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Adenosin deaminasa en la tripanosomiasis experimental: futuras implicaciones.

Adenosine deaminase in experimental trypanosomiasis: future implications.

INTRODUCCION

La Adenosin Deaminasa (ADA), es una enzima polimorfica del catabolismo de las purinas que cataliza la desaminacion de adenosina y 2'-deoxyadenosina para producir inosina y 2'-deoxyinosina respectivamente, con liberacion de amonio en el proceso (1). Esta enzima esta ampliamente distribuida en el organismo, con actividad ADA en practicamente todos los tejidos; sin embargo, su mayor actividad se encuentra en las celulas linfoides (mas elevada en las celulas T que en las celulas B) (2).

La enzima se localiza tanto en citoplasma donde mantiene su actividad hidrolasa, como en la superficie de diversas celulas; por lo que es considerada una ecto-enzima y mantiene su funcion incluso despues de unirse a la glicoproteina CD26, la cual involucra la desaminacion de la adenosina extracelular cuando se encuentra en elevados niveles que son toxicos para los linfocitos (3). Por lo tanto, el control de las concentraciones extracelulares de adenosina, ejercido por la interaccion ADA-CD26, puede ser cuantitativamente importante en caso de descenso de la regulacion, inactivacion de los transportadores de nucleosidos o bajo estres metabolico, ademas de proveer un importante mecanismo de balance en condiciones de un elevado recambio en el metabolismo del nucleotido adenina (4).

La ADA es considerada un marcador de inmunidad celular; puesto que su actividad plasmatica y serica se eleva en enfermedades que alteran la respuesta inmune mediada por celulas. El aumento de la actividad serica de la ADA ha sido observado en los trastornos hipertensivos del embarazo, en el infarto agudo del miocardio y en diversas enfermedades infecciosas causadas principalmente por microorganismos con tropismo por los macrofagos (5-8). Adicionalmente, diversos estudios senalan que la actividad de la ADA en el plasma de pacientes con hipoxia cronica, es superior a la que se observa en los individuos sanos (1), lo que indica que la induccion de la actividad ADA es una adaptacion metabolica natural a los elevados niveles de adenosina durante la hipoxia.

La ADA es un barril [alfa]/[beta] de ocho hebras con el sitio activo en un bolsillo en el extremo C-terminal del barril [beta], como en todas las enzimas con estructura de barril [alfa]/[beta] conocidas. Un ion zinc esencial desde el punto de vista de la catalisis esta unido en la parte mas profunda del bolsillo del sitio activo (9).

Las mutaciones que afectan el sitio activo de la ADA destruyen selectivamente los linfocitos, lo que causa el Sindrome de Inmunodeficiencia Combinada Severa (10). Las consideraciones bioquimicas aportan una explicacion plausible de la etiologia de la enfermedad. En ausencia de ADA activa, la desoxiadenosina se fosforila para generar niveles de dATP que resultan cincuenta veces mas altos de lo normal. Esta concentracion elevada de dATP inhibe la ribonucleotido reductasa y evita asi la sintesis de los otros dNTP, lo que suprime la sintesis de ADN y por lo tanto la proliferacion celular.

La actividad de la ADA puede cuantificarse por el metodo descrito por Galanti y Giusti (11), el cual se basa en una modificacion de la reaccion de Berthelot, en la que el amoniaco liberado reacciona con hipoclorito de sodio y fenol en medio alcalino para formar el indofenol, que es un compuesto de color azul, cuya densidad optica se lee a una densidad optica de 628 nm. Como catalizador de la reaccion se utiliza el nitroprusiato de sodio y la reaccion que cataliza la ADA se detiene tras un periodo de incubacion por la adicion de fenol-nitroprusiato. Otro metodo ampliamente utilizado es el propuesto por Blake y Berman. (12), basado en la reaccion del amoniaco con el [alfa]-cetoglutarato y la NADPH para generar glutamato y NADP. Esta reaccion es catalizada por la glutamato deshidrogenasa, midiendo la variacion de absorcion a 340 nm de longitud de onda, debida a la desaparicion de NADPH.

Catabolismo de las purinas.

El metabolismo de todas las moleculas presentes en la celula consiste de un continuo proceso de sintesis y degradacion. En el hombre y otros animales, los nucleotidos de purina se degradan a acido urico y se excretan. Para ello, el AMP se desamina de forma hidrolitica a IMP por la accion de la adenilato aminohidrolasa (AMP desaminasa) y la 5-nucleotidasa convierte el IMP en inosina, con la eliminacion del grupo fosfato (13). En muchos organismos aparece un segundo tipo de aminohidrolasa que actua como catalizador en una ruta alternativa que conduce desde el AMP hasta la inosina. En ellos el AMP se transforma en adenosina por una hidrolisis catalizada por la 5-nucleotidasa. Entonces, la adenosina aminohidrolasa (Adenosin deaminasa) cataliza la hidrolisis de la adenosina para generar inosina con liberacion de amoniaco (14).

Las dos rutas que parten del AMP convergen en la formacion de inosina, esta sufre la eliminacion de un grupo fosforilo por la purina nucleosido fosforilasa, para generar la base purica hipoxantina y liberar ribosa 1 fosfato (13). A continuacion la hipoxantina se oxida formando xantina en una reaccion catalizada por la xantina oxidasa (Fig 1). En este punto es donde convergen las rutas que parten de AMP, GMP y XMP.

[FIGURA 1 OMITIR]

Las rutas que convierten el GMP y el XMP en acido urico comienzan con una reaccion paralela catalizada por la 5-nucleotidasa, que genera guanosina y xantosina respectivamente. En ambas reacciones se libera fosfato inorganico. La guanosina se transforma en xantina en dos etapas, la primera de las cuales que produce guanina es similar a la reaccion que conduce de la xantosina a la xantina en la ruta de XMP. La guanina formada se desamina a xantina por la accion de la guanina aminohidrolasa (guanina desaminasa). El acido urico generado por la accion de la xantina oxidasa es el producto final de la degradacion enzimatica en el hombre y otros primates, en las aves y en los reptiles terrestres. Cerca del 90% de la hipoxantina y de la guanina que se produce en estas rutas catabolicas se reconvierte en nucleotidos de purina por las rutas de recuperacion descritas anteriormente, el resto se transforma en acido urico y se excreta (15).

Al igual que los peroxisomas, los glicosomas tambien poseen enzimas involucradas en el metabolismo de las purinas. No obstante, los parasitos protozoarios no pueden sintetizar de novo el anillo de purina como sucede en las celulas de los mamiferos. Como una consecuencia de la completa dependencia de las purinas del hospedador, los protozoarios estan equipados con diversas rutas de rescate de purinas (16). Para los tripanosomatides las vias de rescate de purinas consiste en una reaccion unica catalizada por la enzima fosforibosiltransferasa (PRT) en la cual las diferentes purinas reaccionan con 5-fosforibosil-1 pirofosfato (PRPP) para generar las correspondientes purinas (Fig 2).

[FIGURA 2 OMITIR]

Las enzimas PRT involucradas en la conversion de adenina, guanina, hipoxantina y xantina han sido descritas en Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi and Leishmania donovani. Han sido reportados datos relacionados con estas enzimas para L. donovani, mientras que han sido caracterizados tres genes diferentes que codifican para las PRT: PRT hipoxantina-guanina (HGPRT), la cual puede utilizar hipoxantina y guanina como sustratos, xantina PRT (XPRT) que convierte la xantina y la hipoxantina en xantilato e inosinato respectivamente y la adenina PRT (APRT) que es especifica para la adenina (17).

Han sido caracterizados los genes HGPRT de T brucei y T cruzi (18,19). HGPRT y XPRT fueron localizados exclusivamente en glicosomas. Todas estas enzimas tienen un motivo C-terminal de direccionamiento a glicosoma con excepcion de la HGPRT de T. brucei y la APRT de L. donovani (20). Adicionalmente, una enzima implicada en la interconversion de los nucleotidos de purina, la IMP deshidrogenasa (IMPDH) la cual reduce el inosinato a xantilato, tambien posee senal de transporte a glicosoma (21).

ADA y colinesterasas en la tripanosomiasis experimental.

Da Silva y col. (22), estudiaron la actividad de las colinesterasas y la ADA en sangre y suero de ratas infectadas con Trypanosoma cruzi y encontraron un incremento significativo de la actividad de Acetilcolinesterasa (AChE) en la sangre de las ratas infectadas a los 60 y 120 dias post-inoculacion (PI). En contraste, los niveles de butirilcolinesterasa (BChE) disminuyeron significativamente en el suero de los animales infectados en el mismo periodo de tiempo. La actividad ADA a los 120 dias, fue menor en los animales infectados en comparacion con los no infectados.

El aumento en la actividad de la AChE en sangre, puede ser debido a la respuesta inflamatoria causada por el parasito tal como esta descrito en la literatura (23). Cuando aumenta la AChE, se produce una rapida degradacion de acetilcolina (ACh), el cual es un neurotransmisor con accion anti-inflamatoria que se une a los receptores nicotinicos expresados en la superficie de muchos tipos celulares, entre ellos los linfocitos (24); inhibe asi la proliferacion de citoquinas, serotonina, histamina, oxido nitrico, enzimas lisosomales, prostaglandinas y leucotrienos, que son mediadores de procesos inflamatorios (25).

La disminucion de la actividad BChE en la infeccion causada por T cruzi podria estar relacionada con lesiones hepaticas, pero la posibilidad de que esta inhibicion puede estar relacionada con procesos inflamatorios no puede ser ignorada, ya que esta enzima puede participar en la regulacion de la respuesta inmune (24). La reduccion de la actividad ADA podria causar un aumento en la concentracion extracelular de adenosina la cual se convierte en inosina.

La reduccion en los niveles de la ADA daria lugar a la interaccion de la adenosina con los receptores de adenosina expresados en muchos tipos de celulas con posibles efectos antiinflamatorios, entre ellos la inhibicion de la respuesta inmune Th1. En la infeccion aguda causada por T. cruzi hay una polarizacion de la respuesta inmune celular hacia el patron Th1, con la produccion de IFN-[gamma] (26). Sin embargo, la inhibicion de esta respuesta por la accion de la union de la adenosina extracelular a los receptores purinergicos podria ser un efecto compensatorio, para atenuar la inflamacion y el dano tisular. Por lo tanto, la accion anti-inflamatoria de la adenosina como una alternativa para conservar las celulas y los tejidos es una hipotesis probable en la infeccion por T. cruzi (26).

La actividad de la ADA ha sido detectada en la superficie de las celulas hematopoyeticas (27). Chottiner y col. (28), describieron que la anemia hemolitica esta asociada a un notable aumento de la actividad de la ADA en eritrocitos pero con niveles normales de la enzima en otras celulas sanguineas, como los linfocitos. Las causas de la anemia causada por T. evansi no son completamente comprendidas (29). En la infeccion por este protozoario, se producen cambios en los leucocitos tales como neutropenia, neutrofilia, monocitosis, linfopenia y/o linfocitosis (30).

Dada las funciones de la ADA en leucocitos y el sistema hematopoyetico, Da Silva y col. (31), llevaron a cabo un estudio que tuvo como objetivo evaluar la actividad de esta enzima en suero, eritrocitos y linfocitos de ratas infectadas con T. evansi. La reduccion del hematocrito y el aumento en el numero de linfocitos se correlacionaron con la actividad ADA en eritrocitos y linfocitos.

Los autores observaron una disminucion de la actividad de dicha enzima en el suero y eritrocitos de las ratas infectadas con T. evansi en comparacion con las ratas no infectadas (P <0,05). Diversos investigadores han senalado que los globulos rojos poseen niveles significativos de la ADA (32), basados en esta informacion los autores infieren que la actividad ADA fue baja en suero y/o plasma como consecuencia de la disminucion de las celulas sanguineas debido a un proceso hemolitico, lo que causa anemia en la tripanosomiasis. Sin embargo, a pesar de la correlacion positiva entre los niveles de hematocrito y la actividad de la ADA en los eritrocitos, son necesarios mas estudios para confirmar el papel de la enzima en la anemia causada por T. evansi en ratas.

La actividad de la ADA puede ser un marcador sensible para determinar la gravedad de las infecciones y para el seguimiento de la evolucion de las mismas. Se ha reportado aumento en los niveles de la ADA en el suero de hospedadores con tuberculosis, teileriosis, malaria y leishmaniasis visceral (33-35). No obstante, ningun estudio ha demostrado una relacion entre la infeccion por T. evansi con la actividad de ADA en el Sistema Nervioso Central. Por esta razon, Da Silva y col. (36), se propusieron determinar si la infeccion por T. evansi induce cambios en la actividad de ADA en tejidos del cerebro de ratas adultas. La actividad de la ADA se estimo en el cerebelo, la corteza cerebral, el cuerpo estriado y el hipocampo, sin embargo; no se observaron diferencias en el cerebelo de los animales infectados y los no infectados (P> 0,05).

En la corteza cerebral y en el hipocampo de ratas en fase aguda de la infeccion se produjo una reduccion significativa en la actividad de la ADA (al 4 dia post-infeccion; PI), en cambio aumento en las ratas en fase cronica (20 dias PI). Los parasitos se detectaron en sangre periferica y cerebro a traves de examen microscopico y PCR respectivamente, en ratas en fase aguda y cronica (36). La reduccion de la actividad de ADA en el cerebro estuvo asociada con altos niveles de parasitemia y anemia en la infeccion aguda. De tal forma que las alteraciones en la actividad de la enzima en cerebro de ratas infectadas con T. evansi podria tener implicaciones para la patogenesis de la enfermedad.

Papel de las nucleotidasas y los nucleotidos de adenina en la infeccion por T. cruzi y T. evansi

El sistema de senalizacion purinergica cumple importantes funciones: regulador en la inflamacion, laactivacion celular, el flujo sanguineo y latrombosis vascular por biomoleculas extracelulares, tales como nucleotidos de adenina (ATP, ADP y AMP) y de adenosina (37). Como una consecuencia de la infeccion, los eritrocitos, leucocitos y las plaquetas secretan altas concentraciones de adenosina al medio extracelular (38). Estos nucleotidos ejercen sus funciones a traves de tres purinoceptores P2 en plaquetas: P2X1 (receptor ionotropico que provoca una rapida entrada de calcio hacia el citosol), P2Y1 (receptor metabotropico que moviliza el calcio desde las cisternas internas) y P2Y12 (receptor acoplado a la proteina Gai que estabiliza la agregacion plaquetaria) (39-41).

Despues de ejercer sus funciones, los nucleotidos son hidrolizados por un sistema multienzimatico con el fin de mantener los niveles extracelulares en concentracion fisiologica y evitar la desensibilizacion de los receptores purinergicos. Estas enzimas se encuentran en la superficie de practicamente todos los tipos de celulas de mamiferos e incluyen ecto-nucleotidasas de diversas familias tales como la E-NTPDasa, la E-NPP y la E-5'-NT Las ectonucleotidasas son responsables de la hidrolisis de ATP, ADP, AMP y la formacion de la adenosina (42). El nucleosido adenosina inhibe la agregacion de plaquetas y actua como un vasodilatador potente, que ejerce una funcion protectora en el corazon por disminucion de las demandas metabolicas del miocardio y por aumento del flujo sanguineo coronario (43). Sus efectos antiagregantes son mediados a traves de receptores de adenosina acoplados a proteina G (purinoceptores P1), especificamente los subtipos de receptores A2A y A2B (44,45). Goncalves Souza y col. (46), reportaron un incremento del 21% en la actividad E-NPP y del 30% en la actividad E-5'-NT en pacientes chagasicos (P <0,05), sin embargo; una disminucion del 34% en la actividad de E-ADA se determino en el mismo grupo (P <0,001). Adicionalmente, una disminucion significativa en la agregacion de plaquetas a dos concentraciones diferentes de ADP (5 y 10 [micron]M) fue detectada (P <0,05). El incremento en las actividades E-NPP y E-5'-NT asi como la disminucion de la actividad E-ADA en plaquetas de los pacientes chagasicos contribuyeron a disminuir la agregacion plaquetaria, lo que sugiere que el sistema purinergico esta involucrado en el proceso de regulacion de trombos en estos pacientes, ya que la adenosina (el producto final de la hidrolisis de ATP) tiene efectos cardioprotectores y vasodilatadores que impiden el progreso clinico de la enfermedad.

Da Silva y col. (47), llevaron a cabo un estudio con el objetivo de evaluar la concentracion de adenosina y nucleotidos de adenina en el suero y la corteza cerebral de ratas infectadas con T. evansi. A los 4 y 20 dias post-infeccion (PI) se tomaron muestras de sangre y corteza cerebral para medir los niveles de ATP, ADP, AMP y adenosina por cromatografia liquida de alta resolucion (HPLC). En el suero se detecto un aumento significativo en las concentraciones de ATP, AMP y adenosina a los 4 y 20 dias PI. Adicionalmente, en la corteza cerebral se observo un aumento significativo en las concentraciones de ATP, AMP y disminucion de los niveles de adenosina al 4 dia PI. Al dia 20 PI solo se observo un aumento en las concentraciones de adenosina y AMP en la corteza cerebral de las ratas infectadas. No se observo ninguna diferencia entre la concentracion de ADP en el suero y el cerebro a los 4 y 20 dias PI. Tampoco se evidenciaron cambios histologicos en la corteza cerebral de los animales infectados. Dichos resultados permiten sugerir que la infeccion con T. evansi en ratas provoca un aumento en las concentraciones de ATP, AMP y de adenosina en el suero y la corteza cerebral en los periodos de tiempo evaluados. Estas alteraciones se produjeron como resultado de la infeccion por T. evansi e implican el deterioro de la neurotransmision, la neuromodulacion y de la respuesta inmune confirmando asi la importancia del sistema purinergico en esta patologia.

Las enzimas que degradan nucleotidos y nucleosidos: la NTPDasa, la 5-nucleotidasa y la adenosin deaminasa (ADA) estan presentes en la superficie de la membrana de las plaquetas las cuales participan en los trastornos de coagulacion de animales infectados con T. evansi. Oliveira y col. (48), evaluaron las actividades de estas enzimas en las plaquetas de ratas infectadas experimentalmente con el parasito. Para ello, los animales se dividieron en cuatro grupos, de acuerdo con el nivel de parasitemia: (grupo A: comienzo de la parasitemia), (grupo B: alta parasitemia) y (grupo C: infeccion cronica), las muestras de sangre fueron tomadas a los 3, 5 y 15 dias PI respectivamente. El Grupo D (control) estuvo conformado por animales no infectados. En todos se realizaron recuento de plaquetas y los ensayos enzimaticos.

Los animales de los grupos A y B mostraron una marcada trombocitopenia, pero el recuento de plaquetas no se vio afectado en los animales en fase cronica. Las actividades de la NTPDasa, 5-Nucleotidasa y la ADA disminuyeron en las plaquetas de las ratas de los grupos A y B, en comparacion con el grupo de control (p <0,05). En el grupo C, solo la actividad de NTPDasa y de 5-nucleotidasa disminuyo (p <0,001). Las correlaciones entre el recuento de plaquetas y la hidrolisis de nucleotidos/nucleosidos fueron positivas y estadisticamente significativas en los grupos A y B (p <0,05). La agregacion de plaquetas se redujo en todos los grupos infectados, en comparacion con el grupo control (p <0,05). Las alteraciones observadas en la actividad de las enzimas antes mencionadas en los animales infectados con T. evansi pudiesen estar relacionadas con la trombocitopenia la cual genera una menor liberacion de ATP y ADP. Otra posibilidad es que se produzcan cambios en las membranas de estas celulas lo que pudiese llevar a la disminucion en la expresion de estas enzimas en la superficie celular.

Expresion de ADA en T. evansi y uso de inhibidores de la enzima en el tratamiento de la tripanosomiasis.

Las investigaciones para determinar la expresion de ADA en tripanosomatides y el uso de inhibidores de dicha enzima estan en su etapa inicial. Da Silva y col. (49), es el primer grupo de investigacion que ha realizado un estudio bioquimico con la finalidad de detectar la ADA en T. evansi y adaptar un ensayo para la medicion de su actividad en tripomastigotes. Para ello, los parasitos se separaron de la sangre de ratones infectados con una columna de DEAE-celulosa. La actividad ADA en tripomastigotes se evaluo a concentraciones de 0,1, 0,2, 0,5, 0,6 y 0,8 mg de proteina por espectrofotometria y se detecto en todas las concentraciones ensayadas. Por lo tanto, la enzima ADA se expresa en T. evansi y es posible detectarla por metodos bioquimicos. Dicha enzima podria estar asociada a las funciones vitales del parasito, similar a lo que ocurre en los mamiferos.

Rottemberg y col. (50), demostraron que la inyeccion intraperitoneal de cordicepina, un analogo de adenosina (3-desoxiadenosina) junto con el inhibidor de ADA (coformicina o desoxicoformicina) cura la infeccion por T. brucei brucei en ratones. El tratamiento tambien fue efectivo en la etapa en la que los tripanosomas habian penetrado en el parenquima cerebral, segun lo evidenciado por el inmunomarcaje de parasitos y celulas endoteliales de los vasos cerebrales. En esta etapa, no solo se eliminaron los parasitos, sino que tambien se observo una reduccion en el numero de celulas inflamatorias CD45+. La incubacion in vitro con cordicepina redujo el crecimiento de T. brucei brucei y T. cruzi, asi como de L. major y L. amazonensis. Adicionalmente, la administracion de cordicepina junto con deoxicoformicina a ratones infectados con T. cruzi redujo significativamente la parasitemia. En consecuencia, se propone la utilizacion de analogos de nucleosidos resistentes a la ADA como candidatos para el tratamiento de la fase tardia de la Tripanosomiasis Africana Humana (HAT).

Dalla-Rosa y col. (51), evaluaron el efecto de la 3-desoxiadenosina y la desoxicoformicina en los parametros hematologicos y la actividad de la ADA en plasma y cerebro de ratones infectados con T. evansi. Para ello los autores trabajaron con siete grupos de animales: control sano (A), tratados con 3-desoxiadenosina (B), tratados con desoxicoformicina (C), infectados (D), infectados y tratados con 3-desoxiadenosina (E), infectados y tratados con desoxicoformicina (F), infectados y tratados con una combinacion de 3-desoxiadenosina y desoxicoformicina (G). Los animales de los grupos B y C no mostraron variacion en los valores de hematocrito, eritrocitos totales, hemoglobina y leucocitos totales cuando fueron comparados con el grupo A. Adicionalmente, en el grupo D y F se detecto una disminucion en los valores de hematocrito, eritrocitos totales y la concentracion de hemoglobina al 8 dia PI. El numero de leucocitos totales se incremento de manera significativa en los animales del grupo D al 4 y 8 dia PI, en comparacion con los otros grupos, con excepcion de los grupos E y F en los cuales hubo un aumento similar de leucocitos al dia 8 PI.

Con respecto a la actividad de la ADA, los animales del grupo B (tratados con 3-desoxiadenosina) no mostraron variaciones significativas en los niveles de la enzima en plasma y cerebro cuando fueron comparados con el grupo A. El tratamiento con desoxicoformicina en los animales del grupo C redujo de forma significativa la actividad ADA en plasma y cerebro entre los dias 4 y 8 PI. En los animales infectados con T. evansi (D) hubo una reduccion en la actividad de la ADA en plasma solo al dia 8 PI, mientras que los animales del grupo E (infectados y tratados con 3-desoxiadenosina) tuvieron un aumento. En los grupos F y G la actividad ADA en plasma y cerebro se redujo significativamente al ser comparados con el control negativo.

Los inhibidores de la ADA disponibles en la industria farmaceutica presentan un numero de inconvenientes para su uso clinico, tales como problemas en su farmacocinetica, alto costo y/o efectos toxicos graves (51). La desoxicoformicina por su parte, promueve la acumulacion intracelular de los nucleotidos de adenina y desoxiadenosina, bloquea la sintesis de ADN mediante la inhibicion de la ribonucleotido reductasa, mientras que la desoxiadenosina inactiva a la S-adenosil homocisteina hidrolasa y promueve la acumulacion de S-adenosil cisteina la cual es toxica para los linfocitos (52).

Los autores del trabajo mencionado anteriormente (52), indicaron que los resultados eran preocupantes porque a pesar de que el protocolo terapeutico es eficaz en el control de la tripanosomiasis causa interferencia en el sistema purinergico. Debido a que ADA y adenosina participan en la respuesta inmune, el sistema inmune puede verse afectado por el tratamiento empleado. Por lo tanto, deben llevarse a cabo mas estudios antes de recomendar dicho tratamiento para la tripanosomiasis.

CONCLUSIONES

Es evidente que las investigaciones bioquimicas y moleculares en tripanosomatides se han incrementado en los ultimos anos. Algunas tienen el proposito de identificar las proteinas clave que podrian ser utilizadas en la terapia contra estos parasitos. Es por esta razon que es de gran importancia llevar a cabo otros estudios mas complejos, entre ellos la clonacion, secuenciacion y expresion de la enzima recombinante para analizar sus propiedades cineticas (Km y Vmax) y compararlas con las de la enzima natural. Estos hallazgos podrian contribuir a una comprension de las diferencias o semejanzas entre la ADA de tripanosomatides y la de humanos para no generar danos colaterales y asi evaluar si puede ser propuesta como un blanco quimioterapeutico.

Mary Carmen Perez-Aguilar y Rocio Rondon-Mercado.

Laboratorio de Enzimologia de Parasitos (LEP). Facultad de Ciencias, Universidad de los Andes. Merida-Venezuela.

Autor de Correspondencia: Mary Carmen Perez-Aguilar, Edificio A La Hechicera, Laboratorio de Enzimologia de Parasitos (LEP), Departamento de Biologia. Facultad de Ciencias, Universidad de los Andes. Merida, 5101, Venezuela. Telef. 02742401302. Fax: 0274-2401286. Correo electronico: m.perez@ula.ve

Recibido: 02-06-2014 Aceptado: 27-11-2014

REFERENCIAS

(1.) Eltzschig HK. Adenosine: an old drug newly discovered. Anesthesiology 2009; 111:904915.

(2.) Cristalli G, Costanzi S, Lambertucci C, Lupidi G, Vittori S, Volpini R. Adenosine deaminase: functional implications and different classes of inhibitors. Med Res Rev 2001; 21:105-128.

(3.) Cordero OJ, Salgado FJ, Fernandez-Alonso CM, Herrera C, Lluis C, Franco R, Nogueira M. Cytokines regulate membrane adenosine deaminase on human activated lymphocytes. J Leukoc Biol 2001; 70:920-930.

(4.) Perez-Aguilar MC, Goncalves L, Ibarra A, Bonfante-Cabarcas R. Adenosin deaminasa como molecula coestimuladora y marcador de inmunidad celular. Invest Clin 2010; 51:561571.

(5.) Vilchez D, Perez-Aguilar MC, Saba S, Bonfante-Cabarcas R. Los niveles sericos de adenosin deaminasa y acido urico se correlacionan en pacientes gestantes con trastornos hipertensivos. Rev Chil Obstet Ginecol 2009; 74:217-224.

(6.) Torrellas Y, Perez-Aguilar MC, Ramos B, Franco-Useche A, Ibarra A, Rodriguez-Bonfante C, Bonfante-Cabarcas R. Increased adenosine deaminase serum activity in patients with acute myocardial infarction. Rev Latinoam Hipertens 2010; 5:38-42.

(7.) Khambu B, Mehta KD, Rijal S, Lamsal M, Majhi S, Baral N. Serum nitrite level and adenosine deaminase activity is altered in visceral leishmaniasis. Nepal Med Coll J 2007; 9:40-43.

(8.) Jadhav AA, Jain A. Sputum adenosine deaminase and alkaline phosphatase activity in pulmonary tuberculosis. Arch Physiol Biochem 2012; 118:6-9.

(9.) Hitchcock DS, Fan H, Kim J, Vetting M, Hillerich B, Seidel RD, Almo SC, Shoichet BK, Sali A, Raushel FM. Structure-guided discovery of new deaminase enzymes. J Am Chem Soc 2013; 135:13927-13933.

(10.) Perez-Aguilar MC, Goncalves L, Rafael Bonfante-Cabarcas. Adenosin deaminasa en el sindrome de inmunodeficiencia combinada severa. Invest Clin 2012; 53:315-324.

(11.) Galanti B, Giusti G. Direct colorimetric method for the determination of adenosine deaminase and 5-AMP deaminase in the blood. Boll Soc Ital Biol Sper 1966; 15:1316-1320.

(12.) Blake J, Berman P. The use of adenosine deaminase assays in the diagnosis of tuberculosis. S Afr Med J 1982; 3:19-21.

(13.) Contreras J. Errores innatos del metabolismo de las purinas y otras enfermedades relacionadas. Rev Cubana Pediatr 2012; 84:197-200.

(14.) Di Virgilio F. Purines, purinergic receptors and cancer. Cancer Research 2012; 72:1-7.

(15.) Chaudhary K, Malhotra K, Sowers J, Aroor A. Uric acid: key ingredient in the recipe for cardiorenal metabolic syndrome. Cardiorenal Med 2013; 3:208-220.

(16.) Michels PA, Hannaert V, Bringaud F. Metabolic aspects of glycosomes in trypanosomatidae: New Data and Views. Parasitol Today 2000; 11:482-489.

(17.) Boitz JM, Ullman B. Amplification of adenine phosphoribosyltransferase suppresses the conditionally lethal growth and virulence phenotype of Leishmania donovani mutants lacking both hypoxanthine-guanine and xanthine phosphoribosyltransferases. J Biol Chem 2010; 285:18555-18564.

(18.) Allen T, Ullman B. Cloning and expression of the hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase gene from Trypanosoma brucei. Nucleic Acids Res 1993; 21:5431-5438.

(19.) Soeiro MN, de Castro SL. Trypanosoma cruzi targets for new chemotherapeutic approaches. Expert Opin Ther Targets 2009; 13:105-121.

(20.) Zarella-Boitz JM, Rager N, Jardim A, Ullman B. Subcellular localization of adenine and xanthine phosphoribosyltransferases in Leishmania donovani. Mol Biochem Parasitol 2004; 134:43-51.

(21.) Dobie F, Berg A, Boitz JM, Jardim A. Kinetic characterization of inosine monophosphate dehydrogenase of Leishmania donovani. Mol Biochem Parasitol 2007; 152:11-21.

(22.) Da Silva AS, Pimentel VC, Fiorenza AM, Franca RT, Tonin AA, Jaques JA, Leal CA, Da Silva CB, Morsch V, Schetinger MR, Lopes ST, Monteiro SG. Activity of cholinesterases and adenosine deaminase in blood and serum of rats experimentally infected with Trypanosoma cruzi. Ann Trop Med Parasitol 2011a; 105: 385-391.

(23.) Michailowsky V, Silva NM, Rocha CD, Vieira LQ, Lannes-Vieira J, Gazzinelli RT. Pivotal role of interleukin-12 and interferon-g axis in controlling tissue parasitism and inflammation in the heart and central nervous system during Trypanosoma cruzi infection. Am J Pathol 2001; 159:1723-1733.

(24.) Das UN. Acetylcholinesterase and butyrylcholinesterase as possible markers of low-grade systemic inflammation. Med Sci Monit 2007; 13:214-221.

(25.) Nizri E, Hamra-Amitay Y, Sicsic C, Lavon I, Brenner T. Anti-inflammatory properties of cholinergic up-regulation: a new role for acetylcholinesterase inhibitors. Neuropharmacology 2006; 50:540-547.

(26.) Kumar S, Tarleton RL. Antigen-specific Th1 but not Th2 cells provide protection from lethal Trypanosoma cruzi infection in mice. J Immunol 2001; 166:4596-4603.

(27.) Zavialov AV, Gracia E, Glaichenhaus N, Franco R, Zavialov AV, Lauvau G. Human adenosine deaminase 2 induces differentiation of monocytes into macrophages and stimulates proliferation of T helper cells and macrophages. J Leukoc Biol 2010; 88:279-290.

(28.) Chottiner EG, Ginsburg D, Tartaglia AP, Mitchell BS. Erythrocyte adenosine deaminase overproduction in hereditary hemolytic anemia. Blood 1989; 74:448-453.

(29.) Aquino LP, Machado RZ, Alessi AC, Marques LC, Castro MB, Malheiros EB. Aspectos hematologicos, bioquimicos e anatomopatologicos da infecgao de Trypanosoma evansi em caes. Arq Bras Med Vet Zootec 2002; 54:8-18.

(30.) Wolkmer P, Da Silva AS, Carnelutti JF, Paim FC, Traesel C, Lopes STA, Monteiro SG. Lipid peroxidation associated with anemia in rats experimentally infected with Trypanosoma evansi. Vet Parasitol 2009; 165:41-46.

(31.) Da Silva AS, Belle LP, Bitencourt PE, Souza VCG, Costa MM, Oliveira CB, Jaques JA, Leal DB, Moretto MB, Mazzanti CM, Lopes ST, Monteiro SG. Activity of the enzyme adenosine deaminase in serum, erythrocytes and lymphocytes of rats infected with Trypanosoma evansi. Parasitology 2011b; 138:201-208.

(32.) Conlon BA, Law WR. Macrophages are a source of extracellular adenosine deaminase-2 during inflammatory responses. Clin Exp Immunol 2004; 138:14-20.

(33.) Melo FAF, Afiune JB, Santos ML, Castelo-Filho A. Diagnostico da tuberculose pleural pela ADA, isolada ou combinada a outras variaveis, inclusive em HIV-positivos. Folha Med 2000; 119:9-21.

(34.) Khambu B, Mehta KD, Rijal S, Lamsal M, Majhi S, Baral N. Serum nitrite level and adenosine deaminase activity is altered in visceral Leishmaniasis. Nepal Medi Coll J 2007; 9:40-43.

(35.) Altug N, Yuksek N, Agaoglu ZT, Keles L Determination of adenosine deaminase activity in cattle naturally infected with Theileria annulata. Trop Anim Health Prod 2008; 40:449-456.

(36.) Da Silva AS, Belle LP, Bitencourt PER, Garcia-Perez HAC, Thome GR, Costa MM, Oliveira CB, Teixeira MMG, Moretto MB, Mazzanti CM, Lopes STA, Monteiro SG. Trypanosoma evansi: Adenosine deaminase activity in the brain of infected rats. Exp Parasitol 2011; 127:173-177.

(37.) Fietto JLC, DeMarco R, Nascimento IP, Castro IM, Carvalho TMU, Souza W,Almeida SV. Characterization and immunolocalization of an NTP diphosphohydrolase of Trypanosoma cruzi. Biochem Biophys Res Commun 2004; 316: 454-460.

(38.) Atkinson B, Dwyer K, Enjyoji K, Robson SC. Ectonucleotidases of the cd-39/ntpdase family modulated platelet activation on thrombous formation: potential as therapeutic targets. Blood Cells Mol Dis 2006; 36:217-222.

(39.) Fung CY, Jones S, Ntrakwah A, Naseem KM, Farndale RW, Mahaut-Smith MP. Platelet Ca (2+) responses coupled to glycoprotein VI and Toll-like receptors persist in the presence of endothelial-derived inhibitors: roles for secondary activation of P2X1 receptors and release from intracellular Ca(2+) stores. Blood 2012; 119:3613-3621.

(40.) Kalwa H, Sartoretto JL, Martinelli R, Romero N, Steinhorn BS, Tao M, Ozaki CK, Carman CV, Michel T. Central role for hydrogen peroxide in P2Y1 ADP receptor-mediated cellular responses in vascular endothelium. Proc Natl Acad Sci USA 2014; 111:3383-3388.

(41.) Hollopeter G, Jantzen HM, Vincent D, Li G, England L, Ramakrishnan V, Yang RB, Nurden P, Nurden A, Julius D, Conley PB. Identification of the platelet ADP receptor targeted by antithrombotic drugs. Nature 2001; 409:202-207.

(42.) Zimmermann H. Extracellular metabolism of ATP and other nucleotides. Naunyn Schmiedeberg Arch Pharmacol 2000; 362:299309.

(43.) Ralevic V, Burnstock G. Involvement of purinergic signaling in cardiovascular diseases. Drug News Perspect 2003; 16:133-140.

(44.) Yang D, Chen H, KoupenovaM, Carroll SH, Eliades A, Freedman JE, Toselli P, Ravid K. A new role for the A2b adenosine receptor in regulating platelet function. J Thromb Haemost 2010; 8:817-827.

(45.) Johnston-Cox HA, Yang D, Ravid K. Physiological implications of adenosine receptor-mediated platelet aggregation. J Cell Physiol 2011; 226:46-51.

(46.) Gonsalves Souza VC, Schlemmer KB, Noal CB, Jaques JAS, Bagatini MD, Pimentel VC, Carli LFD, Leal CAM, Fleck J, Moretto MB, Schetinger MRC, Leal DBR. Purinergic system ecto-enzymes participate in the thromboregulation of patients with indeterminate form of Chagas disease. Purinergic Signal 2012; 8:753-762.

(47.) Da Silva AS, Oliveira CB, Rosa LD, Leal CA, Da Cruz RC, Thome GR, Athayde ML, Schetinger MRC, Monteiro SG, Lopes STA. Influence of Trypanosoma evansi in adenine nucleotides and nucleoside concentration in serum and cerebral cortex of infected rats. Exp Parasitol 2012; 131:80-84.

(48.) Oliveira CB, Da Silva AS, Vargas LB, Bitencourt PER, Souza VCG, Costa MM, Leala CAM, Moretto MB, Leal DBR, Lopes STA, Monteiro SG. Activities of adenine nucleotide and nucleoside degradation enzymes in platelets of rats infected by Trypanosoma evansi. Vet Parasitol 2011; 178:9-14.

(49.) Da Silva AS, Pimentel VC, Jaques JAS, Wolkmer P, Tavares KCS, Lazzarotto CR, Miletti LC, Schetinger MRC, Mazzanti CM, Lopes STA, Monteiro SG. Biochemical detection of adenosine deaminase in Trypanosoma evansi. Exp Parasitol 2011d; 128:298-300.

(50.) Rottenberg ME, Masocha W, Ferella M, Petitto-Assis F, Goto H, Kristensson K, McCaffrey R, Wigzell H. Treatment of african trypanosomiasis with cordycepin and adenosine deaminase inhibitors in a mouse model. J Infect Dis 2005; 192:1658-1665.

(51.) Dalla-Rosa L, Da Silva AS, Ruchel JB, Gressler LT, Oliveira CB, Franca RT, Lopes ST, Leal DB, Monteiro SG. Influence of treatment with 3'-deoxyadenosine associated deoxy -coformycin on hematological parameters and activity of adenosine deaminase in infected mice with Trypanosoma evansi. Exp Parasitol 2013; 135:357-362.

(52.) Zimmermann SC, Sadler JM, O'Daniel PI, Kim NT, Seley-Radtke KL. Reverse carboxyclic fleximers: synthesis of a new class of adenosine deaminase inhibitors. Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids 2013; 32:137-154.
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Author:Perez-Aguilar, Mary Carmen; Rondon-Mercado, Rocio
Publication:Investigacion Clinica
Date:Sep 1, 2015
Words:6146
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