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Actividad contra Trypanosoma cruzi (Kinetoplastida: Trypanosomatidae) de extractos metanolicos de plantas de uso medicinal en Mexico.

Activity against Trypanosoma cruzi (Kinetoplastida: Trypanosomatidae) of methanolic extracts of medicinal use plants in Mexico.

La tripanosomiasis americana es una enfermedad potencialmente mortal causada por el protozoario Trypanosoma cruzi (Chagas, 1909). Las zonas endemicas abarcan 21 paises de America Latina, donde el parasito se transmite principalmente por via vectorial (Calvo, 2015). La enfermedad presenta dos fases; el inicio de la infeccion es la fase aguda, y permanece hasta dos meses con parasitemia, fiebre y malestar. La etapa cronica, que se desarrolla despues de algunos anos en el 25-35% de las personas infectadas, se caracteriza por no presentar parasitemia; en esta fase, los parasitos se alojan y reproducen en nidos de amastigotes de organos y sistema nervioso periferico, de los cuales un 30% desarrolla desordenes cardiacos y un 10%, trastornos nerviosos y digestivos como el megacolon o megaesofago (Martino, 2012). Actualmente, los movimientos migratorios la han diseminado desde las regiones endemicas hasta Canada y varios paises europeos (Slot, Hogema, Molier, Bart, & Zaaijer, 2016), en los cuales la WHO (2015) ha calculado entre seis y siete millones de personas infectadas.

Los dos unicos medicamentos tradicionales para tratar la enfermedad son el benznidazol y nifurtimox, ambos eficaces si se administran en la etapa aguda, pero su eficacia disminuye si se administra en la fase cronica. En la fase aguda de la enfermedad de Chagas se establecen cifras serologicas de curacion cercanas al 100% (Fabbro et al., 2013), pero en la fase cronica se ha estimado que tan solo 5.9% de los pacientes que reciben tratamiento alcanzan a curarse (Matta, Gutierrez, Nascimiento, DoValle, & Silva, 2012). Las reacciones adversas frecuentemente son causa de suspension del tratamiento, pueden presentarse hasta en el 40% de los pacientes tratados con benznidazol y el 61% de los tratados con nifurtimox (Carrilero, Murcia, Martinez-Lage, & Segovia, 2011; Murcia, Carrilero, Vinas, & Segovia, 2012). El costo del medicamento es elevado para los gobiernos de los paises en vias de desarrollo o con economia insuficiente en programas de salud, por ejemplo, en Colombia el costo anual se ha estimado en alrededor de 267 millones de dolares (WHO, 2015). Otra desventaja de los tratamientos tradicionales es la diferente susceptibilidad que han desarrollado los parasitos a estos compuestos, debido a la regulacion de la expresion del gen de la adenina fosforibosiltransferasa (APRT), de la enzima lipoamido deshidrogenasa y de la tryparedoxina peroxidasa en cepas naturalmente resistentes (dos Santos et al., 2016; Kohatsu et al., 2016; Garcia-Huertas, Mejia-Jaramillo, Gonzalez, & Triana-Chavez, 2017) por lo cual, la parasitemia no puede ser eliminada; ademas, la respuesta terapeutica varia en funcion del area geografica, debido al linaje de las cepas de T. cruzi infectantes, dado que se ha descrito diferente susceptibilidad de algunas cepas de T. cruzi al tratamiento con benznidazol, por lo que la busqueda de nuevos tratamientos tiene una alta prioridad (Villarreal, Barnabe, Sereno, & Tibayrenc, 2004; Mejia-Jaramillo, Fernandez, Montilla, Nicholls, & Triana-Chavez, 2012).

La fitoterapia representa la forma mas antigua de los tratamientos terapeuticos en el ambito mundial, en particular, las plantas son comunmente usadas por la poblacion mexicana para tratar infecciones bacterianas, micoticas y parasitarias. Por este motivo, nuestro grupo de investigadores reporto recientemente los resultados de extractos metanolicos de plantas de uso medicinal tradicional contra la cepa CL Brener de T. cruzi (Molina-Garza, Bazaldua-Rodriguez, Quintanilla-Licea, & Galaviz-Silva, 2014), los cuales fueron obtenidos de Artemisia mexicana (syn. Artemisia ludoviciana var. mexicana Willd ex Spreng 1945) (Asteraceae) y Cymbopogon citratus (Stapf, 1906) (Andropogonodae), las cuales se usan contra el dolor de estomago, infecciones gastrointestinales y parasitos (Navarro, Villarreal, Rojas, & Lozoya, 1996), Castela texana (Torr & Gray, 1909) Rose (syn. C. tortuosa Liebm, 1853) (Simaroubaceae) en la disenteria amebiana (Monzote, Alarcon, & Setzer, 2012), Lippia graveolens (Kunth, 1818) (Verbenaceae) en los casos de desordenes gastrointestinales y giardiasis (Monzote et al., 2012); Persea americana (Mill, 1768) (Lauracea), la cual se usa como tratamiento de infecciones micoticas (Wang et al., 2004) y como nematicida (Dang et al., 2010) Ruta chalepensis (Linnaeus, 1767) (Rutaceae), que se considera un buen antihelmintico y espasmolitico (Gunaydin & Savci, 2005), Eryngium heterophyllum (Engelm, 1848) (Apiaceae), como tratamiento para diarrea, dolor de estomago fiebre y colelitiasis (Camou-Guerrero, Reyes-Garcia, Martinez-Ramos, & Casas, 2008), Haematoxylum brasiletto (Karst, 1862) (Fabaceae) para tratar infecciones bacterianas (Rosas-Pinon et al., 2012), Marrubium vulgare (Linnaeus, 1753) (Lamiaceae), usado como hipotensivo (Bardai, Lyoussi, Wibo, & Morel, 2001) y Schinus molle (Linnaeus, 1753) (Anacardiaceae) que es un tratamiento antiespasmodico e hipotensivo (Yueqin et al., 2003). En el estudio previo, Molina-Garza et al. (2014), concluyen que los extractos de las ultimas cuatro plantas exhibieron la mayor actividad e inhibieron el crecimiento entre el 88 y 100%; incluso, cabe mencionar que se ha experimentado con un amplio espectro de productos naturales contra T. cruzi, pero muy pocos han sido utiles a una concentracion inhibitoria recomendada del 50% (C[I.sup.50]) de 10 [micro]g/mL, en referencia a la CI50 para nifurtimox y para benidazol, la cual debe ser menor a los 3 [micro]g/mL (Werner & Zulantay, 2011), por lo cual fueron seleccionados para continuar con este proyecto.

El presente estudio, como continuacion del anterior, tuvo como objetivos: 1- determinar la eficiencia de los extractos de las cuatro plantas seleccionadas contra una cepa geograficamente diferente de T. cruzi para el uso terapeutico en la region, aislado de vectores triatominos provenientes del estado de Nuevo Leon, Mexico, debido a la alta variabilidad genetica de las cepas de T. cruzi, y 2- identificar los compuestos activos que presenten la mayor inhibicion del T. cruzi in vitro.

MATERIALES Y METODOS

Material vegetal: Se recolectaron 15 ejemplares de H. brasiletto, C. citratus, M. vulgare y S. molle de tres diferentes viveros del area metropolitana del estado de Nuevo Leon, Mexico (25[grados]40'17" N & 100[grados]18'0" W), a una altitud promedio de 500 msnm de mayo a junio del 2014, a finales de primavera y parte del verano y con una temperatura anual que oscila entre los 20[grados]C con precipitaciones de 650 mm, con un clima que se considera semiarido calido (INEGI, 2015). En este periodo, las plantas se encuentran en su mejor estado fisiologico y reproductivo, por ser temporada de lluvias y tener los fotoperiodos mas largos del ano. Los ejemplares frescos recolectados se colocaron en bolsas de plastico con hielo para transportarlos; la identificacion se realizo en el Departamento de Botanica de la Facultad de Ciencias Biologicas de la UANL donde se depositaron los boucher con el registro de H. brasiletto (NL-0548), C. citratus (NL-5542), M. vulgare (NL-5555) y S. molle (NL-5567).

Preparacion de los extractos: Se descartaron las plantas que tuvieran signos de infeccion o enfermedad, despues se lavo con agua bidestilada esteril para eliminar las impurezas superficiales al chorro de agua; posteriormente, se procedio a secarlo a una temperatura de 30 [grados]C por 24 h en una estufa (Cole Parmer, Inc.), una vez seco, se pulverizo con un molino Wiley, hasta obtener polvo fino. Se utilizaron diversas porciones de los ejemplares, como la parte aerea, tallos y hojas (Molina-Garza et al., 2014). Se pesaron 50 g del material vegetal molido y se deposito en un cartucho de celulosa (Cartucho Whatman 33 x 80 mm) para la extraccion con el aparato Soxhlet con 250 mL de metanol absoluto (J. T. Baker) como solvente de extraccion, se coloco a reflujo a 60 [grados]C por 40 h. Posteriormente, se filtro el extracto con papel Whatman No. 1 y se concentro con el rotavapor Buchi R-205. Se analizo el rendimiento de cada planta previo a realizar las pruebas contra el parasito (g de extracto/100 g de planta) (Quintanilla-Licea et al., 2012).

Parasitos: La actividad de los extractos fue evaluada en los epimastigotes de la cepa de T. cruzi obtenida a partir de las heces de Triatoma gerstaeckeri de la localidad de Cerralvo, Nuevo Leon (por la primera autora, KCPT), la cepa se cultivo en nuestro laboratorio en medio LIT (Liver infusion tryptose) con suero fetal bovino al 10%, para incubarse a 28[grados]C y ser cosechada en la fase de crecimiento exponencial (Molina-Garza et al., 2014).

Evaluacion de la actividad tripanosomicida de los extractos: Se realizo una solucion de cada extracto metanolico de 15 mg disueltos en dimetil sulfoxido 1% (DMSO) e incubados por 24 h. Los bioensayos se realizaron por duplicado; para cada extracto se tomo como unidad experimental una microplaca de 96 pozos, donde se depositaron 200 [micro]L de la suspension del medio LIT con 1.5 x [10.sup.6] parasitos/mL, en cada pozo se agrego cada una de las cinco diferentes concentraciones del extracto con tres replicas de cada uno de los tratamientos (1 000 [micro]g/mL, 750 [micro]g/mL, 500 [micro]g/mL, 250 [micro]g/mL y 100 [micro]g/mL); simultaneamente, se colocaron el control positivo y negativo, se utilizo nifurtimox (Sigma-Aldrich) a 10 [micro]g/mL y medio de cultivo con parasitos respectivamente, con un volumen igual al de los extractos de DMSO 1% (Muelas-Serrano, Nogal-Ruiz, & Gomez-Barrio, 2000). Las concentraciones expresadas en [micro]g/mL de los extractos se prepararon en una balanza analitica con capacidad de 80 g a 0.0001 g (Nimbus 84i, Adam Equipment) y mediante diluciones con micropipetas (Eppendorf) con capacidad de 1 mL a 0.5 [micro]L. Las microplacas se incubaron (Memmert, Inc.) por 96 horas a 27[grados]C (Pizzolatti, Koga, Grisard, & Steindel, 2002). El numero de epimastigotes vivos se determino mediante recuento en camara de Neubauer. Los resultados se expresan como la concentracion inhibitoria al 50% ([CI.sub.50]), que corresponde a la concentracion a la cual ocurre el 50% de muerte celular. Se selecciono el extracto con mayor actividad para identificar las familias funcionales mediante pruebas quimicas coloridas (Perez-Trevino, Molina-Garza, & Galaviz-Silva, 2016). Se determino la [CI.sub.50] de los extractos contra la cepa de T cruzi, mediante un analisis de regresion dosis-respuesta con el programa SPSS 17.0 (Al-Adhroey, Nor, Al-Mekhalfi, & Mahumud., 2010) y con un intervalo de confianza (IC) del 95%.

Determinacion de la actividad citotoxica de los extractos en Artemia salina. El ensayo consistio en exponer grupos de larvas a las 48 h despues de eclosionar, a las mismas concentraciones de extracto que se utilizaron contra T. cruzi (1 000 [micro]g/mL, 750 [micro]g/mL, 500 [micro]g/mL, 250 [micro]g/mL y 100 [micro]g/mL) durante 24 h a temperatura ambiente y bajo regimen continuo de luz. Primero, se prepararon placas de 96 pozos, se anadio a cada uno 200 [micro]L de agua de mar suplementada con extracto de levadura y con diluciones del extracto correspondiente. Posteriormente, se transfirieron 10 larvas a cada pozo. Al finalizar las 24 h de exposicion, se contabilizo el numero de organismos muertos y se realizo una prueba PROBIT. Las larvas se consideraron muertas si no exhibian movimiento durante varios segundos de observacion al microscopio estereoscopico. El experimento se considero valido si el porcentaje de mortalidad en los controles no excedio de 10% (Fernandez-Calienes Valdez et al., 2009).

Fraccionamiento del extracto: Para separar los compuestos presentes en los extractos, se realizo cromatografia de capa fina, se utilizaron placas de silica gel en soporte (TLC Silica gel 60 Sigma Aldrich). La observacion de la separacion de los compuestos se realizo bajo la luz visible y ultravioleta (365 nm), en este ultimo caso con el empleo de una lampara portatil. Se realizo una separacion mediante una fase movil (v/v) de cloroformo. metanol (8.2) absolutos, tras evaluar las fracciones, se conservaron las dos con actividad tripanosomicida mayor, identificadas mediante su factor de retencion (Rf), obtenido a partir de la formula [R.sub.f]= Distancia del compuesto desde el origen/ distancia del solvente desde el origen (Tomas-Alonso, 1993). Las fracciones obtenidas se denominaron Fr21 (Rf. 0.25) y Fr22 (Rf. 0.8), mismas que fueron probadas contra T. cruzi, al siguir la metodologia antes descrita (Murillo, Castro, Chavarria, & Poveda, 2006; Volonte & Quiroga, 2013; Mijares-Bullain, Torres-Rodriguez, & Hermosilla-Espinosa, 2014).

Ensayo de citotoxicidad de la fraccion con mayor actividad tripanosomicida en linfocitos humanos: Se emplearon linfocitos humanos de sangre periferica de un donante joven (26 anos) no fumador, sin haber ingerido alcohol un mes antes de la donacion y quien firmo el consentimiento informado para participar en este estudio. Los linfocitos se aislaron por el metodo tradicional en gradiente (Boyum, 1984). Se recolectaron 5 mL de sangre en un tubo Vacutainer con heparina, se mezclo por inversion con 5 mL de amortiguador de fosfato de sodio (PBS) en proporcion 1.1, se transfirio lentamente por las paredes, evitando la formacion de turbulencia, en 10 mL de Ficoll(r)Paque Plus (Sigma-Aldrich), se verifico la formacion de dos capas y se centrifugo durante 30 min a 3 000 rpm a 4[grados]C. Se extrajo con precaucion la capa de linfocitos y se transfirio a otro tubo limpio y seco. Finalmente, se centrifugo para descartar el PBS y se agrego 1 mL de medio modificado Dulbecco de Eagle (DMEM, Sigma-Aldrich). Se determino la viabilidad inicial mediante la tecnica de exclusion por azul de tripano, se incubaron en el mismo medio a 37[grados]C por 2 h. Posteriormente, se evaluaron las concentraciones de 0.15, 0.30, 0.45 y 0.6 mg/ mL de la fraccion con mayor actividad tripanosomicida. Como control positivo se utilizo concavalina A. La prueba se realizo en una solucion de 1 x [10.sup.6] linfocitos/mL, se cultivaron en medio DMEM y se colocaron en una microplaca con un volumen final de 200 [micro]L. Se incubaron a 37[grados]C por 4 h. Posteriormente, se evaluo la viabilidad celular mediante la formacion de cristales de formazan, por medio del metodo de la reduccion metabolica del Bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-ilo)-2,5-difeniltetrazol (MTT) (Cho et al., 2016).

Determinacion cualitativa de metabolitos secundarios: Se realizo la identificacion de metabolitos secundarios mediante reacciones quimicas coloridas. La determinacion de flavonoides se efectuo mediante la prueba de Shinoda; las cumarinas mediante hidroxido de sodio 10%; se utilizo la prueba de Dragendorff para determinar la presencia de alcaloides; los esteroles y terpenos se identificaron mediante el ensayo de Lieberman-Buchard; la prueba de Balje se utilizo para analizar la presencia de sesquiterpenlactonas; quinonas y taninos mediante acido sulfurico y cloruro ferrico 1%, respectivamente; la determinacion de saponinas se realizo mediante la prueba de la espuma (Ortega, Benitez-Bampo, & Cabezas-Fajardo, 2011; Rathore, Bhatt, Dhyani, & Jain, 2012; Sotomayor, 2014).

RESULTADOS

El extracto completo H. brasiletto fue el que tuvo mayor rendimiento con 21.3%; en orden decreciente se encontro a S. molle (17.8%), M. vulgare (16.3%), y finalmente, C. citratus (14.8%).

El extracto de H. brasiletto presento la mayor actividad inhibitoria contra T. cruzi a una concentracion de 1 mg/mL (90%) con una [CI.sub.50] de 0.543 mg/mL: Este fue seguido por el extracto de M. vulgare, el cual tambien presento buena actividad tripansomicida ([CI.sub.50] = 0.647) con baja toxicidad en A. salina. Aunque el extracto de C. citratus fue el menos toxico en el modelo de Artemia, este no presento una buena actividad tripanosomicida; los extractos restantes tampoco mostraron una toxicidad notable anti T. cruzi (Cuadro 1). Con los controles positivos, la CI50 del nifurtimox (10 [micro]g/mL) presento una inhibicion del 80% de los parasitos. En los controles negativos no se encontro efecto sobre los epimastigotes de T. cruzi.

La fraccion Fr22 de H. brasiletto presento una [CI.sub.50] de 0.238 mg/mL (IC = 0.174-0.301), la cual fue incluso mas eficiente que el extracto completo (Cuadro 2). Por lo cual esta fraccion fue la unica seleccionada para determinar el ensayo de citotoxicidad en linfocitos humanos para determinar la selectividad de la misma. Esta fraccion Fr22, a dosis de 0.6 mg/mL (la mas concentrada) presento un porcentaje de viabilidad de linfocitos del 81%. Mientras que el efecto inhibidor medio de la fraccion Fr22 contra los epimastigotes, se presento a los 0.24 mg/mL, la cual fue marcadamente menor respecto al efecto citotoxico.

Posterior a la separacion, se procedio a identificar las familias de compuestos presentes en cada fraccion, asi como en el extracto completo, lo cual permitio identificar como compuestos activos a los flavonoides, sesquiterpenlactonas y quinonas (Cuadro 3).

DISCUSION

Los extractos de plantas con antecedentes de uso medicinal han sido un referente constante en el tratamiento de la enfermedad de Chagas debido a los efectos adversos del benznidazol y el nifurtimox (Cuhna et al., 2003; Paveto et al., 2004; Abdel-Sattar, Maes, & Salama, 2010). Desde que se observo que existe una correlacion positiva entre la actividad tripanosomicida contra epimastigotes in vitro y la actividad contra tripomastigotes in vivo, el uso de epimastigotes para estimar la actividad tripanosomicida se ha difundido mas rapidamente (Schlemper, Chiari & Brener, 1977; Abe et al., 2002).

El extracto de S. molle ha sido utilizado ampliamente como repelente de insectos, incluyendo para Triatoma infestans, vector de la enfermedad de Chagas, identificandose hasta 65 compuestos con actividad repelente, como son el limoneno, eucaliptol y terpenos; sin embargo, su uso antiparasitario se ha restringido solo al extracto completo (Ferrero, Gonzalez, & Chopa, 2006; Abdel-Sattar et al., 2010; Molina-Garza et al., 2014). Del extracto de M. vulgare se han identificado cinco compuestos de una fraccion polar con actividad anti-inflamatoria no esteroidea: el acido cafeoil-L-malico, verbascosido, forsitosida, arenariosido y ballotetrosido; de los cuales solo los dos primeros compuestos se han reportado con actividad antibiotica importante (Sahpaz, Garbacki, Tits, & Bailleul, 2002). Otros 29 compuestos identificados con actividad biologica en el aceite escencial de C. citratus incluyen principalmente al mirceno, citronelal, R-limoneno, citral y P-citronelol, que presentan una buena actividad individual contra T. brucei brucei (Kpoviessi et al., 2014). Sin embargo, no han sido probados contra T. cruzi, lo cual abre nuevas expectativas para futuros estudios y determinar si el efecto sera igual de efectivo.

De los extractos analizados, las dosis (mg/ mL) en las que se observaron las optimas actividades anti-T. cruzi (C[I.sup.50]) fueron 1.21 para C. citratus; 0.647 para M. vulgare y 0.827 en el caso de S. molle, pero fue H. brasiletto (conocido como palo de Brasil en esta region), el que presento una actividad marcada a los 543 [micro]g/ mL. Otros resultados parciales se presentaron en el LI Congreso Nacional de la Sociedad Mexicana de Entomologia, pero este estudio muestra los resultados completos (Perez-Trevino et al., 2016).

En reporte anteriores, se describen pruebas preliminares con 20 familias y 37 especies de plantas de uso medicinal de Mexico y Guatemala contra epimastigotes de T. cruzi, reportandose la "fijacion" del parasito a dosis de 2 mg/mL con la inmovilizacion del mismo en un 90-80% a dosis de 1 mg/mL con el extracto de H. brasiletto, sin embargo, no se mencionan los compuestos activos (Abe et al., 2002). Asi mismo, el efecto antibiotico de H. brasiletto ha sido probado contra bacterias como Escherichia coli y Staphylococcus aureus; pero con mejores resultados contra el ultimo (Yasunaka et al., 2005). El extracto de H. brasiletto tambien ha sido probado contra 12 cepas de bacterias antibiotico resistentes y un eucariota (Candida albicans); y fueron identificados ocho compuestos con actividad biologica: hematoxilina, brazileina, floroglucinol, 5-metoxipsoraleno, metil galato, acido galico, acido 4-hidroxicinamico y acido cafeico (Rivero-Cruz, 2008).

En el extracto de palo de Brasil se encontro la presencia de flavonoides, compuestos que en estudios previos han sido asociados con actividad contra diversos generos de parasitos como Plasmodium, Leishmania, Entamoeba, Giardia, Trichomonas y Trypanosoma; ademas de caracteristicas antioxidante (MartinezFlorez, Gonzalez-Gallego, & Culebras, 2002). Tambien se han identificado quinonas y triterpenos reportados con actividad antimicrobiana (Munoz-Jauregui, Ramos-Escudero, Alvarado-Ortiz, & Castaneda-Castaneda, 2007; Ramirez, Mendoza, Arreola, & Ordaz, 2010), asi como tambien en el presente estudio, identificamos la presencia de sesquiterpenlactonas, las cuales se han reportado con actividad contra los parasitos de la malaria y la leishmaniasis en ensayos in vitro (Oketch-Rabah et al., 1998; Sulsen, 2012; Cano de Terrones, 2014; Galarraga, Luis, Rojas, Offer, & Dobois, 2014).

Con respecto al modelo de citotoxicidad con A. salina descrito en este estudio, este ha sido ampliamente utilizado en toxicologia para evaluar los riesgos del uso de diversas sustancias, entre ellas los extractos de plantas, por ser una tecnica facil y economica, que ademas puede orientar sobre la toxicidad de muchos compuestos (Pino-Perez & Jorge-Lazo, 2010). Sin embargo, al comparar datos de toxicidad obtenidos de A. salina frente a cultivo celular, se aprecia que la [CI.sub.50] resulta mayor, lo cual posiblemente sea debido a la mayor complejidad bioquimica de las larvas, por lo que se hace necesario el uso de celulas para evaluar la toxicidad de un compuesto (Vega-Menchaca et al., 2013; Espitia-Baena, RobledoRestrepo, Cuadrado-Cano, Duran-Sandoval, & Gomez-Estrada, 2014). Los compuestos presentes en el extracto de H. brasiletto abren una nueva alternativa como una posible via de tratamiento, de acuerdo a los resultados obtenidos con la fraccion Fr22. Es importante verificar mediante ensayos de toxicidad con A. salina y linfocitos humanos, si su uso se puede dirigir a organismos superiores, similar a los resultados aqui descritos y los reportados por Deciga-Campos et al. (2007), H. brasilleto es una planta no toxica.

En conclusion, este trabajo presenta la primera caracterizacion parcial del extracto de H. brasiletto y la evaluacion de la capacidad tripanosomicida de cada fraccion del extracto, ademas de ser la primera evaluacion de toxicidad en un modelo mas complejo, como lo es en linfocito humano, por lo que se recomienda estudios mas detallados para identificar la(s) molecula(s) responsable(s) de la actividad. De acuerdo con nuestros resultados, el extracto de H. brasiletto podria ser usado como tratamiento alternativo para la enfermedad de Chagas, sin embargo, se necesitan estudios adicionales para probar su actividad y dosis en un modelo murino con la completa identificacion de los compuestos activos, sobre los cual se esta investigando. Tambien se concluye la presencia y la actividad tripanosomicida de la familia de las sesquiterpenlactonas; y se consolida la capacidad tripanosomicida del extracto de M. vulgare para futuros estudios de nuevas estrategias para el tratamiento de la enfermedad de Chagas.

AGRADECIMIENTOS

Este estudio se efectuo con financiamiento del proyecto PAICyT-UANL (CT305-15) "Evaluacion de la actividad antiparasitaria de extractos metanolicos de plantas con uso medicinal sobre la cepa regional de Trypanosoma cruzf (ZJMG), y al proyecto "Zoonosis Parasitarias" Clave CT-305-15. UANL-CA-278 de PROMEP-SEP No. 103.5/11/1047 P/CA (LGS).

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Karla C. Perez, Lucio Galaviz, Jesus M. Iracheta, Eliud A. Lucero & Zinnia J. Molina

Universidad Autonoma de Nuevo Leon, Laboratorio de Patologia Molecular y Experimental, Facultad de Ciencias Biologicas, Ave. Universidad SN, Ciudad Universitaria, C.P. 66455, San Nicolas de los Garza, Nuevo Leon, Mexico; aestusdrako@hotmail.com, lucio.galavizsl@uanl.edu.mx, jemairvi@gmail.com, alonso_lucero_velasco@hotmail.com, molinazinnia@hotmail.com

Recibido 29-III-2017. Corregido 24-VII-2017. Aceptado 24-VIII-2017.
CUADRO 1

Evaluacion in vitro de la actividad tripanosomicida de los extractos
metanolicos de plantas y su toxicidad en modelo de Artemia salina

TABLE 1

In vitro assessment of the trypanosomicidal activity of metanolic
extracts from four plants and toxicity assay in a model of Artemia
salina

Especie de planta        Parte            Trypanosoma cruzi
                       estudiada
                                   % inhibicion       [CI.sub.50]

Haematoxylum            Corteza         90        0.543 (0.446-0.635)
brasiletto

Cymbopogon citratus      Aerea          2          1.21 (1.05-1.40)

Marrubium vulgare        Aerea          84        0.647 (0.521-0.776)

Schinus molle            Hojas          68        0.827 (0.712-0.957)

Nifurtimox (Control)      NA            80                NA

Especie de planta        Artemia salina

                           [CI.sub.50]

Haematoxylum           2.412(1.731-4.659)
brasiletto

Cymbopogon citratus    3.148(2.129-6.300)

Marrubium vulgare      2.115(1.554-3.974)

Schinus molle          2.279(1.648-4.368)

Nifurtimox (Control)           NA

% de inhibicion= porcentaje de inhibicion a 1 mg/mL. [CI.sub.50] =
Concentracion inhibitoria (mg/mL) que causa la muerte celular del 50
% de los protozoarios a intervalo de confianza del 95 %. NA= No
Aplica.

CUADRO 2
Desafios de las fracciones de
Hematoxylum brasiletto contra T. cruzi

TABLE 2
Challenge of the fractions from
Hematoxylum brasiletto against T.cruzi

Region (1)    Concentracion    Dosis en    IC al 95%
             inhibitoria (2)    mg/mL

Fr21           C[I.sub.80]      0.627     0.530-0.784
               [CI.sub.50]      0.372     0.306-0.454
Fr22           C[I.sub.80]      0.493     0.415-0.614
               [CI.sub.50]      0.238     0.174-0.301

(1) Fr21 = Fraccion a tiempo de retencion de 0.25, Fr22 =
Fraccion a tiempo de retencion de 0.8.
(2) [CI.sub.50] = Concentracion minima para inhibir el 50 % de
los parasitos.
C[I.sub.80] = Concentracion minima para inhibir el 80 % de
los parasitos.
IC =Intervalo de confianza.

CUADRO 3

Compuestos identificados en extractos de Haematoxylum brasiletto
mediante pruebas coloridas

TABLE 3

Identification of compounds from extracts of Haematoxylum brasiletto
by colored chemical reactions

Familia de compuestos   Prueba                   Completo (1)   Fr21(1)

Taninos                 Cloruro ferrico 1%            +            -
Flavonoides             Prueba de Shinoa              +            +
Esteroles y triptenos   Lieberman-Burchard            +            -
Cumarinas               Hidroxido de Sodio 10%        -            -
Sesquiterpenlactonas    Prueba de Balje               +            -
Alcaloides              Dragendorff                   -            -
Saponinas               Espuma                        -            -
Quinonas                Acido sulfurico               +            -

Familia de compuestos   Fr22(1)

Taninos                    +
Flavonoides                +
Esteroles y triptenos      -
Cumarinas                  -
Sesquiterpenlactonas       +
Alcaloides                 -
Saponinas                  -
Quinonas                   +

Fr2 = Fraccion a tiempo de retencion de 0.25.
Fr22 = Fraccion a tiempo de retencion de 0.8.
(1)+ = presencia del metabolito, - = ausencia del metabolito.
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Author:Perez, Karla C.; Galaviz, Lucio; Iracheta, Jesus M.; Lucero, Eliud A.; Molina, Zinnia J.
Publication:Revista de Biologia Tropical
Date:Dec 1, 2017
Words:6491
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