, Adriana; Hernandez, Alexander; Mendez, Naileth; Alvarado, Geine
Publication:BIOAGRO
Date:Dec 1, 2015
Words:4945
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